🧪 DETERMINACIÓN DE CONCENTRACIÓN DE UREA 🧑‍🧫

INTRODUCCIÓN

La urea es un compuesto orgánico natural que desempeña un papel crucial en el

metabolismo biológico del nitrógeno. Es el principal producto de degradación del
metabolismo de las proteínas y se produce en el hígado mediante el ciclo de la urea,
un proceso bioquímico que elimina el exceso de nitrógeno del cuerpo en forma de
amoníaco. El amoniaco es una sustancia altamente tóxica que se convierte en urea,
una molécula soluble en agua menos tóxica que facilita su excreción en la orina a
través de los riñones..[1]
La cantidad de la urea tanto en exceso como en defecto en el cuerpo humano es
afectado por problemas internos o externos del organismo, por ejemplo, el
alcoholismo y la desnutrición son causadas por un defecto de urea, y la
deshidratación y dieta rica en proteína son causadas por un exceso de urea que
puede llegar a contraer uremia.

La hiperuricemia, es decir, un aumento en la concentración de urea en la sangre, se

interpreta típicamente como un signo potencial de disfunción renal [2]. No obstante,
debe tenerse en cuenta que los valores de urea en suero están estrechamente
ligados a la dieta y el metabolismo proteico del individuo, de manera que cualquier
alteración en estos factores se reflejará en una modificación de la concentración de
urea en la sangre.

Según un estudio titulado: ”Efecto de la dieta hiperproteica sobre el metabolismo

proteico en lactantes críticamente enfermos” Las dietas hiperproteicas fueron bien
toleradas desde el punto de vista gastrointestinal, pero el 21 % de los pacientes que
recibieron la fórmula hiperproteica suplementada desarrollaron hiperuremia [3]. Esto
sugiere que se debe tener precaución en el uso de dietas hiperproteicas en
pacientes críticamente enfermos, ya que podrían tener efectos secundarios
adversos en ciertos casos. Se deben considerar cuidadosamente los riesgos y
beneficios potenciales antes de prescribir una dieta hiperproteica en este grupo de
pacientes. Es importante tener en cuenta que los niveles elevados de urea en la
sangre pueden ser indicativos de una variedad de afecciones médicas, y se requiere
una evaluación cuidadosa por parte de un profesional de la salud para determinar la
causa subyacente.

En esta práctica queremos determinar la concentración de la urea pero primero

debemos saber el nivel de urea en el suero y para eso se realizará una prueba de la
urea que se utilizará junto con la prueba de creatinina para evaluar la función renal
una variedad de condiciones, como ayudar en el diagnóstico de enfermedad renal y
para monitorizar pacientes con disfunción o fallo renal ya sea agudo o crónico.[2]
OBJETIVOS
● Describir la técnica de cuantificación de la concentración de urea en suero.
● Explicar el fundamento de la técnica empleada para medir urea.
● Relacionar el significado clínico de los resultados de esta prueba.

1. MATERIALES Y MÉTODOS

03 tubos de ensayo de 13x100mm (blanco, reactivo y desconocido), Pipetas

automáticas de mil microlitros, Puntas o tips, Baño María, Espectrofotómetro
genesys, Estuche comercial para determinar urea (01 estándar de urea
(0.60g/L) frasco 1 mL; 01 ureasa frasco 1 mL; 01 reactivo de trabajo 1 frasco
12 mL; 01 reactivo de trabajo 2 frasco 12 mL), Cronómetro y Cubetas.

a) b) c)

d) e) f) ,

, , g)
 Fig 1. Materiales y Reactivos empleados en la práctica. a) tubos de ensayo de
13x100mm, b) Micropipeta de mil microlitros , c)puntas desechables de micropipeta
de 50 - 1000 ul, d) Baño maria, e)Espectrofotómetro genesys, f)Estuche comercial
para determinar urea, g) Cubetas. Fuente: imágenes propias.

MÉTODO: Calor - ayuda a que los reactivos usados en el experimento pueda

desnaturalizar y a ver mejor la absorbancia de los tubos

2. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

- En 3 tubos de 13x100 mm se rotularon con marcador permanente las letras

B(blanco), ST(estándar) y D(desconocido). (Figura 2)

Fig 2. Tres tubos de ensayo debidamente rotulados. Fuente: Imágenes propias.

- En los 3 tubos se agregó el reactivo de trabajo 1 de 3325 uL y 175 uL de ureasa.

- En el tubo ST se agregó 10 uL de estándar de urea y en D se agregó de la muestra
del paciente ( valtrol valtek). (Figura 3).

Fig 3. Se está agregando 10 uL de estándar de urea.

Fuente: Imágenes propias.

- Se agitó para tener mezclas uniformes en todos los tubos. (Figura 4).
 Fig 4. Agitamos los tres tubos hasta que las mezclas aparezcan totalmente uniformes.
Fuente: Imágenes propias.

- Luego se puso a incubar en baño María durante 3 minutos. (Figura 5).

Fig 5. Se incubaron los tres tubos de ensayo durante 3 minutos a 37°C. Fuente: Imágenes
propias.

- Después de que pasó el tiempo se mezcló con el reactivo 2 de trabajo para después
volver a incubar en baño María por 5 minutos. (Figura 6).

Fig 6. Los resultados de los tres tubos de ensayo. Fuente: Imágenes propias.

- Se tomó la lectura en el espectrofotómetro a 600 nm para poder obtener la

absorbancia de los 3 tubos que se trabajaron en el experimento. (Figura 7).
 Fig 7. Se puso en el espectrofotómetro a 600 nm y poder leer las absorbancias de
los tres tubos respectivamente. Fuente: Imágenes propias.

- Se calculó los datos que se obtuvieron para hallar la concentración de urea (mg/dL).
El valor que se obtuvo de acuerdo con los intervalos de referencia. (Fig 8).

[𝑢𝑟𝑒𝑎]
𝐹𝑐 = 𝐴𝑏𝑠. 𝑆𝑡𝑎𝑛𝑑𝑎𝑟𝑑
[𝑈𝑅𝐸𝐴] = 𝐹𝑐 × 𝐴𝑏𝑠. 𝐷𝑒𝑠𝑐𝑜𝑛𝑜𝑐𝑖𝑑𝑜
Figura 8. Fórmula de concentración de urea. Fuente: PPT de práctica de
Bioquímica-2023-2.

- Se interpretó el valor obtenido en la muestra con los valores referenciales. (Fig.9)

Fig 9. Valores referenciales correspondientes. Fuente: PPT de práctica de

Bioquímica-2023-2.

3. RESULTADOS:

Determinación de [urea] y [BUN] datos:

[urea estándar]: 66 mg/dL

[BUN estándar]: 33 mg/dL
Abs estándar: 0.579

66 𝑚𝑔/𝑑𝐿
➔ Fc [urea]= 0.579
= 113. 9 𝑚𝑔/𝑑𝐿

33 𝑚𝑔/𝑑𝐿
➔Fc [BUN]= 0.579
= 56. 9 𝑚𝑔/𝑑𝐿
 Abs desconocido (paciente) = 0.580

[urea desconocido] = 113. 9 𝑚𝑔/𝑑𝐿 × 0. 580 = 66 𝑚𝑔/𝑑𝐿

[BUN desconocido] =56. 9 𝑀𝐺/𝑑𝐿 × 0. 580 = 33 𝑚𝑔/𝑑𝐿

- Se determina la concentración de la muestra con la fórmula de factor de calibración

e interpretación. Las concentraciones de urea y BUN del paciente están alteradas
(Uremia).

4. DISCUSIÓN:

Con los resultados obtenidos, se puede concluir que la muestra desconocida

tiene una concentración de urea y BUN superior al rango del valor normal, el
cual va de los 10 g/dL a 50 g/ dL, esto quiere decir que el suero que hemos
utilizado es un suero patológico, esto puede ser una patología renal o una
patología hepática, por lo contrario si no es una patología nos puede indicar
que la persona tiene una alta ingesta de proteínas.

Sin embargo, es importante tener en cuenta que los resultados de este

ensayo deben ser interpretados en conjunto con los síntomas y la historia
clínica del paciente, ya que pueden existir otras causas de elevación de los
niveles de urea y BUN en sangre. La tecnica utilizada en este experimento es
conocida como ensayo de urea y BUN, la cual se basa en la reacción entre la
urea y el reactivo 3, formando un complejo que posteriormente reacciona con
el reactivo 2 para producir un cambio de color que se puede medir en el
espectofotometro.

Es importante destacar que el ensayo de urea y BUN es una técnica

ampliamente utilizada en el diagnóstico de enfermedades renales y
hepáticas, ya que la urea es uno de los principales productos de desecho que
se elimina por la orina. Valores elevados o disminuidos de urea y BUN puede
indicar un mal funcionamiento del riñón o del hígado

Por ejemplo, referente a los niveles bajos se debe al consumo bajo de

proteínas, embarazo (segundo y tercer trimestre), exceso de hidratación,
hemodiálisis, malabsorción, tabaco. Y sobre los niveles altos se refiere a la
deshidratación, provocada por no beber suficientes líquidos, obstrucción en
las vías urinarias, insuficiencia cardíaca congestiva o ataque cardíaco
reciente, sangrado gastrointestinal, shock, quemaduras graves,
medicamentos, como algunos antibióticos y dieta alta en proteínas.

Se realizó una comparación con el paper ¨Disfunción inmune y uremia 2020¨,

en que nos indican que la alteración de la filtración glomerular que resulta en
la acumulación de toxinas urémicas y las actividades metabólicas renales
defectuosas contribuyen al mayor riesgo de enfermedades cardiovasculares
e infecciones al interferir directa o indirectamente con las funciones de las
células inmunes. En este se indica la relación de la uremia con la función
 renal y su importancia en el diagnóstico médico para prevenir patologías
antes mencionadas.[4]

Tal cual se explicó anteriormente, los resultados de nuestro paciente indican

una alteración en la concentración de Urea, esto se puede relacionar a la
función renal y por consiguiente a las patologías que podría desencadenar.

5. CONCLUSIONES

● En este experimento basado en la proposición de Faucett y Scott

logramos medir la concentración de urea en plasma y pudimos
apreciar el procedimiento por el cual la ureasa convierte en amonio a
la urea para luego excretarse por la orina. Sin embargo, para poder
medir las absorbancias de este compuesto en el espectrofotómetro,
necesitamos que se forme un compuesto coloreado, para ello nos
ayudamos del Salicilato e hipoclorito, en un ambiente alcalino,
formando un complejo de color verdoso.
● Es importante entender el fundamento teórico de esta técnica ya que
nos ayuda a identificar un problema en la preparación de la mezcla, ya
que, si no se forma el complejo coloreado, se puede deducir de un
fallo en la preparación de la muestra o desarrollo de la técnica.
Añadido a ello, podemos recalcar la importancia de la temperatura en
las muestras, ya que si bien no se requiere de una excesiva
temperatura, se debe de calentarlas para que puedan reaccionar los
complejos del kit enzimático, así como para el Salicilato e hipoclorito.
● Es necesario recordar que la urea es un compuesto residual de la
composición de las proteínas y que su valor en sangre nos sirve como
indicador de un funcionamiento renal óptimo o averiado. El riñón es el
encargado principal de filtrar esta sustancia en la sangre y pasarla a la
orina para luego ser desechada, este proceso regula los niveles de
urea en sangre. En cambio, cuando existe un problema en el riñón
este baja su capacidad de filtrado y por ende los niveles de urea en
sangre aumentan. Eso nos demuestra que conocer estos procesos y
saber como hallar la concentración de urea en el cuerpo, permite
diagnosticar o diferenciar patologías no solo ligadas al riñón sino
también al cuerpo en general.

6. RECOMENDACIONES
● Utilizar las cantidades mencionadas de cada sustancia para no alterar
los resultados obtenidos al finalizar la prueba.
 ● Implementar los protocolos de seguridad adecuados para prevenir
accidentes.
● Etiquetamos los tubos de ensayo a utilizar para evitar confusiones.
● Aseguramos que el espectrofotómetro esté calibrado adecuadamente
para que no obtengamos mal los resultados.

7. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

[1] Clínica Universidad de Navarra. Urea. [internet]. [Consultado el 27 de

septiembre de 2023]. Disponible en:

https://www.cun.es/diccionario-medico/terminos/urea

[2] labtestsonline. Urea. [internet]. [Consultado el 28 de septiembre del

2023]. Disponible en:

https://www.labtestsonline.es/tests/urea#:~:text=La%20prueba%20de%20la

%20urea,ya%20sea%20agudo%20o%20cr%C3%B3nico.

[3] Montes, R. F. Efecto de la dieta hiperproteica sobre el metabolismo

proteico en lactantes críticamente enfermos. 2020. (Doctoral dissertation,

Universidad de Oviedo).

[4] Cohen G. Immune Dysfunction in Uremia 2020. Toxins. 2020;12(7):439.

[Consultado el 28 de septiembre del 2023]. Disponible en:

https://www.mdpi.com/2072-6651/12/7/439

[5] Navarro, M., Salazar, J., Salazar, Y. Zarkovic, G. (2022). Manual de

prácticas de laboratorio. Bioquímica. Universidad Científica del Sur.[citado el

3 de septiembre de 2023].