MACROMOLÉCULAS DE LEVADURA

Cristian Daniel Tapie Taimal (1088588317) ¹, Julieth Andrea Bolaños Gómez (1143852693) ², Miguel Ángel Cabrera
Agreda (1004217061) ³, José Luis Valencia Benavides (1007282368) ⁴

cristian.tapie00@usc.edu.co¹, julieth.bolanos00@usc.edu.co², miguelcabrera2702@gmail.com³,

jose.valencia19@usc.edu.co⁴

Facultad de Ciencias Básicas, Programa de Química Farmacéutica, Universidad Santiago de Cali

Fecha de última sección:01/03/23

Fecha de entrega: 22/03/23
RESUMEN
El objetivo de la practica fue separar las principales macromoléculas como: Glucógeno, Ácidos Nucleicos (ARN) y
proteínas que se encuentran en levadura Saccharomyces ssp. Primero se extrajeron las macromoléculas a través de una lisis
celular, para luego separar cada macromolécula con el método de centrifugación, obteniendo cada macromolécula a través
de sus propiedades fisicoquímicas (densidad). Para la identificación cualitativa se obtuvo resultados positivos para cada una
de las pruebas realizadas, comprobando en la prueba de Lugol, presencia de glucógeno con la tinción de color marrón rojizo.
La presencia de ARN al realizar la prueba de orcinol o Bial, con la obtención de color verde. Y presencia de proteínas en la
prueba de Biuret con la obtención de un color violeta. de esta manera se confirmó resultados positivos para cada una de las
pruebas.

Palabras claves: Ácidos nucleicos, cualitativo, centrifugado, glucógeno, macromolécula, proteína.

ABSTRACT
The objective of the practice was to separate the main macromolecules such as: Glycogen, Nucleic Acids (RNA) and
proteins found in Saccharomyces ssp. yeast. First the macromolecules were extracted through cell lysis, and then each
macromolecule was separated with the centrifugation method, obtaining each macromolecule through its physicochemical
properties (density). For the qualitative identification, positive results were obtained for each of the tests performed, proving
in the Lugol's test, the presence of glycogen with reddish brown staining. The presence of RNA in the orcinol or Bial test,
with green color. And presence of proteins in the Biuret test with the obtaining of a violet color. In this way positive results
were confirmed for each one of the tests.

1. PROCEDIMIENTO a 3.000 rpm durante 5 minutos el precipitado se añadió 1

En esta práctica se determinó las macromoléculas que se
encuentran en la levadura de pan (Saccharomyces ssp)
con diferentes procesos; primero se agregó en un mortero:
Levadura de pan (Saccharomyces ssp) y arena, donde se
trituró durante unos minutos, posteriormente se le agrego
15 mL de ácido tricloroacético (ClCH₂CO₂H) al 5%, se
macero la solución por 3 minutos, donde se separó la
solución acuosa a un tubo de centrifuga el cual se llevó a
3.000 rpm por 3 minutos, al ser centrifugado se obtuvo un
sobrenadante y un precipitado, se separó por decantación
el sobrenadante del precipitado donde se llevó a un baño
de hielo, al sobrenadante se le agrego 2 volúmenes de
alcohol etílico, para llevarlo nuevamente a centrifugación
1
mL de agua destilada.
PRUEBA DE REACTIVO DE YODO
Para poder hacer un control se colocó en otro tubo de
ensayo 1 ml de agua destilada y en los dos tubos de ensayo
se agregó 1 mL yodo donde en un tubo obtuvimos una
tinción de color marrón rojiza.
PRUEBA DE REACTIVO DE ORCINOL
Se tomó el precipitado de ácidos nucleicos y proteínas y
se agregó 15 ml de cloruro de sodio al 10%, se procedió a
pasar la solución en tubo de ensayo para hacer un baño
con agua hirviendo por 10 min, reiteradamente se sometió
a un proceso de enfriamiento el tubo de ensayo,
adicionando la solución en un tubo de centrifuga de esta
manera centrifugar a 3000 rpm por 3 min obteniendo así
un sobrenadante con ácidos nucleicos y un precipitado
proteico, este precipitado proteico se pasó a un tubo de 1 2
ensayo y se dejó en un baño de hielo. El sobrenadante con
ácidos nucleicos se pasó a un tubo de ensayo y se precipito
con dos volúmenes de etanol frio, posteriormente se llevó
a un baño de hielo por 3 min; la anterior solución se pasó
a un tubo, centrifugándolo por 3 min a 3000 rpm después
de haberse centrifugado, descartando el sobrenadante y
disolviendo el precipitado en 2 ml de amortiguador salino; Figura 1: prueba de yodo positiva para glucógeno
haciendo un control con 2 ml de amortiguador salino. A
los dos tubos de ensayo se agregó 3 ml del reactivo de PRUEBA DE REACTIVO ORCINOL
orcinol, finalmente se sometió a un baño de agua (IDENTIFICACION DE ARN)
hirviendo para que después de un tiempo para presenciar la prueba de orcinol adquirió una característica cualitativa
un cambio de color en la solución de ácidos nucleicos de color verde como se registra en el tubo 1 de la (Figura
(ARN). 2). El color verde representa la positividad para ARN al
distinguirse de la prueba de control que posee un color
PUEBA DE BIURET amarillo como se ilustra en el tubo 2 de la (Figura 2)
Al precipitado obtenido en la prueba anterior se adicionó
2 mL de solución salina NaCl 0,15 M, y en otro tubo de
ensayo como referencia de control usamos 2 mL solución
salina. A los dos tubos de ensayo se agregó 1 mL de
sulfato de cobre, 2 mL de NaOH 10 M. Donde en un tubo
2
obtuvimos una coloración violeta el cual indica positivo 1
para la prueba.

Figura 2: prueba de orcinol de ARN (positiva)

2. DATOS, CÁLCULOS Y RESULTADOS
PRUEBA DE BIURET (IDENTIFICACION DE
Tabla 1: Resultados obtenidos de identificación de
PROTEINAS)
macromoléculas.
presentó un color violeta que identifica la presencia de
Muestra Reactivo Resultados coloración proteínas como indica el tubo 1 de la (Figura 3); el tubo
de la dos de la (Figura 3) es la prueba de control que ayudo a
diferenciar el análisis cualitativo.
prueba
Glucógeno Lugol Positivo Rojo pardo
(Yodo) 2
Ácidos Orcinol Positivo Verde 1
nucleicos purpura
(ARN)
Proteínas Biuret Positivo Violeta

PRUEBA DE YODO (IDENTIFICACION DE

GLUCOGENO): Figura 3: prueba de Biuret (positiva para proteínas)
Prueba de Lugol obtuvo un color rojo pardo como lo
indica el tubo de ensayo 1 de la (figura 1) siendo el color
que indica la positividad para glucógeno. El tubo de 3. ANÁLISIS DE RESULTADOS
ensayo 2 de la (Figura 1) representa una prueba de control
que permite diferenciar el análisis cualitativo.

2
Elaborando un análisis cualitativo obtenido de las
diferentes pruebas (prueba de Lugol, prueba de orcinol y
prueba de Biuret) que se sometió las macromoléculas
extraídas de la levadura (Saccharomyces ssp.),cabe
resaltar que dicha extracción se efectuó a través de la
desintegración en la pared celular con ácido
tricloroacético ya que la pared celular de la levadura
Saccharomyces ssp es rígida [1] ; motivo por el cual, Para
la extracción de cada macromolécula se implementó la
técnica de centrifugado, donde es un proceso de
separación basado en la acción de la fuerza centrífuga en
la separación de partículas en una mezcla Esquema 2: Reacción de Lugol con glucógeno
sólido-líquido en dos fases distintas que consisten en un
precipitado y sobrenadante [2]. PRUEBA DE ORCINOL O BIAL:
Se constato durante la separación de aminoácidos la
Se visualizo en el primer centrifugado la formación de dos importancia de desarrollar una lisis celular en medio
fases, esto demuestra como el glucógeno al ser un salino; cabe resaltar que la temperatura juega un papel
polisacárido formado por largas cadenas de D-glucosa muy importante en la separación de las pentosas ya que a
residual unidas por enlaces α(1-4), con ramificaciones una temperatura mayor de 70°C el glucógeno se expande
cada 8-10 unidades de tipo α(1-6) [3] como se muestra en alterando su estructura y convirtiéndose en ribosa
la Esquema 1, presenta una gran solubilidad en agua; el presente en la columna vertebral del ARN [6]; por ende,
cual se aíslo del sobrenadante, precipitando el glucógeno, se precipito con etanol concentrando el ARN, por lo tanto,
siendo este insoluble en alcohol (compuesto polares) [4] se observó en el precipitado disuelto en amortiguador
salino que al aplicar el reactivo de orcinol formo una
coloración verde como se muestra en la Figura 2; es una
reacción coloreada específica para pentosas en que bajo
condiciones controladas de temperatura y concentración
de 𝐻 + las pentosas son rápidamente convertidas en
furfural esquema 3, en presencia del ion férrico (𝐹𝑒 +3) y
orcinol (5-metil resorcinol) el orcinol se condensa
rápidamente produciendo un complejo de color verde [5],
con base a lo anterior, se identificó pentosas (ARN), este
Esquema 1: Formula estructural del glucógeno, enlaces resultado se evidencia en la Figura 2 en la que
de D-glucosa. experimentalmente se muestra que entre el tubo de control
presenta una tonalidad amarilla (tubo 2) y se obtuvo un
PRUEBA DE LUGOL resultado positivo de pentosas en tubo del precipitado
Se observo una tiñes marrón al aplicar Lugol en el disuelto en amortiguador salino dando un color verde
precipitado disuelto obtenido en la segunda etapa de cristalino (tubo 1).
centrifugación. En la figura 1, se evidencia la diferencia
que hay entre el control (tubo 2) y el precipitado disuelto
(tubo 1); por lo tanto, se determinó que el precipitado
obtenido es glucógeno; ya que esta prueba se basa en la
unión de un complejo entre el ion 𝐼 −3 y la molécula de
amilasa del glucógeno, dicha molécula presenta
formación helicoidal; al introducirse el 𝐼 −3 dentro de la
hélice como se muestra en el Esquema 2, forma una
condensación de color pardo rojizo [5].

Esquema 3: Mecanismo de la reacción de orcinol con

pentosa (ARN)

3
 6.
PRUEBA DE BIURET:
Se comprobó que en el precipitado de proteínas
coaguladas interviene enlaces peptídicos; ya que al ser
tratada con sulfato de cobre disuelto (reactivo de biuret)
se obtuvo una coloración violeta como se indica en la
(Figura 3-tubo 1), en la que se comparó con el control
(Figura 3-tubo 2) y se verificó visualmente que el reactivo
de biuret da una coloración violeta en presencia de enlaces
peptídicos. Este color violeta formado, depende
aparentemente del complejo de coordinación formado por
los átomos de cobre del sulfato de cobre disuelto (reactivo
de biuret), y cuatro enlaces de nitrógeno peptídicos que se
encuentran en las ramificaciones polipeptídicas [5] como
se evidencia en la Esquema 4. El tratado de la solución
salina se lo implementa para no permitir la formación de
hidróxido de cobre, que se puede formar eh interferir con
la reacción de los enlaces peptídicos y iones cobre. [7]
Esquema 4: reacción de la prueba de Biuret (proteínas)
5. CONCLUSIONES
• Para la determinación de glucógeno, ácidos
nucleicos y proteínas contenidos en la levadura se
realizó pruebas cualitativas; a través de una
característica de color se definió la presencia de
las macromoléculas. Obteniendo una positividad
para todas las pruebas, además se evidencio sus
colores característicos al ocurrir las diferentes
reacciones o sucesos que se discute en el análisis.
• Durante la práctica se evidencio que la
centrifugación es una técnica efectiva para la
separación de macromoléculas; ya que efectúa
aislando los componentes con mayor densidad de
las mezclas hacia la parte lateral más lejana.
• Se concreto que para verificar la efectividad de
las pruebas es importante emplear para cada una
su control.
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5. RODRIGUEZ ARZAVE, Q. B. P. (1987).
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Edicion). Monterrey.N.L.
6. a temperaturas altas (por encima de 70°C), la
solución comienza a perder su viscosidad debido
a que la molécula o gránulo de almidón a medida
que se va calentando se hincha y termina
explotando, alterando su estructura y
convirtiéndose en un polímero de glucosa. (s. f.).
Bing.
https://www.bing.com/search?q=a+temperaturas
+altas+(por+encima+de+70%C2%B0C),+la+sol
uci%C3%B3n+comienza+a+perder+su+viscosid
ad+debido+a+que+la+mol%C3%A9cula+o+gr
%C3%A1nulo+de+almid%C3%B3n+a+medida
+que+se+va+calentando+se+hincha+y+termina
+explotando,+alterando+su+estructura+y+convi
rti%C3%A9ndose+en+un+pol%C3%ADmero+d
e+glucosa
7. Libretexts. (2020, 30 octubre). 14.4: Hidrólisis de
las soluciones salinas. LibreTexts Español.
https://espanol.libretexts.org/Quimica/Libro:_Qu
%C3%ADmica_General_(OpenSTAX)/14:_Equ
ilibrio_de_acido-
base/14.4:_Hidrolisis_de_las_soluciones_salinas