BIOINORGANICA DEL CINC

Estructura de la b-lactamasa
Cofactores inorgánicos: elementos
traza
 BIOINORGANICA DEL CINC
Oligoelementos
Cinc
Regulador de la actividad de enzimas
Estabilizador de proteínas y polinucleótidos
En enzimas:
Anhidrasa carbónica
Aldolasa
Fosfatasa alcalina
Deshidrogenasas
Polimerasas de DNA y RNA
Peptidasas y proteinasas
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De todos los elementos esenciales
pertenecientes a los grupos 3 al 12, el cinc es
el segundo en cuanto a abundancia es
superado sólo por el hierro. En el ser humano
de un adulto hay unos 3 gramos de cinc. Se
pensó que este alto contenido en cinc carecía
de significación biológica.
El ion Zn2+ al presentar una configuración d10
es incoloro y diamagnético
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Actualmente se conocen más de 300 enzimas
de cinc, este ion metálico es indispensable
para todas las formas de vida.
Las enzimas de cinc catalizan la conversión
metabólica de proteínas, ácidos nucleícos,
lípidos, precursores de porfirinas y otros
compuestos biológicamente importantes.
El cinc también tiene una función estructural
en muchas metalobiomoléculas.
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• La mayoría de las metaloenzimas no redox utilizan el
cinc como centro catalítico, éste actúa esencialmente
como ácido de Lewis, esto se debe a sus propiedades
químicas que lo hacen más adecuado que otros iones
metálicos esenciales como Ca2+, Mg2+ o iones M2+ de
transición.
• En primer lugar, de todos estos iones metálicos, el
Zn+2es el ácido de Lewis más efectivo junto con el Cu2+
y el Ni2+.
• A diferencia del Cu2+ o Ni2+, es inactivo en procesos
redox ya que sólo presenta un estado de oxidación.
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• El cinc en sus metaloenzimas, se encuentra unido a las
cadenas laterales de la proteína, de donde resulta difícil de
extraer.
• Al ser un ácido intermedio, el cinc presenta una elevada
afinidad por dadores intermedios como el átomo de
nitrógeno de histidina, así como por átomos dadores
blandos como el azufre de metionina o el tiolato de
cisteína, e incluso por dadores duros como el carboxilato.
• También es capaz de unirse a grupos carbonilo y forma
enlaces cinéticamente inertes, presenta característica de
que los ligandos no proteicos como el agua, son
cinéticamente lábiles.
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• El cinc puede actuar como ácido de Lewis activando
directamente al sustrato mediante la polarización de un
enlace de grupo coordinado.
• Este conjunto de características que presenta el cinc
favorecen su actividad catalítica, ya que permiten la unión
rápida de sustrato, cambios en la unión de especies
intermedias y una rápida disociación de los productos.
• Además de la activación directa de sustrato, el cinc puede
actuar como ácido de Lewis activando a una molécula de
agua coordinada, facilitando su desprotonación, que
iniciaría el ataque nucleófilo del sustrato.
 Enzimas en las que participa el cinc

Carboxipeptidasa A
La carboxipeptidasa A (CPA), fue la primera
metaloproteasa donde se identificó la
presencia de cinc y la primera enzima de cinc
caracterizada cristalográficamente.
La CPA es una metaloexopeptidasa que se
encuentra en el páncreas y actúa
extracelularmente ayudando en el proceso de
digestión de las proteínas en el duodeno.
 Carboxipeptidasa A
• La función biológica de la CPA es catalizar la hidrólisis
del enlace peptídico C-terminal de sustratos
polipeptídicos, exhibiendo preferencia específica
cuando el aminoácido C-terminal contiene grupos
hidrofóbicos voluminosos, como la fenilalanina.
 Carboxipeptidasa A

El ión cinc, esencial para la catálisis, está situado

en el fondo de una cavidad abierta por la que
acceden los sustratos e inhibidores al ion
metálico.
El cinc está unido a dos histidinas, a un grupo
carboxilato de glutamato que actúa como ligando
bidentado y a una molécula de agua, el átomo
metálico tiene una geometría pentacoordinada
distorsionada. Esta distorsión se debe a que la
coordinación del ligando glutamato bidentado es
ligeramente asimétrica.
 Carboxipeptidasa A

La cavidad también contiene una zona hidrofóbica que puede

acomodar al grupo hidrofóbico R del resto de aminoácido C-
terminal del sustrato, esto permite explicar la mayor eficiencia
catalítica de la CPA en sustratos con este tipo de aminoácido C-
terminal.
Mecanismo de acción de la carboxipeptidasa

Carboxipeptidasa (P.M.; 34,300; 1 Zn). Esta enzima está

localizada en el páncreas de los mamíferos, cataliza la
hidrólisis del péptido unido al final carboxílico de la cadena
peptídica.
La enzima tiene una preferencia particular por aquellos
sustratos en los que la cadena lateral R es aromática, es
decir -CH2C6H5, o bien, -CH2C6H4OH.
Su estructura y mecanismo de acción se han dilucidado
parcialmente. El ion zinc está enlazado, en un entorno
tetraédrico distorsionado, con dos átomos de
nitrógeno-histidina, un átomo de oxígeno carboxílico
glutamato y una molécula de agua como ligandos.
ESTRUCTURA DE LA CARBOXIPEPTIDASA
Mecanismo de acción de la carboxipeptidasa
Mecanismo de acción de la carboxipeptidasa
 Anhidrasa carbónica

• La anhidrasa carbónica (AC), es una

metaloenzima de cinc que cataliza la
conversión reversible del dióxido de carbono
en anión hidrogenocarbonato según el
siguiente equilibrio:
CO2 + H2O ↔ HCO3- + H+ (ac)
Esta es una reacción de importancia para la
mayoría de los seres vivos.
 Anhidrasa carbónica

Esta enzima fue aislada y purificada por primera

vez en 1938 por Meldrum y Roughton.
Pertenece a la familia de las metaloenzimas que
contienen en su sitio activo una molécula de cinc
(II) que coordina con los anillos imidazol de 3
residuos de histidina: His 94, His 96 e His 119.
Los residuos de treonina 199 y glutamato 106
conjuntamente con histidina 64 interactúan
indirectamente a través de la unión de una
molécula de agua, lo que confiere un ion
hidroxilo a la molécula de cinc.
SITIO ACTIVO DE LA ANHIDRASA CARBÓNICA
HUMANA

CO2+ H2O → HCO3- + H+

AMINOACIDOS
 Anhidrasa carbónica

El centro activo se encuentra en el interior de

una cavidad de 15Å de profundidad.
El ión cinc presenta una estructura tetraédrica
ligeramente distorsionada como podemos ver
en la siguiente figura:
GENERACION DE LA FORMA ACTIVA DE LA CARBOXIPEPTIDASA
ESQUEMA PROPUESTO PARA LA ANHIDRASA
CARBONICA
 Anhidrasa carbónica
• Las histidinas se pueden unir al cinc por
cualquiera de los dos átomos de nitrógeno
imidazolinico y la preferencia viene determinada,
por las restricciones estéricas impuestas por el
plegamiento de la proteína.
• El sitio activo presenta una estructura bastante
rígida debido a que los tres ligandos de histidina
están unidos mediante enlaces de hidrógeno a
otros restos de aminoácido de la proteína.
• El mecanismo de la reacción es el siguiente:
 Mecanismo de acción de la anhidrasa carbónica

La hidratación del CO2 se lleva a cabo de la siguiente manera: el carbonilo del CO2 es
atacado por el hidroxilo de la AC y forma una molécula de HCO3- que queda unida al
zinc; posteriormente, la hidrólisis produce la liberación del HCO3-. Luego el H+ se
transfiere al amortiguador externo mediante un transportador (H64 en la AC-II) para
regenerar la especie catalítica activa, y el zinc se une nuevamente al hidroxilo.
 Función estructural

Dedos de cinc
Los dedos de cinc son pequeños motivos estructurales
de proteínas que pueden coordinar uno o más iones de
cinc para ayudar a estabilizar sus pliegues.
Se pueden clasificar en diferentes familias estructurales
y normalmente funcionan como módulos de
interacción que unen el ADN, ARN, proteínas y
moléculas pequeñas.
El nombre de "dedo de cinc" fue dado para describir la
hipótesis de la estructura de la unidad repetida del
factor de transcripción IIIA en Xenopus laevis.
Estructura de los dedos de zinc
 Dedos de cinc

En esta figura se representa el motivo de dedo de zinc Cys2His2, que consiste en una
hélice alfa y una lámina beta antiparalela. El ion de zinc (verde) está coordinado por
dos histidinas y dos cisteínas.
PROTEINAS DE UNION A ADN
DEDO DE ZINC
 Estructura del Zn(II) b-lactamasa (3bc2)

The Zn(II) is tetrahedrally

coordinated by His86, His88,
His149 and a water/hydroxide
molecule
Dal Peraro et al. (2002) JBIC 7, 704-712
 Lactamasa

Una betalactamasa es una enzima producida por algunas bacterias y es

responsable por la resistencia que éstas exhiben ante la acción de antibióticos
betalactamicos como las penicilinas, las cefalosporinas.
 ABSORCIÓN, TRANSPORTE Y METABOLISMO
• Los inhibidores de la absorción de zinc son fundamentalmente los fitatos – se
encuentran en los cereales-, oxalatos, hemicelulosa, calcio, hierro y cobre. La
absorción puede ser facilitada por la presencia de proteína animal, la histidina y
puede ocurrir a lo largo del intestino delgado.
• Una vez absorbido el zinc es transportado rápidamente y se concentra en el
hígado. Se ha identificado la albúmina como la proteína plasmática que transporta
el metal en la sangre.
• Los componentes del plasma que lo contienen son los hematíes luego las
plaquetas, los leucocitos, la alfa dos macroglobulina, la transferrina y los
aminoácidos, sobre todo la cisteína y la histidina.
• Las concentraciones séricas o plasmáticas de zinc experimentan oscilaciones,
disminuyen durante el estrés. Una ingesta excesiva de zinc puede incrementar en
varias veces sus concentraciones sanguíneas.
• La velocidad inicial de captación de Zn por los tejidos a partir de una dosis oral
dada es mayor en el hígado, seguido de la médula ósea, el hueso, la piel, el riñón y
el timo, en este orden.
• La excreción de zinc se produce fundamentalmente por las heces, a partir de las
secreciones pancreáticas, biliares o intestinales y de las células mucosas
descamadas.
MUCHAS GRACIAS
Proteínas cristalizan en la configuración biológica activa
Los electrones de los átomos dispersan los rayos X
La forma de dispersión dependen del ordenamiento atómico
Transformación de Fourier

Mapas de densidad electrónica

Los dominios de nuestra proteína son alfa beta, que forman la arquitectura
"3-layer (aba) sandwich". La proteína pertenece a la superfamilia DD-
peptidasa/beta-lactamasa, topología beta lactamasa

Dedos de cinc?