REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA Y VISUALIZACIÓN DE LOS FRAGMENTOS

DE AMPLIFICACIÓN.
Diana Ashín Girón López, Gerardo Romo Alonzo, Karen Alexa Velasco Velázquez, Oscar Andree López Vázquez y
Alejandro Astudillo Aguilar.

se debe a que no se inyectó bien.

Introducción. La reacción en cadena de la polimerasa o
PCR (siglas de su nombre en inglés Polymerase Chain
Reaction) se basa en una replicación exponencial in vitro
que permite generar una gran cantidad de copias de un
fragmento de DNA (ácido desoxirribonucleico) (1). El
requisito fundamental para poder llevar a cabo la
reacción es disponer de fragmentos cortos de DNA de
cadena sencilla complementarios a los extremos del
fragmento a amplificar. Estos fragmentos servirán como
cebadores para que una enzima polimerasa sea capaz
de incorporar nucleótidos complementarios a la cadena
molde (2). Para corroborar la amplificación de la
secuencia blanco de interés, los productos de la PCR o
también llamados amplicones, son analizados en geles
de agarosa para confirmar si la reacción fue exitosa (3). Fig. 1. Condiciones de reacción a los que se sometieron los tubos de
Objetivos: Aprender a manipular los materiales ADN con los master mix y los primers en el termociclador.
necesarios de la reacción en cadena de la polimerasa
para la amplificación de fragmentos de ADN y la
visualización.

Metodología. Primeramente se realizó la reacción en

cadena de la polimerasa con el método del manual de
laboratorio (4) para la cual se realizó una mezcla de
reactivos para realizar PCR y primers con ADN, después
se prepararon los tubos y se colocaron a un
termociclador con ciertas condiciones de reacción y
finalmente guardaron a 4°C. En la siguiente sesión se
realizó la visualización de fragmentos de amplificación
para lo que se siguió el método del manual de laboratorio
(4) con la modificación de la agarosa al 1.5% en TAE 1X;
primeramente se preparó la solución de agarosa en
buffer, se vertió esta solución anteriormente preparada en
un molde, se colocó el gel en la cámara de electroforesis
con TAE 1X, se inyectaron 10 μL de cada muestra en el
gel de agarosa al 1.5% en TAE 1X, se tiñó el gel con
Bromuro de Etidio y finalmente se visualizó en un
transiluminador.
Resultados. Utilizamos un termociclador, como se puede
ver en la fig. 1. Después de que el termociclador se
detuviera, obtuvimos la amplificación de ADN por medio
de PCR. Al seguir con el procedimiento obtuvimos un gel
con sus cavidades llenas de ADN con los mixers y los
primers. Logramos ver la amplificación del ADN de la
región ITS-5.85, como nos muestra la figura. 2. Con
ayuda de la luz UV de un transiluminador, se observan
las 18 muestras de ADN y el marcador de peso molecular
en donde se obtuvieron 1500, 1000 y 500 pares de
bases. Hubo variación en cuanto a la concentración de
ADN de los carriles 7 al 9, aunque estos fueron largos
(1000 pb), las concentraciones eran bajas. La
concentración mayor de ADN se puede observar por la
coloración fuerte de algunos y los de poca concentración
Fig. 2. Electroforesis en gel de agarosa al 1.5 % de productos de
amplificación por PCR. Del carril 5-9 ADN correspondiente al equipo.
Observados en transiluminador con luz UV.
Conclusiones.
En el transcurso de la obtención de los fragmentos de
ADN y el procedimiento para su visualización se destacó
la trascendencia implícita de las sustancias reguladoras
como fueron los primers, fundamentales para la
iniciación de la reacción de PCR resultando útil para la
multiplicación de copias de las muestras de ADN ,
igualmente para la visualización se empleó el
transiluminador de luz UV el cual permitió conocer el
tamaño de las bandas expuestas obteniendo el
establecimiento de la cantidad de pares de bases .
Bibliografía.
1. Sandoval-Rodríguez, A. S., Floresvillar-Mosqueda, J. F.,
Meza-Ríos, A. (2013). Reacción en cadena de la polimerasa.
En: Biología Molecular, Fundamentos y aplicaciones.
McGraw-Hill, México. Pp 145-157.
2. Tamay de Dios L, Ibarra C y Velasquillo C. (2013).
Medigraphic. Vol 2(2):Pp 70-78.
3. Pérez-De Castro, A. M. (2011). Reacción en cadena de la
polimerasa. Universidad Politécnica de Valencia.
4. Verdugo-Valdez, A.M, y Schlie-Guzmán, M.A. (2022). Manual
de prácticas de Biología Molecular. Universidad de Ciencias y
Artes de Chiapas: Escuela de Biología.