ST-14: Movilización de plásmidos: organización de

la región de movilización de pMV158, RSF1010 y F.

Origen de transferencia. Relaxosoma, relaxasa y
proteínas accesorias. Conjugación (pili conjugativo
y sistema de secreción tipo IV). Plásmidos
“helper”. Estrategias de movilización de plásmidos
co-residentes
 Movilización de plásmidos
• Cada bacteria puede albergar múltiples plásmidos: plásmidos
co-residentes y cada uno con diferente mecanismo de ser
movilizado a otra bacteria huésped
• Cada bacteria puede contener un solo plásmido movilizable o
conjugativo
• Dos funciones son esenciales para la supervivencia de los
plásmidos: replicación y movilización (transferencia
horizontal)
• La identificación de la diversidad de mecanismos de
movilización podría permitir:
• comprender importancia de diseminación de genes de
resistencia a antibióticos
• el desarrollo de nuevos plásmidos vectores más
eficientes
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 Región de movilización de plásmidos conjugativos
• MOB: También se les denomina genes Dtr (transferencia para la
replicación de ADN)
• mob esencial para el proceso conjugativo de ADN, codifica la
relaxasa conjugativa
• Genes mob accesorios de movilización cuyas proteínas
ayudan a la actividad de la relaxasa (raf)
• Genes tra para auto-transferencia
• MPF (genes para la formación del poro de conjugación)
• Genes que codifican proteínas del canal de transporte del
DNA-relaxasa
• Gen que codifica proteína de acoplamiento (T4CP con
actividad de ATPasa) recluta al complejo relaxasa-DNA y lo
pone en contacto con el T4SS

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 Constitución genética de plásmidos Conjugativos

• Codifican los cuatro components del sistema conjugativo:

1. Origen de transferencia (oriT)
2. Genes tra (transferencia incluye mob (relaxasa)
3. Gen para proteína de acoplamiento T4CP que recluta al
complejo DNA-relaxasa
4. Sistema de secreción tipo IV (T4SS): 12 a 30 proteínas para
formar MPF (pili de conjugación)

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 Constitución genética de plásmidos movilizables

• Codifican dos o tres components del sistema conjugativo:

• Origen de transferencia (oriT)
• Gen mob (relaxasa) y genes mob accesorios
• Presencia o ausencia de T4CP (proteína de acoplamiento)
• Necesitan de un plásmido conjugativo co-residente o un auxiliar o
“helper” de otra bacteria para movilizarse por conjugación)

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 Clasificación de Relaxasas
Ocho familias “MOB”
MOBF, MOBH, MOBQ, MOBC, MOBP, MOBV, MOBT,
MOBB
Familia MOB Relaxasa plásmido
H TraI F
Q MobA_MobL RSF1010
V Mob_Pre pMV158
F TrwC
C Replic_Relax

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 Origen de transferencia oriT
• Secuencia de ADN generalmente en cis al gen de la relaxasa
• Secuencias repetidas invertidas
• Secuencias repetidas directas
↓
• Contiene el sitio de corte (“nic”) en el core G C

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 Organización genética de plásmidos movilizables
oriT en región adyacente al gen que codifica la relaxasa (mobA)

• RSF1010

mobA
mobB
repB
mobC
oriT

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pAB6: Sólamente el gen que codifica la relaxasa mobA

oriT mob

pTF1: gen que codifica la relaxasa mobL y mobS (equivalente a

mobC)

oriT mobL
mobS

pAB (2297 bps)

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Plásmido movilizable pMV158

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 Plásmido movilizable pMV158
ssoU oriT ssoA
mob M

• mobM codifica la relaxasa

• Región 3564...3650 contiene el oriT
• Region del oriT contiene tres secuencias repetidas invertidas
que se sobreponen (IR1, IR2,IR3) y (2429
X15669.1:3113-5541 el sitiobps)
de corte (nic)
entre los IR2

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Plásmido movilizable RSF1010

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 Plásmido movilizable RSF1010
• mobA: codifica proteína MobA con actividades de relaxasa (N-
terminus) y primasa (C-terminus)
• relaxasa corta en forma reversible una de las bandas del ADN
y permanece unida covalentemente al extremo 5’ del ssDNA
• primasa requerida para el inicio de la replicación del ADN
• MobA unida al 5’ de ssDNA es un intermediario esencial en la
transferencia conjugacional de 5’ →3’ a la célula recipiente
• Los genes accesorios mobB y mobC codifican proteínas que
facilitan el corte y transferencia del DNA
• MobC: promueve la separación de las bandas de ADN en la
cercanía del sitio de corte del oriT
• MobB: aumenta la estabilidad del corte en el sitio “nic” y del
relaxosoma

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 mobA
mobB
repB
mobC
oriT

• oriT de RSF1010: 38 bp
• Dos secuencias imperfectas, repetidas e invertidas (IR)
de 10 bp
• Una región adyacente conteniendo TAAA y una región
rica en GC que contiene el sitio de corte “nic”

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 Conjugación bacteriana
• Proceso de intercambio de material genético en una manera
unidireccional de una célula donadora a una recipiente a
través del contacto directo entre células.
• Relaxasas son el componente crucial para el inicio de la
transferencia del ssDNA
• Plásmidos conjugativos codifican un sistema de auto-
transferencia ( funciones de Mob y Tra)
• Generalmente son plásmidos grandes o megaplásmidos
• Los genes que codifican el sistema de transferencia son
aproximadamente de 30 y organizados en operones
• Constituyen el 39% de plásmidos de procariotas
• Plásmidos F, R

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 Organización genética de Tra operón de plásmido conjugativo F

• Codifica genes para transferencia

• TraL TraE TraK TraV TraC TraW TraU TraN
TraH: participan en el ensamblaje del pili conjugativo
• TraC: esencial para la formación del pili y por su
actividad de ATPasa procesa la transferencia del
sustrato ADN-relaxasa
• TraD: T4CP recluta al complejo ADN-relaxasa y lo
pone en contacto con el T4SS

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Activación de los genes tra
 Relaxasa del plásmido F
gene 92673..97943
/gene="traI"
CDS 92673..97943
/gene="traI"
/function="oriT nicking and unwinding"

• Las relaxasas son proteínas multifuncionales

• Transesterasa ( relaxasa) ejecuta la reacción fosfodiesterasa
• Helicasa

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Relaxosoma
 Relaxosoma del plásmido F

• Tra M: liga DNA

• TraY dobla el DNA en 50–55°
• IHF de la bacteria huésped dobla el DNA en 160°
• Tra I: (relaxasa) corta el oriT en una de las bandas generando “nic”
(helicasa) alta procesividad desdobla DNA ~1100 bp/s

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• La relaxasa corta una de las cadenas de ADN en el orígen de transferencia
(oriT) y permanece unida al 5’ del ADN y transportado hacia la célula
recipiente
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 Conjugación biparental (transconjugación)

• Bacteria donadora del plásmido movilizable también alberga al

plásmido conjugativo co-residente (genes para la conjugación):
“helper”
• Bacteria recipiente (no contiene plásmido)
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• Relaxasas de plásmidos conjugativo y movilizable cortan su oriT.
• Relaxasa de plásmido conjugativo interactúa con su proteína de
acoplamientoT4CP y luego con los otros componentes del T4SS
• Relaxasa de plásmido movilizable interactúa con T4CP y los otros
componentes del T4SS del plásmido conjugativo

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 Plásmido auxiliar o “helper”
• Participa en conjugación de plásmidos movilizables
• Son plásmidos conjugativos que proporcionan la
función de transferencia en trans
• Transferencia conjugativa de pMV158 de
Streptococcus agalactiae a E. coli, requiere del
producto del gen trwG del plásmido conjugativo R388
ó del gen traF del plásmido conjugativo RP4
• Transferencia conjugativa de RSF1010 de E. coli /
Pseudomonas hacia otras especies requiere del
producto del gen traF del plásmido conjugativo RP4

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 Movilización de RSF1010 por plásmido conjugativo RP4(helper)

• Movilización directa del plásmido movilizable RSF1010 desde el donador al

recipiente por medio del plásmido conjugativo co-residente RP4
• El plásmido conjugativo puede o no ser transferido en este proceso de
movilización

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 Conjugación triparental (transconjugación)

• Bacteria con el plásmido conjugativo “helper”

• Bacteria donadora del plásmido movilizable
• Bacteria recipiente (no contiene plásmido)
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 Plásmidos co-residentes
• Mas de un plásmido por célula genera mayor costo de
energía y conduce a un incremento en el tiempo de
generación
• Plásmidos co-residentes pueden transmitirse horizontalmente
por tres mecanismos de transferencia:
• Conducción: plásmido movilizable o plásmido no
movilizable es transferido por un conjugativo y se necesita
contacto de bacterias
• Movilización: contacto celular establecido por el plásmido
conjugativo permite transferencia de plásmido movilizable
• Facilitación: tasa de conjugación de plásmido conjugativo
incrementa cuando otro plásmido co-residente también es
conjugativo
Estrategias de movilización de plásmidos co-residentes
 Estrategias de movilización de plásmidos co-residentes

• (ia) Codifica su propia relaxasa (mob), oriT y genes para factores

auxiliares al relaxosoma (raf). Relaxosoma es reclutado por
proteína de acoplamiento T4CP del plásmido conjugativo co-
residente. Relaxasa unida el DNA-plasmídico utiliza el T4SS
codificado por el plásmido conjugativo co-residente
• (ib) oriT reconocido por relaxasa de otro plásmido co-residente
(ia). Relaxosoma es reclutado por proteína de acoplamiento
T4CP del plásmido conjugativo co-residente. Relaxasa unida el
DNA-plasmídico utiliza el T4SS del plásmido conjugativo co-
residente
• (ic) genes codificadores de su propia relaxasa (mob) y proteína
de acoplamiento (T4CP). oriT para su propia relaxasa. Relaxasa
unida el DNA-plasmídico utiliza el T4SS del plásmido conjugativo
co-residente

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 Estrategias de movilización de plásmidos co-residentes
• (iia) secuencia del oriT similar a la del oriT del plásmido
conjugativo. Utiliza la relaxasa y factores asociados a la
relaxasa (raf) del plásmido conjugativo
• (iib) propio gen raf y secuencia del oriT similar a la del
oriT del plásmido conjugativo. El relaxosoma
comprende a la relaxasa del plásmido conjugativo y raf
del plásmido co-residente
• (iii) gen rep codifica relaxasa replicativa (reconoce el
orígen de la replicación oriV) que es capaz de reclutar
el DNA-plasmídico hacia la proteína de acoplamiento
T4CP del plásmido conjugativo. Rep unida al DNA-
plasmídico utiliza el T4SS codificado por el plásmido
conjugativo co-residente

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Plásmidos co-residentes de Citrobacter rodentium ICC168

Type Name RefSeq Size (Mb) Gene

Chr - NC_013716.1 5.35 5,222

Plsm pCROD1 NC_013717.1 0.05 62

Plsm pCROD2 NC_013718.1 0.04 63

Plsm pCROD3 NC_013719.1 0 4

 pCROD2 pCROD1
Plásmido conjugativo Movilizable por “helper” pCROD2

moviliza a pCROD1 Secuencias repetidas de oriV simulan

oriT de pCROD2 para corte de relaxasa
 pCROD2 pCROD3
Plásmido conjugativo Codifica su relaxasa que corta el oriT

moviliza a pCROD3 y utiliza el SST4 del conjugativo:

Movilizable por “helper” pCROD2
 pCROD1 pCROD2 pCROD3
Movilizable Conjugativo moviliza a Movilizable
pCROD1 y pCROD3