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CÓDIGO:

UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA FDOC-090


VERSIÓN: 01
EMISIÓN:
02/03/2020
GUÍA DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO PÁGINA
1 DE 10

FACULTAD: CIENCIAS DE LA SAUD


DEPARTAMENTO: BACTERIOLOGÍA
PROGRAMA: BACTERIOLOGÍA
NOMBRE DEL CURSO: INTRODUCCIÓN A LA MICROBIOLOGÍA
GUÍA # 1 - NORMAS DE BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE
NOMBRE DE LA PRÁCTICA:
MICROBIOLOGIA

1. OBJETIVOS

• Aplicar las normas de bioseguridad en el trabajo del laboratorio de Microbiología.

• Identificar los riesgos potenciales inherentes al trabajo en el laboratorio de Microbiología.

2. INTRODUCCIÓN

La Bioseguridad es el conjunto de normas y procedimientos que garantizan el control de los factores de


riesgo, tanto químicos, físicos, orgánicos, psicológicos, ambientales, biológicos, ergonómicos y de
seguridad, los cuales atentan contra las personas que trabajan en el laboratorio.
La bioseguridad en el laboratorio se basa esencialmente en la prevención de condiciones que puedan
resultar en lesiones al personal o en daños a las instalaciones del laboratorio que pueden causar accidentes
o reducir a un nivel aceptable el riesgo inherente a la manipulación de material peligroso.
El riesgo se define como la probabilidad de que ocurra un daño, lesión o enfermedad.
Durante el trabajo diario en el área de microbiología, se dan situaciones que representan un riesgo
potencial, estas varían según el agente infeccioso y los procedimientos utilizados. El trabajo en el
laboratorio de microbiología es, como en la mayoría de las otras secciones del Laboratorio Clínico, un
trabajo de grupo. La actitud ante las practicas seguras de cada uno de los integrantes del equipo,
determinan su propia seguridad, así como la de sus compañeros y la de la colectividad del Laboratorio.
Dentro de las normas generales de bioseguridad en el laboratorio de microbiología clínica se considera que
la peligrosidad de un agente está directamente relacionada con el tipo de microorganismo y la
manipulación a la que es sometido. Por lo que es básico:
1. Conocer los agentes, sustancias y productos peligrosos que existen en el laboratorio.
2. Conocer la metodología de trabajo del laboratorio.
3. Conocer el equipamiento del laboratorio.
4. Conocer las medidas a tomar en caso de emergencia.
5. Conocer las leyes relacionadas con la seguridad biológica.
6. Respetar y hacer cumplir todo lo anterior.

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Un aspecto importante para que suceda un accidente por agente biológico es la concurrencia de cuatro
elementos básicos: Un huésped susceptible, un agente infeccioso, una concentración suficiente de éste y
una ruta de transmisión apropiada. De los cuales, el que mejor se puede controlar en el laboratorio es la
ruta de transmisión.
Los microorganismos pueden ingresar al organismo a través de:
• La boca: Al comer, beber y fumar en el laboratorio; transferir reactivos o material biológico con pipetas
sin utilizar ningún tipo de dispositivo mecánico; transferencia indirecta de microorganismos a través de los
dedos o utensilios contaminados.
• La piel: Por inoculación accidental con una aguja hipodérmica u otros instrumentos cortopunzantes o
de vidrio; cortaduras o rasguños.
• Los ojos: A través de Salpicaduras de materiales infecciosos; transferencia indirecta de
microorganismos a través de los dedos contaminados.
• Los pulmones: Por inhalación de microorganismos transportados por el aire (aerosoles).

LA BIOSEGURIDAD COMO EJERCICIO PRÁCTICO


Cloro y compuestos clorados como desinfectantes de superficies y limpieza de material orgánico en el
laboratorio de Microbiología:
Los hipocloritos son los compuestos más ampliamente usados y vienen en forma líquida (hipoclorito de
sodio) o sólida (hipoclorito de calcio). Son compuestos de espectro amplio, precio bajo y acción rápida. Su
uso está limitado por su efecto corrosivo, su inactivación por materiales orgánicos y su inestabilidad
relativa. El compuesto activo que se libera es el ácido hipocloroso de potente actividad oxidante inhibidor
de la actividad de las proteínas. Su actividad germicida depende de la concentración del compuesto. De
menor a mayor concentración es activo contra bacterias, hongos, virus, micobacterias y esporas
bacterianas. Comercialmente el hipoclorito de sodio viene en diferentes concentraciones, por ejemplo, al
5,25 % o 52.500 partes por millón (ppm), y puede ser la base para obtener diluciones con diferentes
concentraciones. El cloro y los compuestos clorados se usan en desinfección de superficies, en la
lavandería, para tratamiento de agua y de algunos desechos. Cuando se utilizan en presencia de sangre su
concentración debe ser de (0,5%) 5.000ppm, para lograr la inactivación. A (0,1%) 1.000 ppm tiene efecto
contra hongos, protozoos, micobacterias y endosporas bacterianas. A (0,02%) 200ppm, y (0,01%) 100 ppm
destruye virus y formas vegetativas de bacterias.
Algunas dosis utilizadas para la desinfección de diferentes fuentes son: agua (0,2ppm); desinfección de
manos (50ppm); camillas, mesones y camas (200ppm); y para desinfección de material orgánico
(5.000ppm).

3. PROCEDIMIENTO

1. Preparación de hipoclorito de sodio en concentraciones utilizadas en la desinfección de áreas y


limpieza de material orgánico:
Para la preparación de las diluciones de hipoclorito de sodio de acuerdo al uso, aplique la siguiente formula:
Cd x Vd
V= -----------------

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Cc
Dónde:
Vd: volumen deseado
Cd: concentración deseada
Cc: concentración conocida

Ej: Si se desea preparar 1L (1000ml) de solución de hipoclorito de sodio al 0,5% (5.000ppm) a partir de
hipoclorito de sodio comercial al 5% (50.000 ppm). Se procede como sigue:
0,5% x 1.000 ml
V= --------------------------= 100 ml
5%

Entonces usted debe tomar una probeta graduada y medir 100 ml de hipoclorito de sodio comercial al 5%,
luego agregar este volumen a un frasco tapa rosca que contiene 900 ml de agua para obtener un volumen final
de 1L (1.000 ml), de una dilución 0,5%, rotular y disponer para su uso.

Actividad a realizar: partiendo del ejercicio anterior prepare a partir de hipoclorito de sodio comercial 5%
(50.000 ppm), 100ml de solución a cada una de las siguientes concentraciones:
0,5% (5.000ppm)
0,1% (1.000ppm)
0,02% (200ppm)
0,01% (100ppm)

2. Inactivación de material biológico potencialmente peligroso:


a) Sangre derramada en el lugar de trabajo:
Cubra el material derramado con papel absorbente aplique sobre este una solución desinfectante de
hipoclorito de sodio a 5000ppm déjela actuar por 30 min, luego retire este material y descártelo en la
caneca destinada para este tipo de residuo y de acuerdo con el procedimiento establecido, desinfecte
el área.

b) Caldo de cultivo bacteriano (positivo) derramado en el lugar de trabajo:


Cubra el material derramado con papel absorbente aplique sobre este una solución desinfectante de
hipoclorito de sodio a 200ppm déjela actuar por 30min, luego retire este material y descártelo en la
caneca destinada para este tipo de residuo, desinfecte el área.

3. Limpieza y desinfección de superficies:

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a) Tome un hisopo estéril y realice un frotis en el mesón asignado a su grupo de trabajo práctico de
laboratorio de Microbiología, y cerca a la llama del mechero deposite el hisopo en un tubo que
contiene 9 ml de caldo nutritivo, rotule y lleve a incubación por 24h a 35+/- 2°C, transcurrido este
tiempo describa y esquematice sus observaciones.
b) Tome una porción de algodón, gasa o papel absorbente y humedézcalo en la solución de hipoclorito de
sodio que corresponda y proceda a desinfectar el mesón de trabajo dejando actuar la solución
desinfectante por un tiempo no menor a 10min. Transcurrido este tiempo, tome un hisopo estéril y
proceda a realizar un frotis de la superficie desinfectada, cerca de la llama de un mechero deposite el
hisopo en un tubo que contiene 9ml de caldo nutritivo, rotule y lleve a incubación por 24h a 35+/- 2°C.
transcurrido este tiempo describa y esquematice sus observaciones.

4. MATERIALES, EQUIPOS, REACTIVOS.

Hipoclorito de sodio
Agua destilada
Caldo BHI inoculado con Staphylococcus aureus
Caldo BHI inoculado con Escherichia coli
Muestras de sangre
Gradillas
Papel kraft
Algodón
Fucsina
Tubos con caldo nutritivo
Probetas
Frascos tapa azul
Pinzas
Hisopos estériles

5. EQUIPOS DE PROTECCIÓN PERSONAL Y/O COLECTIVA.

Gorro
Guantes desechables
Tapabocas
Bata manga larga

6. MANEJO DE RESIDUOS PELIGROSOS.

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Descartar todo el material contaminado en bolsa roja (riesgo biológico)

7. CUESTIONARIO O ACTIVIDADES COMPLEMENTARIAS.

PRE LABORATORIO

1. Analizar los siguientes documentos anexos a esta guía:


• Normas generales de bioseguridad.
• Procedimientos para tener en cuenta durante el trabajo en el laboratorio de microbiología
2. Defina bioseguridad primaria y secundaria.
3. Mencione por lo menos tres elementos que hacen parte de las barreras primarias y secundarias.
4. Con relación a los elementos de protección personal utilizados en el laboratorio de microbiología
investigue para socializar en grupo:
• Riesgo que reduce cada uno de ellos
• Características que deben poseer
• Procedimiento para su mantenimiento
POS LABORATORIO
Complete la información:
Norma(s) de bioseguridad Riesgo que reducen

Esterilizar el material contaminado antes de


desecharlo

Contaminación de los ojos

Mantener el puesto de trabajo sólo con el material


necesario

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8. BIBLIOGRAFÍA

Shanna N, Stefan W. Manual de bioseguridad en el laboratorio de microbiología. 3 edición: Ginebra.

Martí MC et al. Prevención de riesgos biológicos en el laboratorio. Instituto Nacional de Seguridad e Higiene en
el Trabajo. Madrid; 1997.

Lara Villegas, H. H., Ayala Núñez, N. V., & Rodríguez Padilla, C. (2008). Bioseguridad en el laboratorio: Medidas
importantes para el trabajo seguro. Bioquimia Internet, 33(2)
BSL3 and BSL4 Agents: Epidemiology, Microbiology and Practical Guidelines Somerset, DE: Wiley-Blackwell,
2012.

Alvarado, Eei Elizabeth García Y Pérez, Eesp Virginia César. Medidas de bioseguridad, precauciones estándar y
sistemas de aislamiento. En: REV ENFERM IMSS. vol. 10, no. 1, p. 27-30

Guideline for Disinfection and Sterilization in Healthcare Facilities, 2008. CDC.

How to make chlorine solutions for environmental disinfection (Annex 6 from Interim Infection Prevention and
Control Guidance for Care of Patients with Suspected or Confirmed Filovirus Haemorrhagic Fever in Health-
Care Settings, with Focus on Ebola 2014)

9. RECOMENDACIONES

Leer la guía con anterioridad a la clase, profundizar sobre bioseguridad en el campo de las ciencias de la salud.

Leer el anexo del listado de las normas de bioseguridad.

10. ANEXOS

REGLAS BÁSICAS PARA EL ACCESO Y USO DE LOS LABORATORIOS DE DOCENCIA DEL PROGRAMA DE
BACTERIOLOGÍA

Para la realización de las prácticas de laboratorio el estudiante deberá tener en consideración inmediata las
siguientes reglas:

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1. El ingreso a los laboratorios es solo para el personal autorizado y es regulado por el docente y/o
funcionario responsable del mismo.
2. Todas las áreas deben estar rotuladas con la señal de riesgo biológico y el nivel de contención.
3. Los estudiantes y demás personal que ingresa al laboratorio son responsables de cumplir con las normas de
bioseguridad.
4. El laboratorio siempre debe permanecer limpio y ordenado durante la realización de los procedimientos.
5. Las puertas y ventanas deben permanecer cerradas durante la sesión de laboratorio para evitar el ingreso
de potenciales contaminantes por las corrientes de aire.
6. Deberá lavar meticulosamente las manos con jabón y agua al entrar y antes de salir del laboratorio, incluso
cuando salga por breves periodos.
7. Durante la práctica el estudiante siempre deberá usar bata manga larga bien abotonada y limpia, gorro,
cubrebocas y guantes.
8. Evitar colocar objetos no relacionados con la práctica de laboratorio sobre el área de trabajo, colocar todos
los objetos personales (libros, bolsos etc.), en las zonas destinadas para tal fin.
9. Antes y después de cada practica el estudiante deberá limpiar la mesa de trabajo con el desinfectante que
se le proporciona para tal fin.
10. Se prohíbe ingresar o ingerir cualquier tipo de alimento o bebida en el laboratorio.
11. No se admitirán visitas personales que distraigan la atención y pongan en riesgo la seguridad en el trabajo
que se realiza.
12. . No se autorizará ni permitirá la entrada de niños en las zonas de trabajo del laboratorio
13. No es permitido fumar en el sitio de trabajo
14. No es permitido el ingreso, preparación y consumo de alimentos al interior del laboratorio.
15. No guardar alimentos en las neveras ni en los equipos destinados a la refrigeración de sustancias
contaminantes o químicos.
16. Las condiciones de temperatura, iluminación y ventilación de los sitios de trabajo deben ser óptimas.
17. Utilizar en forma sistemática guantes plásticos o de látex en procedimientos que conlleven manipulación
de elementos biológicos y cuando maneje instrumental o equipo contaminado en la atención de pacientes.
Hacer lavado previo antes de quitárselos y al terminar el procedimiento. Utilice un par de guantes por
paciente.
18. Manejar todo paciente como potencialmente infectado. Las normas universales deben aplicarse con todos
los pacientes independientemente del diagnóstico, por lo que se hace innecesario la clasificación específica
de sangre y otros líquidos corporales como “infectada o no infectada”.
19. Abstenerse de tocar con las manos enguantadas alguna parte de su cuerpo y de manipular objetos
diferentes a los requeridos durante el procedimiento.

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20. Emplear mascarilla y protectores oculares durante procedimientos que puedan generar salpicaduras o
gotitas aerosoles de sangre u otros líquidos corporales.
21. Usar delantal plástico en aquellos procedimientos en que se esperen salpicaduras, aerosoles o derrames
importantes de sangre u otros líquidos orgánicos.
22. Evitar deambular con los elementos de protección personal fuera de su área de trabajo.
23. Mantener sus elementos de protección personal en óptimas condiciones de aseo, en un lugar seguro y de
fácil acceso.
24. Utilizar equipos de reanimación mecánica, para evitar el procedimiento boca a boca.
25. Evitar la atención directa de pacientes por profesionales que presenten lesiones exudativas o dermatitis
serosas, hasta tanto éstas hayan desaparecido.
26. Si presenta alguna herida, por pequeña que sea, cubrirla con esparadrapo o curitas.
27. Mantener actualizado el esquema de vacunación contra Hepatitis B.
28. Las mujeres embarazadas que trabajen en ambientes hospitalarios expuestas a factor de Riesgo Biológico
de transmisión parenteral deberán ser muy estrictas en el cumplimiento de las precauciones universales y,
cuando el caso lo amerite, se deben reubicar en áreas de menor riesgo.
29. Aplicar en todo procedimiento asistencial las normas de asepsia necesarias.
30. Manejar con estricta precaución los elementos cortopunzantes y desecharlos en los guardianes. Estos
deberán estar firmemente sujetos de tal manera que pueda desechar las agujas halando la jeringa para que
caigan entre el recipiente, sin necesidad de utilizar para nada la otra mano.
31. Cuando no sea posible la recomendación anterior, evitar desenfundar manualmente la aguja de la jeringa.
Desechar completo.
32. Evitar el traslado de elementos cortopunzantes de un recipiente a otro.
33. Abstenerse de doblar o partir manualmente la hoja de bisturí, cuchillas, agujas o cualquier otro material
cortopunzante.
34. Nunca reutilizar el material contaminado como agujas, jeringas y hojas de bisturí.
35. Todo equipo que requiera reparación técnica debe ser llevado a mantenimiento, previa desinfección y
limpieza por parte del personal encargado del mismo. El personal del área de mantenimiento debe cumplir
las normas universales de prevención y control del factor de riesgo Biológico.
36. Realizar desinfección y limpieza a las superficies, elementos, equipos de trabajo, al final de cada
procedimiento y al finalizar la jornada de acuerdo con el proceso descrito en el manual de limpieza y
desinfección.
37. En caso de derrame o contaminación accidental de sangre u otros líquidos corporales sobre superficies de
trabajo. Cubrir con papel u otro material absorbente; luego echar hipoclorito de sodio a 5000 partes por
millón (0,5%) sobre el mismo y sobre la superficie circundante, dejando actuar durante 30 minutos;
después limpiar nuevamente la superficie con desinfectante a la misma concentración y realice limpieza

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con agua y jabón. El personal encargado de realizar dicho procedimiento debe utilizar guantes, mascarilla y
bata.
38. En caso de ruptura del material de vidrio contaminado con sangre u otro líquido corporal los vidrios se
deben recoger con escoba y recogedor; nunca con las manos.
39. Los recipientes para transporte de muestras deben ser de material irrompible y cierre hermético. Debe
tener preferiblemente el tapón de rosca.
40. Manipular, transportar y enviar las muestras disponiéndolas en recipientes seguros, con tapa y
debidamente rotuladas, empleando gradillas limpias para su transporte. Las gradillas a su vez se
transportarán en recipientes herméticos de plástico o acrílicos que detengan fugas o derrames
accidentales. Además, deben ser fácilmente lavables.
41. En caso de contaminación externa accidental del recipiente, éste debe lavarse con hipoclorito de sodio a
1000 partes por millón y secarse.
42. En las áreas de alto riesgo biológico el lavamanos debe permitir accionamiento con el pie, la rodilla o el
codo.
43. Restringir el ingreso a las áreas de alto riesgo biológico al personal no autorizado, al que no utilice los
elementos de protección personal necesarios y a los niños.
44. La ropa contaminada con sangre, líquidos corporales u otro material orgánico debe ser enviada a la
lavandería en bolsa plástica roja.
45. Disponga el material patógeno en las bolsas de color rojo, rotulándolas con el símbolo de riesgo biológico.
46. En caso de accidente de trabajo con material cortopunzante hacer el auto reporte inmediato del presunto
accidente de trabajo.
47. Los trabajadores sometidos a tratamiento con inmunosupresores no deben trabajar en áreas de alto riesgo
biológico.

PROCEDIMIENTOS A TENER EN CUENTA DURANTE EL TRABAJO EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

1. Las puertas del laboratorio deben mantenerse cerradas.


2. Utilizar los elementos de protección personal requeridos según el procedimiento a realizar.
3. Desinfectar con un detergente el área de trabajo antes y después de su uso.
4. Poner una hoja de papel en el área desinfectada, sobre la cual se ubica el mechero y la gradilla con los
elementos de trabajo necesarios. La hoja se descarta al terminar el trabajo en la bolsa establecida para
material contaminado (bolsa roja) y el material no contaminado (bolsa verde)
5. No se colocará ningún material en la boca ni se pasará la lengua por las etiquetas.
6. Todos los procedimientos técnicos se practicarán de manera que se reduzca al mínimo la formación de
aerosoles y gotículas.

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7. Las jeringuillas y agujas hipodérmicas no serán utilizadas en lugar de dispositivos de pipeteo ni con ningún
fin distinto de las inyecciones por vía parenteral o la aspiración de líquidos de los animales de laboratorio.
8. Todos los derrames, accidentes y exposiciones reales o potenciales a materiales infecciosos se
comunicarán al docente. Informar inmediatamente cualquier accidente como cortaduras y quemaduras. En
caso de rompimiento de tubos con cultivos microbianos, cubrir el tubo con hipoclorito al 0,02% (200ppm) o
fenol al 5% (50.000 ppm), tapar con una hoja de papel periódico y dejar sedimentar los aerosoles durante
media hora, luego recoger el material, envolverlo en papel y llevarlo a esterilización antes de descartarlo.
9. Se deberá seguir el procedimiento escrito para la limpieza de todos los derrames.
10. Los líquidos contaminados deberán descontaminarse (por medios químicos o físicos), de acuerdo con el
protocolo establecido en el laboratorio, antes de su eliminación en el laboratorio o entregarlos a la
empresa contratada.
11. Mantener el puesto de trabajo sólo con el material necesario
12. Trabajar cerca al mechero prendido
13. No poner ningún elemento de trabajo en contacto con el cuerpo
14. Evitar al máximo transitar por el laboratorio
15. Descartar el material contaminado en las bolsas o recipientes destinados para tal fin.
16. Evitar desplazarse de una parte a otra con el asa bacteriológica cargada con algún cultivo de
microorganismos para no crear aerosoles
17. Marcar cuidadosamente todos los cultivos y las preparaciones procesadas.
18. Incubar los cultivos en el lugar destinado específicamente para ello.
19. Flamee el asa antes y después de usarla.
20. Evite llevar a la cara, la boca y los ojos objetos no estériles.
21. Esterilizar el material contaminado antes de desecharlo
22. Lavar las manos después de manipular material infeccioso, así como antes de abandonar las zonas de
trabajo del laboratorio.
23. La ropa protectora de laboratorio no se guardará en los mismos armarios o casillas que la ropa de calle.
24. Está prohibido usar las prendas protectoras fuera del laboratorio, por ejemplo, en cafeterías, oficinas,
bibliotecas, salas para el personal y baños.
25. Debe utilizarse calzado con puntera

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