ENZIMOLOGIA CLINICA

Dr. Ronald Navarro Oviedo

Departamento de Biología
Facultad de Ciencias Bilógicas
1. Importancia biológica, Propiedades y Clasificación de las enzimas.
• 1. Las enzimas son catalizadores biológicos que aceleran la velocidad de las reacciones químicas.
• 2. Disminuyen la energía de activación de una reacción química
• 3. Las enzimas hacen posible la vida en la tierra, toda la biología desde la concepción hasta la disolución
que sigue a la muerte depende de las enzimas.
• 4. Las enzimas regulan la velocidad del proceso fisiológico. Entonces, los defectos en la función
enzimática causan enfermedades.
• 5. Cuando las células se lesionan, las enzimas se filtran al plasma. La medición de la actividad de dichas
enzimas en plasma es una parte integral del diagnóstico médico moderno.
• 6. Las enzimas se utilizan como fármacos.
• 7. Las enzimas inmovilizadas, que son enzimas adheridas a soportes sólidos, se utilizan en laboratorios
de química clínica y en la industria. Por ejemplo, la glucosa en sangre u orina se detecta utilizando
glucosa oxidasa inmovilizada. En la industria farmacéutica, la glucosa isomerasa se utiliza para producir
fructosa a partir de glucosa.
• 8. Las enzimas se utilizan como biosensores.
• 9. La detección del SIDA implica el uso de una técnica ELISA dependiente de enzimas.
• 10. Las enzimas se utilizan como agentes limpiadores en la industria de los detergentes.
 Propiedades de las enzimas
Naturaleza química: Las enzimas, casi todas ellas proteínas, son biocatalizadores altamente
selectivos que aceleran las reacciones en factores de hasta 1015.
Cofactores: Holoenzyme ⇄ Apoenzyme + Cofactor
• Pueden ser: iones metálicos inorgánicos o
• Moléculas orgánicas, llamadas coenzimas o grupos prostéticos.
Eficiencia catalítica: incrementan la velocidad de una reacción 103 a 1015 veces. Transforman 100 a
1000 moléculas de Sustrato por segundo. Una sola molécula de anhidrasa carbónica transforma
36,000,000 moléculas de sustrato por segundo.
Especificidad enzimática: El sitio activo: Especificidad absoluta, de grupo, estereoespecificidad. La
especificidad reside en el sitio activo.
Localización dentro dela célula: citosol, matriz mitocondrial, etc. Este arreglo ayuda a:
• Organizar miles de enzimas de la célula en distintas vías,
• Proporcionar un entorno favorable para las reacciones celulares.
• Aislar el sustrato o producto de una reacción determinada de otras reacciones competitivas.
Figura 6.1. Sitio activo de una enzima y un complejo enzima-sustrato (enzima E, complejo enzima-sustrato ES, sustrato S).
Clasificación de las enzimas
 Transfer of electrons (hydride
ions or H atoms)

Transfer of functional groups

from one molecule to another.

Catalyze hydrolytic cleavage.)

Cleavage of C—C, C—O, C—N, or other bonds by elimination,

leaving double bonds or rings, or addition of groups to
double bonds 7 Translocases Movement of molecules or ions across
membranes or their separation within membranes

Transfer of groups within

molecules to yield isomeric
forms

Formation of C—C, C—S, C—O, and C—N bonds by condensation

reactions coupled to cleavage of ATP or similar cofactor
2. Factores que afectan la actividad enzimática.

Figura 6.3. La relación entre la concentración de

sustrato [S] y la velocidad de reacción (V).

Figura 6.8. El modelo de Michaelis-Menten predice una curva hiperbólica

de la velocidad de reacción inicial (Vo) frente a la concentración de
sustrato. Km es la concentración de sustrato a la mitad de la velocidad
máxima (Vmax).
kcat = Vmax/[Et] Vmax = kcat[Et],
Fig. 6.9. 1/V against 1/[S]. The straight line represents the Lineweaver-
Burk transformation of the Michaelis–Menten equation.
Figura 6.4. Dependencia de la temperatura de la enzima. V velocidad de reacción. La velocidad máxima de
reacción se alcanza a la temperatura óptima y cae al aumentar o disminuir la temperatura.
Fig. 6.5. Dependencia del pH de algunas enzimas (V velocidad de reacción. Cada
Figura 6.6. Efecto de la concentración de enzima sobre la
una de las tres enzimas tiene su pH óptimo característico, correspondiente a su
actividad enzimática (velocidad de reacción V).
máxima actividad).
 3. Inhibición enzimática
A. Inhibición reversible
• Si el inhibidor actúa sólo sobre el Km aparente, es un inhibidor competitivo;
• Si el inhibidor afecta sólo a la Vmax aparente, es un inhibidor no competitivo; y
• Si el inhibidor afecta a ambas constantes, es un inhibidor incompetitivo.

Fig. 6.12. Lineweaver-Burk plot showing the effect of competitive and non-competitive
inhibitors. Km increases in competitive and Vmax decreases in non-competitive inhibition.
Fig. 6.13. The effect of uncompetitive inhibitor on enzymatic reaction.
 B. Inhibición irreversible
El inhibidor irreversible se une firmemente, principalmente de forma covalente, a aminoácidos a menudo
en el sitio activo de la enzima o cerca de él, inactivando permanentemente la enzima.
Aplicaciones terapéuticas de los inhibidores enzimáticos

Puri Dinesh (2011) Textbook of MEDICAL BIOCHEMISTRY. Elsevier

 4. Mecanismos de catálisis enzimática
La pregunta “cómo funcionan las enzimas” puede responderse a través de: a) los cambios de energía que ocurren durante las reacciones
catalizadas y no catalizadas y b) los cambios en el sitio activo de la enzima que facilita la catálisis.

A. Cambios de energía libre durante las reacciones químicas

Las enzimas sólo pueden cambiar la velocidad de la reacción, no el

equilibrio de la reacción catalizada. Actúan disminuyendo la
energía libre de activación ΔGact, la energía libre necesaria para
alcanzar el estado de transición (el punto de mayor energía libre
en la reacción).

Figura 6.2. Representación esquemática de los cambios de energía libre que se producen durante una reacción química. (a) Sin catalizar, (b) Catalizada, energía libre de activación
ΔGact. Las enzimas aceleran una reacción química al reducir la magnitud de la barrera de energía de activación sin afectar el equilibrio de la reacción.
 B. Cabios en el sitio activo de la enzima
1. Estabilización del Estado de Transición
El sitio activo se une al sustrato en una geometría que se asemeja al estado de transición del sustrato. Esto ayuda a la
estabilización de la molécula del sustrato en su estado de transición, que al ser una forma reactiva, se convierte en el
producto.
2. Aumento de la velocidad y especificidad para el sustrato
Las enzimas son iguales a los demás catalizadores, se diferencian por la especificidad. La energía de enlace entre los
grupos complementarios de un S y un centro activo se utiliza para proporcionar la Ea de la reacción y por tanto se
incrementa la velocidad
3. Encaje inducido y catálisis enzimática
Cambios conformacionales; un encaje inducido incrementa la velocidad de algunas reacciones pero el incremento es
pequeño comparado con otros mecanismos. Ejm. Carboxipeptidasa A, lisozima
4. Aproximación
Una reacción bi-molecular es transformada en reacción mono-molecular, por ello se incrementa la concentración
efectiva de los reactantes, comparado con una solución diluida
5. Desestabilización
El ataque específico con la superficie de una enzima induce tensión, deformación o desestabilización de los enlaces
que han de romperse.
6. Catálisis covalente
Se basa en la formación de enlaces covalentes transitorios (entre los residuos aminoacilo del sitio activo y la molécula
sustrato) durante la catálisis. Ej. Es utilizada por las serina proteasas que unen su sustrato de forma covalente en la
cadena lateral de la serina.
7. Catálisis nucleofílica
Grupo nucleófilo (grupo básico), cede electrones al S
Imidazol (Histidina) pK = 6.0 – 7.0
OH (Serina) pK = 13.6
ε-NH2 (Lisina) pK = 7.6 – 10.6
SH (Cisteina) pK = 8.0 – 9.0
COOH (Aspártico) pK = 3.9
Coenzimas: piridoxal-P, TPP

8.Catálisis electrofílica
Grupo electrófilo (grupo ácido), acepta electrones del S
Mn++, Mg++, Fe+++, ε-NH3 (Lisina)

9. Catálisis general ácida o básica

COOH: Ac. Glutámico, Ac. Aspártico
Imidazol (histidina) Protonados Desprotonados
ε-NH2 (Lisina) funcionan como funcionan como
Hidroxibenceno (Tirosina) catalizadores ácidos catalizadores básicos
SH (Cisteína)
5. REGULACION DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA
1. Regulación alostérica

Fig. 6.15. The sigmoid curve showing the activity

of an allosteric enzyme. (a) After addition of an
allosteric activator, (b) Without any allosteric
modulator, (c) After addition of an allosteric
inhibitor.
2. Modificación covalente (enzimas con varias subunidades)
 3. Proteólisis limitada

Activación del zimógeno por escisión proteolítica. Esta vista esquemática muestra la
Activación proteolítica del quimotripsinógeno activación de los zimógenos pancreáticos, moléculas que se vuelven
Las cascadas regulatorias gobiernan diversos proceso biológicos: catalíticamente activas cuando se escinden. Los zimógenos se muestran en naranja
y las proteasas activas en amarillo o verde.
- Aspectos de la determinación del destino celular durante el desarrollo
- Detección de la luz por los bastones retinales
- Muerte celular programada (apoptosis)
- Coagulación de la sangre
4. Compartimentalización

5. Inducción y represión enzimática

Enzimas constitutivas: siempre presentes en concentraciones constantes.
Ejm. Glicólisis
Enzimas iducibles: Ausente o solo en pequeñas cantidades; inductor =
substrato

6. Disponibilidad de substratos y cofactores

 6. Aplicación clínica de las enzimas
A. Isoenzimas: Formas múltiples de una enzima que catalizan la misma reacción pero difieren en sus propiedades cinéticas
Mecanismos para la producción de isoenzimas:
 Por combinación de diferentes subunidades polipeptídicas, que resultan de diferentes loci genéticos. Ejm. La creatina
quinasa, dímero con dos tipos de subunidades: M (músculo) y B (cerebro). Tres combinaciones: MM, MB y BB. Lactato
deshidrogenasa, tetrámero con dos tipos de subunidades (H y M). Cinco formas isoenzimáticas.
 Por variaciones estructurales entre diferentes individuos (formas alternativas de la misma enzima). Las isoenzimas alélicas,
surgen del mismo locus genético. Ej. se han identificado unas 400 isoenzimas alélicas diferentes de la glucosa 6-fosfato
deshidrogenasa; Sólo una forma está presente en un individuo determinado, pero todas las formas diferentes se observan
en toda la población.
 Por modificación postraduccional del mismo polipéptido enzimático. Son llamadas isoformas. Ej. Las isoformas de la
fosfatasa alcalina, se diferencian en el número de residuos de ácido siálico y, por tanto, en el número de grupos cargados.
B. Separación de isoenzimas.
 Electroforesis: revela diferentes patrones de migración electroforética
 Uso de inhibidores: la alta temperatura o un inhibidor puede inhibir una isoenzima. Ejm. la isoenzima -2 de la fosfatasa
alcalina (ALP) de origen placentario es termoestable incluso a 65ºC, pero la isoenzima -2 producida por las células
hepáticas pierde su actividad a esta temperatura en 30 minutos. La -ALP de origen intestinal es inhibida por la fenilalanina.
C. Isoenzimas útiles en el diagnóstico: Las isoenzimas LDH y CK son muy importantes en el diagnóstico del infarto de
miocardio.
Enzimas en el diagnóstico clínico
B. Aplicaciones clínicas de las enzimas de diagnóstico
Fig. 6.18. Alanine transaminase is an early indicator of hepatocellular damage.
 7. Enzimas como agentes terapéuticos
Las enzimas se usan en el tratamiento de una serie de enfermedades:
 La estreptoquinasa (de Streptococcus) o la uroquinasa (de la orina) lisan
los coágulos intravasculares y, por tanto, se utilizan en el infarto de
miocardio.
 La hialuronidasa degrada el ácido hialurónico, un mucopolisacárido del
tejido extracelular. Por tanto, se utiliza para aumentar la permeabilidad de
los tejidos y en el tratamiento del edema traumático o postoperatorio.
 La asparaginasa se utiliza como fármaco anticancerígeno; más
comúnmente en algunos tipos de leucemia.
 La pepsina y la tripsina son útiles en pacientes con indigestión crónica y en
insuficiencia pancreática.
 La alfa-1-antitripsina (AAT) se utiliza en el tratamiento de un tipo de
enfisema causado por la deficiencia de AAT. (Enfisema pulmonar: Acumulación patológica
de aire en los tejidos u órganos).