Wuolah Free Bloque III y IV

Bloque-III-y-IV.
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Microbiología
1º Grado en Ciencias Ambientales
Facultad de Ciencias
Universidad de Málaga
Reservados todos los derechos.

No se permite la explotación económica ni la transformación de esta obra. Queda permitida la impresión en su totalidad.
Microbiología Lección III
Bloque III: Genética microbiana.
Lección 10: Estructura y organización.
1. Elementos genéticos en procariotas.
1.1 El cromosoma bacteriano: estructura, organización y replicación.
1.2 Plásmidos.
1.3 Elementos transponibles.
Papel ecológico de los elementos extracromosómico.
Los procesos vitales de los seres vivos están controlados por su dotación
genética.
Genoma: conjunto de genes presentes en una célula o virus.
Gen: segmento de ADN que al expresarse da un producto funcional (proteínas o ARN).
Número de bases por molécula: cada 1000 bases es una Kb de ADN.
• Si el ADN es de doble hélice= kilo pares de bases (Kpb).
1. Cromosoma
 1 (algunas especies, tienen 2).
 1 copia (haploides).
 ADN circular de doble cadena (algunas especies, lineal).
 Genes no fragmentados.
 Sin secuencias repetidas (excepto ARNr y unos pocos genes).
 50% genes en cada cadena.
 Presencia de operones.
Características del cromosoma.

- 10ˢ- 10⁶ pb. (genoma E. coli: 4.64 millones de pares de bases= 4640 Kpb).
- Haploides.
- Aproximadamente 90% codificada para proteínas y el 10% para regulación.
- Operones poligénicos o policistrónicos y operones monocistrónicos.
- No hay operones en eucariotas.
- Operón: unidad de expresión génica completa, que suele codificar varios
polipéptidos en un ARNm policistrónico.
Reservados todos los derechos. No se permite la explotación económica ni la transformación de esta obra. Queda permitida la impresión en su totalidad.
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Doble hélice:
✓ Bases púricas:
- Adenina y guanina.
✓ Bases pirimidínicas:
- ARN: uracilo y citosina.
- ADN: timina y citosina.
✓ Bases complementarias: A-T y C-G unidos por puentes de hidrógeno.
✓ Disposición antiparalela de las cadenas.
✓ Surco mayor vs surco menor. Interacción con proteínas.
• B: 10 pares de bases/vuelta (estructura de

Watson y Crick).
• A: 11 pares de bases/vuelta (ARN de doble
cadena).
• Z: 12 pares de bases/vuelta y es levógira.
Nucleoide.
❖ En contacto con la membrana citoplasmática.
❖ Presencia de proyecciones.
❖ Proteínas asociadas a nucleoides. Bajo peso molecular y ricas en aminoácidos
con carga.
o Funciones:
-Capacidad para unirse al ADN de manera específica e inespecífica.
-Participan en la compactación del cromosoma bacteriano:
▪ Induciendo y estabilizando las curvas en el ADN.
▪ Condensa el ADN mediante puentes.
▪ Restringiendo los superenrollamientos en el ADN.
Cada especie se caracteriza por un conjunto específico de proteínas asociadas a
nucleoides, pero las proteínas HU se encuentran en todas las bacterias.
Organización del genoma bacteriano.

El ADN de E. coli tiene una longitud de 1mm,
unas 400 veces su tamaño. Se encuentra
organizado en dominios (100) superenrollados,
estabilizados cada uno por proteínas
específicas.
Topoisomerasa
Enzimas que regulan la tensión en la molécula de ADN.
Topoisomerasas clase I. Elimina el superenrollamiento y la cadena vuelve a un
estado relajado.
Topoisomerasas clase II (o ADN girasa):
-Presente en bacterias y muchas arqueas.
-En bacterias la ADN girasa es inhibida por quinolona (ácido nalidíxico),
fluoroquinolonas (ciprofloxacino) y novobiocina que también parece inhibir a la
ADN girasa en algunas especies de arqueas.
-Introduce superenrollamiento negativo haciendo cortes en la doble hebra.
Arqueas: cromosoma con superenrollamiento positivo → mayor resistencia a Tª altas.
Replicación del ADN cromosómico

• Características:
- Replicación semiconservativa.
- Se produce en sentido 5´→ 3´: la nueva hebra se sintetiza desde el extremo con
el fosfato 5´al extremo 3´-hidroxilo.
• Enzimas y elementos implicados:
- ADN polimerasas: adicción dNTPs.
5 tipos en E. coli (ADN pol I-V)
ADN pol I y III: replicación del ADN cromosómico.
ADN pol II, IV y V: reparación.
Todas necesitan un cebador que aporte un grupo 3´-OH.
- Cebadores: pequeños fragmentos de ADN o ARN (pocos nucleótidos).
- Primasa: sintetiza un fragmento corto de ARN (aporta un grupo 3´-OH).
• Mecanismo de replicación.
Replicación del ADN cromosómico en procariotas (I).
Pasos iniciales:
1. Desenrollamiento del ADN por ADN-helicasa (gasto de ATP).
2. Inicio de la síntesis del ADN: origen de replicación Ori C (reconocido por la
proteína DnaA).
3. Se coloca la helicasa (también como DnaB) ayudada por la proteína cargadora
de helicasa (DnaC).
4. Se cargan primasas y dos ADN polimerasas detrás de las helicasas.
5. Formación de una horquilla de replicación.
6. Estabilización de las cadenas sencillas por proteínas de unión.
7. Avance de la síntesis en las dos cadenas:
- Cadena avanzada: síntesis continua. Solo es necesaria 1 cebador.
- Cadena retrasada: síntesis discontinua → no hay 3´-OH al que añadirle
nucleótidos.
La primasa tiene que sintetizar varios cebadores.
Surgen los fragmentos de Okazaki y se unen por ADN-ligasa.
ADN polimerasa I: elimina el cebador de ARN y los sustituye por ADN.
Replicación del ADN cromosómico en procariotas (II)

La replicación bidireccional.
✓ ADN circular → replicación bidireccional.
✓ En E. coli 1000 nucleótidos por segundo, duración total: 40
min.
✓ Hay 20 condiciones óptimas de crecimiento, pero solo hay un
origen de replicación.
✓ Comienza una nueva burbuja antes de finalizar la síntesis de
la cadena anterior.
Replicación del ADN cromosómico en procariotas (III)

Replisoma: conjunto de proteínas contenidas en
la horquilla de replicación, que se agregan para
formar un gran complejo.
Dos ADN-polimerasa III
ADN topoisomerasa (ADN girasa)
ADN helicasa, ADN primasa → Primosoma.
Proteínas de unión a la cadena sencilla.
Terminación de la replicación
• Proteínas Tus: bloquea el avance de la horquilla de
replicación.
• Secuencias ter: zona de parad de la replicación.
• Topoisomerasa IV: separa las dos moléculas circulares.
2. Plásmidos
o Elementos prescindibles.
o Replicación autónoma (pero usan enzimas codificadas en el
cromosoma).
o ADN circular de doble cadena y superenrollado (en algunas especies,
lineales).
o Una o más copias (Barrelia burgdorferi contiene 17 plásmidos).
o Codifican para propiedades adicionales.
o Tamaño: Kpb o Mpb.
o 5% tamaño del cromosoma.
o Pérdida o curación.
o Episoma: plásmidos que se integran en el cromosoma.
Replicación del plásmido

Utilizan parte de la maquinaria de la célula.
1. Modelo de replicación en (theta), frecuente en plásmidos de bacterias
Gram-negativas: se separan las cadenas en el sitio oriV. Pueden ser:
- Unidireccional: se forma una horquilla que avanza hasta volver a oriV.
- Bidireccional: se forman 2 horquillas de replicación en sentidos
opuestos que avanzan hasta la mitad de la molécula.
2. Modelo de replicación en (sigma) o círculo rodante.

Frecuente en plásmidos de bacterias de Gram-positivas: se rompe una de
las cadenas a nivel de:
- Sso: origen de replicación.
- Dso: origen replicación cadena líder.
El extremo 3´serán el cebador de la cadena adelantada. La cadena
retrasada debe ser replicada a partir de sitios de cebado
concretos.
Tipos de plásmidos
➢ Crípticos
➢ Transmisión:
- Conjugativos o autotransmisibles.
- No conjugativos o no transmisibles.
- Movilizables.
➢ Coexistencias en la célula:
- Compatibles o incompatibles.
➢ Hospedador:
- Rango Amplo o Rango reducido.
➢ Funciones:
- Resistencia
- Producción de toxinas, enzimas, antibióticos.
- Catabólicos o degradativos.
Tipos de plásmidos (II)

Según su rasgo fenotípicos:
✓ Producción de antibióticos.
✓ Conjugación.
✓ Resistencias a antibióticos, inhibidores del crecimiento, y/o metales.
- Plásmidos R.
- Plásmidos R100 → resistencia a 6 antibióticos y al mercurio.
✓ Virulencia:
- Capacidad de colonización o invasión de células del hospedador (Salmonella,
Shigella).
- Síntesis de toxinas, enzimas, moléculas que causan daños en el hospedador.
- Síntesis de bacteriocinas.
- Producción de tumores en plantas o nodulación y fijación de nitrógeno.
❖ Plásmidos Col.
Contiene genes para la síntesis de bacteriocinas conocidas (colicinas) que están
dirigidas contra E. coli.
3.Elementos transponibles.
❖ Fragmentos de ADN con genes necesarios para la transposición o integración
en diferentes sitios del cromosoma o de un plásmidos.
❖ Capacidad de autorreplicación.
❖ Existentes en todos los organismos.
❖ Tipos:
- Secuencias o elementos de inserción (IS).
- Transposones (Tn5, Tn10, Tn3, Tn916).
- Bacteriófagos (Mu, Lambda, P22,etc).
Secuencia de inserción (IS)
Secuencias cortas que codifica las enzimas necesarias para su transposición.
Los extremos son secuencias repetidas invertidas idénticas de 15-25pb, variables en
distintas IS.
Transposasa: caliza el movimiento del transposón a otra del genoma por un

mecanismo de corta y pega, o un mecanismo de transposición replicativo.
Transposones compuestos (Tn)

Contienen otros genes, además de los necesarios para su transposición.
A menudo están en la región central, y flanqueada por elementos de inserción (IS).
Tipos de transposición
Elementos Tn5
Elementos Tn3
Transposones conservativos
Transposones replicativos
▪ Hay replicación del elemento transponible.
▪ La Transposasa codifica en el IS participa en la unión al
elemento en el sitio de inserción.
▪ Durante la interacción el elemento se replica → la copia se
inserta en un nuevo sitio y la otra original se queda en la cadena
inicial.
Bacteriófago Mu
- Fago y transposón.
- Genoma lineal (<40 Kpb).
- Contiene genes que codifican para Transposasa y para resolvasa.
- El fago se escinde del cromosoma y puede llevarse ADN de la bacteria.
- El virus se encapsida y puede infectar a otra célula introduciendo genes de una
bacteria a otra.
Consecuencias de la transposición
• En el cromosoma:
Inserción de un gen → mutación o deleción.
Codones de parada → bloqueo de la traducción.
Secuencia de terminación → transcripción.
Promotores → activación de genes.
• En plásmidos:
Fusión de plásmidos.
Inserción en el cromosoma.
Evolución plasmídica.
Los factores de virulencia

pueden estar codificados en
elementos genéticos móviles.
Papel ecológico de los elementos extracromosómico.

Mecanismos de plasticidad genética:
o Mayor adaptación a cambios en el ambiente.
o Incremento en la diversidad de población.
o Mayor posibilidad de explotación de los recursos.
Los elementos extracromosómico suministran mecanismos rápidos de cambio
evolutivo.
Transcripción
Síntesis de ARN usando ADN como molde.
Diferencias con respecto al ADN.
 Contiene ribosa (no actúan enzimas que sí actúan sobre el ADN).
 Uracilo en vez de timina.
 Cadena simple. Se producen plegamientos sobre sí misma.
Funciones:
ARN mensajero: porta la información genética del genoma al ribosoma.
ARN transferentes: función activa en el transporte de aminoácidos.
ARN ribosómicos: papel funcional y estructural en los ribosomas.
Enzima principal: ARN polimerasa (proteína de 5 subunidades: β, β´, α, γ, ω).

▪ Localiza en el ADN los promotores o iniciación de la transcripción (α).
▪ Desenrolla un tramo del ADN de doble cadena (forma una burbuja de
transcripción).
▪ No requiere de cebadores o primers para comenzar.
▪ Selecciona el NTP adecuado y cataliza la formación del enlace fosfodiéster, en
dirección 5´→ 3´.
▪ En bacterias, α se disocia cuando se ha formado un pequeño fragmento de
ARN.
▪ Localiza las señales de terminación.
▪ Interacciona con las proteínas activadoras y represoras.
10
Lección 11
Genética microbiana: variabilidad genética
Transferencia horizontal de genes.
• Transformación
• Transducción
• Conjugación
Recombinación
- Es el intercambio físico de material genético entre dos
elementos genéticos.
- Las secuencias que se recombinan
deben ser genéticamente distintas
para originar un nuevo genotipo.
- Genotipo vs fenotipo.
En procariotas
Fragmentos de ADN homólogos y genéticamente distintos son transferidos de un
donador a un receptor.
Transferencia horizontal de genes (HGT)
✓ Transformación: ADN libre de una célula es captado por otra.
✓ Conjugación: transferencia de ADN que implica contacto entre células y la
presencia de un plásmido conjugativo en la célula donadora.
✓ Transducción: transferencia de ADN es mediada por un virus.
¿Qué ocurre dentro?
El ADN puede:
▪ Degradarse por enzimas de restricción.
▪ Autorreplicarse.
▪ Recombinarse con el cromosoma del hospedador.
Transformación
Transformación: proceso por el cual una célula
capta ADN libre en el medio y la posterior
recombinación con algún elemento del genoma de la célula receptora.
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Variación en una célula bacteriana debido a la captación de
ADN libre en el medio, con la posterior recombinación en el
genoma de la célula (transformante).
Principio de transformación:
Griffith (1928) hizo experimentos con neumococos.
Cepas S: con cápsulas y virulentas.
Cepas R: sin cápsulas y no virulentas.
Observó la existencia de una sustancia que confiere una nueva
propiedad heredable a un organismo.
2.Experimentos de Avery, MacLeod y McCarty.

❖ Descubrieron que el principio de transformantes era ADN.
❖ Ensayo in vitro con los distintos componentes de las células.
❖ Identificación del factor de transformantes (FT).
Cepas S: con cápsula y virulentas.
Cepas R: sin cápsulas y no virulentas.
No fue aceptado por la comunidad

científica.
3. Hotchiss (1949) ensayos in vitro solo usando ADN puro.

4. Hershey y Chase (1952) hicieron el mismo experimento, pero
marcando el ADN con radioactivos. Confirmaron que el ADN es
el material genético.
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Transformación natural
Características generales:
ADN de cadena doble.
Basta con una sola molécula, pero hay un límite: cinética de saturación.
No todas las células son transformables en cualquier momento del ciclo de
crecimiento.
Competencia: estado fisiológico característicos que permite captar ADN del
medio exterior. Influido por parámetros como: densidad, temperatura, pH,
nutrientes.
Una célula competente posee:

➢ Capacidad de aceptar ADN y transformarse.
➢ Proteínas de unión al ADN asociadas a membrana.
➢ Varias nucleasas.
➢ Proteínas de unión a ADN monocatenario.
¿De dónde procede el ADN exógeno?

 Lisis espontánea.
 Destrucción del ADN que pasa al medio.
 Gram positivas: Streptococcus, Bacillus.
 Gram negativas: Haemophilus, Neisseria, Moraxella, Acinetobacter,
Pseudomonas.
Fases o etapas:
 Competencia: capacidad por parte de la célula de aceptar ADN.
 Unión y entrada del ADN exógeno a la célula.
 Fase de eclipse o forma de resistencia a la ADNasa.
 Destino del ADN y recombinación.
 En Gram positivas.
 Presencia de mecanismos inespecíficos de captación de ADN
exógeno, pero recombina solo cuando hay cierto grado de
homología.
 En Streptococcus pneumoniae: células competentes al final del
periodo de crecimiento exponencial (100% células competentes
durante 15min).
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1. Crecimiento de la célula y excreción del péptido CSP.
⧫ Cuando hay una determinada concentración extracelular de CSP se une a
una proteína quinasa en la membrana que fosforila a ComE.
⧫ ComE: activa la transcripción de varios operones:
- ComCDE: operones de competencia, gen que sintetiza ComX.
- ComX: se une a la ARN polimerasa y transcribe operones
tardíos de competencia para que la maquinaria de captación
de ADN exógeno, entrada y recombinación.
- El ADN s une a ComEA de B. subtilis y se inicia la translocación.
2. Entrada del ADN y fase de eclipse.

El ADN exógeno se vuelve resistente a la ADNasa.
Actividad endonucleasas (EndA) que corta las hebras de ADN.
Una hebra entra al citoplasma como cadena simple y se
recubre de proteínas y la otra se degrada a nucleótidos.
3. Recombinación homóloga.
Se integran el 50% del ADN transportado y afecta al 10% del genoma receptor.
Sistema Hex repara los malos emparejamientos o emparejamientos no
homólogos.
Bacillus subtilis
Competencia en fase estacionaria.
Solo afecta al 25% de las células son competentes.
1. Inicio de la competencia por percepción del quoeum + señales nutricionales +
tipo celular.
2. ComX y CSF se excretan al medio y forman parte de dos sistemas: Sistema
ComX y Sistema CSF.
3. El ADN interacciona con la pared celular creando un canal → membrana →
maquinaria de translocación.
- ComEA: receptor.
- ComEC: canal de membrana.
- ComFA: traslocasa.
En Gram negativas
El estado de competencia se induce internamente.
Discrimina entre ADN de diferentes especies → solo capta ADN de especies de mismo
género.
El ADN procede de autolisis (20%) o por eliminación a través de sistemas de secreción
de tipo IV (80%).
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1. Captación de ADN.
Receptores DUS en la membrana externa → se une y permite la apertura de la
secretina PilQ → ADN se trasloca por la membrana citoplasmática.
2. Entrada del ADN.
En forma de cadena simple generada en el periplasma.
3. Recombinación.
Implicaciones de la transformación natural

Origen evolutivo de la capacidad de transformación.
Hipótesis de la reparación de ADN: sistema para obtener moldes de ADN para la
reparación. ADN de repuesto que se usó también para aportar variabilidad y capacidad
de adaptación.
Hipótesis de la nutrición: para obtener capacidades adicionales a partir de ADN
exógeno.
Hipótesis de la recombinación: existencia de una presión selectiva que favoreció el
desarrollo de mecanismos de intercambio y recombinación de ADN. Aumento de
diversidad y evolución. Mayor supervivencia en el huésped al que parasitan.
Transformación artificial.
 Observación de células competentes en el laboratorio.
 Introducción del ADN.
 Electroporación: pulsos cortos de corriente eléctrica de alto voltaje.
 Choque térmico: 4ºC → 42ºC – 2min.
Conjugación
 Proceso de transferencia de información genética
desde una célula donadora a otra receptora,
promovido por determinados tipos de plásmidos, y
que requiere contactos directos entre ambas, con
intervención de estructuras superficiales
especializadas y de funciones específicas.
 Hay una célula donadora (F⁺) que pasa su material
genético a otra receptora (F⁺).
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 Se vio que se necesitaban contactos directos entre las
células de las dos capas, mediante el experimento del
tubo en “U” de Davis: si en cada rama de la U se coloca
una cepa distinta, y ambas están separadas físicamente
(en la base de la U) por un filtro con poros de tamaño
inferior del diámetro de las bacterias, no aparecían
recombinantes.
Cepas fértiles (F⁺) o donantes.

Cepas infértiles (F⁻) o receptoras.
Cruces: F⁻ x F⁺ dan origen a recombinantes.
Cruces: F⁻ x F⁻ no dan origen a recombinantes.
F⁻ no se volvían F⁺ al final de la conjugación.
F⁺ poseen el Factor sexual o factor de fertilidad F o plásmidos F.
- Codificado en un plásmido F.
- Puede integrarse en el cromosoma
(Episoma).
3 estados:
- Autónomo: en las células F⁺.
- Integrado como Episoma: células Hfr.
- Autónomo, pero con un trozo de cromosoma: cepas F⁻.
Estructura física:
 ADN circular de cadena doble y cerrado.
 Superenrollamiento negativo.
 100 Kpb.
Organización genética y funcional:
60 genes
Porción tra →
➢ Genes para la transferencia conjugativa.
➢ Biosíntesis y ensamblaje de pelos sexuales.
➢ Estabilización de los agregados de conjugación.
➢ Metabolismo del ADN durante la conjugación.
➢ Regulación.
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Regiones para la replicación del plásmido F.
Secuencia de inserción.
2 secuencias Ori (2 orígenes de replicación OriV y OriT).
Fisiología y biología molecular de la conjugación.

Fase:
1. Contactos entre células F⁺ y F⁻.
- F⁺ poseen de 1 a 10 pelos sexuales que interaccionan. Con la
proteína OmpA de la membrana externa.
- F⁺ contacta y el pelo se despolimeriza → acercamiento de las
células.
- Células en contacto pared-pared --< puede conjugativo.
- Estabilización.
2. Pase de ADN de una célula a otra mediado por proteínas (traD).
- Desagregación
Exclusión superficial: sistema por el cual se evita que una célula tipo
F⁺ coja otro plásmido de otra F⁺.
*traT: se sitúa en la membrana externa impidiendo los contactos pili-
membrana.
*tras: se sitúa en la membrana plasmática y evita la
entrada de ADN desde otra célula F⁺.
Zigosis letal: proporción F⁺/F⁻ de 10:1. Las células
receptoras mueren debido a los numerosos
contactos por células F⁺.
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Transferencia y procesamiento del ADN conjugativo
 Se da replicación asimétrica por circulo rodante.
 Una endonucleasa (TraY+TraZ) corta un punto de la secuencia OriT del
plásmido.
 La cadena se desplaza por una helicasa tipo I que desenrolla la doble hélice del
F (hay gasto de ATP).
 Las proteínas Tra transportan la cadena al receptor y una vez dentro, rehace el
enlace fosfodiéster 3´-5´de la cadena.
Síntesis conjugativa del ADN.

Se sintetizan la cadena de ADN en cada célula:
⧫ Síntesis de la cadena de reemplazo del donador: síntesis de forma continua. Se
inicia con un cebador de ARN.
⧫ Síntesis de la cadena complementaria del receptor: síntesis discontinua a base
de fragmentos de Okazaki.
⧫ Circulación del ADN transferido, replicado y adquisición de la configuración
final.
Transferencia conjugativa entre reinos

Agrobacterium tumefaciens parasita una amplia diversidad de plantas
dicotiledóneas → “tumor en agalla”.
Posee un plásmido llamado Ti (“inducción de tumoración”). En presencia
de la planta se activan a los genes tra, que promueven la transferencia a
la célula vegetal de un segmento del plásmido denominado ADN-T. Dicho
ADN-T se integra en el genoma vegetal, y promueve a la planta a fabricar
hormonas vegetales (responsables del crecimiento incontrolado de las
células de la planta).
Ingeniería genética: se obtienen plantas transgénicas con algún sistema de plásmidos
artificiales derivados de Ti, que funcionan como vectores para introducir genes
foráneos en una amplia diversidad de especies vegetales.
Transducción: un virus bacteriano

transfiere el ADN de una célula a otra.
18
Tipos:
Transducción generalizada: ADN de cualquier región del cromosoma bacteriano queda
dentro de la cápside vírica.
Transducción especializada: ADN de zonas concretas del genoma bacteriano son
encapsuladas en la cápside vírica.
Mezclando dos cepas de Salmonella, cada una con un juego distinto de marcadores
genéticos:
¿Transformación? Añadían Dnasa (no había AND libre) → pero sí aparecían
recombinantes.
¿Conjugación? Experimento del tubo “U” → pero sí había
recombinantes.
Salmonella + fago P22 de tipo moderado → sí
recombinantes.
Salmonella resistente a P22 (no adsorben el fago) → no
dan recombinantes.
El fago está implicado en la obtención de recombinantes
→ transducción.
Transducción generalizada: ADN de cualquier

región del cromosoma bacteriano queda dentro de
la cápside vírica.
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Transducción especializada: ADN de zonas concretas del genoma bacteriano se
empaquetan en la cápside vírica.
20
Tema 12: Metabolismo y obtención de energía . I.
12.1. Visión general del metabolismo procariota.
12.2. Tipos metabólicos y producción de energía.
12.3. Quimioheterotrofía.
12.4. Quimiolitotrofía.
12.1 Visión general del metabolismo procariota.

Metabolismo: estudia los enzimas bacterianos y las reacciones químicas llevadas cabo.
Objetivos:
 Convertir los nutrientes obtenidos del medio en precursores de los
componentes estructurales de la célula bacteriana.
 Formar y degradar moléculas necesarias para las funciones celulares
específicas.
 Obtener energía química y almacenarla, para utilizarla luego en diferentes
funciones celulares.
Catabolismo Anabolismo
 Reacciones degradativas  Reacciones biosintéticas

 Liberan energía  Requieren energía
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Catabolismo bacteriano
Fases
 Quimiotaxis
 Digestión
 Absorción
 Preparación
 Oxidación biológica
Oxidación biológica deshidrogenación
ATP
ATP es el almacén de energía. Los enlaces que unen los grupos fosfatos entre sí son
ricos en energía. El ATP se sintetiza mediante la adicción de un grupo fosfato al ADP
durante las reacciones catabólicas. La energía almacenada se utiliza en otras etapas del
metabolismo, en las que el ATP es hidrolizado y genera ADP.
1.Fosforilación a nivel de sustrato (fermentación)

⧫ No requiere cadena transportadora de
electrones.
⧫ Tiene lugar en el citoplasma.
⧫ Acontece en ausencia de oxígeno.
⧫ El aceptor final de electrones es un
compuesto orgánico.
22
2.Quimiósmosis:  Cadena transportadora de electrones.
 Tiene lugar en la membrana citoplasmática.
 Acontece en presencia (aerobia) o ausencia de oxígeno
(anaerobia).
 Habitualmente el aceptor final de electrones es un
compuesto inorgánico.
A. Respiración aerobia
23
❖ Oxidación biológica
Sistemas transportadores de electrones:
• Complejos macromoleculares, asociados a membranas (respirosomas).

• Dos funciones básicas:
1. Aceptar electrones de un donador y transferirlos a un aceptor.
2. Conservar algo de la energía liberada durante la transferencia de electrones
para la síntesis de ATP.
• Tipos:
1. Complejo I (NADH deshidrogenasas). Grupo protético: FMN.
2. Complejo II (Succinato deshidrogenasas o succinato-ubiquinona reductasa).
Grupo prostético: FAD.
3. Complejo III (citocromo bc1 o ubiquinona: citocromo c oxidorreductasa).
4. Complejo IV (citocromo c oxidasa).
Metabolismo de los hidratos de carbono

3 vías centrales:
⧫ Glucólisis o ruta de Embden-
Meyerhof- Parnas.
⧫ Vía de las pentosas fosfatos.
⧫ Vía de Entner-Doudoroff.
24
ATPsintasa de membrana
Está compuesta por 2 fracciones:
1) F0 (cola): está inserta en la membrana y
conduce los protones a favor de gradiente
hacia el interior celular.
2) F1 (cabeza): estructura esférica orientada
hacia el interior celular constituidas por
distintas subunidades. La subunidad beta es
el sitio catalítico para la síntesis de ATP.
 Torre de electrones
25
12.2 Tipos metabólicos y producción de energía.
Nutrientes bacterianos:
a. Nutrientes básicos → entorno.
b. Metabolitos esenciales → catabolismo
c. Factores de crecimiento → Vitaminas (coenzimas o precursores): vitamina B1,
B2, B6 o B12, aa ese3nciales, bases púricas y pirimidínicas y hermina (X) y NAD
(V).
d. Factores estimulantes
Protótrofo: organismo capaz de crecer en un medio mínimo conteniendo sólo sales
(como de N y P) y una fuente de carbono principal (orgánica o inorgánica).
Auxótrofo: organismo que ha desarrollado una necesidad nutricional, a menudo como
consecuencia de una mutación.
A. Nutrientes básicos
26
12.3 Quimioheterotrofía
27
Preparación
Rutas metabólicas:
 Hidratos de carbonos y polialcoholes:
➔ Glucólisis o ruta de Embden-Meyerhof.
➔ Ruta de las pentosas fosfato conectan con la glucólisis
➔ Ruta de Entner-Doudoroff 2 moléculas de piruvato → CO₂ y H₂O
 Triglicéridos (3AG + glicerol)
➔ Glucólisis o ruta de Embden-Meyerhof
➔ Ciclo de Krebs o ATC (bacterias aerobias)
 Aminoácidos
➔ Diversas rutas.
Etapas en la respiración aerobia
➢ Oxidación de la glucosa en
quimiorganotrofos creciendo en aerobiosis
(respiración aerobia) y anaerobiosis
(respiración anaerobia o fermentación).
➢ Se produce piruvato que seguirá caminos
diferentes en la respiración y fermentación.
28
Glucolisis o ruta de Embden-Meyerhof-Parnas
Fase 1: fase de C6, activación de la glucosa
• Reacciones preparatorias.
• No implica reacciones redox.
• No liberan energía.
Fase 2: fase de C3, de oxidación
• Se produce ATP.
• Se produce poder reductor.
• Ocurre dos veces.
Ruta de Entner-Doudoroff
Activación
Oxidación
Deshidratación
➢ Esta ruta sólo aparece en procariotas y tiene como
productores finales G 3-P, Pry, y 1 ATP. Sustituye a la vía de la
glucólisis en algunos microorganismos (aunque es menos
frecuente que la glucólisis), fundamentalmente Gram negativos
de suelo (Agrobacterium sp., Rhizobacter sp. Y Pseudomonas sp.)
Metabolismo de hidratos de carbono
29
-3 ATP
Ruta de las pentosas fosfatos
➢ Tiene como productos finales 3 G 3-P (que se
transforma en Pry).
➢ La glucólisis y la vía de Entner-Doudoroff son
rutas excluyentes en una misma célula, pero
coexisten con la ruta de las pentosas fosfato,
ya que ésta resulta esencial para generar
poder reductor e intermediarios de rutas de
síntesis, fundamentalmente de ácidos
nucleicos y aminoácidos aromáticos.
Metabolismo de la glucosa
30
Ciclo de Krebs
➢ Oxidación de la glucosa en quimioorganotrofos
creciendo en aerobiosis. Bajo estas condiciones
están activos el ciclo de Krebs y la cadena
transportadora de electrones (las células pueden
obtener energía mediante fosforilación oxidativa).
31
Respiración anaerobia: aceptores de electrones alternativos al oxígeno
Reducción asimilatoria y
desasimilatoria de nitrato
32
Quimioorganotrofos
Fermentación
 No interviene cadena transportadora de
electrones.
 Se genera ATP por fosforilación a nivel del
sustrato.
 El NADH es reoxidado: el aceptor de
electrones es un sustrato endógeno (tiene
lugar en el citoplasma).
33
Características de la fermentación
➢ Características comunes a todos los tipos de
fermentación:
1) Oxidación de NADH.
2) Aceptor final: piruvato o derivado de éste.
3) El sustrato es oxidado parcialmente.
4) Si se forma ATP, éste se sintetiza por
fosforilación a nivel del sustrato.
5) No requiere oxígeno.
12.4. Quimiolitotrofía
Procesos generadores de energía de los quimiolitotrofos
34
Flujo inverso de protones
Flujo de electrones en la cadena de transporte de Nitrobacter. A la derecha: la fuerza

protón motriz se produce cuando los electrones son transportados desde el NO₂ hasta
el O₂ y se acopla con la generación de ATP. A la izquierda: parte de la FMP se utiliza
para forzar electrones a fluir desde el nitrito hasta el NAD+. Se utilizan para ello el
citocromo c y cuatro complejos más: 1:NADH-Ubiquinona oxido-reductasa,
2:ubiquinol-citc oxido-reductasa, 3:nitrito oxidasa y 4: citocromo aa3 oxidasa.
35
Algunos quimiolitotrofos usan
compuestos reducidos de azufre como
donadores de electrones. La oxidación
de compuestos de azufre origina ácido
sulfúrico.
36
37
Lección 13: Metabolismo y obtención de energía II.
 Contenidos
 Fototrofía: concepto.
 Fotoautotrofía y fotoheterotrofía.
 Fotosíntesis en los microorganismos.
1. Fototrofía
Capacidad de captar la energía lumínica.
-Para generar directamente ATP:
fotofosforilación.
-Para generar gradiente electroquímico de
protones (FMP) a ambos lados de una
membrana, que alimenta ATP-sintasas.
38
Componentes del aparato fotosintético
Fotosistemas:
 Complejo antena
 Centro de reacción: pigmentos y otros componentes.
 Cadena transportadoras de electrones.
Fotosistemas (o fotocomplejos)
Convierte la energía lumínica en forma útil de energía.
Partes:
➢ Complejo antena → con pigmentos captadores de luz
(pigmentos antena).
➢ Centro de reacción: pigmentos fotoactivos (clorofilas o
bacterioclorofilas y situados en estructuras membranosas
(tilacoides, cromatóforos o membrana citoplasmática).
Pigmentos fotosintéticos
Clorofila y bacterioclorofila.
 Relacionados con los tetrapirroles.
 Contienen Mg²⁺ en el centro del anillo.
 Contienen cadenas de alcohol (como fitol).
 Presente en pigmentos antena como en centros de
reacción (> 300en cada sitio).
 En el centro de reacción 2/4 están asociadas a proteínas.
 Tras excitarse, se oxidan → clorofilas fotoactivas.
Clorofila a:
 Molécula principal de los fotótrofos oxigénicos.
 Varios tipos en función del espectro de absorción y de emisión.
39
Carotenoides
Forman parte del complejo antena.
Funciones:
 Protección contra los efectos potencialmente dañinos producidos por
acción de la luz y el O₂.
 Captan la luz (como pigmentos antena, pero menos eficientes).
Ficobiliproteínas
En cianobacterias.
Se encuentran en complejos supramoleculares denominados Ficobilisomas, en la
superficie de los tilacoides.
Tipos: Ficocianina, ficoeritrina, aloficocianina.
Feofitinas y bacteriofeofitinas.
No están queladas con Mg²⁺.
Aceptan el electrón que pierde cada bacterioclorofila en e centro de
reacción.
Otros componentes:
Quinonas, quinonas-Fe, citocromos, ferroproteínas no hémicas.
Localización de los pigmentos.

o Membranas fotosintéticas.
o Cromatóforo o lamelas: en bacterias rojas.
o Lamelares o tilacoides: en cianobacterias.
o Clorosomas: en bacterias verdes anoxigénicas del azufre y bacterias verdes no
del azufre.
- Unión a la membrana no mediada por proteínas.
- Tiene bacterioclorofila c, d o e que pasan la energía lumínica
hasta la bacterioclorofila a, en el centro de reacción, a través
de una pequeña proteína llamada proteína FMO.
- Captan luz de baja intensidad.
o Cloroplastos: en eucariotas.
40
El uso de diversos pigmentos con propiedades
de absorción distintas permite que fotótrofos
diferentes puedan coexistir en el mismo
hábitat, absorbiendo longitudes de onda que
otros microorganismos no pueden utilizar.
Diversidad de pigmentos= importancia
ecológica para la coexistencia satisfactoria de
diferentes fotótrofos en un mismo hábitat.
2. Funcionamiento de n fotosistema
Resonada inductiva: transferencia de energía sin oxidar las moléculas.
3. Fotofosforilación
Cuando el potencial electroquímico de protones se disipa gracias a las ATP-sintasas y
se produce ATP celular.
Tipos
Fotofosforilación cíclica:
• Cuando la bacterioclorofila del centro de reacción sirve tanto como donador

primario como aceptor final de electrones. Los electrones NO salen del ciclo.
NO hay donador exógeno de electrones.
• En autótrofas: hace falta NAD(P)H para la fijación de CO₂ → Fotofosforilación
acíclica.
Fotofosforilación acíclica:
- Los electrones cedidos por la bacterioclorofila también pasan al NAD(P)H.
- Hacen falta más electrones → fuente exógena.
Fotofosforilación acíclica anoxigénica: H₂O como donador exógeno.
41
En bacterias purpúreas (o rojas). Compuestos reducidos del azufre (SH₂, s₀) h2.
En bacterias purpúreas no del azufre: compuestos orgánico reducido.
Mecanismo de la fotofosforilación: transferencia de electrones en el centro de
reacción, generación de fuerza protón-motriz y producción de ATP:
1. Luz → las bacterioclorofilas adquieren un bajo potencial de reducción (potente
donador de electrones).
2. Las bacterioclorofilas se oxidan (bacterioclorofila⁺) y hay una estabilización
(proteínas L, M y H) para que no se vuelva al estado anterior.
3. Los electrones cedidos pasan a las
bacteriofeofitinas → ubiquinona Qa→
ubiquinona Qb → quinonas libres por la MP →
CTE (citocromos bc1) → cit c2 periplásmico →
bacterioclorofila⁺.
4. Esta cadena transportadora de electrones
provoca una translocación de protones fuera
de la membrana.
➔ Potencial electroquímico de protones

(FPM).
Fotofosforilación acíclica oxigénica en cianobacterias.

❖ Requiere que el H₂O un elevado potencial de reducción
para obtener los electrones y un fotosistema oxidado para
captar los electrones de agua: Fotosistema II.
❖ Esquema en Z.
❖ Luz → FSI → quinona → proteínas Fe/S → ferredoxina →
NAD+ → poder reductor (NADPH+H+).
❖ FSI⁺ recibe electrones del FSII a través de la cadena
transportadora de energía (gasto de ATP).
❖ Complejo lítico del agua o reloj oxidante del agua.
42
Bacterias púrpura
 Usan SH₂, S⁰, S₂, O₃²⁻, H₂ o compuestos orgánicos
reducidos (en bacterias púrpuras no del azufre).
 Se ceden electrones al citocromo tipo c y a las
quinonas.
 Transporte inverso de electrones: cuando el potencial
de reducción de la quinona no es suficientemente
negativo como para reducir el NAD+ → se consume
potencial electroquímico para generar NADH.
 CO₂ se fija en el ciclo de3 Calvin.
 El donante de electrones no regenera la bacterioclorofila.
Bacterias verdes del azufre.

▪ Usan compuestos reducidos de azufre e hidrógeno molecular.
▪ Los donadores de electrones regeneran la bacterioclorofila.
▪ Proceso: bacterioclorofila → ferredoxina → donación de
electrones al NAD⁺.
▪ Fijación de CO₂ a través del ciclo reductivo de los ácidos
tricarboxílicos.
43
Heliobacterias
❖ Son bacterias esporulantes fotótrofas.
❖ Proteínas Fe/S como aceptor de electrones → reducción de NAD⁺.
❖ La regeneración de bacterioclorofila ocurre mediante un aceptor exógeno
orgánico (heterotrofía).
44
Tema 15: El crecimiento bacteriano
15.1 Crecimiento celular
15.2 Crecimiento poblacional:
15.2.1. Métodos de estudio
15.2.2. Recuento de células
15.2.3. Curva de crecimiento
Distintos tipos de vida celular.

Crecimiento microbiano
Crecimiento:
• Aumento ordenado de los componentes del sistema biológico.

• Aumento de la masa celular.
• Multiplicación.
Estudio:
1. Celular o individual: ciclo celular.
➢ Replicación y segregación de cromosomas.
➢ Síntesis de nuevos materiales de las envueltas.
➢ Coordinación de la replicación y la división celular.
2. Poblacional:
➢ Factores ambientales que afectan al crecimiento.
➢ Cinética del crecimiento.
➢ Factores que afectan al tiempo de generación.
45
Ciclo celular
1. Célula en
reposo.
2. Replicación del ADN. Semiconservativa
3. División de la pared celular e

Bacilos: múltiples puntos de
invaginación de la membrana
crecimiento.
plasmática
4. Separación del ADN. Cocos: dos puntos de
crecimiento.
5.Separación de las células.
15.2. Crecimiento poblacional

➢ Aumento en el número de células microbianas de una población.
➢ Altamente variable entre los microorganismos.
➢ Depende de factores genéticos, ambientales y nutricionales.
• Velocidad de crecimiento: cambio en el número de células o biomasa celular

por unidad de tiempo.
• Tiempo de generación: intervalo de tiempo para la formación de dos células
hijas a partir de una (tiempo para que se duplique la población).
• Crecimiento exponencial: periodo de tiempo en el que las células doblan su
número cada unidad de tiempo.
Crecimiento es sinónimo de incremento de

número de células, y no de tamaño.
46
Crecimiento
3. ç exponencial: periodo de tiempo en el
que las células doblan su nº cada unidad de tiempo.
Cultivo discontinuo (sistema cerrado). Los microorganismos se cultivan en un

recipiente cerrado al que no se incorporan nuevos nutrientes ni se retiran productos
de desecho.
Curva de crecimiento bacteriano en
medio líquido.
47
Cultivo continuo (sistema abierto). Cultivo equilibrado o balanceado mantenido por
tiempo indefinido en sistema abierto de flujo compuesto por:
✓ Una cámara de cultivo de volumen constante.
✓ A la que llega un suministro de nutrientes desde una cámara reservorio.
✓ Desde la cámara de cultivo se elimina parte del cultivo y de sustancias tóxicas
por un dispositivo de rebosadero.
48
15.2.1. Métodos de estudio
• Método indirecto
• Método directo
Métodos indirectos
a) Medición de peso: seco: liofilización y pesada; húmedo: centrifugación y
pesada.
b) Métodos analíticos: ADN, nitrógeno total, proteínas,…
c) Turbidimetría.
49
Tema 16: Control del crecimiento bacteriano.
16.1 → Conceptos.
16.2 → Cinética de muerte microbiana.
16.3 → Agentes físicos.
16.4 → Agentes químicos: desinfectante y antiséptico, quimioterápicos.
Agentes microbianos
Agente antimicrobiano
Propiedades deseables de un quimioterápico ideal.
1. Toxicidad selectiva.
- Dosis terapéutica: nivel necesario para tratamiento clínico.
- Dosis tóxicas: nivel al que el agente se vuelve excesivamente tóxico
para el hospedador.
2. Microbicida (muchos son microbiostáticos → defensa natural del hospedador).
3. No desarrollo resistencia → uso racional de los medicamentos y búsqueda de
nuevos agentes.
4. Efectivo contra un amplio espectro de microorganismos.
5. No alergénico, y sin efecto secundario.
6. Activo en plasma, tejidos, etc. Durante el tiempo necesario.
7. Otras: soluble en agua, acción rápida (alcance pronto de la concentración
terapéutica en los tejidos),…
50
Antimicrobianos antibióticos
Sustancias químicas producidas por organismos vivos, capaces de inhibir el crecimiento
e incluso destruir ciertas especies microbianas y con toxicidad selectiva (escasa o nula
toxicidad para las células del hospedador).
➢ Producidos por microorganismos (metabolismo secundario)
➢ Eucariotas: penicilina.
➢ Procariotas: aminoglicósidos, macrólidos y tetraciclina.
Clasificación de los antibióticos

1. Espectro de acción:
- Amplio espectro. : ejemplo tetraciclina
- Espectro reducido.
2. Naturaleza:
- Naturales
- Sintéticos.
51
3. Tipo de acción:
- Bacteriostáticos (inhibición).
- Bactericidas (destrucción).
Espectro de acción
Clasificación de los antibióticos

4. Estructura química:
- Contienen carbohidratos (estreptomicina)
- Lactonas macroclínicas (eritromicina)
- Quinonas y compuestos relacionados (tetraciclinas)
- Polipéptidos (polimixina)
- ß-lactámicos (penicilinas)
- Compuestos aromáticos (cloranfenicol)
- Heterociclos del N y del O (grupo de las 2-oxozolidonas-linezidol)
- Alifáticos (rifamicinas)
5. Mecanismo de acción o diana:

- Pared celular
- Membrana citoplasmática
- Síntesis de proteínas
Síntesis de ácidos nucleicos
52
53
Resistencia clásica o adquirida: variante fenotípica que aparece en poblaciones
inicialmente sensible inicialmente sensible y que permite crecer en presencia de dicho
agente.
Mecanismos genéticos de adquisición de R: mutación espontánea y transferencia
horizontal genética.
54

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1º Grado en Ciencias Ambientales

Reservados todos los derechos.

• Si el ADN es de doble hélice= kilo pares de bases (Kpb).

Características del cromosoma.

• B: 10 pares de bases/vuelta (estructura de

Organización del genoma bacteriano.

Replicación del ADN cromosómico

Replicación del ADN cromosómico en procariotas (II)

Replicación del ADN cromosómico en procariotas (III)

Replicación del plásmido

2. Modelo de replicación en (sigma) o círculo rodante.

Tipos de plásmidos (II)

Transposasa: caliza el movimiento del transposón a otra del genoma por un

Transposones compuestos (Tn)

Los factores de virulencia

Papel ecológico de los elementos extracromosómico.

Enzima principal: ARN polimerasa (proteína de 5 subunidades: β, β´, α, γ, ω).

2.Experimentos de Avery, MacLeod y McCarty.

Cepas S: con cápsula y virulentas.

Cepas R: sin cápsulas y no virulentas.

No fue aceptado por la comunidad

3. Hotchiss (1949) ensayos in vitro solo usando ADN puro.

Una célula competente posee:

¿De dónde procede el ADN exógeno?

2. Entrada del ADN y fase de eclipse.

Implicaciones de la transformación natural

Cepas fértiles (F⁺) o donantes.

Fisiología y biología molecular de la conjugación.

Síntesis conjugativa del ADN.

Transferencia conjugativa entre reinos

Transducción: un virus bacteriano

Transducción generalizada: ADN de cualquier

12.1 Visión general del metabolismo procariota.

 Reacciones degradativas  Reacciones biosintéticas

Oxidación biológica deshidrogenación

1.Fosforilación a nivel de sustrato (fermentación)

• Complejos macromoleculares, asociados a membranas (respirosomas).

Metabolismo de los hidratos de carbono

Etapas en la respiración aerobia

Fase 2: fase de C3, de oxidación

Metabolismo de hidratos de carbono

Procesos generadores de energía de los quimiolitotrofos

Flujo de electrones en la cadena de transporte de Nitrobacter. A la derecha: la fuerza

Localización de los pigmentos.

• Cuando la bacterioclorofila del centro de reacción sirve tanto como donador

➔ Potencial electroquímico de protones

Fotofosforilación acíclica oxigénica en cianobacterias.

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Distintos tipos de vida celular.

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3. División de la pared celular e

5.Separación de las células.

15.2. Crecimiento poblacional

• Velocidad de crecimiento: cambio en el número de células o biomasa celular

Crecimiento es sinónimo de incremento de

Cultivo discontinuo (sistema cerrado). Los microorganismos se cultivan en un

Clasificación de los antibióticos

Clasificación de los antibióticos

5. Mecanismo de acción o diana:

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