Manual de Procedimiento de Inmunohematologia (Daniel)

Universidad Central Del Este
Facultad de ciencias de la salud

Escuela de Bioanálisis
Manual de procedimientos de Inmunohematología

BIA-061
Manual de procedimiento de Inmunohematología
Programa de práctica
semanas Practicas pagina fecha protocolo nota
1 Orientaciones generales Si
Calidad en banco de sangre y
preparación de células
2 Preparación de células control de No
Coombs y preparación de células
3 Sistema ABO (deter de ags y acs) Si
4 Fenotipo Rho y variante D débil Si
5 Tipificación con variante D débil Si
6 Tipificación con variante D débil No

(repaso)
7 Practica fundamental (5 ptos) No
8 Tipificación sanguínea en Gel No

(video)
9 Prueba de compatibilidad Si
10 Prueba de compatibilidad (repaso)

11 Selección del donante de grupo O Si
12 Pruebas de las Antiglobulinas Si

Directa (PAD) e Indirecta (PAI)
13 Identificación de anticuerpos No
Irregulares
14 Examen final (25ptos)
15 Examen final
pág. 2
Reglamentos para las prácticas
1. La asistencia a las prácticas es obligatoria. La entrada formal o inicio más tardar

10 minutos después de la hora establecida. El estudiante que llegue 20 minutos
más tarde, pierde el derecho a tomar la práctica.
2. El manual de prácticas es obligatorio, no fotocopias. El estudiante debe tener

colores básicos (rojo, azul y amarillo), un resaltador y un marcador permanente
para rotular.
3. El estudiante deberá llegar al laboratorio con su práctica previamente leída, ya que

el profesor podrá evaluarlo con preguntas.
4. El protocolo de cada práctica se dará el día correspondiente, no otro día. Si el

estudiante no ha toma do la práctica no tiene derecho a protocolo.
5. Las prácticas NO se reponen. En caso extremo de necesitar una reposición, el

estudiante deberá hacerlo con autorización de su profesor y presentar una
justificación escrita como constancia.
6. El valor de cada protocolo es de 30 puntos. El que no lo tome equivale a cero.
7. La práctica fundamental es obligatoria, con un valor de 5 puntos, en que no lo

tome lo pierde.
8. Examen final de practica 25 puntos.
pág. 3
Normas de bioseguridad en el laboratorio

1 El uso de bata es obligatorio, (preferiblemente blanca con mangas largas y
abrochada delante).
2 El uso de guantes es estrictamente obligatorio.
3 Debe lavarse las manos antes y después del uso de los guantes.
4 Uso mascarilla, gorro y lentes.
5 Está prohibido fumar o comer en el laboratorio.
6 Está prohibido peinarse y maquillarse dentro del laboratorio.
7 La vestimenta debe ser apropiada, cubierta y decente (decorosa).
8 El cabello debe estar recogido total o parcialmente. No tener pelo que le

caiga a la cara y obstruyan su desempeño en la práctica.
9 Los zapatos deberán ser totalmente cerrados.
10 Al finalizar la practica el estudiante deberá recoger su área de trabajo,

descartar sus utensilios y cualquier otro material que se le indique. Dejar
butaca organizada.
Nota: cada estudiante tiene que traer a los laboratorios un Kit con sus
guantes, batas mangas largas, papel toalla, jeringuillas de 5 cc,
torniquete, algodón, alcohol, gorro, y lentes.
pág. 4
Garantía de calidad en banco de sangre
Principio:
Consiste en desarrollar técnicas de control de calidad para los equipos, reactivos y

muestra usadas, que nos garanticen el aseguramiento de la calidad de la sangre y sus
componentes.
Objetivos:
Garantizar la calidad de los equipos, reactivos y muestras usadas en los Bancos de

Sangre.
Conocer el tipo de muestra utilizada en el Banco de Sangre.
Registrar y archivar el control de calidad de los equipos y de los reactivos.
Calidad en Banco de Sangre
Calidad: conjunto de propiedades y característica de un servicio que permiten

satisfacer necesidades del usuario.
Aseguramiento de la calidad: conjuntos de acciones planificadas y sistemáticas que

son necesarias para proporcionar la confianza de que un producto o servicio satisfaga
los requisitos necesarios sobre la calidad.
Control de calidad: es un sistema de comprobación y equilibrio.
Condiciones indispensables de un Bioanalista para el cumplimiento del control

de calidad:
1. Tener conciencia de implementar y desarrollar un control de calidad.

2. Estar capacitado y dispuesto a mantener ese control de calidad.
pág. 5
Aspecto a tomar en cuenta en el control de calidad del Banco de Sangre:
1. Anotaciones:
El primer aspecto a exponer es de las anotaciones; en todo Banco de Sangre este
libro de anotaciones debe ser claro y conciso de tal manera de que todos lo puedan
entender.
2. Instructivo de Técnicas y Estandarización:
El instructivo o guía debe contener todas las instrucciones y sugerencia de los

fabricantes de reactivos. En el instructivo estarán los procedimientos y técnicas que
se realizan en el Banco. Debe mantenerse actualizado, aplicando los cambios
necesarios.
3. Registro Diario:
 Es un libro donde se anota lo todo lo que sucede en el Banco de Sangre se anota:

 Inicio de un frasco de antisuero
 Variaciones en la temperatura del baño de María, nevera de reactivo, nevera de las
unidades de sangre y congelador
 Vacaciones y permiso del personal
 Mantenimiento de equipo
 Uso de controles
 Accidente del personal.
4. Condiciones indispensables en el personal de Banco de Sangre
Integridad, criterio de trabajo, honestidad, sensibilidad, responsabilidad entre otro.
La sensibilidad humana del individuo juega un papel determinante, ya que las

personas que trabajan en el Banco de Sangre no tienen horario establecido. No se
cobra por horas. Para el personal de Banco de Sangre lo más importante es: dar el
mejor servicio humano.
5. Instrumentos y Materiales:
Las condiciones de los equipos y materiales tienen gran importancia, ya que de estos
depende la calidad de las pruebas realizadas. Los equipos deben monitorearse
periódicamente.
pág. 6
Entre los equipos tenemos:
Caja de visualización, Baño de María, congelador, nevera de los reactivos, nevera de

las unidades, centrifuga Serofuge, centrifuga, termómetro, relojes, medidor de
temperatura y humedad, mezcladora de plaquetas, separador manual de plasma y
mezcladora de unidades.
Todos estos equipos deben ser sometidos al control establecido por el Banco de
sangre.
Algunos de los que podemos aplicar, son los siguientes:
Baños húmedo o de agua: la temperatura usada para las reacciones Ags/Acs es de

37oC± 0.5, es decir, que permite un límite 36.5 a 37.5 0C. Deben usar agua destilada,
no debe pagarse nunca, se debe tomar temperatura diariamente rotando el
termómetro por toda la superficie del baño, para evitar temperaturas estacionarias.
Anotar la temperatura diaria, tirar una curva mensual y guardarla por un año.
Baño seco o calor seco: la temperatura se muestra de manera digital, se debe

confirmar esta temperatura con un termómetro de baño de maría.
Termómetro de Baño de maría: es un instrumento (no equipo), debe ser de buena

calidad, tiene una escala que va de 16 a 100 oC. Su exactitud debe ser comprobada
con varias temperaturas (ambiente, de nevera y baño de maría).
Centrifugas: se debe chequear la nivelación del cabezal y las copas, ya que cuando
está funcionando a altas velocidades, desarrollan una fuerza de gravedad de miles de
libras. Si la copa no está de igual peso, la centrifuga se desajusta, y hace una fuerte
vibración y la separación de los componentes es inadecuada. Hay centrifuga que son
de velocidad fija y otra con velocidad variable. Para la velocidad fija se debe establecer
un tiempo óptimo de centrifugación para la reacción antígeno/anticuerpo y los
lavados de células.
La nevera de los hemocompentes o unidades de sangre: la temperatura se le debe

tomar diariamente, la temperatura debe ser entre 1-6 0C, siendo la temperatura óptima
de 40C. Se debe realizar un cultivo mensual antes y después de limpiarla.
6. Sangre y sus derivados:

Los componentes de la sangre deben ser monitoreados periódicamente garantizando
que son seguros y apropiados para el tratamiento del paciente. Hay dos aspectos a
tomar en cuenta:
pág. 7
La esterilidad de los hemocompentes, donde se establece realizar un cultivo a una

unidad de sangre de 18 a 20 día de extraída, que no se va a usar; se le extrae 10 ml
de la bolsa y se siembra en tioglicolato para observar si hay crecimiento de algún
microorganismo.
7. Reactivos:
El control de calidad del reactivo consiste en realizar las pruebas de Titulación y

Avidez a los sueros comerciales: Anti-A, Anti-B, Anti-A, B, Anti-D. La titulación se
realiza al recibir cada lote de reactivos y la avidez diariamente por duplicado. El suero
antiglobulínico o suero de Coombs debe probarse diariamente con las células control
de Coombs, ya que es uno de los reactivos más importantes, y es muy vulnerable a la
neutralización y contaminación.
8. Eliminación de residuo peligroso:
Se divide en 4 categorías:
Residuos comunes: no contaminado que pueden eliminarse como si fuera basura en

general; se eliminan en bolsas de color negro.
Residuos patógenos. Se clasifican:
 Residuos provenientes de cultivos del laboratorio.

 Resto de sangre y sus derivados.
 Residuos orgánicos provenientes del quirófano.
 Resto de animales producto de investigación médica.
 Algodones, gasas, vendas usadas, ampollas, jeringuillas, objetos cortantes o
punzantes materiales descartables, elementos impregnados de sangre u otras
sustancias putrescibles que no se esterilizan.
 Agentes quimioterapéuticos.
Se eliminan en bolsas de color rojas.
Residuos químicos peligrosos.
Residuos radioactivos.
pág. 8
Preparación de suspensión de células
Las suspensiones de células rojas (hematíes) se prepara con sangre fresca al

momento de usar. Pueden ser conservadas durante varios días a una temperatura de
4-80C.
La concentración a que se utilizan las suspensiones de células en los procedimientos

inmunohematológicos varía en relación al tipo de método que se realice:
 Para procedimientos en tubos: se prepara al 2 o 5% (este es el que más se

utiliza).
 Para procedimientos en láminas: al 40%
Materiales y equipos:
 Tubos de centrifuga/ 13x100/12x75.

 Goteros.
 Solución salina 0.9%.
 Centrifuga de velocidad variable.
Procedimiento:
1. Servir 5 a 7 gotas de sangre en un tubo de centrifuga (13x100).
2. Agregar solución salina al 0.9% hasta la ¾ parte del tubo y homogenizar.
3. Centrifugar por 3 minutos a 5000 RPM y descartar el sobrenadante.
4. Repetir el paso 2 y 3 dos veces. Resuspender en cada lavado antes de agregar

salina, para desprender los hematíes del fondo del tubo luego del centrifugado.
5. Después del tercer lavado descartar el sobrenadante y hay tenemos nuestra

células lavadas.
6. En un tubo de ensayo agregamos 1 ml de solución salina al 0,9% y 2 o 3 gotas de
las células lavadas para una coloración de rojo tomate. Estas células están lista
para preparación en tubo.
7. Para procedimiento en lamina se puede preparar a partes iguales (ejemplo: 1ml de

salina y 1ml de la células lavada).
pág. 9
Titulación de antisueros comerciales Anti-A y Anti-B
Reactivos: Antisueros comerciales Anti-A y Anti-B

Suspensión de células a y b al 2%
Método: Reacción Ag/Acs de aglutinación macroscópica.
Medio de conservación: solución salina 0.9%
11 tubos 12x75mm, pipetas de 0.2 ml, 0.5 ml y 1ml.
Centrifuga, gradillas, pipeteador
Procedimiento:
1. preparar en una gradilla, una hilera de 10 tubos rotulado con los números del 1 al
10, con la letra A o B, según se trate la titulación de anti-A o anti-B y con las
diluciones correspondiente.
2. Agregar a todos los tubos con excepción del primero 0.1 ml de solución salina al
0.9 %
3. A los tubos 1 y 2, agregar 0.1 ml del antisuero a titular.
4. Mezclar el contenido del tubo 2 y transferir 0.1 ml al tubo número 3.
5. Mezclar el contenido del 3 y transferir 0.1 ml al tubo número 4 y así
sucesivamente hasta el último, del cual se desechará 0.1 ml, para que todos los
tubos queden de un mismo volumen (0.1 ml).
6. Los 10 tubos quedaran con las siguientes diluciones del antisuero comercial:
Tubo #1 = 1:1 Tubo #4 = 1:8 Tubo #7 = 1:64 Tubo #10 =1:512
Tubo #2 = 1:2 Tubo #5 = 1:16 Tubo #8 = 1:128
Tubo #3 = 1:4 Tubo #6 = 1:32 Tubo #9 = 1:256.
7. Agregar a cada uno de los tubos 0.1 ml de suspensión de células a o b al 2 % en

solución salina, según se trate del suero comercial anti-A o anti-B.
8. Mezclar y centrifugar todos los tubos por el tiempo óptimo (30segundos) de
centrifugación.
9. Resuspender y observar en busca de aglutinación.
Interpretación de los resultados: El título del antisuero comercial será la

mayor dilución del antisuero que presente aglutinación al agregarle la suspensión de
células indicada.
pág. 10
Para el anti-A y anti-B las exigencias mínimas de título son de 1: 256 y la avidez de
15 segundos.

Titulación del antisuero comercial Anti-D
Reactivos:
1. Antisuero comercial anti-D

2. Albumina bovina al 22 0 30%
3. Suspensión de células de grupo O Rho positivo
1. Tubos 12x 75 ml
2. Pipetas 0.2 ml y 0.5 ml
3. Centrifuga
4. Aplicadores de maderas
Procedimiento:
1. preparar en una gradilla, una hilera de 10 tubos, rotulándolo del 1 al 10.
2. Agregar a todos los tubos con excepción del primero 0.1 de albumina bovina al 22
o 30%
3. Colocar 0.1 ml del suero anti-D a los tubos primero y segundo.
4. Mezclar el contenido del segundo tubo y transferir 0.1 ml al tercer tubo.
5. Mezclar el contenido del tercer tubo y transferir 0.1 ml al cuarto tubo y así
sucesivamente hasta el último tubo, donde se desechará 0.1 ml después de
mezclar.
6. Los 10 tubos quedaran con las siguientes diluciones del antisuero comercial:
Tubo #1 = 1:1 Tubo #4 = 1:8 Tubo #7 = 1:64 Tubo #10 =1:512
Tubo #2 = 1:2 Tubo #5 = 1:16 Tubo #8 = 1:128
Tubo #3 = 1:4 Tubo #6 = 1:32 Tubo #9 = 1:256.
pág. 11
8. Agregar a cada uno de los tubos 0.1 ml de suspensión de células de grupo O Rho
positivo preparada al 2 o 5% lavadas en salina y suspendida en albumina bovina al
22 o 30%.
.
9. Mezclar e incubar a 370C por 15 minutos.
10. Luego centrifugar por 30 segundos y observar sobre la lámpara de visualización en

busca de la mayor dilución del antisuero que presente aglutinación.
Interpretación de los resultados: El título del antisuero comercial será la mayor

dilución del antisuero que presente aglutinación al agregarle la suspensión de células
indicada.
Para antisuero comercial anti-D el título mínimo aceptado es de 1:32
pág. 12
Prueba de avidez para los antisueros comerciales Anti-A y Anti-B.
Reactivos:
Sueros comerciales Anti-A y Anti-B

Suspensión de células a y b al 40 o 50%
Medio de conservación:
Solución salina al 0.9%.
Goteros
Lamina de avidez (placa de tipificación)
Cronometro
Aplicadores de madera
Procedimiento:
1. En la lámina de avidez colocar una gota de antisuero en estudio más una gota de
suspensión de células a o b, según se trate del antisuero comercial anti-A o anti-B.
2. Marcar inmediatamente el tiempo en el cronometro.
3. Mezclar e inclinar la lámina hasta que la aglutinación aparezca.
4. Marcar el tiempo en segundos.
5. La prueba tiene que hacerse en duplicado. Se suman los valores obtenidos y se

dividen entre dos, el promedio será el valor real.
La exigencia mínima para la avidez es de 15 segundos.
pág. 13
Prueba de avidez para el antisuero comercial anti-D
Reactivos:
Antisuero comercial anti-D
Suspensión de células de grupo “O” Rho positivo al 40 o 50% en su propio suero o

plasma.
Materiales y equipos: goteros, alamina de tipificación, cronometro.
Procedimiento:
1. En la lámina de avidez colocar una gota de antisuero en estudio más una gota de
suspensión de células grupo “O” Rho positivo al 40 o 50%.
2. Marcar inmediatamente el tiempo en el cronometro.
3. Mezclar e inclinar la lámina hasta que la aglutinación aparezca.
4. Marcar el tiempo en segundos, hacer la prueba por duplicado.
5. Se suman los resultados y se dividen entre dos y el promedio es el valor
Obtenido.
La exigencia mínima para la avidez es de 65 segundos.
Fecha de # de Antisuero Fuente Células Avidez Titulo Firma

vencimiento lote s
Anti-A
Anti-B
Anti-AB
Anti-D
pág. 14
Preparación de las Células Control de Coombs (practica # 1)
Objetivo:
Preparar una suspensión al 10% de eritrocitos de grupo O Rho positivo
aglutinados y sensibilizados que nos ayudaran como fase de comprobación en pruebas
de compatibilidad. Pruebas antiglobulínicas.
Fundamento:
Sensibilizar los anticuerpos y aglutinación positiva.
Materiales:
1. Suspensión de células al 2 - 5% de sangre O Rho positiva.
2. Solución salina 0.9%.
3. Suero comercial Anti-D (anti-Rho).
4. Antiglobulina Humana o suero de Coombs.
5. Tubos 12 x 75 ml o 13 x 100 ml.
6. Pipetas serológicas o automáticas.
7. Centrifuga.
8. Frascos con goteros
9. Baño d María.
Procedimiento:
1. Preparar una dilución 1: 10 del antisuero comercial anti-D.
2. Preparar una suspensión de células grupo O Rho positivo al 2 - 5%.
pág. 15
3. En un tubo 13x100 mm agregar 4.5 ml del antisuero diluido (anti-D) y agregar 0.5
ml de la suspensión de la células al 2-5% (O Rho positivo).
4. Mezclar e incubar a 37 0C por 15 minutos.
5. Realizar un control: una gota de estas células con una gota de Antiglobulina
Humana, la cual debe aglutinar en dos cruces.
Practica # 4
Sistema ABO
El primer sistema descrito fue el ABO o ABH, por Karl Landsteiner y sus colaboradores.
Es el sistema más importante con relación a las transfusiones sanguíneas.
La clasificación de las personas, en cuatro grupos sanguíneos, está basada en el hecho

que los antígenos A y B pueden existir individuales, juntos o faltar ambos.
Los antígenos de este sistema se encuentran en el estroma de los eritrocitos, sus

anticuerpos están en el suero del paciente. Y son de variedad natural, por lo que se
manifiestan a temperatura ambiente. La presencia o ausencia del antígeno le dará el
nombre al grupo sanguíneo.
Esta determinación se fundamenta en la ley de Karl Landsteiner que dice “Ningún

antígeno puede encontrase con su correspondiente anticuerpo, por aglutina.
El sistema ABO se determina en varias fases:
 Globular: en la que se determina la presencia o la ausencia del antígeno, la cual

se realiza poniendo en contacto los glóbulos rojos del paciente con los antisueros
comerciales anti-A, anti-B y anti-A, B.
 Sérica o comprobación grupal: en la que se determina la presencia o la ausencia

de los anticuerpos, la cual se realiza poniendo en contacto el suero del paciente
con hematíes conocidos a y b.
Reactivos:
Sueros comerciales; anti-A, anti-B y anti-A, B
Células conocidas; a y b al 5%.
Método: Aglutinación en tubo.
Medio de conservación: solución salina 0.9 %.
pág. 16
Tubos de ensayo 12 x 75mm, goteros, gradilla, lápiz marcador.
Centrifuga Serofuge.

Muestra: Sangre sin anticoagulante.
Procedimiento:
1. Centrifugar la sangre problema
2. Rotular tubo y separar el suero.
3. Depositar de 5 a 7 gotas de sangre problema en un tubo 13 x 100 mm,

debidamente rotulado, lavar 3 veces por 3 minutos con solución salina al 0.9%, y
luego prepara estas células al 5%.
4. Rotule 6 tubos de ensayo 12 x 75mm con: A, B, AB, AC, CA Y CB (rotulando

cada uno de los tubos con el número de la muestra correspondiente).
5. Depositar una gota de los hematíes al 5% en los tubos marcados A, B, AB, AC.
6. Depositar dos gotas de suero del paciente a los tubos marcados CA, CB.
7. Agregar al tubo marcado A, una gota de anti-A
8. Agregar al tubo marcado B, una gota de anti-B
9. Agregar al tubo marcado AB, una gota de anti-A, B
10. Agregar al tubo marcado AC, una gota del suero del paciente.
11. Al tubo marcado CA, agregar una gota de hematíes a.
12. Al tubo marcado CB, agregar una gota de hematíes b.
13. Mezclar todos los tubos y centrifugar por 45 segundos a 3,400 rpm.
14. Leer y reportar los resultados
pág. 17
Interpretación de los resultados:
Grupo A (debe determinar el subgrupo)

Aglutinación en los tubos A y AB, indica la presencia del antígeno A.
Aglutinación en el tubo CB, indica la presencia de anticuerpos anti-B
Grupo B
Aglutinación en los tubos B y AB, indica la presencia del antígeno B.
Aglutinación en el tubo CA, indica la presencia de anticuerpos anti-A
Grupo AB (debe determinar el subgrupo)

Aglutinación en los tubos A, B y AB, indica la presencia de los antígenos A y B.
Ausencia de Aglutinación en los tubos CA y CB, indica ausencia de los anticuerpos anti-
A y anti-B
Grupo O
Ausencia de aglutinación en los tubos A, B y AB, indica ausencia de los antígenos A y
B.
Aglutinación en los tubos CA y CB, indica presencia de los anticuerpos anti-A y
anti-B.
Autoanticuerpos
Aglutinación en el tubo AC, indica presencia de autoanticuerpos.
Ausencia de aglutinación en el tubo AC, indica ausencia de autoanticuerpos.
Ejemplo de Reporte
RESULTADO: Grupo Sanguíneo: _________
INTERPRETACION: Al mezclar células lavadas del paciente con los antisueros

comerciales anti-____, anti-_____ y anti-____ no presento aglutinación en los tubos A, B
Y AB.
Al mezclar el suero del paciente con las células conocidas a y b, presento aglutinación en
los tubos CA y CB.
pág. 18
Conclusión: Mi grupo sanguíneo es _____ porque está presente el antígeno_____ y
ausente el antígeno____. Está presente el anti- ____ y ausente el anti-_____.

Reporte de resultados de prácticas de Inmunohematología Practica # 4
Nombre_____________________________ Matricula__________
Determinación__________________________________________
Muestra_________________________ Método_______________
Reactivos_______________ ________________ _____________
___________________ __________________ ________________
Dibujo de la reacción
Resultado: Grupo Sanguíneo: _______
Interpretación:
1.
2.
pág. 19
Conclusión

Determinación de los subgrupos de A
Algunas formas débiles del grupo A, reaccionan muy débilmente, o no reaccionan, con
antisueros muy potentes anti-A. Las diferencias observadas en potencia del antígeno A,
condujeron a la división de los grupos de los grupos A y AB en: A1, A2, A1 B y A2 B.
La diferenciación es más segura, si se utiliza un reactivo adicional como el suero anti

absorbido o Lecitina anti-A1.
Objetivos. Determinar el subgrupo para las transfusiones sanguíneas por su gran

importancia.
Reactivos:
Lectina anti-A1.
Medios de conservación:
Solución salina al 0.9%.
Materiales y equipo:
Tubos 12x 75mm, goteros, gradilla, lápiz marcador.
Muestra:
Hematíes de grupo A o AB.
Procedimiento:
1. Lavar y preparar suspensiones de los hematíes en estudio (A o AB).
2. Rotular un tubo 12 x 75mm, y depositar una gota de los hematíes.
3. Agregar a este tubo una gota del reactivo anti-A1 o lecitina; mezclar y dejar en
reposo 5 minutos.
4. Centrifugar y observar en busca de aglutinación.
Interpretación de los resultados
pág. 20
Si se observa aglutinación, se reporta subgrupo A 1 o A1 B.
Si no se observa aglutinación, se reporta subgrupo A 2 o A2 B.

Practica # 5
Determinación del fenotipo Rho o D
El factor Rho fue descubierto por Karl Landsteiner y Wiener en 1940. El factor Rho es el
que posee mayor poder antigénico del sistema Rh-Hr. Puede causar enfermedad
hemolítica del recién nacido o feto neonato (EHRN o EHFN), si la madre es Rho negativo
ha sido inmunizada por el factor Rho.
El antígeno Rho se encuentra en la membrana de los eritrocitos y su anticuerpo es de

variedad inmune. (Es producido por estimulación antigénica). Por la presencia o la
ausencia del antígeno D o factor Rho la población se divide en dos grandes grupos: los
Rho positivos, que posee el antígeno (Rho) en sus eritrocitos y los Rho negativo que no
posee el antígeno en sus eritrocitos.
A la persona Rho negativo se le debe investigar la variante D débil, ya que esta variante
es inmunizante.
La determinación del antígeno Rho se fundamenta en una reacción antígeno-anticuerpo,

donde el antígeno se encuentra en la muestra (eritrocitos) y anticuerpo en el reactivo
empleado.
Reactivo:
Anti-D o anti-Rho.
Albumina bovina al 22 o 30%
Método: Aglutinación en tubo
Tubos de ensayo 12 x 75mm
Lámpara de visualización
Goteros
Gradilla
Baño de maría.
Muestra: Sangre Fresca sin anticoagulante.
Procedimiento:
pág. 21
1. Preparar una suspensión de hematíes lavados al 2 o 5% en solución salina al
0.9% de la muestra a investigar.

2. Depositar una gota de anti-D o anti-Rho, una gota de Albumina Bovina al 22 o

30% a una gota de los hematíes lavados en tubo 12 x 75mm debidamente
rotulado.
3. Mezclar y llevar al baño de maría a 370C, por 15 minutos.
4. Centrifugar por el tiempo óptimo de centrifugación (30 segundos) a 3,400 rpm.
5. Resuspender suavemente y colocar el tubo sobre la lámpara de visualización,

oscilando suavemente de atrás hacia adelante y observar en busca de
aglutinación macroscópica.
Aglutinación: indica la presencia del antígeno D o Rho (se reporta: Rho negativo).
Ausencia de aglutinación: indica ausencia del antígeno D o Rho (se reporta: Rho
negativo).
Nota: El Rho se debe reportar en letras (positivo o negativo), nunca + o –.
Ejemplo de reporte
Resultado: Rho positivo o Rho negativo.
Interpretación: Al mezclar las células lavadas con el antisuero comercial anti-D (anti-Rho)
y albumina bovina al 22 0 30% presento aglutinación o ausencia de aglutinación.
Conclusión: está presente el antígeno D o Rho o está ausente el antígeno D o Rho. (Por
lo que se recomienda la variante D débil).
pág. 22
Reporte de resultados de prácticas de Inmunohematología

Practica # 5
Nombre: _________________________ Matricula:____________
Determinación:_________________________________________
Muestra:______________________ Método: ________________
Reactivos:_________________, __________________________
________________________,_____________________________
Dibujo de la reacción:
Resultados:
No:_______ Rho___________
No: _______ Rho__________
Interpretación:
1.
2.
pág. 23
Conclusión:

Practica # 6
Determinación de la variante D débil
Principio:
Se fundamenta en investigar la expresión débil del antígeno D normal, es decir, la menor
concentración del antígeno D por glóbulo rojo.
Objetivo:
Investigar la presencia o ausencia del antígeno D débil en persona Rho negativo.
Tipo de muestra: hematíes Rho negativo
Reactivos:
1. Anti Rho o Anti D

2. Antiglobulina humana (anti IgG)
3. Albumina bovina al 22 o 30%
4. Células Rho negativo (control negativo)
5. Células Rho positivo (control positivo)
6. Células control de Coombs
1. Tubos de ensayo 12x75mm
2. Baño de maría
3. Lámpara de visualización
4. Goteros
5. Gradilla
Medio de conservación: solución Salina 0.9%
pág. 24
Procedimiento:
1. Identificar tres tubos 12x75mm: Muestra (M), control positivo (CP) y control
negativo (CN).
2. Preparar suspensión de células rojas al 5% de la muestra Rho negativo.

3. Depositar:
a. En el tubo M, una gota de anti-Rho y una gota albumina bovina 22 o 30%.
b. En el tubo CP, una gota de anti-D.
c. En el tubo CN, una gota de albumina bovina al 22%.
4. Añadir al tubo marcado M, dos gotas de la suspensión de los hematíes problema

(Rho negativo) al 5%.
5. Añadir al tubo marcado CP dos gotas de la suspensión de células Rho positivo al

5% (control positivo).
6. Añadir al tubo marcado CN dos gotas de la suspensión de células Rho negativo al

5% (control negativo).
7. Mezclar el contenido de los tubos e incubar a 37 oC por 15 minutos.
8. Luego lavar los tubos tres veces con solución salina al 0.9 % por 1 minuto y el
último lavado secar bien la solución salina.
9. Añadir una gota de Antiglobulina humana a cada tubo y centrifugar por 1 minuto.
10. Observar en busca de aglutinación y comparar la muestra con los controles positivo
y negativo para luego reportar.
11. Si no hay aglutinación en tubo muestra agregar una gota de célula de control de
Coombs y debe aglutinar y si no aglutina debe repetir la prueba.
Control de calidad:
1. Usar muestras de Rho Positivo y Rho negativo conocidas para los controles.
2. Usar células control de Coombs.
Intrepretacion de los resultados:
1. Aglutinación en el tubo M, indica la presencia del antígeno D débil.
pág. 25
2. Ausencia de aglutinación en el tubo M, indica ausencia del antígeno D débil.
Nota: El tubo marcado CP debe estar aglutinado

El tubo marcado CN debe estar sin aglutinación.
Los controles NO se reportan, solo se usan para compáralos con la muestra.

Interferencias:
1. Muestra con anticoagulantes.

2. Muestra no calentada a 37oC.
3. Intercambios de muestra y servicios en controles.
4. Muestras no lavadas, con lavados insuficientes o en exceso.
5. No secar completamente la salina.
Conclusión:
La muestra Rho negativa con presencia del antígeno D débil, se reporta: Rho positivo
Débil.
La muestra Rho negativa con ausencia del antígeno D débil, se reporta: Rho negativo.
Ejemplos de reporte:
1. Resultado: Rho negativo Variante D débil positivo
Resultado final: Rho positivo Débil
2. Resultado: Rho negativo Variante D débil negativo

Resultado final: Rho negativo.
Interpretación: Al mezclar las células lavadas con anti-Rho, albumina bovina y

Antiglobulina humana, hubo aglutinación o no aglutinación.
Conclusión: Esta presente la variante D débil.

Está ausente la variante D débil.
pág. 26
Practica # 6
Nombre:________________________ Matricula: ____________
Determinación:_________________________________________
Muestra: _________________ Método: _____________________
Reactivos: ________________, ____________________________
______________________________, _______________________
___________________________,___________________________
Dibujo de la Reacción:
Resultado: Rho_________________ D débil _________________
Resultado final: _________________
Intrepretacion:
pág. 27
Conclusión:

Practica # 7
Tipificación o clasificación sanguínea
Principio:
Se fundamenta en determinar los diferentes grupos, subgrupos y tipos sanguíneo,
mediante reacciones antígeno-anticuerpo.
Objetivos:
Diferenciar los diferentes grupos y tipos sanguíneos.
Diferenciar los subgrupos de A.
Tipo de muestra: sangre fresca sin anticoagulante.
Recolección y condiciones de la muestra:

Tomar 5 ml de sangre en un tubo de ensayo seco debidamente identificado. Dejar 30
minutos que se retraiga el coagulo, centrifugar y luego el suero. Esta muestra (coagulo y
suero) son estable en refrigeración, 2- 8 0C durante 72 horas.
Reactivos:
Suero comercial anti-A
Suero comercial anti-B
Suero comercial anti-A, B
Suero comercial anti-A1
Suero comercial anti-D o anti-Rho
Células a al 5%
Células b al 5%
Medio de conservación: solución salina al 0.9%
pág. 28
Tubos de ensayos 12 x 75 mm
Goteros
Lápiz marcador
Centrifuga Serofuge
Baño de María

Procedimiento:
1. Centrifugar la sangre problema
2. Rotular un tubo con SP (suero del paciente) y separar el suero.
3. Depositar 5 gotas de la sangre problema en un tubo rotulado CLP (células lavada del
paciente) 12 x 75mm, lavar tres veces por TOC (tiempo óptimo de centrifugado), y
luego preparar las células al 5% en solución salina
4. Rotule 7 tubos de la siguiente manera: D, A, B, AB, AC, CA Y CB.
5. Depositar en el tubo D una gota de los hematíes lavados al 5%, una gota de anti-D,
una gota de albumina bovina al 22%, incubar a 37 0C por 15 minutos.
6. Depositar una gota de los hematíes lavados al 5% en los tubos A, B, AB, AC.
7. Depositar en los tubos CA y CB una gota del suero de la sangre problema.
8. Agregar: Al tubo marcado A, una gota de anti-A.

Al tubo marcado B, una gota de anti-B
Al tubo marcado AB, una gota de anti-A, B
Al tubo marcado AC, una gota del suero problema.
A los tubos marcados CA y CB, una gota de suspensión de células ayb
respectivamente.
9. Centrifugar todos los tubos (D, A, B, AB, AC, CA y CB por 30 segundos a 3400, rpm y
leer.
10. Reportar los resultados sobre la base de la observación de aglutinación macroscópica.
pág. 29
Nota: si la muestra es Rho negativo, realizar la variante D débil.

1. Grupo A:
Aglutinación en los tubos A y AB, indica la presencia del antígeno A, y
aglutinación en el tubo CB indica la presencia de anticuerpo anti-B. Determinar
subgrupo.
2. Grupo B:
Aglutinación en los tubos B y AB, indica la presencia del antígeno B y
aglutinación en el tubo CA indica la presencia de anticuerpo anti-A.
3. Grupo AB:
Aglutinación en los tubos A, B y AB, indica la presencia de los antígenos A y B,
ausencia de aglutinación en los tubos CA y CB, indica la ausencia de los
anticuerpos anti-A y anti-B. Determinar subgrupo.
4. Grupo O:
Ausencia de aglutinación en los tubos A, B y AB, indica la ausencia de los
antígenos A y B. La presencia de aglutinación en los tubos CA y CB indica la
presencia de los anticuerpos anti-A y anti-B.
5. Aglutinación en el tubo AC, indica la presencia de autoanticuerpos. La no

aglutinación indica la ausencia de autoanticuerpos.
6. Aglutinación en el tubo D, indica la presencia de antígeno D o Rho. (Rho

positivo).
7. Ausencia de aglutinación en el
8. tubo D, indica ausencia de antígeno D o Rho. (Rho negativo). Realizar variante

D débil.
Notas: El tubo AB es un tubo control para los antígenos (tubo A y B).
pág. 30
El tubo AC es un autocontrol (autoanticuerpos).
Estos tubos no se reportan.

Ejemplo de reporte:
Resultados: Grupo sanguíneo________ Rho___________
Intrepretacion:
1. Al mezclar la célula con los antisueros comerciales anti- __ anti-__ y anti- ___
presento aglutinación o no presento aglutinación.
2. Al mezclar el suero del paciente con las células conocidas A y B, hubo

aglutinación en el tubo____ y no hubo aglutinación en el tubo_____.
3. Al mezclar las células lavadas con anti-D y albumina bovina al 22% presento
aglutinación o ausencia de aglutinación en el tubo D.
4. Si se realiza la variante D débil, al mezclar la célula Rho negativa con anti-D o

anti-Rho, albumina bovina al 22% y Antiglobulina humana, hubo presencia o
ausencia de aglutinación.
Conclusión:
Mi grupo sanguíneo es _____ Rho_____ porque está presente o ausente los

antígenos______, presentes o ausentes los anticuerpos anti- ____ o anti-___ y
presente o ausente el antígeno D Rho. Está presente o ausente la variante D
débil.
pág. 31
Practica # 7
Nombre:________________________ Matricula: ____________
Determinación:_________________________________________
Muestra: _________________ Método: _____________________
Reactivos: ________________, ____________________________
______________________________, _______________________
Resultado: Grupo_______ Rho_______ D débil ______
Resultado final: Grupo________Rho __________
Intrepretacion:
1._____________________________________________________
2._____________________________________________________
pág. 32
3._____________________________________________________
4._____________________________________________________
Conclusión:

Practica # 8
Tipificación o clasificación sanguínea en GEL
Principio: Investigar e identificar antígenos y anticuerpos eritrocitarios. Cada

microtubo tiene en su interior una materia filtrante formando una red de poros.
Mediante un proceso de centrifugación los hematíes aglutinados son retenidos por
esta red, permitiendo a los no aglutinados su desplazamiento al fondo de la columna.
Principio de la técnica en Gel
Objetivo:
Estandarización de la lectura de la reacción
Eliminar la lectura al microscopio
Eliminar el proceso de agitación del tubo
Facilidad y repetividad de la lectura
Estandarización del uso de los reactivos, tiempo y lectura.
Muestra: Sangre con anticoagulante
Reactivo: Tarjeta de tipificación, diluente 2, células A y B.
Materiales: tips, tubos12 x 75 mm, pipetas, dispensadores etc.
Equipos: Centrífuga e incubadora para tarjeta de gel, centrifuga para tubos.
pág. 33
Método: Gel (el método de gel emplea el principio de centrifugación controlada de los
eritrocitos a través del gel dextran acrilamida contenido en el microtubo).

Procedimiento
1. Centrifugue la muestra, luego de centrifugado no separar plasma.
2. Prepare una suspensión de células al 0.8 % de la siguiente manera: En un tubo 10 x 75

mm agregar 1 ml del diluente 2 y 10 uL del paquete globular.
Prueba directa
3. Rotular la tarjeta del gel, retirar el papel de aluminio.
4. Agregar 50 uL de la suspensión de células (poner la punta del Tips en ángulo de

900) al microtubo A, B, D, Ctl.
5. Agregar 50 uL de células A y B al microtubo a y b.
6. Agregar al microtubo a y b 50 uL de plasma (poner pipeta de forma vertical).
7. Centrifugar la tarjeta por 10 minutos.
8. Leer los resultados.
Interpretación positiva
Aglutinación sobre la microcolumna__________________________Grado 4
pág. 34
Aglutinación en la mitad superior de la microcolumna____________ Grado 3
Aglutinación en toda la columna del gel_______________________ Grado 2
Aglutinación en la mitad inferior de la micro columna______________Grado 1
Aglutinación en el fondo del pocillo____________________________Grado 0

Es Escuela de Bioanálisis
Practica # 9
Prueba de compatibilidad
Principio:
Garantizar la ausencia de anticuerpos séricos del paciente, capaces de reaccionar con los
antígenos de los glóbulos rojos transfundidos.
La prueba de compatibilidad es una de las pruebas más importantes en un servicio

transfusión y su finalidad es detectar la presencia de reacciones antígeno-anticuerpo. En
esta prueba no se detecta errores del sistema Rho.
La prueba debe ser desarrollada de tal forma, que permita detectar aquellos anticuerpos
que sean clínicamente importantes. Estos anticuerpos según su comportamiento
serológico, pueden ser aglutininas de reacción en medio salina o albuminosa, hemolisina
o anticuerpos detectables solo en la prueba de Coombs (anticuerpos que sensibilizan
las células).
La prueba de compatibilidad debe ser realizada con un gran cuidado antes de administrar
la sangre para la transfusión.
:
Consta de 2 partes: prueba de cruce mayor y prueba de cruce menor.
En la prueba de cruce mayor: el suero del receptor (paciente) es enfrentado con las
células del donante en varias fases, y detectar anticuerpos en el suero del receptor
(paciente) que puedan dañar los glóbulos rojos que va a recibir.
En la prueba de cruce menor: el suero del donante es enfrentado con los glóbulos rojos
del receptor o paciente, y detectamos anticuerpos en el suero del donante que puedan
dañar los glóbulos rojos del paciente o receptor.
La prueba de compatibilidad consta de 4 fases
pág. 35
1. Fase salina o temperatura ambiente: detecta errores de ABO. (Anticuerpos IgM).
2. Fase albuminoidea: ayuda a la mejor unión de los glóbulos rojos, disminuyendo el

potencial Z. El potencial Z es uno de los parámetros fundamentales que controla la
interacción de las partículas en suspensión.

3. Fase térmica o de incubación a 370C: proporciona la temperatura necesaria a los

anticuerpos de tipo IgG.
4. Fase antiglobulínico: detecta los anticuerpos irregulares.
Nota: en cada fase se centrífuga por un minuto a 3,400 rpm.
Objetivos:
 Detectar anticuerpos en el receptor o paciente que vayan en contra de los

antígenos del donante.
 Detectar anticuerpos en el donante que vayan en contra de los antígenos del

receptor o paciente.
 Detectar errores en cada una de las fases de la prueba de compatibilidad.
Tipos de muestras:
 Sangre sin anticoagulante del donante o dador.

 Sangre sin anticoagulante del receptor o paciente.

Tomar dos tubos diferentes, debidamente rotulados, 5 ml de sangre sin anticoagulante del
receptor o paciente y donante.
Reactivos:
 Antiglobulina humana o suero de Coombs (anti-IgG).
 Albumina bovina al 22% o 30%.
 Solución salina 0.9%.
 Células control de Coombs.
pág. 36
Materiales y Equipos:
Tubos 12 x 75 ml, Gradillas, Goteros, Baño de María, Microscopio y Lámpara de
visualización.

Procedimiento:
1. Centrifugar las muestras donante y paciente.
2. Separar el suero de la célula en tubos rotulados correctamente (suero del paciente

(SP) y Suero del donante (SD).
3. En tubos identificados Células del Donante (CD) y Células del Paciente (CP),
agregar 5- 10 gotas de células de cada uno, lavar 3 veces por 1 minuto y preparar
al 5% en solución salina.
4. Rotular tres tubos: Cruce mayor (C+), cruce menor (C-) y autocontrol (A/C).
5. Fase salina o temperatura ambiente:
 En el tubo rotulado cruce mayor (C+) deposite: 2 gotas del suero del
paciente y 1 gota de células del donante al 5% en solución salina. (SP/CD).
 En el tubo rotulado cruce menor (C-) deposite: 2 gotas de suero del donante
y 1 gota de células del paciente al 5% en solución salina. (SD/CP).
 En el tubo rotulado autocontrol (A/C) deposite: 2 gotas del suero del

paciente y 1 gota de células del paciente al 5% en solución salina.
 Centrifugar los 3 tubos por 30 segundos a 3,400 rpm, luego observar el

sobrenadante de los tubos en busca de hemolisis y luego resuspender los
tubos en busca de aglutinación.
6. Fase albuminoidea:
 Agregar a los 3 tubos 1 gota de albumina bovina al 22% o 30%.
pág. 37
 Centrifugar los 3 tubos a 3,400 por 30 segundos, luego observar el

7. Fase térmica o de incubación a 370 C.

 Incubar los 3 tubos a 370 C durante 15 a 60 minutos.
 Centrifugar los 3 tubos a 3,400 por 30 segundos, luego observar el

8. Fase antiglobulínico:
 Lavar los tubos 3 veces con abundante solución salina al 0.9%, descartando
bien el ultimo lavado, para evitar interferencia con la Antiglobulina humana.
 Agregue a los tubos 1 gota de Antiglobulina humana o suero de Coombs

(anti- IgG). Centrifugar los tubos por 30 segundos a 3,400 rpm, luego
resuspender los tubos en busca de aglutinación.
 Si no aparece aglutinación o hemolisis, agregar a los tubos 1 gota de células

control de Coombs y debe aglutinar, de lo contrario repetir todo el
procedimiento.
Control de calidad: Se usa la célula de control de Coombs.
Interpretación:
 Si no se observa aglutinación o hemolisis en ninguna de las fases, indica que hay
compatibilidad serológica entre el paciente y el donante, la sangre se puede
transfundir.
 Si se observa aglutinación o hemolisis en cualquiera de las fases, en el cruce

mayor (C+) o en el cruce menor (C-), indica que no hay compatibilidad serológica
entre paciente y donante, la sangre no se puede transfundir.
Aplicación clínica: Reacciones post-transfusionales por incompatibilidad serológica entre

donante y paciente.
pág. 38
Interferencias:
 Muestras viejas o contaminadas.
 Muestras con anticoagulante.
 Sueros hemolizados.

Grupos y Rho Puede donar a: Puede recibir de:
A+ A+ y AB+ A-, A+. O+ y O-
A- A+, A-, AB+ y AB- A- y O-
B+ B+ y AB+ O+, O-, B+ y B-
AB+ AB+ A+, A-, B+, B-, AB+ y

AB-
O+ A+, B+, AB+ y O+ O+ y O-
O- A todos O-
Ejemplo de reporte:
Resultados:
Prueba de compatibilidad: Compatible o Incompatible.
Interpretación: Al realizar el Cruce Mayor (SP/CD) y Cruce Menor (SD/CP) presento o no

presento aglutinación hemolisis o aglutinación en cualquiera de las fases.
Conclusión: La muestra del paciente es compatible o Incompatible con la muestra del

donante por lo que no o si se puede transfundir.
pág. 39
Practica # 9
Nombre:_______ ___________________________ Matricula: ____________
Determinación_________________________________________________
Muestra:_________ _________________ Método: _____________________
Reactivos:_________ ________________, ____________________________
______________________________, ________________________________
Resultados: prueba de compatibilidad:
Interpretación:
Conclusión:
pág. 40
Practica # 10
Selección del donante de Grupo “O”
Principio:
Se fundamenta en determinar la cantidad de anticuerpos naturales anti-A y anti-B en el
suero de donante de grupo “O”, mediante una reacción antígeno-anticuerpo. Detectar la
presencia de anticuerpos hemolíticos o hemolisinas en el suero de donante de grupo “O”.
Objetivos:
Determinar el título de los anticuerpos naturales anti-A y anti-B presentes en el suero de

donante grupo “O”.
Detectar la presencia o no de hemolisina o anticuerpos hemolíticos en el suero de

donante de grupo “O”.
Condiciones para que la sangre de grupo O (paquete globular), pueda ser transfundida a
los otros grupos sanguíneos:
 Que el título de anticuerpos naturales anti-A y anti-B sean menor de 1:50.

 Que haya ausencia de anticuerpos hemolíticos (hemolisina).
Muestra: Suero de grupo O.
Métodos: Aglutinación en tubo, para los anticuerpos naturales.

Hemolisis en el sobre nadante para, los anticuerpos hemolíticos.
pág. 41
Recolectar 5 ml de sangre sin anticoagulante en un tubo debidamente rotulado de
donante de grupo O. dejar reposar, centrifugar y separar el suero. Esta muestra
refrigerada de 2 – 80 C dura 3 días (72 horas).
Reactivos: Materiales y Equipos:

 Suspensión de células A al 5% tubos 13 x 100 mm y 12 x 75mm,
 Suspensión de células B al 5% gradilla, pipetas de 5 ml, 1 ml,
 Solución salina 0.9% 0.2ml, 0.1ml, goteros centrifugas,
Baño de María y lamp de
Visualización.

Investigación de Hemolisina o anticuerpos Hemolíticos
Muestra: Suero de Grupo O
Reactivos: Células A y Células B al 5%
Método: Reacción Hemolítica
Procedimiento:
1. Identificar 2 tubos de ensayo con las letras A y B.
2. Colocar 0.1 ml de suero en estudio a cada tubo.
3. Agregar 0.1 ml de la suspensión de células A, al tubo marcado A; y 0.1 ml de la

suspensión de células B, al tubo marcado B.
4. Mezclar e incubar ambos tubos a 370 C por 60 minutos.
5. Centrifugar a 3,400 rpm durante 45 segundos, luego observar el sobrenadante en

busca de hemolisis.

 El sobrenadante rosado o rojo, indica la presencia de anticuerpos hemolíticos.
 El sobrenadante claro, indica ausencia de anticuerpos hemolíticos.
 Se reporta: positivo o negativo.
 Los donantes de grupo O no deben tener presencia de hemolisina.
pág. 42
Nota: si el donante de grupo O es positivo para los anticuerpos hemolíticos solos puede
donar a pacientes de su mismo grupo, o sea a grupo O.
Si el donante de grupo O es negativo para los anticuerpos hemolíticos puede donar a los
demás grupos A, B y AB (paquete globular).
Interferencias:
Muestras hemolizadas, viejas y contaminadas.

Titulación de anticuerpos naturales anti-A y anti-B
Muestra: Suero de grupo O.
Reactivos: Células A y Células B al 5%.
Medio de conservación: Solución salina.
Procedimiento:
1. En un tubo de ensayo 13 x 100mm, preparar una dilución del suero problema en

solución salina 0.9% en proporción 1:50, colocando 4.9 ml de solución salina y 0.1
ml de suero en estudio y mezclar.
2. Dejar en reposo 2 minutos.
3. Rotular 2 tubos de ensayo 12 x 75 mm con la letra A y B, colocar a cada uno de

ellos 2 gota de la dilución del suero 1:50, ya preparada.
4. Agregar al tubo A una gota de células A; y al tubo B una gota de células B.
5. Luego centrifugar ambos tubos a 3,400 rpm por 1 minuto.
6. Resuspender en busca de aglutinación.

 Si ninguno de los tubos presenta aglutinación, el título de anticuerpos naturales
anti-A y anti-B es menor que 1:50.
pág. 43
 Si el tubo A presenta aglutinación, el título de anticuerpos anti-A, es mayor o igual a
1:50.
 Si el tubo B presenta aglutinación, el título de anticuerpos anti-B, es mayor o igual a

1:50.
 El donante de grupo O debe tener un título de anticuerpos naturales anti-A y anti-B

por debajo de 1:50.
 Si el donante de grupo O presenta anticuerpos naturales con títulos mayor o igual a
1:50, solos puede donar a los pacientes de grupo O.

Aplicación clínica general:
La selección de donante de grupo O para transfundir su paquete globular, en pacientes de

grupos sanguíneos A, B, y AB.
Interferencias:
 Muestra viejas y contaminadas.

 Muestras hemolizadas.
Ejemplos de reporte:
Resultados:
1. Los anticuerpos naturales anti-A y anti-B tienen un título menor de 1:50 o un título
mayor o igual a 1:50.
2. Los anticuerpos hemolíticos están positivo o negativo.
Interpretación:
1. Al mezclar el suero del donante de grupo O con células A y células B presento o no
presento hemolisis.
2. Al mezclar el suero diluido del donante de grupo O (1:50) con células A y células B,
presento o no presento aglutinación.
Conclusión:
Anticuerpos hemolíticos están presente o ausente.
Anticuerpos naturales anti-A y anti-B tienen títulos menor o mayor o igual a 1:50.
pág. 44
Conclusión final: El donante de grupo O puede o no ser donante universal.

Practica # 10
Nombre: _______ ________________________ Matricula: ____________
Determinación_________________________________________________
Muestra: _________ _________________ Método: _____________________
Reactivos: _________ ________________,____________________________
______________________________, ________________________________
Resultados:
Interpretación:
pág. 45
Conclusión:

Practica # 11 y 12
Prueba de Antiglobulina Directa (PAD) E Indirecta (PAI)
Principios:
La prueba de Antiglobulina directa (PAD) se fundamenta en detectar la presencia de

células rojas revestidas o sensibilizadas de anticuerpos, a través de una reacción
antígeno-anticuerpo. Esto significa de la fijación de los anticuerpos sobre los eritrocitos
ocurrió in vivo.
La prueba de Antiglobulina Indirecta (PAI) se fundamenta en determinar la presencia

de anticuerpos irregulares circulantes en el suero de paciente a través de una reacción
antígeno-anticuerpo. Estos anticuerpos irregulares reaccionan in vitro con el
correspondiente antígeno.
Objetivos:
 Detectar la presencia de antígenos sensibilizados o recubiertos de anticuerpos en
reacciones que ocurran in vivo, a través de reacciones Ag-Ac, en la prueba de
Coombs directa.
 Detectar la presencia de anticuerpos irregulares que se encuentran circulando,

mediante una prueba de Coombs Indirecta.
Tipos de muestras:
Antiglobulina directa: sangre sin anticoagulante.
Antiglobulina indirecta: sangre sin anticoagulante.
pág. 46
Prueba de Antiglobulina Directa (PAD) #11
Recolección y condición de la muestra:
Tomar en un tubo sin anticoagulante 5 ml de sangre. Dejar en reposos hasta que se

retraiga el coagulo. Debe de conservarse de 2-8 0 C no más de 72 horas.
Reactivos:
 Suero Antiglobulina humana o suero de Coombs.

Tubos 12x75 mm, gradilla, Goteros, microscopio y lámpara de visualización.
Procedimiento:
 Resuspender la muestra en su propio suero y depositar en un tubo, previamente
rotulado, de 5 a 10 gotas. Lavar los hematíes 3 veces con solución salina 0.9% y
preparar una suspensión de eritrocitos al 5%.
 Rotular un tubo 12x75mm y agregar una gota de la suspensión.
 Lavar 4 veces con solución salina, descartar bien el último lavado y secar.
 Agregar una gota de Antiglobulina humana, mezclar y centrifugar a 3,400 rpm por
un minuto.
pág. 47
 Resuspender y leer en busca de aglutinación.
 Verificar el resultado y si es negativo agregar 1 gota de las células control de

Coombs a los tubos negativos (sin aglutinación), centrifugar y observar
aglutinación, si no aglutina debe repetir la prueba.
 A los resultados positivos (aglutinación en el tubo) no se le agrega células control

de Coombs.
Control de calidad:
Uso de células control de Coombs.

Aglutinación: indica prueba de Antiglobulina Directa positiva.
No Aglutinación: indica prueba de Antiglobulina negativa.
Aplicación clínica:
La prueba de Coombs Directa está indicada en el diagnóstico de las siguientes

enfermedades:
 Enfermedad Hemolítica del Recién Nacido (niño).
 Anemia hemolítica Autoinmune.
 Investigación de reacciones transfusionales.
 Anemia Hemolítica y sensibilidad de los glóbulos rojos por medicamentos como:
quinina, penicilina, cefalosporina etc.
 Envenenamiento por plomo.
Interferencias:
 Muestra vieja y contaminadas
 Lavados insuficientes
 Lavado en exceso
 Interrupción en el lavado
 No secar completamente la salina.
 No agregar Antiglobulina humana o suero de Coombs.
Ejemplo de reporte
Resultado: Prueba de Antiglobulina Directa (PAD): positiva o negativa.
Interpretación: Al mezclar las células lavadas con anti-IgG hubo o no aglutinación.
pág. 48
Conclusión:
Negativo porque no hubo presencia de células rojas revestida de Anticuerpos.
Positivo porque hay presencia de células rojas revestida de Anticuerpos.

Practica # 11
Nombre:_______ ________________________ Matricula: ____________
Determinación_________________________________________________
Muestra:_________ _________________ Método: _____________________
Reactivos:_________ ________________, ____________________________
______________________________, ________________________________
Resultados:
Prueba de Antiglobulina Directa (PAD):
Interpretación:
pág. 49
Conclusión:

Prueba de Antiglobulina Indirecta (PAI)
Practica # 12
Tomar en un tubo sin anticoagulante 5 ml de sangre. Dejar en reposos hasta que se

retraiga el coagulo.
Reactivos:
 Células con antígenos conocidos (Selectrógenos I y II).
 Suero Antiglobulina humana o suero de Coombs.
 Albumina bovina.
Tubos 12x75 mm, gradilla, Goteros, lámpara de visualización.
Procedimiento:
1. Centrifugar la sangre a 3,400 rpm por 5 minutos y separe el suero en un tubo

debidamente rotulado.
2. Macerar el coagulo y depositar 5 gotas en un tubo previamente rotulado, lavar 3

veces con solución salina 0.9% y preparar células al 5%.
pág. 50
3. Rotule 3 tubos de la siguiente manera:
SI……………… Selectrógenos I………. Células I
SII……………... Selectrógenos II……... Células II
A/C…………… autocontrol o auto testigo
4. Agregar una gota de Selectrógenos I al tubo SI o CI.
5. Agregar una gota de Selectrógenos II al tubo SII o CII.
6. Agregar una gota de la suspensión de las células del paciente al tubo A/C.
7. Añadir a los 3 tubos dos gotas del suero del paciente.

8. Mezclar y centrifugar a 3,400 rpm los 3 tubos por 1 minuto, lea y anote resultados
en busca de hemolisis y aglutinación. (Fase salina)
9. Agregar a los 3 tubos una gota de Albumina Bovina mezcle y centrifugue por 1
minuto a 3,400 rpm, lea y anote resultados en busca de hemolisis y aglutinación.
(Fase Albuminoidea).
10. Colocar los 3 tubos en el baño de María a 37 0C 15 a 60 minutos.
11. Después de incubar centrifugar los 3 tubos, lea y anote resultados en busca de
hemolisis y aglutinación. (Fase Térmica).
12. Luego lavar 3 veces con solución salina 0.9%, los 3 tubos decantando bien el
ultimo lavado y secar.
13. Agregar 1 gota de Antiglobulina humana mezclar y centrifugar por 1 minuto, leer los
resultados en busca de aglutinación. (Fase antiglobulínico).
14. Si es negativo (no aglutinación) agregar 1 gota de células control de Coombs,

centrifugar y debe aglutinar .si no aglutina debe repetir la prueba.
15. Si es positivo (aglutinación) no agregar células control de Coombs
Control de calidad: Uso de células control de Coombs.
Interpretación de los Resultados:
Aglutinación o hemolisis, se reporte:

Prueba de Antiglobulina Indirecta: Positivo
pág. 51
Debe identificarse y titularse el anticuerpo encontrado.
No aglutinación o hemolisis, se reporta:

Prueba de Antiglobulina Indirecta: negativo.
Aplicación clínica
1. En toda persona que vaya a recibir o donar sangre.
2. Anemia hemolítica del recién nacido (madre).
3. Prueba de compatibilidad.
4. Investigación de anticuerpos y antígenos desconocidos.

Interferencias:
Muestras viejas y contaminadas.
Lavados insuficientes.
Lavados en exceso.
Interrupción en el lavado.
No secar completamente la solución salina.
No agregar Antiglobulina humana o suero de Coombs.
Ejemplo de reporte
Resultado:
Prueba de Antiglobulina Indirecta (PAI): Positiva o Negativa.
Interpretación:
Al mezclar el suero del paciente con los Selectrógenos I y II y anti-IgG no hubo hemolisis
y aglutinación en las diferentes fases.
Conclusión:
 Es negativo por la ausencia de Acs. Irregulares circulantes.
 Es positivo por la presencia de Acs. Irregulares circulantes.
pág. 52
Practica # 12
Nombre:_______ ________________________ Matricula: ____________
Determinación_________________________________________________
Muestra:_________ _________________ Método: _____________________
Reactivos:_________ ________________, ____________________________
______________________________, ________________________________
_____________________________, _________________________________
Resultados:
Prueba de la Antiglobulina Indirecta (PAI):
pág. 53
Interpretación:
Conclusión:
pág. 54
Practica # 11
Identificación de Anticuerpos Irregulares
Principio: Se fundamenta en la presencia de un anticuerpo irregular, que utiliza como

reactivo principal el panel de células, que consiste en sangre de grupo O con distintos
antígenos conocidos.
Objetivo: Identificar anticuerpos Irregulares.
Tipo de Muestra: Suero.
Condición de la muestra: Prueba de Antiglobulina Indirecta Positiva.
Recolección de la muestra:
Tomar 10 ml de sangre en un tubo seco, debidamente rotulado. Dejar retraer el coagulo,
centrifugar y separar el suero. Esta muestra es estable en refrigeración de 2-80C durante
72 horas.
Reactivos:
 Panel de células.
 Albumina bovina 22%
pág. 55
 Antiglobulina humana o suero de Coombs.
 Solución salina.
Método: Aglutinación o Hemolisis en tubo.
Materiales y Equipos:
 Tubos 12x75mm.
 Goteros.
 Gradillas.
 Centrifugas.
 Baño de María.
 Microscopio.
 Lámpara de visualización.

Procedimiento:
1. Marcar 11 tubos para el panel frio.

2. Marcar 11 tubos para el panel a temperatura ambiente, albumina bovina y 37 0 C.
3. Agregar a cada tubo 2 gotas de suero a investigar y 1 gota de cada una de las
células del panel, en su tubo correspondiente; mezcle y deje en reposo a
temperatura ambiente por 10 minutos.
4. Centrifugue todos los tubos en busca de aglutinación y anote los resultados.
5. Agregue a todos los tubos 1 gota de albumina bovina al 22% o 30%, luego
centrifugue todos los tubos a 3,400 rpm durante 1 minuto.
6. Desprenda suavemente el botón de células y evalué el grado de aglutinación,

anote los resultados.
7. Incube todos los tubos del panel en caliente al baño de María a 370C por 30
minutos. Incube todos los tubos del panel en frio al baño de 10-180C por 30
minutos.
pág. 56
8. Transcurrido el tiempo, centrifugue todos los tubos (panel en frio y caliente) por 1
minuto a 3,400 rpm.
9. Después de centrifugar, observe que en el sobrenadante no haya hemolisis; si

sucede anótelo, este dato es muy importante. Evalúe el grado de aglutinación.
10. Proceda a realizar 3 lavados con abundante solución salina; escurrir bien el último
lavado con papel absorbente la solución salina.
11. Agregar 1 gota de Antiglobulina Humano a todos los tubos. Centrifugue, lea y anote
los resultados.
12. Agregue 1 gota de células control de Coombs a los tubos no aglutinado, o sea,
negativos. Centrifugar los tubos y deben aglutinar.
13. Reporte el resultado y proceda a la titulación del o los anticuerpos para ofrecer los
resultados.

Titulación de anticuerpos Irregulares
La titulación de anticuerpos de un determinado suero consiste en proceder a realizar una
serie de diluciones del mismo, y ponerla en contacto con hematíes portadores del
antígeno correspondiente.
Esta prueba es rutinariamente realizada para determinar la concentración del anticuerpo,
pero pueden servir también para indicar la potencia del antígeno.
Los resultados de la prueba de titulación serán expresados en títulos y se reporta a partir
de la titulación más alta del suero en la cual ocurra reacción microscópica de aglutinación
o hemolisis.
Objetivos: La determinación de los títulos de los anticuerpos irregulares es de utilidad en

varios aspectos como son:
1. Para determinar la potencia de un anticuerpo en una muestra de suero, incluyendo
la determinación de efecto de prozona.
2. Para la determinación comparativa de la potencia de anticuerpos de una misma

especificidad en dos o más muestra, usando los mismos hematíes.
3. En estudios comparativos de un mismo anticuerpo con células diferentes.
Tipo de muestra: Suero
pág. 57
Condición de la Muestra: Prueba de Antiglobulina Indirecta Positiva
Recolección de la Muestra:
Tomar 10 ml de sangre un tubo seco, debidamente rotulado. Dejar retraer el coagulo,
centrifugar y separar el suero. Esta muestra es estable en refrigeración de 2-80C durante
72 horas.
Reactivos:
Panel de células
Albumina bovina 22%
Antiglobulina humana o suero de Coombs
Solución salina 0,9%
Células control de Coombs.

Tubos 12x75ml
Goteros
Gradillas
Pipetas
Centrifuga
Baño de María
Microscopio
Procedimiento:
1. Rotular 10 tubos para indicar las siguientes diluciones: 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32,
1:64, 1:128,1:256, 1:512 y 1:1024.
2. Agregar a los tubos 1 y 2 0.1ml del suero en estudio.
3. Agregar 0.1ml de solución salina a partir del tubo #2 hasta #10.
4. Transferir 0.1ml de la dilución del tubo 2 al 3 mezcla y transferir 0.1 ml al 4 y así
sucesivamente hasta el tubo 10 y descartar 0.1 ml de la dilución.
pág. 58
5. Agregar 0.1 ml de las células adecuada en todos los tubos.
6. Proceder a la prueba antiglobulínico.
o Fase salina a temperatura ambiente.

o Fase albuminoidea a temperatura ambiente.
o Fase albumina a 370C.
o Fase antiglobulínico humana.
7. Centrifugar a 3,400 rpm por 1 minuto

8. Leer y evaluar el grado de reacción de aglutinación macroscópica.
9. Se reporta el grado más alto de dilución del suero que presente reacción de aglutinación
macroscópica.
pág. 59

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Universidad Central Del Este

Facultad de ciencias de la salud

Manual de procedimientos de Inmunohematología

3 Sistema ABO (deter de ags y acs) Si

4 Fenotipo Rho y variante D débil Si

5 Tipificación con variante D débil Si

6 Tipificación con variante D débil No

8 Tipificación sanguínea en Gel No

10 Prueba de compatibilidad (repaso)

12 Pruebas de las Antiglobulinas Si

Reglamentos para las prácticas

1. La asistencia a las prácticas es obligatoria. La entrada formal o inicio más tardar

2. El manual de prácticas es obligatorio, no fotocopias. El estudiante debe tener

3. El estudiante deberá llegar al laboratorio con su práctica previamente leída, ya que

4. El protocolo de cada práctica se dará el día correspondiente, no otro día. Si el

5. Las prácticas NO se reponen. En caso extremo de necesitar una reposición, el

6. El valor de cada protocolo es de 30 puntos. El que no lo tome equivale a cero.

7. La práctica fundamental es obligatoria, con un valor de 5 puntos, en que no lo

8. Examen final de practica 25 puntos.

Normas de bioseguridad en el laboratorio

2 El uso de guantes es estrictamente obligatorio.

4 Uso mascarilla, gorro y lentes.

5 Está prohibido fumar o comer en el laboratorio.

6 Está prohibido peinarse y maquillarse dentro del laboratorio.

7 La vestimenta debe ser apropiada, cubierta y decente (decorosa).

8 El cabello debe estar recogido total o parcialmente. No tener pelo que le

9 Los zapatos deberán ser totalmente cerrados.

10 Al finalizar la practica el estudiante deberá recoger su área de trabajo,

Garantía de calidad en banco de sangre

Consiste en desarrollar técnicas de control de calidad para los equipos, reactivos y

Garantizar la calidad de los equipos, reactivos y muestras usadas en los Bancos de

Conocer el tipo de muestra utilizada en el Banco de Sangre.

Registrar y archivar el control de calidad de los equipos y de los reactivos.

Calidad en Banco de Sangre

Calidad: conjunto de propiedades y característica de un servicio que permiten

Aseguramiento de la calidad: conjuntos de acciones planificadas y sistemáticas que

Control de calidad: es un sistema de comprobación y equilibrio.

Condiciones indispensables de un Bioanalista para el cumplimiento del control

1. Tener conciencia de implementar y desarrollar un control de calidad.

Aspecto a tomar en cuenta en el control de calidad del Banco de Sangre:

2. Instructivo de Técnicas y Estandarización:

El instructivo o guía debe contener todas las instrucciones y sugerencia de los

 Es un libro donde se anota lo todo lo que sucede en el Banco de Sangre se anota:

4. Condiciones indispensables en el personal de Banco de Sangre

Integridad, criterio de trabajo, honestidad, sensibilidad, responsabilidad entre otro.

La sensibilidad humana del individuo juega un papel determinante, ya que las

Entre los equipos tenemos:

Caja de visualización, Baño de María, congelador, nevera de los reactivos, nevera de

Baños húmedo o de agua: la temperatura usada para las reacciones Ags/Acs es de

Baño seco o calor seco: la temperatura se muestra de manera digital, se debe

Termómetro de Baño de maría: es un instrumento (no equipo), debe ser de buena

La nevera de los hemocompentes o unidades de sangre: la temperatura se le debe

6. Sangre y sus derivados:

La esterilidad de los hemocompentes, donde se establece realizar un cultivo a una

El control de calidad del reactivo consiste en realizar las pruebas de Titulación y

8. Eliminación de residuo peligroso:

Residuos comunes: no contaminado que pueden eliminarse como si fuera basura en

Residuos patógenos. Se clasifican:

 Residuos provenientes de cultivos del laboratorio.

Se eliminan en bolsas de color rojas.

Residuos químicos peligrosos.

Preparación de suspensión de células

Las suspensiones de células rojas (hematíes) se prepara con sangre fresca al

La concentración a que se utilizan las suspensiones de células en los procedimientos