CÓDIGO:

UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA FDOC-090

VERSIÓN: 01
EMISIÓN:
02/03/2020
GUÍA DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO PÁGINA
1 DE 8

FACULTAD: CIENCIAS DE LA SALUD

DEPARTAMENTO: BACTERIOLOGÍA
PROGRAMA: BACTERIOLOGÍA
NOMBRE DEL CURSO: BACTERIOLOGÍA II
NOMBRE DE LA PRÁCTICA: IDENTIFICACIÓN DEL GÉNERO Vibrio

Asignatura: Bacteriología II
Código: 504129
Horas semanales: 3
Componente: Teórico-Práctico
Ubicación: III Semestre
Requisitos: Introducción a Microbiología, Biología, Bacteriología
Docentes: MSc. Margarita María Díaz Durango- MSc. Clelia Rosa Calao Ramos

GUÍA Nº4
IDENTIFICACIÓN DEL GÉNERO Vibrio

INTRODUCCIÓN

El segundo gran grupo de bacilos gramnegativos anaerobios facultativos y fermentadores son los
géneros Vibrio y Aeromonas.

Son bacilos curvos Gram negativos, anaerobios facultativos con flagelos polares, fermentadores. El
género posee 76 especies de bacilos curvados. Una serie de especies se asocian a enfermedad en
personas, pero tres especies son patógenos de especial importancia para el ser humano: V. cholerae,
V. parahaemolyticus, y V. vulnificus.

Crecen entre 14 y 40°C y son especies halofílicas. El V. cholerae se subdivide en 140 serogrupos,
siendo las relacionadas con cólera los serogrupos O1 y O139 (figura 1). Los microorganismos se
encuentran en ríos y mares de todo el mundo. La infección por este microorganismo se asocia con el
consumo de crustáceos, alimentos y aguas contaminadas con la bacteria.

Si usted ha accedido a este formato a través de un medio diferente al sitio web del Sistema de Control Documental del
SIGEC asegúrese que ésta es la versión vigente
 CÓDIGO:
UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA FDOC-090
VERSIÓN: 01
EMISIÓN:
02/03/2020
GUÍA DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO PÁGINA
2 DE 8

Figura 1. Clasificación de los serogrupos de V. cholerae en los grupos Epidémico y No-

Epidémico.

Las enfermedades relacionadas con este género son:

 Cólera: se caracteriza por la perdida de líquidos y electrólitos, conduciendo al paciente a una

acidosis metabólica, hipokalemia, shock hipovolémico, arritmias cardíacas, fallo renal y muerte.
 Gastroenteritis
 Infección de heridas (V. vulnificus)
 Septicemia (V. vulnificus)

Este género se observa rara vez en las muestras de heces teñidas con Gram, estas deben procesarse
inmediatamente recogidas y cultivarse en los medios adecuados, en caso de retraso debe ser
transportada en el medio de transporte Cary- Blair y refrigerarse.

Si usted ha accedido a este formato a través de un medio diferente al sitio web del Sistema de Control Documental del
SIGEC asegúrese que ésta es la versión vigente
 CÓDIGO:
UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA FDOC-090
VERSIÓN: 01
EMISIÓN:
02/03/2020
GUÍA DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO PÁGINA
3 DE 8

Los Vibrios crecen en la mayoría de los medios empleados en el Laboratorio para cultivo de heces,
pero es aconsejable utilizar medios selectivos y diferenciales como agar TCBS y realizar un pre-
enriquecimiento en Agua Peptonada alcalina (pH de 8,6).

Requerimientos ambientales: El rango de temperatura de crecimiento están entre 16 y 42 °C con

un óptimo de 37°C con un rango de PH de 6.8 a 10.2 y un pH óptimo de 7.0 a 8.0.

Epidemiología: Se le ha encontrado en ambientes marinos en regiones templadas o tropicales, en

lagos y ríos, en moluscos y crustáceos, en pájaros y herbívoros a un lejos de las costas marinas. El
número de bacterias de Vibrio cholerae, disminuye a medida que la temperatura del agua baja por
debajo de 20 °C la enfermedad humana resulta de la ingestión de agua contaminada o del consumo
de alimentos contaminados

Diagnóstico: La muestra a estudiar en los pacientes debe ser materia fecal y junto a un antecedente
epidemiológico debe investigarse Vibrio cholerae. Se puede realizar a demás el análisis microbiológico
de los alimentos y aguas consumidas. Se realiza un aislamiento de las cepas sospechosas y se le
realizan las pruebas bioquímicas correspondientes confirmando la identificación con pruebas
serológicas.

Colección de muestras: La muestra de materia fecal para estudios de V. cholerae deben ser
recogidas inmediatamente se inicie la sintomatología y antes del comienzo de cualquier tipo de terapia
antibiótica. Se debe colectar la muestra en un recipiente estéril, cerrado o utilizarse escobillón rectal
(fase aguda).

OBJETIVOS

 Conocer las características de aislamiento, crecimiento e identificación de este género

bacteriano en el laboratorio de Microbiología.

 Interpretar los resultados obtenidos y realizar un informe escrito.

COMPETENCIAS

 Adquirir conocimientos microbiológicos básicos sobre el crecimiento y metabolismo del género

Vibrio.
 Identificar las características fundamentales de aislamiento, crecimiento e identificación del
género Vibrio spp. en el laboratorio de microbiología.
 Adquirir destrezas para el desarrollo de técnicas de aislamiento e identificación de Vibrios de
importancia clínica.

Si usted ha accedido a este formato a través de un medio diferente al sitio web del Sistema de Control Documental del
SIGEC asegúrese que ésta es la versión vigente
 CÓDIGO:
UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA FDOC-090
VERSIÓN: 01
EMISIÓN:
02/03/2020
GUÍA DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO PÁGINA
4 DE 8

MATERIALES

 Agar TCBS
 Agar MacConkey
 Agar gelatina
 Mechas para toma de muestras
 Desoxicolato de Sodio al 0.5%
 Colorantes para Gram
 Tirillas de oxidasa
 Asas bacteriológicas.
 Agua peptonada alcalina ph 8,6
 Escobillones estériles
 Papel kraf
 Descartadores
 Microscopios
 Aceite de inmersión
 Pruebas bioquímicas
 Reveladores
 Pipetas de Pasteur

Prueba de la cuerda para Vibrio (Desoxicolato de sodio al 0.5%)

Procedimiento

 Colocar 1 gota de solución de Desoxicolato de sodio al 0.5% sobre una lámina portaobjetos.
 Tomar una asada de la colonia y mezclarla con el Desoxicolato de sodio
 Homogenizar bien
 Observan la formación de una suspensión viscosa que forma una cuerda cuando es
levantada en el aire con el asa (Véase la siguiente figura).

Si usted ha accedido a este formato a través de un medio diferente al sitio web del Sistema de Control Documental del
SIGEC asegúrese que ésta es la versión vigente
 CÓDIGO:
UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA FDOC-090
VERSIÓN: 01
EMISIÓN:
02/03/2020
GUÍA DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO PÁGINA
5 DE 8

PROCEDIMIENTO

Tomar la muestra (previa inmersión de las mechas en las fuentes de aguas escogidas).

Realizar el pre-enriquecimiento selectivo en Agua Peptonada alcalina (APW) pH 8,6 x 6

– 8 horas a 37°C en atmósfera de aerobiosis.

Subcultivar en los medios de Agar TCBS y MacConkey

(Agotamiento quemando asa) Incubar a 37°C por 24 a 48 horas en aerobiosis

Revisar los medios y escoger las colonias sospechosas de Vibrio

en TCBS
(Colonias amarillas)

Resembrar en Agar nutritivo alcalino (aislamiento)

(37°C x 24-48 horas)

1. Gram: (Bacilos curvos

Gram negativos) Pruebas serológicas
2. Prueba de la oxidasa
3. Prueba de la cuerda

Identificación bioquímica

Figura 2. Algoritmo de identificación del género Vibrio

Si usted ha accedido a este formato a través de un medio diferente al sitio web del Sistema de Control Documental del
SIGEC asegúrese que ésta es la versión vigente
 CÓDIGO:
UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA FDOC-090
VERSIÓN: 01
EMISIÓN:
02/03/2020
GUÍA DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO PÁGINA
6 DE 8

Nota: se debe realizar otras pruebas bioquímicas y serológicas para confirmar Especie y Serogrupo.

PRE- LABORATORIO

1. ¿Cuáles son estas pruebas bioquímicas y serológicas para confirmar la especie y serogrupo?

2. ¿Cuáles son las entidades de Salud Pública encargadas del control de esta infección?

3. ¿Porque se realiza un pre-enriquecimiento selectivo en agua peptonada alcalina y qué otros

caldo de enriquecimiento se utilizan para el aislamiento de éste género?

4. ¿Cuál es el fundamento de la prueba de la cuerda y del agar TCBS?

5. Investigue otros medios de cultivo utilizados para el aislamiento del género Vibrio.

6. Investigue los fundamentos de la pruebas bioquímicas: Kligler, ADH (arginina dihidrolasa), Test
de Gelatinasa, Hidrólisis de Almidón, reducción de nitratos a nitritos y descarboxilación de la
Ornitina.

POST-LABORATORIO

1. Investigue y realice un esquema de identificación de las reacciones bioquímicas que se utilizan

en la identificación de Vibrio cholerae, V. parahaemolyticus y V. vulnificus.

2. Elabore un caso clínico donde esté implicado el microorganismo en estudio.

Si usted ha accedido a este formato a través de un medio diferente al sitio web del Sistema de Control Documental del
SIGEC asegúrese que ésta es la versión vigente
 CÓDIGO:
UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA FDOC-090
VERSIÓN: 01
EMISIÓN:
02/03/2020
GUÍA DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO PÁGINA
7 DE 8

MANEJO DE RESIDUOS Y SUSTANCIAS PELIGROSAS

Si usted ha accedido a este formato a través de un medio diferente al sitio web del Sistema de Control Documental del
SIGEC asegúrese que ésta es la versión vigente
 CÓDIGO:
UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA FDOC-090
VERSIÓN: 01
EMISIÓN:
02/03/2020
GUÍA DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO PÁGINA
8 DE 8

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS (disponibles en la biblioteca de la Universidad de

Córdoba)

 Murray Patrick. 6da Edición. Harcourt Brace. Microbiología Médica.

 T Stuart Walter. Mac Graw Hill. México. Editores S.A Microbiología
 El laboratorio en el diagnóstico clínico. Jhon Bernard Henry. Editorial Marban. 20° edición
 B.A Freeman. Microbiología Burrows. Interamericana Mac Graw Hill. México
 Diagnóstico Microbiológico. Bailey y Scott. Editorial Panamericana.

Si usted ha accedido a este formato a través de un medio diferente al sitio web del Sistema de Control Documental del
SIGEC asegúrese que ésta es la versión vigente