Manual de Prácticas de

Microbiología

Universidad Autónoma de Sinaloa

Facultad de Ciencias Químico Biológicas

Micr-03. Forma y agrupamiento de células bacterianas.

1.0 Objetivos
1.1 Observar el tipo de agrupamiento en ciertos grupos bacterianos de
importancia médica.
1.2 Identificar la importancia de algunos métodos de coloración para definir
características o propiedades bacterianas.
1.3 Realizar la tinción de Gram.

2.0 Introducción
Las formas que asumen las bacterias tienen estrecha relación con las características
propias de su pared celular. Dentro del gran número de especies bacterianas que
existen, resalta la pobreza morfológica de éstas, considerando que todas las bacterias
conocidas y descritas solo presentan dos formas básicas: cocos (ejemplo peptococcus
niger) y bacilos (ejemplo Bacillus antharacis); sin embargo ambas formas presentan
modificaciones como los cocobacilos Brucella melitensis, los bacilos en espiral o
helicoidiales como Treponema pallidum y Leptospira interrogans, los bacilos curvos
como Vibrio cholerae y Campylobacter jejuni y los bacilos delgados fusiformes como
Fusobacterium nucleatum. A la vez, esta formas pueden agruparse en dos unidades
como los diplococos (Neisseria meningitidis), en cuatro denominadas tétradas
(Aerococcus viridans) u ocho denominadas sarcinas (Sarcina spp.) en cadenas cortas o
largas como los estreptococos (Streptococcus pneumoniae y S. pyogenes) y los
estreptobacilos (Bacillus antharacis), en racimos como los estafilococos
(Staphylococcus aureus), o bien agrupándose a semejanza de letras chinas
(Corynebacterium diphteriae).
Aunque la subdivisión de bacterias según su forma y agrupamiento permite una
separación burda de grandes grupos bacterianos, se recurre algunas veces a otros
parámetros morfológicos que confieren más información sobre la célula bacteriana,
como demostrar por métodos de tinciones selectivas ciertas estructuras, tales como:
cápsula (Haemophilus influenzae [tinción de Gin-tinta china y Anthony]); esporas
(Clostridium tetani [tinción de Schaeffer y Fulton]); gránulos metacromáticos
(Corynebacterium diphteriae [tinción de Albert]) y flagelos (Proteus mirabilis [tinción
de Leisfon]).
No obstante que se recurre rutinariamente a la observación de forma, agrupamiento y
tinción para iniciar un proceso de identificación de bacterias, no hay que perder de vista
que estos datos iniciales son insuficientes para definir una especie bacteriana, por lo
que se requiere sistemáticamente de información adicional, como: aspectos fisiológicos
y metabólicos de las bacterias; además del apoyo de las características antigénicas y
moleculares para identificar un espécimen bacteriano.

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Microbiología

3.0 Material y equipo

Cultivos de:
Escherichia coli
Streptococcus spp
Staphylococcus
spp Bacillus spp
- Asas bacteriológicas
- Portaobjetos de 26 x 76 mm.
- Frasco gotero con agua destilada
- Puentes para tinción
- Reactivos para la tinción de Gram (MicrR-03.1 a MicrR-03.4)
- Mecheros de Bunsen
- Aceite de inmersión
- Papel limpia lentes
- Microscopio
- Marcador indeleble
- Preparaciones fijas de bacterias con diferentes formas y agrupamientos.
4.0 Técnica
Preparaciones de frotes para tinción.
1 Trabajar en un área de aproximadamente 10 cm de distancia de la flama del
mechero (zona considerada estéril).
2 Esterilizar el asa, flameándola y enfriarla.
3 Tomar una pequeña porción de una colonia aislada.
4 Resuspender el material del asa en una gota de agua destilada, colocada
previamente en un portaobjeto, mezclar y extender la suspensión en un área
de 2 cm como máximo.
5 Secar la preparación al aire libre.
6 Fijar la preparación por cuatro o cinco pases sobre la flama del mechero
evitando el calentamiento excesivo.
7 Identificar cada preparación con un marcador indeleble.
8 Colocar el frote sobre el puente de tinción.
Tinción
1 Cubrir los frotes con cristal violeta, durante un minuto.
2 Lavar con agua corriente, ligeramente.
3 Cubrir con lugol, durante un minuto.
4 Lavar con agua corriente, ligeramente.
5 Decolorar con la mezcla alcohol-acetona (hasta que no salga colorante).
6 Lavar con agua corriente, ligeramente.
7 Cubrir con safranina (colorante de contraste), durante treinta segundos.
8 Lavar con agua corriente.
9 Secar al aire.
10 Observar al microscopio con objetivo de 100x y comparar con figuras 1 a 8 en
anexo 4.4.

Interpretación:
Las bacterias que retienen el colorante inicial y se tiñen de color violeta son Gram
positivas y las que se decoloran y adquieren la coloración roja del colorante de
contraste son Gram negativas. (Anexo 4.4).

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5.0 Resultados
Complete el cuadro con la morfología micrsoscópica observada para
cada mocroorganismo.

Bacteria Forma Agrupamiento Afinidad al Gram

Se agrupan por medios de

cepas productoras de diarrea. Gram/negativa

Escherichia coli

Salmonella spp. adaptadas a

vivir en el humano, entre
ellas, S. typhi, S. paratyphi A,
B y C; Gram/negativa

Salmonella spp. adaptadas a

hospederos no humanos, que
circunstancialmente pueden
Salmonella/shigella producir infección en el
hombre, entre ellas, S. dublin
y S. cholerae-suis;

Salmonella spp. sin

adaptación específica de
hospedero, que incluye a unas
1800 serovariedades de
amplia distribución en la
naturaleza, las cuales causan
la mayoría de las salmonelosis
en el mundo.

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6.0 Conclusiones y comentarios

En esta practica podemos concluir que por medio de reactivos para tincion de Gram
entren otros compuestos o sustancias, distintos cultivos bacterianos pueden ser
identificados como Gram positivas o Gram negativas, lo cual nos lleva a un proceso
de tincion donde una muestra de un cultivo bacteriano pasa por un proceso y al final
se observa el resultado en el microscopio donde se notara una coloracion en la
muestra, ya se violeta o rojo, asi mismo es como se puede conocer que tipo de bacteria
y como poder trabajar el resto del cultivo.

A lo largo de esta práctica pudimos observar como con tan sólo el siemple hecho de realizar
un reactivo de función podemos obtener resultados pata poder así visualizar con ayuda del
microscopio el tipo de bacteria que obtuvimos Ya sea gram positiva o gram negativa.
También pudimos observar la e.coli que logramos identificar como un basilus.

Como conclusión de esta practica tenemos que, al identificar la importancia de algunos

métodos de coloración para definir las propiedades de las bacterias, estas tienen estrecha
relación con las características de su pared celular, de igual manera pudimos observar que se
dividen en dos formas básicas, ya sea cocos ó bacilos.

Se concluye que esta práctica observamos los tipos de agrupamientos de los grupos
bacterianos y su forma que permite una separación de grandes grupos bacterianos como
también fue identificada y observamos la importancia de métodos de coloración para de ahí
iniciar un proceso de identificación de bacterias con una técnica sencilla realizada con una
esterilización del asa, flameandola y tomando pequeñas porciones de colonias que fue
colocada en un porta objeto y con una gota de agua destilada extenderla

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