TRANSCRIPCIÓN DE ADN (RNA TRANSCRIPTION)

1. Definición.
El primer paso de la expresión génica es la transcripción, proceso por el cual se sintetiza una
molécula de ARN complementaria a una de las cadenas del ADN por medio de unas enzimas
especializadas, denominadas RNA polimerasas (RNA Pol). Los principales productos de la
transcripción son: ARN mensajero (ARNm) que codifica la secuencia de los aminoácidos en las
proteínas, ARN ribosómico (ARNr) que constituye la mayor parte del ribosoma y ARN transferente
(ARNt) que activa a los aminoácidos y los transporta al ribosoma para la síntesis de proteínas. Las
moléculas de ARNm son degradadas tras su traducción por la maquinaria de la síntesis de
proteínas mientras que las de ARNr y ARNt son extremadamente estables.
Como excepción, muchos virus con ARN como material genético (por ej. Retrovirus) utilizan su
propio ARN como molde para la síntesis de un ADN complementario (ADNc), mediante una ADN
polimerasa dependiente ARN (transcriptasa inversa).

2. Características generales
La síntesis de RNA tiene las siguientes características
a. Es monocatenaria. A diferencia de la replicación, sólo se transcribe una de las cadenas de
DNA, la complementaria no suele contener información. Hay genes contenidos en una de las
hebras, y genes que se sitúan en la otra
b. Es selectiva. Sólo se sintetiza RNA a partir de ciertas regiones del DNA. Hay zonas del DNA
que no contienen información para ser transcrita, otras que se transcriben sólo en las células
de un determinado tejido (por ej. El gen de la hemoglobina que se transcribe en los
reticulocitos), y otras cuya transcripción depende del estado fisiológico de la célula
c. Es reiterativa. Es decir, una misma región de DNA puede estar siendo transcrita
simultáneamente por varias RNA polimerasas, con lo que se obtienen muchas copias
d. Es secuencial. El agregado de desoxirribonucleótidos es de a uno -por vez- en el extremo 3’
OH de la cadena en crecimiento
e. No requiere de cebadores.

3. Requerimientos generales
La síntesis de RNA requiere la intervención de enzimas y proteínas diversas.
a. RNA Polimerasa dependiente de DNA (procariota):
En bacterias una única RNA polimerasa (RNA Pol)
lleva a cabo la transcripción. El holoenzima RNA Pol
está formado por dos componentes: el núcleo
enzimático y la subunidad σ correspondiente. El
núcleo enzimático, formado por las subunidades
α2ββω contiene toda la maquinaria catalítica
necesaria para la síntesis del ARN. No obstante, sólo
el holoenzima puede iniciar la transcripción en un
promotor determinado. La subunidad σ tiene tres
funciones principales: asegurar el reconocimiento de
una secuencia promotora específica, posicionar el holoenzima en un promotor diana, y facilitar
la apertura de la doble hélice de ADN cerca del inicio de transcripción.
 En eucariotas existen varias RNA Pol especializadas en la síntesis de diferentes tipos de RNA.
La RNA Pol I se encarga principalmente de la transcripción de los RNA ribosomales 18S, 28S y
5.8S; la RNA Pol II transcribe los RNA mensajeros y algunos RNA de pequeño tamaño como
snRNAs (small nuclear RNAs) y snoRNAs (small nucleolar RNAs); y la RNAPol III es la responsable
de la síntesis del RNA ribosomal 5S, de los RNA de transferencia y de otros RNA pequeños.
b. Topoisomerasa I y II. Durante la transcripción, la doble hélice se desenrolla, generando un
estrés topológico en forma de superenrollamiento de ADN que es inherente al avance de la
ARN polimerasa II (Pol II). Este proceso debe resolverse mediante ADN topoisomerasas, que se
consideran facilitadores positivos de la transcripción
c. Sustratos. Se utiliza como sustratos el conjunto de los cuatro ribonucleótidos trifosfato (rNTPs):
ATP, CTP, GTP y UTP). De cada uno de ellos queda incorporado en el ARN nuevo la parte rNMP
(ribonucleótido mono fosfato) de la molécula. A estos efectos, los rNMPs y rNDPs son inactivos.
d. Cofactores. Para una actividad óptima se requiere un ión metálico divalente como cofactor,
asociado a los rNTPs. Es Mg2+ o Mn2+
e. Molde o plantilla. El orden correcto de incorporación de los rNMP viene determinado por su
complementaridad de bases con la secuencia de la cadena molde ADN (cadena 3’ →5’).
f. Factores proteicos. En procariotas: Factores proteicos sigma (σ), rho (ρ), omega (ω)
En eucariotas. Factores de Transcripción basales y específicos.
g. Poli A polimerasa y espleciosoma (en eucariotas)

4. Etapas de la transcripción en procariotas

La transcripción se divide en tres fases: la fase de iniciación, elongación y terminación.
a. Inicio de la transcripción.
En E. coli, la ARN polimerasa se une al ADN dentro de una región de 100 pb que se extiende
desde cerca de 70 bp antes de sitio de inicio de la transcripción a cerca de 30 bp más allá de
ese sitio. Por convención, los pares de bases de ADNA correspondientes al inicio de una
molécula de ARN son designados con números positivos (downstream, + 1 es el sitio de inicio
de la transcripción), y aquella que precede el sitio de inicio se designa con números negativos
(upstream). La secuencia consenso centrada en la región - 10 es 5' -TATAAT-3'; la secuencia
consenso en la región -35 es 5' -TTGACA-3'.

La holoenzima se une al promotor para formar lo que inicialmente es el complejo cerrado, con
el ADN manteniendo su estructura doble hélice. El complejo cerrado puede espontáneamente
convertirse a un complejo abierto competente. El cambio conformacional energéticamente
favorable en la RNA polimerasa (RNA pol) acompaña la apertura del ADN doble hélice,
exponiendo las cadenas molde y codificante en la región -11 a +3. En el complejo abierto, varios
canales proporcionan acceso al centro de la enzima. Un primer canal permite que los
ribonucleótidos ingresen al sitio catalítico de la enzima, un segundo canal permite que el ARN
en crecimiento salga de la RNA pol durante la fase de elongación y un tercer canal permite
espacio para que entre el ADN al centro catalítico en forma de doble hélice entre las dos pinzas
del complejo en forma de garra. Las dos cadenas se separan y son mantenidas apartadas por
una protrusión en la estructura de la RNA polimerasa, que ayuda a mantener la burbuja de
transcripción abierta dentro de la enzima.
La RNA pol puede iniciar la transcripción con un único nucleótido, ellas no dependen de una
cadena prexistente para extender un nuevo RNA. La RNA pol debe por lo tanto unir y sujetar
dos nucleótidos en el sitio de la cadena de DNA molde, y con la orientación correcta catalizar la
formación del enlace fosfodiéster entre ellos. Una vez que esto ocurre, para los primeros 8 a 10
enlaces fosfodiéster formados hay una alta probabilidad que la RNA pol pueda liberar el
transcrito de la cadena molde sin extenderlo más allá. Si esto sucede, la holoenzima polimerasa
empieza la síntesis de ARN otra vez sobre la misma cadena molde. Este proceso es llamado
iniciación abortiva. La iniciación abortiva parece ocurrir debido a que el canal de salida del ARN
es bloqueado o bien por parte de la polimerasa misma, o por parte del factor sigma. Para un
transcrito que se extiende más allá de 10 nucleótidos, una transición estructural debe tener
lugar para desbloquear el canal de salida del RNA, un proceso que ocurre sólo durante el estadio
inicial de la transcripción. En bacterias, este proceso puede debilitar la afinidad del factor sigma
dentro del complejo RNA pol, explicando porque la subunidad σ a veces se desprende del
complejo durante la elongación del transcrito.
b. Elongación.
Una vez que la RNA pol entra a
la fase de elongación, la enzima
no libera la cadena de ADN
molde hasta que encuentra una
secuencia de terminación. En
este modo la polimerasa se dice
que es procesiva, moviéndose
suavemente a lo largo de la
cadena molde, sintetizando la
cadena de ARN complementaria
y disociándose sólo cuando el
transcrito es completo. La RNA
pol bacteriana puede sintetizar
ARN a una tasa de 50 a 90
nucleótidos por segundo. Antes
que transcribir a un constante
ritmo, la enzima hace pausas a
veces a través del proceso.
Durante la elongación del
transcrito, el ADN se mueve a
través del sitio activo de la RNA
pol. La cadena de ADN doble hélice se separa justo antes del sitio de catálisis, se mantienen
separadas por una protrusión estructural dentro de la polimerasa, luego reforman la doble
hélice cuando salen del interior de la polimerasa. Durante la transcripción, la RNA pol de E. coli
generalmente desenrolla el ADN cerca de 17 bp y cerca de 8 a 9 nucleótidos del ARN transcrito
permanecen apareados con el ADN molde, mientras que el resto del transcrito no está
apareado y es dirigido fuera a través del canal de salida del ARN. La RNA pol carece de actividad
proofreading 3’→ 5’ exonucleasa. La RNA pol intenta garantizar la precisión de la transcripción
por pirofosfórolisis, en el cual la reacción catalítica corre en reversa cuando la polimerasa se
detiene a lo largo del ADN. Las RNA pol son generalmente menos precisas que las DNA pol.
Mientras que en las DNA pol existe un error por 106 nucleótidos incorporados, la RNA pol
comete un error por 104 a 105 nucleótidos agregados.
c. Terminación
La transcripción se detiene cuando la RNA pol transcribe a través de ciertas secuencias en la
cadena molde. En este punto, la RNA pol libera el transcrito finalizado y se disocia de la cadena
de ADN molde. El ADN de E. coli tiene dos clases de secuencias de terminación: una que
depende de una estructura que se forma en el RNA transcrito y otra que requiere un factor
proteico accesorio llamada rho (ρ).
Muchas terminaciones independientes de rho (ρ) tiene dos caracteres distintivos. El primero es
una región (secuencia palindrómica) que produce una ARN transcrito con secuencias autocom-
plementarias que permiten la formación de una estructura en bucle (hairpin) de 15 a 20
nucleótidos. El segundo carácter es un segmento altamente conservado de tres residuos de A
en la cadena molde que son transcritos en residuos U cerca del extremo 3' del bucle. Cuando
una RNA pol llega a tales secuencias de terminación, se desprende. La formación del bucle en
el nuevo ARN transcrito afecta varios pares de bases A=U en los segmentos híbridos ARN-ADN
y puede alterar importantes interacciones entre RNA y RNA polimerasa, llevando a la
disociación del transcrito.
Los terminadores dependientes de rho (ρ) carecen de la secuencia repetida de residuos A en la
cadena molde pero típicamente incluye una secuencia rica en CA llamada sitio rut (rho
utilization). El factor ρ, es una helicasa hexamérica, que hidroliza ATP para unirse al RNAm y
correr a través de él durante la transcripción hasta que encuentre el sitio rut. Este contribuye
a liberar el transcrito primario tanto de la cadena molde de ADN como la polimerasa.
5. Etapas de la transcripción en procariotas
En general, el proceso de transcripción llevado a cabo por la RNA Pol II ocurre a través de las
siguientes etapas: pre-iniciación, iniciación, elongación y terminación
a. Pre-iniciación e iniciación
Debido a que las RNA pol no son capaces de
reconocer por sí solas el inicio de la transcripción,
son necesarias otras proteínas para reclutarlas a los
promotores, que conjuntamente dan lugar al
llamado complejo de pre-iniciación (PIC, pre
initiation complex) y que permite iniciar la
transcripción. En el caso de la RNA Pol II incluye los
factores basales o generales de la transcripción
(GTF, general transcription factor: TFIIA, TFIIB,
TFIID, TFIIE, TFIIF, TFIIH). La formación del PIC suele
comenzar por la unión del factor TFIID a la caja
TATA, seguido por la entrada de otros GTFs y de la
RNA Pol II. Además, existen numerosos factores
reguladores (activadores, represores y
coactivadores) con un papel importante durante la
pre-iniciación. Los componentes del PIC se
encargan de reconocer las secuencias promotoras,
de reclutar y posicionar a la RNA Pol II, de la
formación y estabilización de la burbuja de
transcripción, y de la selección del sitio de inicio de
la transcripción.
El PIC posicionado en el promotor es inactivo, y se
denomina complejo de transcripción cerrado. La
transición al estado abierto se produce mediante un cambio conformacional en el cual el ADN
doble hélice del promotor accede al centro activo de la polimerasa. En este proceso interviene,
entre otros, el factor TFIIH, que es una helicasa con actividad ATPasa, que provoca la separación
de las dos cadenas del ADN permitiendo que la cadena molde contacte con el centro activo y
se inicie la síntesis de ARN.
El escape del promotor va a suponer que la RNA Pol II deje de contactar con la secuencia
promotora, se desensamble de algunos de los componentes del PIC y establezca una unión más
fuerte y estable con el ARN naciente. Cuando el transcrito ha alcanzado una longitud adecuada,
establece contactos fuera del canal de salida del ARN, que van a provocar la separación del
híbrido ARN-ADN molde y un cambio conformacional en la RNA Pol II, que pasará a contener
ARN-ADN estable en su centro activo. La liberación del factor TFIIB permite que las cadenas de
ADN se vuelvan a unir corriente arriba, favoreciendo la salida de la RNA Pol II del promotor,
facilitando así la elongación.
b. Elongación
La elongación consiste en la extensión de la cadena del transcrito naciente por la RNA Pol II,
que atraviesa las regiones codificantes del DNA molde, asociada a los factores de elongación.
Entre los factores de elongación destaca el TFIIS, entre otras.
 c. Terminación
Una vez que a RNA Pol II ha alcanzado las regiones 3’ de los genes, reconociendo las señales de
poliadenilación y terminación, cesará la síntesis del ARN, y por lo tanto se disociará del ADN
molde y del ARN naciente. Se han descrito dos vías para la terminación y procesamiento del
extremo 3’ de los ARNs transcritos por la RNA Pol II. El primero, conocido como modelo
alostérico o antiterminador, propone que la transcripción a través del sitio poli-A desencadena
un cambio conformacional en el complejo de elongación RNA Pol II causado por la disociación
de los factores de elongación y/o asociación de factores de terminación. Esto es análogo a
modelo de bucle de terminación en bacterias. De acuerdo al modelo alostérico, este cambio
conformacional en Pol II causa que se desprenda del DNA molde.
El segundo modelo, modelo torpedo, sugiere
que después de que la síntesis de ARNm se
completa, la RNA Pol II permanece asociada con
el ADN molde y continua la reacción de
transcripción para extender el extremo 3' del
ARNm. Un complejo proteico corta el ARNm en
el sitio de poliadenilación, produciendo un
nuevo extremo 3' que puede ser reconocido y
extendido por la enzima poly(A) polimerasa. El
nuevo extremo 5' de corriente abajo, o residual
cadena de ARNm es un sustrato para una enzima
exonucleasa 5'→3' (exoribonucleasa) que se une
al CTD de RNA Pol II. La enzima procede a
degradar el ARNm residual no cubierto en la
dirección 5' → 3' hasta que alcanza a la RNA Pol
II. Similar al factor rho p en terminación
dependiente de rho en bacterias la exonucleasa
desencadena disociación de RNA Pol II o bien
empujando la polimerasa del ADN molde o sacando el molde fuera de la RNA Pol II.
Modificaciones postranscripcionales
a. CAP en extremo 5’
Los ARN son vulnerables a degradación en ambos extremos por exoribonucleasas. La primera
modificación en un pre-RNAm transcrito es la adición de un cap en el extremo 5', el cual
previene la degradación de ese extremo. El cap 5' es un residuo de 7-metilguanosina (7-metG)
unido a residuo terminal 5' del ARNm a través de un inusual enlace 5' ,5' -trifosfato. El cap se
agrega muy temprano en la transcripción, después que los primeros 20 a 30 nucleótidos del
transcrito han sido agregados. El 5′ cap tiene varias funciones, incluyen: 1) proteger el ARNm
de la degradación, evitando el reconocimiento del extremo 5’ por exoribonucleasas, las cuales
digieren ARN secuencialmente un extremo 5' libre, 2) facilitando el transporte de ARNm a
través del poro nuclear, 3) facilitando subsecuente splicing del intron, y 4) potenciando
eficiencia de la traducción, orientando el ribosoma en el ARNm.
b. Poliadenilación en extremo 3‘
El ARNm contiene una señal de poliadenilación insertada en la secuencia transcrita por la RNA
pol. Una enzima asociada con el dominio C-terminal (CTD, C-terminal domain) de la RNA Pol II
 corta el transcrito después de la señal de poliadenilación, y el ARNm es poliadenilado por otros
factores asociados a CTD. El resto del transcrito se disocia de la polimerasa y es degradado.
La cola de poli(A) 3’, típicamente tiene 80 a 250 A residuos, y se añade en múltiples pasos
catalíticos que involucran factores de poliadenilación, poliadenilato polimerasa (PAP) y
proteínas de unión a poli-A (PABP, Poly(A)-binding protein).
La cola de poli A 3′ tiene varias funciones, incluyen: 1) proteger el ARNm de la degradación,
evitando el reconocimiento del extremo 3’ por exoribonucleasas, las cuales digieren ARN con
un extremo 3' libre, 2) facilitando el transporte del ARNm maduro a través del poro nuclear y
3) potenciando la traducción, permitiendo el reconocimiento ribosomal del ARNm.
c. Pre-ARNm Splicing
Los transcritos de células eucariotas son procesados en una serie de reacciones referidas como
ARN splicing o “ayuste”, el splicing de pre-ARNm para producir el ARNm maduro. El splicing
involucra una cascada de reacciones mediante las cuales se unen los dos extremos del exón,
liberando el intrón para su posterior degradación. Estas reacciones son catalizadas por
ribonucleoproteínas (RNPs, ribonucleoproteins).

INHIBIDORES DE LA TRANSCRIPCION

- Actinomicina D, un antibiótico que inhibe la transcripción porque se une estrecha y

específicamente al DNA de doble hélice evitando de este modo que éste actúe como molde
efectivo para la síntesis de RNA.
- Rifamicina y Rifampicina, inhiben específicamente la iniciación de la síntesis de RNA, pues
bloquean la formación del primer enlace fosfodiéster en la cadena de RNA.
- α-Amanitina. (hongo Amanita phalloides). Inhibe predominantemente la RNA pol II. Forma con
ella un complejo que impide la elongación.
 CÓDIGO GENÉTICO

Se llama código genético al conjunto de correlaciones entre cada triplete de bases del RNAm (codón)
y el correspondiente aminoácido de la proteína.
Características del código genético:
a. Los codones se leen en grupos sucesivos de tres nucleótidos.
b. Es casi universal. En todos los organismos estudiados (eucariotas, procariotas y virus) se observa
la misma correspondencia entre tripletes y aminoácidos. Existe variaciones en el código genético
para la síntesis de proteínas en mitocondrias
c. Es degenerado. Como hay 61 tripletes que codifican los 20 aminoácidos, muchos aminoácidos
tienen más de un codón. Los diferentes codones para un aminoácido dado se denominan codones
sinónimos
d. Es unidireccional.
e. No es ambiguo. cada triplete codifica un solo aminoácido
f. No se superpone.
g. El marco de lectura se fija entre un codón de iniciación que, generalmente, es AUG que especifica
metionina y un codon de término (UAA, UAG y UGA).
h. Los tripletes se encuentran yuxtapuestos en el ARNm.
 TRADUCCIÓN O SÍNTESIS DE PROTEÍNAS

1. Definición.
La traducción es el proceso por el cual una molécula de ARNm da lugar a una secuencia de
aminoácidos (proteína) de acuerdo con la información genética y se emplea como molde una
molécula de ARNm. Se llama traducción porque interpreta la información contenida en el gen
utilizando un código genético a través del cual desarrolla una lectura de la secuencia de
nucleótidos contenidos en el ARNm. Esta conversión de información se conoce como
decodificación, y se considera extremadamente exacta (con un error de aproximadamente 5 × 10–
4
por residuo de aminoácido) y rápida (incorpora aproximadamente 15 aminoácidos por segundo).
En la traducción los nucleótidos (A, U, C, G) se leen de tres en tres sin solaparse. De este modo,
tres nucleótidos (codón) dan lugar a un aminoácido.
2. Características
La traducción tiene las siguientes características:
a. Es Unidireccional. En la biosíntesis de proteínas el ARNm se traduce unidireccionalmente, del
extremo 5’ al 3’.
b. Es Reiterativa. Un mismo ARNm, puede estar siendo traducido simultáneamente por varios
ribosomas. Cada ribosoma sintetiza un ejemplar de la proteína.
c. Es Selectiva. No todo el ARNm se traduce; se descartan los extremos inicial y final (UTR
untranslated región), y, en los RNAm poligénicos, también fragmentos intermedios
d. Es secuencial. El agregado de aminoácidos es de a uno -por vez- en el extremo -COOH de la
cadena en crecimiento.
e. Requiere un intérprete o adaptador: Por
la naturaleza misma del proceso, la
traducción requiere de una molécula
que actúe de intérprete o adaptador,
esta molécula es el ARN de
transferencia,
f. Es de alto costo energético. Consume
aproximadamente el 80%, en forma de
ATP y 20% de GTP que la célula produce.
g. El ARNm procariota es policistrónico (un
gen codifica varias proteínas) y el
eucariota es policistrónico (un gen
codifica una sola proteína)

3. Requerimientos.

Proceso Procariotas Eucariotas Función

Unidades estructurales de las
20 aminoácidos 20 aminoácidos
proteínas
Unión del Llevan los aminoácidos a los
32 ARNt 32 ARNt
aminoácido al ribosomas
ARNt 20 Aminoacil-ARNt 20 Aminoacil-ARNt
Une los aminoácidos a los ARNt
sintetasa sintetasa
ATP y Mg2+ ATP y Mg2+
 ARNm ARNm Porta instrucciones de codificación
Proporciona el primer aminoácido
fMet-ARNt fmet Met-ARNt met
al péptido
Subunidad 30S Subunidad 40S Se une al ARNm
Estabiliza los ARNt y los
Subunidad 50S Subunidad 60S
aminoácidos
Iniciación elF1, e1F1A, e1F2, e1F3, Evita unión del primer ARNt-aa al
IF-1
e1F4B, e1F4F, elF5, eF5B sitio A
Se une a GTP; entrega fMet-RNAt
IF-2 fmet
al codón de iniciación
Se une a subunidad 30S; mantiene
IF-3
subunidades separadas
GTP y Mg2+ GTP y Mg2+
Ribosoma funcional con sitios A, P y
Complejo de inicio
Complejo de inicio 70S E y actividad peptidil transferasa.
70S (peptidil
(peptidil transferasas) Crea enlace peptídico entre
transferasas)
aminoácidos de sitio A y P
Lleva los aminoácidos al ribosoma y
Aminoacil-ARNt
Aminoacil-ARNt cargados ayuda a ensamblarlos en el orden
cargados
Elongación especificado por el ARNm
Se une a GTP; lleva al aminoacil-
EF-Tu eEF1α
RNAt al sitio A del ribosoma
EF-Ts eEF1β Genera EF-Tu activo
Estimula la traslocación, es
EF-G eEF2
dependiente de GTP
GTP y Mg2+ GTP y Mg2+
Codon stop ARNm Codon stop ARNm (UAA, Determinan culminación de síntesis
(UAA, UAG, UGA) UAG, UGA) proteica
Cataliza la liberación de la cadena
polipeptídica del ARNt; es
RF1 eRF
Terminación y específico de los codones de
liberación terminación UAA y UAG
Actúa como el RF-1; específico de
RF2
codones UAA y UGA
RF3 Estimula a RF-1 y a RF-2
RRF - IF3

4. Etapas de la traducción en procariotas

La traducción se divide en cuatro fases: fase de activación de aminoácidos, iniciación, elongación
y terminación.
a. Activación de Aminoácidos
La activación de los aminoácidos para formar los complejos de transferencia es el paso previo
necesario para que pueda comenzar la traducción. Esta activación viene mediada por las
enzimas aminoacil-ARNt sintetasas que se encargan de catalizar la esterificación de un
aminoácido específico o su precursor, con uno de los ARNt correspondientes para formar el
complejo aminoacil-ARNt (ARNt-aa). El mecanismo de la reacción enzimática se da en dos
etapas. En la primera de ellas se forma el intermediario AMP-aa mediante un aporte energético.
Se une una molécula de adenosina trifosfato (ATP) al correspondiente aminoácido liberando
una molécula de pirofosfato (PPi). En la segunda etapa, también conocido como paso de carga
de RNAt, el grupo aminoacilo es transferido del AMP-aminoacilo unido a la enzima a su ARNt
específico. Se transfiere el aminoácido a uno de los dos hidroxilos (2´-OH o 3´-OH) de adenosina
3 ' terminal del ARNt, dependiendo del tipo de aminoacil-ARNt sintetasa.
b. Iniciación
La traducción en todos los organismos empieza con la unión de la pequeña subunidad
ribosomal a un ARNm. En bacterias, El 5' -AUG iniciante es guiado a su correcta posición en el
ribosoma por la secuencia Shine-Dalgarno, también llamado sitio de unión del ribosoma (RBS,
ribosomal binding site). Esta secuencia consenso es una señal de iniciación de 4 a 9 residuos de
purina, situada a 8 a 13 nucleótidos en el lado 5' del codon de inicio. La secuencia de bases se
aparea son una secuencia complementaria rica en pirimidinas cerca al extremo 3' del ARNr 16S
de la subunidad ribosomal 30S. Esta interacción ARNm-ARNr posiciona la secuencia iniciante
5'-AUG del ARNm en la precisa localización de la subunidad 30S donde es requerido para la
iniciación de la traducción. El específico 5'-AUG donde el aminoacil-ARNt iniciador -un tipo
especial de ARNt-metionil- se une, se distingue de otros codones AUG que codifican metionina
por su proximidad a la secuencia Shine-Dalgarno.
El codon de iniciación 5'-AUG especifica un residuo N-terminal Met. Aunque metionina tiene
solo un codon, AUG, todos los organismos tienen dos ARNts para metionina. Uno es usado
exclusivamente cuando 5'-AUG es el codon de iniciación para síntesis proteica; el otro es usado
para codificar residuo Met en una posición interna en un polipéptido. Un factor de iniciación
específico une el ARNt iniciador y lo descarga al ribosoma, por lo tanto permite a las células
separar iniciación de la traducción de la elongación. En células procarióticas, los polipéptidos
sintetizados por ribosomas empiezan con formilmetionina (Met-RNAtfMet ).
Los ribosomas tienen tres sitios que unen ARNt-aminoacilo: los sitios A, P y E. La iniciación
requiere la subunidad menor 30S, un ARNm, y un iniciador Met-ARNtfMet, además tres factores
de iniciación: IF-1, IF-2, y IF-3. Cada uno juega un rol específico en el ensamblaje de la subunidad
ribosomal menor (con el ARNm y ARNt iniciador) y la subunidad ribosomal mayor en un proceso
controlado por hidrólisis de GTP. La formación del ribosoma 70S tiene lugar en tres etapas.
b.1. En etapa 1, la subunidad 30S se une a dos factores de iniciación, IF-1 y IF-3. IF-3 previene
la prematura unión de las subunidades 30S y 50S. IF-1 se une al sitio A y bloquea la unión
del ARNt durante la fase de iniciación. El ARNm luego se une a la subunidad 30S por un
apareamiento de bases de la secuencia Shine-Dalgarno con el ARNr 16S, esto posiciona el
ARNm adyacente al sitio P, lo que asegura la precisión de la selección del codon de inicio.
El 5'-AUG iniciante es ahora posicionado en el sitio P. Este es el único sitio al cual fMet-
ARNtfMet, puede unirse. Met-ARNtfMet, es el único ARNt-aminoacilo que puede unirse
primero al sitio P. Durante el siguiente paso de elongación, los otros ARNt-aminoacilo
entrantes se unen primero al sitio A y después se transfieren a los sitios P y E.
b.2. En paso 2, al complejo conformado por la subunidad ribosomal 30S, IF-1, IF-3, y ARNm se
unen al GTP-unido a IF-2 y el fMet-ARNtfMet iniciante. El anticodon de este ARNt ahora se
aparea con el ARNm del codon de inicio en el sitio P.
b.3. En paso 3, un cambio conformacional en la subunidad 30S desencadena la liberación de
IF-3, permitiendo asociación con la subunidad 50S; simultáneamente, el GTP unido a IF-2
es hidrolizado a GDP y Pi, los cuales son liberados del complejo. Todos los tres factores de
iniciación salen del ribosoma en este punto. Al completar los pasos se produce un
ribosoma funcional 70S, llamado el complejo de iniciación 70S, conteniendo el ARNm y el
fMet-tRNAt fMet iniciante.
c. Elongación
En bacterias, la elongación requiere el complejo de iniciación, aminoacil-ARNts, GTP, y varios
factores de elongación: EF-Tu, EF-Ts, y EF-G. Las células siguen tres pasos para agregar cada
residuo de aminoácido, y estos pasos se repiten tantas veces como residuos deban de ser
agregadas.
c.1. Unión del aminoacil ARNt al sitio A, el apropiado aminoacil-ARNt entrante se une al
ribosoma con la ayuda de EF-Tu. El aminoacil-ARNt se une primero a un complejo GTP-
unido a EF-Tu. Después, el GTP es hidrolizado y el complejo EF-Tu-GDP es liberado del
ribosoma 70S. El complejo EF-Tu-GTP es regenerado en un proceso que involucra EF-Ts y
GTP. Ambos el EF-Tu-GTP y EF-Tu-GDP existen por unos pocos milisegundos antes que
ellos se disocien. Una vez que EF-Tu-GTP es hidrolizado a EF-Tu-GDP, pierde afinidad de
unión para el ARNt-aminoacilo. Cuando EF-Tu-GDP libera el extremo aminoacilo del ARNt
dentro del ribosoma, este extremo está aún lejos del sitio activo de la formación del
enlace peptídico. Las correctas interacciones codon-anticodon en el ribosoma rotan el
ARNt hacia la posición para la reacción con con fMet, para la formación del primer enlace
peptídico (o la cadena polipeptídica creciente), en un proceso llamado acomodación. El
incorrecto aminoacil-ARNt normalmente se disocia del sitio A. El mecanismo proofreading
en el ribosoma establece que solo debe darse el apropiado apareamiento codon-
anticodon. La identidad del aminoácido unido al ARNt no se verifica en el ribosoma.
c.2. Formación del enlace peptídico. Un enlace peptídico es formado entre dos aminoácidos
unidos por sus ARNt en los sitios A y P del ribosoma. La formación del primer enlace
peptídico ocurre por la transferencia del grupo iniciante N-formil-metiionil desde su ARNt
en el sitio P al grupo amino del segundo aminoácido en su ARNt del sitio A. El grupo α -
amino del aminoácido en el sitio A actúa como un nucleofilo, desplazando el ARNt del sitio
P para formar el enlace peptídico. Esta reacción produce un dipeptidilo-ARNt en el sitio A
(p.ej. ARNt fmet-val), dejando un ARNtfMet no cargado (desacilado), en el sitio P. La enzima
que cataliza la formación del enlace peptídico, peptidiltransferasa, es intrínseca al ARNr
23S de la subunidad mayor. La reacción peptidiltransferasa implica la unión del grupo α -
 amino del aminoacil-ARNt del sitio A al carbono carbonilo del fMet (o cadena peptídica
en crecimiento) del ARNt del sitio P.
c.3. Translocación. Inmediatamente después de la formación del primer enlace peptídico, el
ribosoma se mueve un codon hacia el extremo 3' del ARNm, en un proceso llamado
translocación. Este movimiento mueve el anticodón del dipeptidil-ARNt, el cual está aún
unido al segundo codon del ARNm, desde el sitio A al sitio P, y mueve el ARNt desacilado
del sitio P al sitio E, desde el cual el ARNt es liberado hacia el citosol. El tercer codon del
ARNm ahora se ubica en el sitio A y el segundo codon en el sitio P. El movimiento del
ribosoma a lo largo del ARNm requiere la energía provista por la hidrólisis de otra
molécula de GTP por la GTPasa EF-G. EF-G es similar en estructura al complejo EF-Tu-
aminoacil-RNAt y puede unirse al sitio A de la subunidad mayor, desplazando el peptidil-
ARNt. Cuando el GTP es hidrolizado, la estructura del EF-G cambia tal que puede hacer
contacto con la subunidad menor y conlleva la translocación del ARNt del sitio A.
d. Terminación
La elongación continua hasta que el ribosoma agrega el último aminoácido codificado por el
ARNm. La terminación es señalada por la presencia de un codon stop en el ARNm. En bacterias,
una vez que un codon stop ocupa el sitio A del ribosoma, tres factores de terminación, o
factores de liberación RF-1, RF-2, y RF-3 contribuyen a 1) hidrólisis del enlace terminal
peptidilo-RNAt; 2) liberación del polipéptido y el último ARNt ahora no cargado, del sitio P; y
3) disociación del ribosoma 70S en sus subunidades 30S y 50S, listo para iniciar un nuevo ciclo.
Los RF-1 y RF-2 son factores proteicos referidos como factores de liberación clase I. RF-1
reconoce codones stop UAG y UAA, y RF-2 reconoce codones UGA and UAA. RF-3 actúa
diferente y es referido como factor de liberación clase II.
 Los RF-1 o RF-2 (dependiendo que codon esté presente) se unen al codon stop e inducen a la
peptidiltransferasa a transferir el polipéptido creciente a una molécula de agua antes que a
otro aminoácido. RF-1 and RF-2 tiene dominios que imitan la estructura de un ARNt. RF-3, una
GTPasa, cataliza la disociación de RF-1 y RF-2 del después de la liberación de la cadena
polipeptídica. El RF-3-GTP tiene una alta afinidad por el ribosoma, llevando a desplazamiento
del RF-1 o RF-2. Después de la liberación del polipéptido y los factores de terminación, el
ribosoma permanece unido al ARNm y contiene ARNts desacilados en los sitios P y E. En
bacterias, el factor de reciclamiento del ribosoma (RRF) se une al sitio A vacío y recluta EF-G
para estimular liberación de los ARNts no cargados en los sitios P y E, en un proceso que imita
a EF-G, cuando estimula la elongación de polipéptido. Además separa el ARNm y el ribosoma
en sus subunidades en preparación para nuevas rondas de traducción. Cuando RRF ocupa el
sitio A y transloca al sitio P, el ribosoma libera EF-G y RRF. El factor de iniciación IF-3 luego se
une a la subunidad ribosomal menor y separa el ribosoma, de esta manera desencadena
liberación de ARNm, preparando la subunidad menor para una nueva ronda de traducción.
5. Etapas de la traducción en eucariotas
a. Iniciación.
El proceso de iniciación en eucariotas requiere un conjunto diferente de factores de iniciación,
un ensamblaje del complejo de iniciación y un iniciador especial ARNtMet normal para
metionina. La subunidad 60S del ribosoma se estabiliza con el eIF-6. eIF-3, eIF-1 y eIF-1A se unen
a la subunidad menor. Junto con el aminoacilo-ARNt a eIF-2, van a formar el complejo 43S. Una
vez unidos los aminoacilo-ARNt llegan acompañados de un factor (eIF-2) que se reciclara
mediante el factor eIF-2B. Gracias a eIF-5B, el Met-ARNti se coloca correctamente. El ARNm es
reconocido por eIF-4F a través del cap. El complejo 43S se une al RNAm/eIF-4F y comienza a
rastrear el ARNm desde su extremo 5′ en busca del AUG iniciador.
 Una vez que lo encuentra, se forma el complejo de iniciación 48S. eIF-1 y eIF-1A estabilizan este
complejo, además de catalizar su disociación. El eIF-4G sirve de punto de anclaje de formación
de todos los factores que componen eIF-4F, además de interaccionar con eIF-3. eIF-4E reconoce
el cap. eIF-4A es una ATPasa dependiente de ARN con actividad de helicasa de ARN, cuya misión
es relajar los 15 primeros nucleótidos del ARNm, así como ayudar en la migración del ribosoma
para buscar el AUG iniciador. El eIF-5 activa la actividad GTPasa de eIF-2 para indicar que el
rastreo del AUG ha concluido y liberar todos los factores. Cuando la subunidad mayor se une,
se libera eIF-6 y se forma el complejo de iniciación 80S, con el Met-ARNti en el sitio P. El Met-
ARNti que ha entrado con eIF-2, no se usará luego en la elongación. El GTP unido a eIF-2 se
hidroliza por la intervención de eIF-5, y es la señal que indica que se ha encontrado el AUG
iniciador, provocando la liberación de todos los factores, incluidos los propios eIF-2 y eIF-5. El
factor eIF2 se reciclara mediante el factor eIF-2B con consumo de ATP.
b. Elongación.
Una vez formado el complejo de iniciación, se sintetiza una cadena polipeptídica por adiciones
sucesivas de aminoácidos, de acuerdo con la secuencia de codones del ARNm. Esta etapa de
elongación de la síntesis del polipéptido implica un ciclo repetitivo de tres pasos en el que la
unión de un aminoacil ARNt lleva un nuevo aminoácido a la posición de unión a la cadena
polipeptídica, la formación del enlace peptídico une el aminoácido a la cadena polipeptídica en
formación, y se produce un desplazamiento del ARNm de tres nucleótidos mediante el proceso
de traslocación para llevar al siguiente codón a la posición correcta para la traducción.
b.1. Unión del aminoacil ARNt. Al principio de la etapa de elongación, el codón de iniciación
AUG del ARNm está localizado en el sitio P del ribosoma y el segundo codón está localizado
en el sitio A. La elongación empieza cuando un aminoacil-ARNt cuyo codón es
complementario al segundo codón se une al sitio A del ribosoma. La unión de este nuevo
aminoacil-ARNt al codón del sitio A requiere dos factores de elongación proteicos, eEF-1α
y eEF-1βγ. eEF-1α es una proteína G análoga a EF-Tu, que reconoce cualquier ARNt menos
el iniciador. Como no tiene afinidad por el ribosoma, se desprende de él cuando el
aminoacilo-ARNt se fija al ribosoma con hidrólisis de GTP. El eEF-1 βγ es análogo a EF-Ts y
su función es reciclar y regenerar el eEF-1α. A partir de este momento, todos los nuevos
aminoácidos que se van incorporando se unen primero al sitio A (aminoacilo). Durante la
transferencia del aminoacil-ARNt al ribosoma, se hidroliza GTP.
b.2. Formación del enlace peptídico. Tras la incorporación del aminoacil ARNt adecuado en el
sitio A del ribosoma, el siguiente paso es la formación de un enlace peptídico entre el grupo
amino del aminoácido unido al sitio A y el grupo carboxilo del aminoácido inicial (o la
cadena polipeptídica en formación) que está unido al ARNt del sitio P (peptidilo). La
formación de este enlace peptídico hace que la cadena polipeptídica en formación sea
transferida del ARNt localizado en el sitio P al ARNt del sitio A. En los ribosomas eucariotas,
la actividad peptidil transferasa se ha localizado en el ARNr 28S de la subunidad mayor del
ribosoma.
b.3. Traslocación. Después de la formación del enlace peptídico, el sitio P contiene un ARNt
vacío, mientras que el sitio A contiene un peptidil-ARNt. El ARNm avanza entonces una
distancia de tres nucleótidos respecto a la subunidad menor, llevando el siguiente codón
a la posición adecuada para la traducción. Durante este proceso de traslocación, el peptidil
ARNt se desplaza del sitio P al sitio de salida E (exit), donde se libera del ribosoma. El
 proceso de traslocación requiere que un factor de elongación, denominado eEF-2 es otra
proteína G análoga a EF-G que interviene en la translocación del ribosoma.
c. Terminación
La terminación de la traducción eucarionte es mediada por el factor de liberación eRF1, el cual
se une al ribosoma en lugar del ARNt para reconocer cualquiera de los tres codones de paro
(UAA, UAG o UGA), induciendo la hidrólisis de la proteína recién sintetizada del último ARNt
Posteriormente, eRF3 unido a GTP promueve la liberación de eRF1.
Al finalizar la traducción tendremos una proteína cuyo primer aminoácido es la metionina, que
usualmente es removida de manera que el segundo aminoácido pasa a la primera posición,
teniendo su extremo amino libre; de esta manera, el último aminoácido tendrá el extremo
carboxilo libre.

MODIFICACIONES POSTRADUCCIONALES

Una vez que la proteína es sintetizada y plegada, es modificada químicamente. Estas modificaciones
pueden alterar la actividad, la vida media e incluso la localización celular de las proteínas, estas
implican la unión de un grupo químico a los grupos libres –NH2 o –COOH ya sea en los extremo de una
proteína o en los residuos internos.
Entre las modificaciones postraduccionales se encuentra la acetilación, que consiste en la adición de
un grupo acetilo (CH3CO) al grupo amino del residuo N-terminal, que es una de las modificaciones más
comunes, y afecta casi al 80% de todas las proteínas. Esta modificación desempeña un papel
importante en el control de la vida media de las proteínas en la célula, debido a que las proteínas no
acetiladas son degradadas rápidamente. Otro ejemplo, es la adición de grupos largos como los lípidos
en los residuos ubicados en los extremos terminal de algunas proteínas, esta fijación de colas
hidrófobas permite anclar a la proteína a la bicapa lipídica y es un mecanismo mediante cual la célula
restringe ciertas proteínas a las membranas. También el grupo acetilo y otros grupos químicos se
puede adicionar a residuos internos específicos de la proteína. La fosforilación de residuos de serina,
treonina, tirosina e histidina es muy importante, en la medicina principalmente en el estudio de la
fisiología, muchas proteínas regulan su actividad siendo fosforiladas o desfosforiladas, e incluso esta
modificación suele ser reversible. Otras cadenas laterales como la asparagina, serina y treonina son
sitios de glicosilación, donde se adicionan cadenas de hidratos de carbono y otras modificaciones
postraduccionales como metilación, ubiquitinación, hidroxilación, etc.

Modificación Proteína diana Consecuencia Clínicas

Acetilación Acetilación Afecta a la regulación de las interacciones entre el ADN y las
proteínas. Las proteínas histonas a menudo son acetiladas
Formación de Anticuerpos Los anticuerpos son moléculas inmunitarias complejas cuya
enlaces disulfuro función requiere la presencia de números enlaces disulfuro
intramoleculares, así como entre moléculas.
Fosforilación Receptores de factores La fosforilación de proteínas normalmente favorece el
de crecimiento crecimiento.
Glucosilación Proteínas de los La adición de azúcares distintos a las proteínas de los
eritrocitos eritrocitos determina el tipo de sangre del individuo
Hidroxilación Colágeno Proteína de matriz extracelular. Se hidroxila la prolina y lisina
en hidroxiprolina e hidroxilisina
Ubiquitinación Proteínas destinadas a La ubiquitinación y degradación inadecuada de diversas
la degradación proteínas puede ser causa de alteraciones en el plegamiento.
 INHIBIDORES DE LA SÍNTESIS DE PROTEÍNAS

Existe un sinnúmero de moléculas que actúan deteniendo, complicando o evitando la síntesis de una
nueva proteína. Entre las moléculas inhibidoras de la síntesis de proteínas se encuentran los
antibióticos. Mas de la mitad de los antibióticos actúan inhibiendo uno de organelos responsables de
la síntesis de proteínas, el complejo ribosomal.
Su mecanismo se ve favorecido por la capacidad de diferenciar entre los procesos de traducción
presentes en procariotas y eucariotas, y así inhibe de forma selectiva la síntesis de proteínas en las
bacterias sin afectar al huésped.
Los antibióticos pueden agruparse según la fase concreta de la elongación sobre la que actúan en:
a. Inhibición del reconocimiento de un aminoacil-ARNt en el sitio A del ribosoma.
b. Inducción de la presencia de errores en la lectura del ARNm.
c. Inhibición de la formación del enlace peptídico.
d. Inhibición de la translocación del peptidil-ARNt desde el sitio A al sitio P.
e. Bloqueo de los factores de elongación.
 MUTACIONES

La mutación es todo cambio permanente ocurrido en la secuencia de bases de un gen. Las mutaciones son
alteraciones genéticas permanentes que pueden provocar cambios en la estructura y/o función de una proteína
o causar una disminución o pérdida completa de su expresión. A su vez, las mutaciones pueden ser espontáneas
o adquiridas. Las mutaciones espontáneas son las que ocurren en condiciones medioambientales normales, y las
mutaciones inducidas son aquellas que para que se produzcan precisan necesariamente de un agente externo,
llamado mutágeno, que actúa como acelerador de la tasa de mutaciones espontáneas. Constantemente se están
produciendo mutaciones y son precisamente imprescindibles para la evolución biológica.
a. Mutaciones adaptativas o "conductoras” (driver), son aquellas que otorgan una ventaja de crecimiento a la
célula portadora y conducen o lideran la transformación neoplásica. Hay tres tipos de genes que pueden
recibir mutaciones driver: genes supresores de tumores (TP53, Rb y PTEN), oncogenes (Myc, las GTPasas
regulatorias de la familia Ras y los receptores kinasas), y genes de estabilidad (BRCA1, BRCA2, MLH1 y
MSH2). Las predisposiciones hereditarias suelen deberse a mutaciones germinales de genes de estabilidad.
b. Mutaciones neutrales o “pasajeras” (Passenger), le confieren una ventaja de selección y que aparecen como
consecuencia de la alta tasa de división de las células tumorales y de los defectos en los sistemas de
reparación del ADN que estas presentan, no le otorga capacidad proliferativa a las células.
Las mutaciones pueden darse a nivel génico, cromosómico y genómico.
a. Mutaciones génicas o puntuales. Ocurren a nivel molecular y generan cambios en la secuencia lineal de los
nucleótidos que conforman un gen. Básicamente las mutaciones puntuales se pueden agrupar en varias
categorías:
Sustitución. Un nucleótido es sustituido por otro diferente.
- Mutación silente o silenciosas (silent mutations), la sustitución de un nucleótido por otro puede no
conllevar cambio de aminoácido. Esto ocurre porque hay diferentes codones que codifican para un
mismo aminoácido. Esta alteración genética no produciría ninguna afectación fenotípica.
- Mutación de cambio de sentido (missense mutation), la sustitución de un nucleótido por otro dará lugar
a un codón codificante para un aminoácido diferente. La consecuencia funcional en la proteína que se
genera dependerá en gran medida de si las propiedades del aminoácido sustituido son muy diferentes
al original.
- Mutaciones terminadoras o sin sentido (nonsense mutation), la sustitución de un nucleótido genera un
codón de terminación. Normalmente esta sustitución dará lugar a una proteína truncada no funcional
que tendrá como consecuencia un cambio fenotípico importante.
- Mutación por cambio de marco de lectura (frameshift), involucra la inserción o deleción (eliminación)
de uno o más nucleótidos. Esta mutación normalmente conlleva a la formación de proteínas no
funcionales. Sil as deleciones, siempre que sea un número de nucleótidos múltiplo de 3 darán como
resultado la eliminación de un pequeño número de aminoácidos contiguos; si en las inserciones, se
insertan un número de bases múltiplo de 3, resultará en la adición de unos pocos aminoácidos dentro
de la secuencia de la proteína. Otros números darán cambio de marco de lectura; si hay mutaciones que
combinan estas últimas dos se llaman indel.

Desplazamiento de marco
Mutación Puntual
de lectura “Frameshift”
Sin
De cambio de sentido
mutación Sin
Silenciosa No Deleción Inserción
Conservadora sentido
conservadora
ADN CGA TTC CGA TTT CGA TCC CGA TGC CGA ATC CG TTC CCGA TTC
ARNm GCU AAG GCU AAA GCU AGG GCU ACG GCU UAG GCA AG GGC UAA G
Proteína Ala Lys Ala Lys Ala Arg Ala Thr Ala Stop Ala Gly Stop
b. Mutaciones cromosómicas. Son cambios estructurales que afectan a un segmento del cromosoma mayor a
un gen. Estas modifican la estructura de los cromosomas a través de la pérdida, la ganancia o el
reordenamiento de segmentos. Estas anomalías ocurren cuando los cromosomas sufren procesos de
ruptura y reunión, lo que resulta en el intercambio o la pérdida de material genético dentro del mismo o
entre diferentes cromosomas. Hay cuatro rearreglos estructurales cromosómicos comunes que incluyen las
deleciones, inversiones, duplicaciones y translocaciones.
Las deleciones es la pérdida de un segmento cromosómico (ej. Cri du Chat) de manera que el material
genético no se puede recuperar.
Las inversiones ocurren cuando el segmento de un cromosoma se desprende y luego se vuelve a unir en la
orientación inversa al mismo cromosoma.
La duplicación de un segmento cromosómico ocurre cuando una parte del cromosoma se copia y se inserta
junto al segmento original en tándem o en orientación inversa.
Las translocaciones (ej. Cromosoma filadelfia) implican la transferencia de un segmento de un cromosoma
a una parte diferente del mismo cromosoma o a un cromosoma completamente diferente.

c. Mutaciones genómicas. Afectan al conjunto del genoma. Estas mutaciones se deben a errores en la
separación de los pares de cromosomas homólogos durante la meiosis, aumentando el número de juegos
cromosómicos (poliploidía) o reduciéndolo a un único juego (monoploidía).