TAREA GRUPAL: ESPECTROFOTOMETRÍA

Lee esta práctica, escucha los videos con los links que están al final y agénciate de
más información para contestar las siguientes preguntas del cuestionario.

Integrantes del grupo:

- Daniel Victor Trigoso Lostaunau
- Arturo Alejandro Sánchez Heredia
- Romina Lizeth Santos Bulnes
- Maria José Silva Rojas
- Miguel Villanueva (no trabajo)

CUANTIFICACIÓN DE HIERRO POR ESPECTROFOTOMETRÍA EN EL UV-VISIBLE

I. CAPACIDADES

1. Conoce y opera el espectrofotómetro UV – visible

2. Maneja los términos absorbancia, transmitancia y la ley de Lambert y Beer.
3. Prepara disoluciones y maneja la curva de calibración para cuantificación de
Hierro.

II. CUESTIONARIO

Desarrollar el siguiente cuestionario de definiciones; leer la práctica y videos

proporcionados e investigar en textos los siguientes términos y dar dos ejemplos
de cada término y haga un esquema o dibujo que ilustre su uso de cada uno.

1. Absorbancia:

Definición: La absorbancia, también conocida como densidad óptica, es la cantidad de

luz absorbida por una solución. La absorbancia y el porcentaje de transmitancia se
utilizan frecuentemente en espectrofotometría.

El color de la luz es uno de los cinco factores que condicionan la iluminación. Según su
color, podemos agrupar la luz en tres grandes grupos según sea luz monocromática,
luz blanca o luz RGB, pues cada uno de ellos nos aportará ciertas ventajas que
deberemos aprovechar según convenga, a la hora de inspeccionar el objeto de estudio.

Absorbancia = - log T = log P0 /P

Ejemplos: Para caracterizar líquidos y para caracterizar bases.

2. Transmitancia:

Definición: La transmitancia es la cantidad de luz que pasa a través de una solución

Cuando un haz de luz pasa a través de un medio, se registra una cierta pérdida de
intensidad, debido a la absorción por parte de la sustancia.
Se llama “TRANSMITANCIA” a la relación entre la luz incidente y la luz transmitida: T =
Is / I0 ; %T = (Is / I0 ) x 100.

Ejemplos: Transmitancia térmica

3. Luz monocromática:

Definición: El color de la luz es uno de los cinco factores que condicionan la

iluminación. Según su color, podemos agrupar la luz en tres grandes grupos según sea
luz monocromática, luz blanca o luz RGB, pues cada uno de ellos nos aportará ciertas
ventajas que deberemos aprovechar según convenga, a la hora de inspeccionar el
objeto de estudio.

Ejemplos: Diodos láser, la luz emitida por un led

4. Analito:
En química analítica un analito es el componente (elemento, compuesto o ion) de
interés analítico de una muestra. Son especies químicas cuya presencia o
concentración se desea conocer. El analito es una especie química que puede ser
identificado y cuantificado, es decir, determinar su cantidad y concentración en un
proceso de medición química, constituye un tipo particular de mensurando en la
metrología química.

Ejemplo: Plasma en la sangre y cloruro de sodio

5. Ley de Lambert y Beer:

Definición: Ley de Lambert-Beer: muestra cómo la absorbancia es directamente

proporcional a la longitud b de la trayectoria a través de la solución y a la
concentración c del analito o especie absorbente.
Al interaccionar la radiación electromagnética con la materia, tiene lugar la absorción
si la ϑ de la radiación coincide con la energía necesaria para que el sistema pase a un
nivel de energía superior y permitido
h ϑ = E2 - E1

Las dos leyes fundamentales que rigen el comportamiento de la fracción de la

radiación incidente absorbida al pasar a través de una muestra dada son:

Ley de Lambert: predice el efecto que produce el espesor del medio-muestra sobre la
fracción de radiación que se absorbe.
Ley de Beer: establece el efecto de la concentración del medio-muestra sobre la
fracción de radiación que se absorbe.

6. Longitud de paso óptico:

Longitud de camino óptico es la distancia recorrida, a la velocidad de la luz en el vacío,
en el tiempo t empleado por la luz para recorrer la distancia l en un medio con índice
de refracción n.

Teniendo en cuenta que L=nl. Teniendo en cuenta que n=v/c. Podemos ver de que:
L=(c/v)l=ct siendo t el tiempo que tarda la luz en recorrer la distancia l y c la velocidad
de la luz.

Si el medio por el que la luz se propaga tiene un índice de refracción n variable, el

camino óptico viene dado por:

En el caso de que la distribución de este sea continua. Si es discreta:

7. Curva de calibración:

Una curva de calibración es una función de transferencia que relaciona la entrada con
la salida. El método se basa en la relación proporcional entre la concentración y una
determinada señal analítica (propiedad).

Ejemplo aplicado a la electrónica

Un sensor de temperatura con rango [-100 °C ; 100 °C] ofrece una relación de 1mV/°C,
la señal tiene que adaptarse mediante un amplificador de ganancia 50 para un
Conversor Analógico/Digital de rango +-5V. La curva de calibración sería la que nos
relaciona el rango del termómetro con el rango de entrada del Conversor
Analógico/Digital.

Ejemplo aplicado a la Química

Es un método de química analítica empleado para medir la concentración de una

sustancia en una muestra por comparación con una serie de elementos de
concentración conocidos.
8. Espectro de Absorción:

El espectro de absorción de una materia muestra la fracción de la radiación

electromagnética incidente que un material absorbe dentro de un rango de
frecuencias.

Ejemplo aplicado a la Química

Debido a su especificidad y su naturaleza cuantitativa. La especificidad de los espectros

de absorción permite que los compuestos se distinguen entre sí en una mezcla, lo que
hace que la espectroscopia de absorción sea útil en una amplia variedad de
aplicaciones. Por ejemplo, los analizadores de gases infrarrojos se pueden utilizar para
identificar la presencia de contaminantes en el aire, distinguiendo el contaminante del
nitrógeno, oxígeno, agua y otros componentes esperado

Ejemplo aplicado a la astronomía

La espectroscopia de absorción también se emplea en el estudio de planetas

extrasolares. La detección de planetas extrasolares por el método de tránsito también
mide su espectro de absorción y permite la determinación de la composición
atmosférica del planeta, [7] temperatura, presión y altura de escala, y por lo tanto
permite también la determinación de la masa del planeta.

9. Espectrofotometría:

La Espectrofotometría es una de las técnicas experimentales más utilizadas para la

detección específica de moléculas. Se caracteriza por su precisión, sensibilidad y su
aplicabilidad a moléculas de distinta naturaleza (contaminantes, biomoléculas, etc) y
estado de agregación (sólido, líquido, gas). Los espectrofotómetros son equipos
ópticos que permiten evaluar la luz que es absorbida, transmitida o reflejada por un
material –sólido o líquido- para cada longitud de onda.

Ejemplo aplicado a las industrias alimentarias

Requerida para el control de la calidad de los alimentos, a través del contenido en los
mismos de hidroxiprolina, almidón o nitritos en carne y productos cárnicos; lactosa en
alimentos y bebidas alcohólicas; o furosina en leche.

Ejemplo aplicado al control de agua

Ayuda a la detección de detergentes aniónicos, cianuros, amonio, nitritos, cromo o

cloro residual en aguas de consumo y aguas envasadas.

10. Espectrofotometría UV-Visible:

La espectroscopia ultravioleta-visible o espectrofotometría ultravioleta-visible (UV/VIS)

es una espectroscopia de emisión de fotones y una espectrofotometría. Utiliza
radiación electromagnética (luz) de las regiones visible, ultravioleta cercana (UV) e
infrarroja cercana (NIR) del espectro electromagnético, es decir, una longitud de onda
entre 380nm y 780nm. La radiación absorbida por las moléculas desde esta región del
espectro provoca transiciones electrónicas que pueden ser cuantificadas.

La espectroscopia UV-visible se utiliza para identificar algunos grupos funcionales de

moléculas, y además, para determinar el contenido y fuerza de una sustancia. Se utiliza
de manera general en la determinación cuantitativa de los componentes de soluciones
de iones de metales de transición y compuestos orgánicos altamente conjugados.

Ejemplo aplicado a química y bioquímica

Usado para determinar pequeñas cantidades de cierta sustancia, como las trazas de
metales en aleaciones o la concentración de cierto medicamento que puede llegar a
ciertas partes del cuerpo.

11. Longitud de onda

 Es la distancia entre dos puntos correspondientes en la onda

Longitud de onda λ: se expresa en centímetros y subdivisiones, las cuales son:

Amstrongs: 10-8 cm

Nanómetros: 10-7 cm

Micrómetros: 10-4 cm

Los aparatos diseñados para la medición de absorción o emisión de radiación

electromagnética en función de la longitud de onda se denominan:

- Fotómetros - Espectrómetros - Espectrofotómetros

11. Longitud de onda en espectrofotometría de rayos X:

La espectroscopia de rayos X es una técnica que detecta y mide fotones, o partículas de luz,
que tienen longitudes de onda en la porción de rayos X del espectro electromagnético. Se
utiliza para ayudar a los científicos a comprender las propiedades químicas y elementales de
un objeto. (Usa longitudes de onda que van de 100 pm a 10 nm)

Hay varios métodos diferentes de espectroscopia de rayos X que se utilizan en muchas

disciplinas de la ciencia y la tecnología, incluyendo la arqueología, la astronomía y la ingeniería.
Estos métodos pueden ser usados independientemente o juntos para crear una imagen más
completa del material u objeto que se está analizando.

- EJEMPLO 1 APLICADO A SU USO: Espectrometría de rayos X se utilizan para realizar el

análisis elemental, químico, cristalográfico, estructural y dinámico de una amplia gama
de materiales que cumplen una gran variedad de requisitos

- EJEMPLO 2 APLICADO A SU USO: Se pueden usar para analizar y obtener imágenes de

grandes superficies, de hasta varios metros cuadrados. Por lo general, el estado
fisicoquímico de la muestra (líquida, congelada o caliente) u otros factores
ambientales no suponen un obstáculo para su aplicación, ya que las mediciones se
 pueden realizar en el vacío o bajo presión atmosférica, en cámaras experimentales
especializadas o, mediante espectrómetros portátiles, incluso sobre el terreno.

12. Longitud de onda en espectrofotometría ultravioleta:

La espectrofotometría en el ultravioleta y visible consiste en la medida de la absorción

de las radiaciones electromagnéticas comprendidas en un intervalo espectral de 200 a
400 nm para la región ultravioleta y de 400 a 800 nm para la región visible. Las bandas
del espectro del UV y visible generalmente son anchas y no poseen un alto grado de
especificidad para la identificación de sustancias. Sin embargo, existen ensayos
adecuados para la cuantificación de muchas sustancias, así como ensayos adicionales
para la identificación de sustancias.
En la ley de Lambert-Beer la absorbancia (Aλ) de una solución a una longitud de onda
dada, λ, es definida como el logaritmo en base 10 del inverso de la transmitancia (Tλ)

EJEMPLOS APLICADO A SUS USOS:

● Determinación de grupos funcionales en moléculas orgánicas

● Análisis de muestras bioquímicas
● Determinación de metales en compuestos de coordinación
● Análisis de semiconductores
● Medidas de color
● Determinación cuantitativa
● Seguimiento de la cinética de procesos químicos y bioquímicos
13. Longitud de onda en espectrofotometría de infrarrojo:

Es la medida de la interacción de la radiación infrarroja con la materia por absorción, emisión o

reflexión. Se utiliza para estudiar e identificar sustancias químicas o grupos funcionales en
forma sólida, líquida o gaseosa. El método o técnica de espectroscopía infrarroja se realiza con
un instrumento llamado espectrómetro infrarrojo (o espectrofotómetro) que produce un
espectro infrarrojo. Un espectro de infrarrojos se puede visualizar en un gráfico de absorbancia
(o transmitancia) de luz infrarroja en el eje vertical frente a la frecuencia o longitud de onda en
el eje horizontal.

- EJEMPLO 1 APLICADO A SU USO: Se utiliza en aplicaciones de control de calidad,

medición dinámica y monitoreo, como la medición desatendida a largo plazo de
concentraciones en invernaderos y cámaras de crecimiento mediante analizadores de
gas infrarrojos.

También se utiliza en análisis forenses en casos penales y civiles, por ejemplo, para
identificar la degradación de polímeros. Se puede utilizar para determinar el contenido
de alcohol en sangre de un presunto conductor ebrio.

La espectroscopía IR se ha utilizado con éxito en el análisis y la identificación de

pigmentos en pinturas y otros objetos de arte como manuscritos iluminados.

- EJEMPLO 2 APLICADO A SU USO: La espectroscopía infrarroja también es útil para

medir el grado de polimerización en la fabricación de polímeros. Los cambios en el
carácter o la cantidad de un vínculo en particular se evalúan midiendo a una frecuencia
específica a lo largo del tiempo. también se ha utilizado con éxito en el campo de la
microelectrónica de semiconductores: por ejemplo, la espectroscopía infrarroja puede
aplicarse a semiconductores como silicio, arseniuro de galio, nitruro de galio, seleniuro
de zinc, silicio amorfo, nitruro de silicio, etc.

Otra aplicación importante de la espectroscopía infrarroja es en la industria

alimentaria para medir la concentración de varios compuestos en diferentes productos
alimenticios.
14. Longitud de onda en espectrofotometría en el UV-Visible:

La espectroscopia ultravioleta-visible es un tipo de espectroscopia de absorción en la que se

ilumina una muestra con rayos electromagnéticos de varias longitudes de onda en el rango
ultravioleta (UV) y visible (VIS). Según la sustancia, la muestra absorbe parcialmente los rayos
de luz ultravioleta o visible. El resto de la luz, es decir, la luz transmitida, se registra como una
función de la longitud de onda mediante un detector adecuado. El detector produce entonces
el espectro UV-VIS único de la muestra (también conocido como el “espectro de absorción”).

- EJEMPLO 1 APLICADO AL USO EN LA INDUSTRIA ALIMENTARIA: Si nos centramos en el

sector de la alimentación, podemos encontrar una amplia variedad de aplicaciones de
esta técnica. Es común el uso de estos equipos para el control de la calidad de los
alimentos, a través del contenido en los mismos de hidroxiprolina, almidón o nitritos
en carne y productos cárnicos; lactosa en alimentos y bebidas alcohólicas; o furosina
en leche. Además, se hace uso de esta técnica para controlar la trimetilamina, la
histamina, el ácido domoico o el fósforo en productos de pesca y acuicultura.

Asimismo, es común el uso de estos equipos para mediciones en jugos de fruta que
permiten controlar el ácido cítrico, el fósforo, el ácido L-málico, el ácido D-isocítrico, la
glucosa, la fructosa y la sacarosa. Del mismo modo, en la miel y en productos apícolas
es posible realizar la medición de hidroximetilfurfural (HMF) con esta técnica.

- EJEMPLO 2 APLICADO AL USO DEL CONTROL Y TRATAMIENTO DEL AGUA: Además, las
entidades de salud pública y las empresas encargadas del control y tratamiento de
aguas utilizan los espectrofotómetros UV-VIS, entre otras cosas, para la detección de
detergentes aniónicos, cianuros, amonio, nitritos, cromo o cloro residual en aguas de
consumo y aguas envasadas.

15. Absortividad:

Se denomina absortividad a la medida de la cantidad de luz absorbida por una

solución, definida como la unidad de absorbancia por unidad de concentración por
unidad de longitud de la trayectoria de luz.De acuerdo con la Ley de Beer-Lambert, la
absortividad es proporcional a la conductividad del soluto absorbente.

La ecuación es:

A = εbc

- EJEMPLO 1 CON EJERCICIOS:

Se sabe que una solución de un compuesto orgánico con una concentración de
0.008739 M presentó una absorbancia de 0.6346, medida a λ=500 nm y con
una celda de 0.5 cm de longitud. Calcule cuál es la absortividad molar del
complejo a dicha longitud de onda.
A partir de estos datos puede despejarse directamente ε:
ε= 0.6346/(0.5 cm)(0.008739 M)
145.23 M-1∙cm-1

- EJEMPLO 2 CON EJERCICIOS:

Se tiene las siguientes absorbancias medidas a diferentes concentraciones de
un complejo metálico a una longitud de onda de 460 nm, y con una celda de 1
cm de longitud:
A: 0.03010 0.1033 0.1584 0.3961 0.8093
c: 1.8∙10-5 6∙10-5 9.2∙10-5 2.3∙10-4 5.6∙10-4
 Calcule la absortividad molar del complejo.
Hay un total de cinco puntos. Para calcular ε es necesario graficarlos colocando
los valores de A en el eje Y, y las concentraciones c en el eje X. Una vez hecho
esto, se determina la recta de los mínimos cuadrados, y con su ecuación se
podrá determinar ε.
En este caso, graficados los puntos y trazada la recta con un coeficiente de
determinación R2 de 0.9905, la pendiente es igual a 7∙10-4, es decir, εb= 7∙10-
4.
Por lo tanto, con b=1cm, ε será de 1428,57 M-1.cm-1 (1/7∙10-4)

16. Espectro electromagnético:

Es la distribución completa de frecuencias o longitudes de onda de la radiación

electromagnética se denomina espectro electromagnético (em).El espectro
electromagnético abarca toda la radiación electromagnética y se divide en varios
subrangos, conocidos como partes, como la luz visible o la radiación ultravioleta.
El espectro electromagnético abarca desde la radiación de baja energía y baja
frecuencia que viaja en ondas largas (como las ondas de radio y las microondas) hasta
la radiación de alta energía y alta frecuencia que viaja en ondas cortas (como los rayos
X y los rayos gamma).

Ejemplos :
- Los siete ejemplos del espectro electromagnético son las ondas de radio, las
microondas, los infrarrojos, el visible, el ultravioleta, los rayos X y los rayos
gamma.
a) Los rayos gamma tienen las longitudes de onda más cortas y las
frecuencias más altas conocidas. Son ondas de alta energía capaces de
viajar a larga distancia a través del aire y son las más penetrantes.
b) Los rayos X tienen longitudes de onda más largas que los rayos gamma,
pero menores que la radiación ultravioleta y por lo tanto su energía es
mayor que la de estos últimos. Se utilizan en diversas aplicaciones
científicas e industriales, pero principalmente se utilizan en la medicina
como la radiografía. Consisten en una forma de radiación ionizante y
como tal pueden ser peligrosos. Los rayos X son emitidos por electrones
del exterior del núcleo, mientras que los rayos gamma son emitidos por
el núcleo.

Esquema :
17. Coeficiente de correlación:

Un coeficiente de correlación es una medida estadística del grado en que los cambios
en el valor de una variable predicen el cambio en el valor de otra. En las variables
correlacionadas positivamente, el valor aumenta o disminuye a la par. En las variables
correlacionadas negativamente, el valor de una aumenta a medida que disminuye el
de la otra.
Los coeficientes de correlación se expresan como valores entre +1 y -1. Un coeficiente
de +1 indica una correlación positiva perfecta: Un cambio en el valor de una variable
predecirá un cambio en la misma dirección en la segunda variable. Un coeficiente de -1
indica una correlación negativa perfecta: Un cambio en el valor de una variable predice
un cambio en la dirección opuesta en la segunda variable. Los grados de correlación
menores se expresen con decimales distintos de cero. Un coeficiente de cero indica
que no hay relación perceptible entre las fluctuaciones de las variables.

- Un ejemplo de uso de un coeficiente de correlación sería determinar la

correlación entre el software sin licencia y los ataques de malware.
- La cantidad de gasolina en un depósito, por ejemplo, disminuye en proporción
(casi) perfecta a la velocidad.
18. Celdas o Cubetas para Espectrofotómetros:

Las Celdas o Cubetas para Espectrofotómetro son recipientes de plástico, vidrio o

cuarzo que se utilizan para realizar lecturas espectrofotométricas a líquidos. Para que
una Celda o Cubeta para Espectrofotómetro funcione adecuadamente requiere estar
completamente limpia y sin ralladuras; además, la elección del material de fabricación
es importante dependiendo del método espectrométrico que se utilice y la naturaleza
de la muestra.
19. Barrido espectral:

La gráfica del conjunto de valores de absorbancia de una sustancia vs diferentes

longitudes de onda constituye una curva característica conocida como barrido
espectral. Un barrido espectral se obtiene trabajando con una misma solución
coloreada (de concentración constante) y midiendo los valores de absorbancias
correspondientes a distintas longitudes de onda seleccionadas dentro de un
determinado rango de trabajo.

El perfil de los barridos espectrales representa cómo interactúa la sustancia a radiación

electromagnética de las longitudes de onda evaluadas, siendo este perfil propio de
cada sustancia. Una zona de pico en el barrido espectral representa un rango de
radiaciones de determinadas longitudes de onda que la sustancia absorbe, mientras
que un valle representa un rango de radiaciones de longitudes de onda para las cuales
hay nula absorción.

Usos :

- Pueden emplearse para identificar sustancias incógnitas. Por lo general, cuando

se busca identificar una sustancia coloreada se realiza un barrido espectral a lo
largo de todo el rango visible (400 a 700 nm). Debe disponerse de antemano de
un espectro de la “supuesta” sustancia, con el cual comparar el barrido
espectral de la sustancia en estudio.
- Nos permite visualizar la variación de la absorbancia con la longitud de onda de
la radiación electromagnética, mediante el análisis de los barridos podemos
elegir una longitud de onda óptima de trabajo cuando busquemos cuantificar
una sustancia o bien evaluar si cumple con la Ley de Lambert-Beer en
determinadas condiciones. Este tema lo desarrollaremos en los capítulos
siguientes.

Ejemplo 1 :

Barrido espectrofotométrico UV-Vis de los colorantes:

a) A5
b) R40
antes y después del contacto con los materiales adsorbentes
Fuente : https://www.researchgate.net/figure/Figura-1-Barrido-espectrofotometrico-UV-
Vis-de-los-colorantes-A5-a-y-R40-b-antes-y_fig1_343912333

Ejemplo 2 : Barrido espectral del NM 5,9x10 -5 M a diferentes valores de pH

Esquema de uso :
FUENTE : https://link.springer.com/chapter/10.1007/978-3-030-16638-0_3

20. Absorbancias corregidas:

Las absorbancias se corrigen porque el disolvente y otros reactivos que no son analito
pero que están presentes en la solución de muestra también pueden haber absorbido
luz. Esto significa que la solución de muestra con concentración cero de analito se
pondrá a cero después de la corrección. La absorbancia corregida se obtiene restando
la absorbancia del blanco de cada valor de absorbancia individual. La absorbancia del
blanco es el valor para una concentración que es igual a 0.

Ejemplos :

- La corrección se utiliza para tener en cuenta el efecto del ruido del instrumento
y de las partículas de la muestra que dispersan la luz y que pueden causar una
desviación en la absorbancia total de la muestra.
- En aplicaciones de ácidos nucleicos y proteínas
Esquema :

- El efecto Zeeman es preferible a la mayoría de las otras formas de corrección

de fondo, ya que tiende a ser más preciso. Los sistemas Zeeman de corriente
alterna suelen ser más caros que los de corriente continua, pero son más
sensibles y tienen rangos de trabajo lineales más amplios.

FUENTE : https://blogs.maryville.edu/aas/wp-content/uploads/sites/1601/2013/05/
zeeee-e1368735274939.jpg

III. BIBLIOGRAFÍA

● Harris Daniel C., 2001. Análisis Químico Cuantitativo. 2ª edición. Editorial

Reverté, S.A. México.
● Skoog Douglas A., West Donald M., Holler F. James, Crouch Stanley R. 2008.
Fundamentos de Química Analítica. 8ª edición.
Thomson Learning, México.
● Verde Calvo José Ramón, Escamilla Hurtado Ma. de Lourdes, Reyes Dorantes
Alberto y Malpica Sánchez Frida. Manual de Prácticas de Química Analítica II. 1ª
edición. Universidad Autónoma Metropolitana-Iztapalapa, México.
● Wikipedia. Absortividad. En linea. Consultado el 22 de diciembre de 2022.
Disponible en: https://es.wikipedia.org/wiki/Absortividad