Introducción

El colesterol es un tipo de grasa que se encuentra solamente en los alimentos de

origen animal. En el cuerpo humano, esta grasa es necesaria para producir hormonas como
las sexuales, formar las paredes de nuestras células, las sales biliares y la vitamina D. Se ha
señalado como colesterol bueno el unido a las HDL, lipoproteínas que se encuentran en la
sangre y atrapan el colesterol circulante para llevarlo al hígado donde es utilizado en la pro-
ducción de hormonas y otros compuestos. En otras palabras, las HDL contribuyen a dismi-
nuir el colesterol circulante en la sangre y evita que se acumule en las paredes de las venas y
arterias. Por el contrario, el colesterol que está unido a los LDL, lipoproteínas que se encuen-
tran en la sangre y que transportan el colesterol del hígado hacia los tejidos, es conocido co-
mo colesterol malo. Cuando las cantidades de LDL en la sangre son altas, provocan acumula-
ción de colesterol en las venas y arterias. Si esta situación persiste durante un período prolon-
gado, se produce ateroesclerosis y otras enfermedades circulatorias y del corazón. Mediante
la práctica constante de ejercicio físico y una alimentación saludable se puede aumentar los
niveles de HDL en sangre y reducir los niveles de LDL. Para determinar cada uno de ellos se
utiliza una prueba específica, en este caso, para el HDL. La determinación de HDL mide la
concentración de colesterol HDL en sangre. Niveles elevados de colesterol se asocian a
desarrollo de aterosclerosis (endurecimiento de las arterias) y enfermedad cardíaca.
 Determinación de HDL colesterol
o Definición del colesterol HDL

Las lipoproteínas de alta densidad (HDL) son una familia de partículas que difieren en
tamaño, densidad y composición química. La heterogeneidad de las HDL resulta de la
velocidad de síntesis y de catabolismo de las partículas, y de la acción de enzimas y proteínas
de transporte que las remodelan continuamente. Los bajos niveles de colesterol HDL
correlacionan con un riesgo elevado de desarrollar enfermedad aterosclerosa coronaria. La
disminución de las HDL afecta el transporte reverso de colesterol, que es la vía metabólica
responsable de la remoción del colesterol excedente de la células periféricas y su transporte
hacia el hígado para reciclarlo o eliminarlo. Las HDL poseen además propiedades
antiinflamatorias, antioxidativas, antiagregatorias, anticoagulantes y profibrinolíticas in vitro.
Algunas de estas propiedades potencialmente antiaterosclerosas, también se han puesto de
manifiesto in vivo con infusiones de HDL.

o Métodos ultizados  para determinación del colesterol HDL

Determinación del colesterol HDL mediante el método de precipitado (fosfotungstato):

Para realizar este método se usó 1 ml de reactivo (fosfotungstato 0,4 mmol/L y cloruro de
magnesio 20 mmol/L), que se mezcla con 0,2 ml de la muestra de suero, se agitq bien y se
deja durante 10 minutos a temperatura ambiente, se centrifugó por 10 minutos a 4000 rpm.
En el precipitado quedan las VLDL, IDL y LDL, y en el sobrenadante quedan las HDL.

Determinación del colesterol HDL mediante el método directo (detergente): Este método
consta de: un Reactivo A, que contiene un Buffer good, colesterol oxidasa < 1 U/ml,
peroxidasa < 1 U/ml, N,Nbis(4-sulfobutil)-m-toluidina 1 mmol/L, un acelerador 1 mmol/L.
Un Reactivo B, que contiene: Buffer good, colesterol esterasa < 1,5 U/ml, 4-AA 1 mmol/L,
ascorbato oxidasa < 3,0 KU/L y un detergente.

Determinación colesterol total (CT). Para la determinación del CT en el suero, se

mezclaron 10 µl de la muestra y 1 ml de reactivo (PIPES 35 mmol/L, colato sódico 0,5
mmol/L, fenol 28 mmol/L, colesterol esterasa > 0,2 U/ml, colesterol oxidasa > 0,1 U/ml,
peroxidasa > 0,8 U/ml, 4-AA 0,5 mmol/L, pH 7,0).

Determinación de triglicéridos (TG). Se utilizaron 10 µl de la muestra y 1 ml de reactivo

(PIPES 45 mmol/L, 4-clorofenol 6 mmol/L, cloruro magnésico 5 mmol/L, lipasa > 100 U/ml,
glicerolquinasa > 1,5 U/ml, glicerol-3P-oxidasa > 4 U/ml, peroxidasa > 0,8 U/ml, 4-AA 0,75
mmol/L, ATP 0,9 mmol/L, pH 7,0).
 o Fundamento del método para la determinación del Colesterol HDL

El presente, es un método homogéneo que emplea dos reactivos. En la primera etapa de la

reacción, se solubiliza y consume el colesterol libre o unido a proteínas distintas de la HDL
en una reacción que involucra a colesterol oxidasa (CHO), peroxidasa (POD) y N-etil-N-(2-
hidroxi-3-sul-fopropil)- 3-toluidina disódica (TOOS) dando lugar a un producto no
coloreado. En una segunda etapa, un detergente solubiliza específicamente las HDL. El HDL-
colesterol es liberado para reaccionar con colesterol esterasa (CHE), colesterol oxidasa y
TOOS, dando un producto coloreado:

o Significado clínico de los Colesterol HDL 

Las lipoproteínas plasmáticas son partículas esféricas que contienen
cantidades variables de colesterol, triglicéridos, fosfolípidos y proteínas. Los fosfolípidos,
el colesterol libre y las proteínas constituyen la superficie externa de la partícula
lipoproteica, mientras que su core contiene en mayor proporción colesterol esterificado y
triglicéridos. Estas partículas solubilizan y transportan el colesterol en el torrente
sanguíneo. La proporción relativa de proteína y lípido determina la densidad de estas
lipoproteínas y provee las bases sobre las cuales establecer una clasificación. Estas clases
son: quilomicrones, lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL - Very Low Density
Lipoproteins), lipoproteínas de baja densidad (LDL - Low Density Lipoproteins) y
lipoproteínas de alta densidad (HDL - High Density Lipoproteins). Numerosos estudios
clínicos han demostrado que las diferentes clases de lipoproteínas tienen distintos y
variados efectos en el riesgo de enfermedad coronaria. La función principal de las HDL
en el metabolismo lipídico es la captación y transporte de colesterol desde los tejidos
periféricos al hígado en un proceso conocido como transporte reverso de colesterol
(mecanismo cardioprotectivo). El HDL-colesterol bajo, está asociado con un alto riesgo
de enfermedad cardíaca. Por este motivo la determinación de HDL-colesterol es una
herramienta útil en la identificación de individuos de alto riesgo.
 o Niveles normales en la sangre. 

Estudios tanto de hombres como de mujeres han mostrado que cuanto más alto sea
su HDL, menor será su riesgo de padecer enfermedad arterial coronaria. Es por esto que
el HDL suele llamarse colesterol "bueno". Los niveles deseados de colesterol HDL están
entre los 40 y los 60 mg/dL (de 2.2 a 3.3 mmol/l).

o Factores que influyen en el aumento o disminución en la determinación

del Colesterol HDL
Tomar ciertos medicamentos puede disminuir los niveles de HDL en algunas personas. Estos
incluyen:

 Betabloqueantes, un tipo de medicinas para la presión arterial

 Esteroides anabólicos, incluyendo la testosterona, una hormona masculina

 Progestinas, hormonas femeninas que se encuentran en algunas píldoras

anticonceptivas y terapia de reemplazo hormonal

 Benzodiazepinas, sedantes que a menudo se usan para la ansiedad y el insomnio

Si está tomando alguno de estos medicamentos y tiene un nivel muy bajo de HDL, pregúntele
a su proveedor si debe seguir tomándolos.

o Cuales son los valores de referencia en la determinación del Colesterol

HDL
Edad Niveles Favorables de colesterol HDL

Edad 19 - Mas de 45 mg/dl

Hombres 20 + Mas de 40 mg/dl

Mujeres 20 + Mas de 50 mg/dl

 o Donde se sintetiza el Colesterol HDL

Las HDL , lipoproteínas de alta densidad, también se producen en el hígado y eliminan

de las células el exceso de colesterol llevándolo al hígado, único órgano que puede
desprenderse de éste convirtiéndolo en ácidos biliares.

o Identificar los materiales y equipos que se utilizan para la determinación 

del Colesterol HDL
- Material volumétrico para medir los volúmenes indicados

- Analizador automático

o Manejo de espectrofotometro
Un espectrofotómetro es un instrumento usado en el análisis químico que sirve para medir,
en función de la longitud de onda, la relación entre valores de una misma magnitud
fotométrica relativos a dos haces de radiaciones y la concentración o reacciones químicas que
se miden en una muestra. También se utiliza en laboratorios de química para
la cuantificación de sustancias y microorganismos.

Este espectrofotómetro es un instrumento fácil de usar que ejecuta mediciones de

absorbancia, % de transmitancia y concentración dentro del rango de longitud de onda de 325
a 1100 nanómetros. Consta de un interruptor de apagado y encendido, una pantalla digital,
una tapa del compartimiento de muestra, el teclado, una puerta del compartimiento de la
lámpara.

TECLADO:

 Pantalla de cristal líquido de 20 caracteres en 2 líneas.

 Tecla FUNCIÓN 1: La función varia dependiendo de la pantalla, generalmente salir,

retroceder o borrar.

 Tecla FUNCIÓN 2: La función varia dependiendo de la pantalla, generalmente entrar,

aceptar o continuar.

 Tecla de SELECCIÓN: Usada para recorrer el menú e ingresar valores numéricos.

 Controles de longitud de onda: Aumenta y disminuye el ajuste de longitud de onda

 0 Abs/100%T: (Cero Abs/100% Transmitancia) Aumenta automáticam. el instrumento a

cero absorbancia (100%T).

 A/T/C: Cambia entre modos de absorbancia, % de transmitancia y concentración.

 Utilidades: Accede al ajuste del instrumento, diagnóstico y otras funciones.

 IMPRIMIR: Envía los datos actuales a una impresora seleccionada.

o Longitud de onda.
- Longitud de onda: 505 nm

o Cantidad de muestra utilizada en la prueba y tiempo de incubación 

Suero o plasma

a) Recolección: previo ayuno de 12 a 14 horas, obtener suero o plasma. Separar de los

glóbulos rojos dentro de las 2 horas de extracción.

b) Aditivos: en caso de emplear plasma, se recomienda el uso de Anticoagulante W o

heparina para su obtención.

c) Sustancias interferentes conocidas: no se observan interferencias por bilirrubina hasta 15

mg/dl; hemólisis marcadas no interfieren en la determinación. Referirse a la bibliografía de
Young para los efectos de las drogas en el presente método.

d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: los triglicéridos en suero son estables 3

días en refrigerador (2-10o C). No congelar.

- Tiempo de reacción: 5 minutos

 Conclusión
El HDL corresponde a una familia de partículas que difieren en tamaño, densidad y
composición química. La heterogeneidad de las HDL resulta de la velocidad de síntesis y de
catabolismo de las partículas, y de la acción de enzimas y proteínas de transporte que las
remodelan continuamente. Por definición, el término hipoalfalipoproteinemia corresponde a
concentraciones plasmáticas de CHDL por debajo de la décima percentila ajustada por la
edad y sexo del sujeto. En términos prácticos, un C-HDL < 35 mg/dL se había considerado
como hipoalfalipoproteinemia. No obstante, los Estados Unidos, en su último panel de
expertos para el tratamiento de adultos (ATPIII) del Programa Nacional de Educación sobre
el Colesterol (NCEP), consideran un factor de riesgo de aterosclerosis niveles de C-HDL por
debajo de 40 mg/dL. En la práctica, la concentración plasmática de las partículas HDL se
estima generalmente por la medición del colesterol contenido en estas lipoproteínas. Este
método no garantiza una medida precisa de la cantidad de partículas HDL. En efecto, pueden
existir pocas partículas HDL en circulación, pero se puede sobrestimar su número, si éstas
están enriquecidas en ésteres de colesterol. Bajo tales condiciones, la medida de C-HDL
plasmático sería “normal”, no por ser suficientes partículas, sino por tener mucho colesterol
cada una; un paciente así, presenta un factor de riesgo de desarrollar aterosclerosis por la
alteración en la composición de sus HDL –HDL no funcionales–, como ocurre en la
deficiencia de CETP o en el hipotiroidismo.
 Bibliografía
 https://www.medigraphic.com/pdfs/archi/ac-2004/ac041h.pdf

 http://www.ministeriodesalud.go.cr/gestores_en_salud/guiasalimentarias/colesterol.pd
f

 http://www.scielo.org.co/pdf/luaz/n38/n38a07.pdf

 https://www.wiener-lab.com.ar/VademecumDocumentos/Vademecum
%20espanol/hdl_colesterol_monofase_aa_plus_sp.pdf