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UNIDAD 3: ENZIMAS
Contenidos:
1.- Estructura de las enzimas
2.- Clasificación de las enzimas según el tipo de reacción
3.- Análisis de enzimas para el diagnóstico clínico
4.- Enzimas de uso terapéutico
5.- Cinética enzimática
Velocidad de la reacción química. Estado de transición. Características de las enzimas durante la reacción. Factores que
influyen en las reacciones catalizadas por enzimas: Temperatura, pH y [sustrato]. Inhibidores enzimáticos
6.- Enzimas alostéricas
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1.- Estructura de las enzimas óptima. En nuestro organismo estos iones provienen de los
Las enzimas en su mayoría son de naturaleza proteica con alimentos como el cambur, pescado, vegetales , etc
capacidad para acelerar la velocidad de las reacciones La coenzima transporta componentes para la reacción del
química, aumentan la cantidad de producto por unidad de sustrato, por ejemplo si el sustrato requiere hidrógeno (H)
tiempo. Es evidente el requerimiento de enzimas en la para convertirse en producto, la coenzima cede el
digestión de los alimentos, porque un alimento tipo hidrógeno. Los folatos son coenzimas: transportan grupos
almuerzo debe ser digerido en el estómago y en el metilo y la coenzima A transporta acilo derivado de los
duodeno en menos de 4 horas para que se absorban las ácidos grasos.
pequeñas moléculas resultantes de la digestión: Sitio activo es la región de la enzima donde se une el
monosacáridos, aminoácidos, ácidos grasos y sustrato para convertirse en producto
monoglicéridos. En ausencia de cantidades adecuadas de Sitio regulador es la región de la enzima donde se puede
enzimas digestivas, la absorción es deficiente. Además de unir una molécula o ión como activador para favorecer la
la digestión, las enzimas controlan las reacciones de síntesis estructura de la enzima que tenga la máxima actividad o
y degradación de proteínas corporales, el ADN, unirse un inhibidor para impedir que la enzima actúe.
membranas, células y tejidos. También las reacciones que Algunos inhibidores se originan en la célula otros son
liberan la energía para la motilidad celular, la función fármacos, por ejemplo las estatinas inhiben la síntesis del
neural y la contracción muscular. Toda conversión colesterol en el hígado del paciente
bioquímica está controlada por enzimas específicas. Sustrato Producto
Sitio activo
H
Conocer la estructura de las proteínas (Unidad 2 de la
o
asignatura) es conocer la estructura de las enzimas, no
l
obstante, por la función que ejercen estas proteínas se le Apoenzima
o Zn++
ha asignado nombres a ciertas regiones de la molécula: (parte proteica)
e
Holoenzima es la enzima que contiene todos los
n
requerimientos estructurales para ser funcional
z Cofactor
Apoenzima es la parte proteica de la enzima, en nuestro
i
ejemplo de la figura 1 son las dos cadenas polipeptídicas Sitio regulador Sitio regulador
m positivo,
representadas por las líneas color azul y roja negativo , interactúa el
a interactúa el inhibidor
Cofactor es la parte no proteica de la enzima que se asocia
activador
de forma reversible, puede ser el ion Zn++, Cu+, Se++ u
otro ion, su presencia es indispensable para una catálisis Figura 1. Estructura de una holoenzima
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2.- Clasificación de las enzimas según el tipo de reacción 3.- Análisis de enzimas para el diagnóstico clínico
Considerando el tipo de reacción, las enzimas se agrupan en En varias técnicas diagnósticas se aprovecha la especificidad
6 clases: y eficiencia de las enzimas, son específicas porque una
enzima actúa solamente sobre una o pocas reacciones y son
1.- Oxido-reductasa: Catalizan reacciones de transferencia
eficientes porque aceleran la conversión aumentando la
de electrón o de hidrógeno (El hidrógeno es un electrón más
cantidad de producto por minuto. En el plasma sanguíneo se
un protón). En estas reacciones por lo general participa
puede analizar la presencia de enzimas, utilizando como
como coenzimas el NAD+, NADH, FADH2 y el FAD que
reactivo de laboratorio el sustrato específico para esa
ceden o liberan hidrógeno requerido por el sustrato, en
enzima. Algunas enzimas son constituyentes funcionales de
otras enzimas oxido-reductasa el O2 es quién recibe los
la sangre por ejemplo la lipasa lipoproteica, otras enzimas se
electrones.
liberan a la sangre por lesión de tejidos o muerte celular, por
2.- Transferasa: Transfieren grupos R distintos al hidrógeno. ejemplo la creatincinasa del corazón CK MB se libera a la
Por ejemplo las Enzimas transaminasas transfieren grupos sangre por lesión en el miocardio, su análisis en sangre
amino. contribuye al diagnóstico de un posible infarto al miocardio
Marcadores enzimáticos: son los análisis de las enzimas
3.- Hidrolasa: Estas enzimas catalizan reacciones de
específicas para cada órgano, se pueden analizar en sangre
hidrólisis, con participación del agua (H2O) como sustrato.
porque la inflamación de los tejidos incrementa la
Por ejemplo, las peptidasas, que requieren de H2O para
concentración de las enzimas liberadas a la sangre. Veamos
separar los aminoácidos de las proteínas.
dos ejemplos:
4.- Liasa: Catalizan reacciones de remoción (separación) de 1.- Marcadores hepático: las enzimas alanina
grupos sin necesidad de la participación del H2O. Muchas aminotransferasa y aspartato aminotransferasa (AST),
veces se forman enlaces dobles C=C conocidas como: transaminasas, se analizan para evaluar
daño hepático, aunque la AST también es una enzima de
5.- Isomerasa: Cataliza interconversión de isómeros, por
corazón, músculo esquelético y del riñón, pero su análisis en
ejemplo la conversión del cis-retinol en trans-retinol.
sangre contribuye al diagnóstico de una posible hepatitis.
6.- Ligasa: Enlaza diferentes sustratos, se requieren en la 2.- Marcadores cardíaco: Las enzimas lactato dehidrogenasa
síntesis de moléculas de gran tamaño, requiere de la energía (LDH) y creatincinasa (CK) se liberan del miocardio
del ATP. inflamado y pueden ser analizadas en sangre. La LDH
contiene 4 cadenas polipeptídicas que pueden ser H (de
Heart) o M (de Músculo) y cataliza la última reacción de la

glucólisis anaerobia por tanto es un indicador de isquemia o
baja irrigación sanguínea del miocardio, pero su presencia
en la sangre puede ser también porque se liberó del
músculo o del hígado, no obstante la que tiene las 4 cadenas
idénticas HHHH predomina en el corazón.
La CK es un dímero y sus cadenas polipeptídicas pueden ser
distintas: M o B, si es de origen muscular las dos cadenas
polipeptídicas serán MM, si el origen es el cerebro las
cadenas serán BB ( del inglés Brain), mientras que la CK del
corazón es CK MB por lo tanto se puede reconocer el
órgano que la liberó a la sangre. No obstante la CK MB
también se puede liberar a la sangre desde el músculo
estriado por eso los análisis de enzimas contribuyen al
diagnóstico pero deben ir acompañado de una evaluación
clínica integral. La enzima LDH HHHH es específica pero
tiene la desventaja que su concentración es alta a las 48
horas del infarto (Figura 2)
encima del valor normal
CK MB
Número de veces por
LDH HHHH
Tiempo desde el inicio del infarto (horas)
Figura 2. Aumento de las enzimas CK MB y LDH durante las
primeras horas después del infarto.
El valor más alto de la CK MB es entre 12 y 24 h. Para la LDH
HHHH es a las 48 h
4
El término “isoenzimas” se utiliza para referirse a
enzimas que catalizan las mismas reacciones pero su
estructura es diferente, por ejemplo para la CK existen
isoenzimas del cerebro, músculo y corazón, estas son: CK
BB, CK MM y CK MB respectivamente.
4.- Enzimas de uso terapéutico
Las enzimas digestivas hidrolizan los almidones,
triacilglicéridos, proteínas y el ADN de los alimentos para
formar moléculas pequeñas que puedan ser absorbidas
con facilidad en el intestino delgado. Un organismo sano
las produce pero también se encuentran disponibles en
casa naturistas, para su uso temporal hasta realizar el
tratamiento adecuado en el paciente.
Nombre y función de las enzimas digestivas:
Amilasa: Enzima que hidroliza o digiere los almidones
Lipasa: Enzima que hidroliza o digiere los triacilglicéridos
Proteasa: Enzima que hidroliza o digiere las proteínas
Lactasa: Enzima que hidroliza la lactosa de productos
lácteos en glucosa y galactosa
Nucleasa: enzima que hidroliza el ADN y ARN de los
alimentos
Figura 3. Enzimas digestivas de uso terapéutico
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Otros usos de las enzimas: Las enzimas proteasas de la 5.- Cinética enzimática
lechoza verde o de la piña se utilizan para ablandar cortes
La cinética es el campo de la bioquímica que estudia la
de carne, antes de cocinar se aplica para que el colágeno
velocidad de conversión o reacción de las moléculas y los
de la carne se hidrolice con las enzimas de origen vegetal.
parámetros que la modifican
También existen enzimas que se utilizan para la limpieza
porque degradan las grasas sin producir cambios en otros Velocidad (V) de la reacción química. La V es la
componentes concentración de sustrato (S) que desaparece por unidad de
tiempo, puede ser un minuto o un segundo, también se
puede definir como la concentración de producto (P) que se
forma en un minuto o en un segundo (Figura 5a y 5b)
[S] [P]
Figura 4. Las enzimas proteasas de la lechoza hidrolizan el
colágeno del alimento, aumentado la digestabilidad de las
proteínas y la absorción de los aminoácidos
tiempo tiempo

Figura 5. Disminución de [S] con el tiempo o aumento de [P]

con el tiempo para determinar la velocidad de una reacción
Algunos reportes de enzimas se realizan en unidades (U) y
este valor representa la cantidad de enzima que cataliza la
formación de 1 micromol de producto en un segundo
Estado de transición. es la forma inestable de alta energía
que adquieren las moléculas entes de convertirse en
producto. En el siguiente ejemplo el sustrato ( A-X )
contiene el grupo X que será transferido al sustrato B, esta
reacción se acelera en presencia de la enzima específica
para formar el producto X-B . El compuesto intermediario o
de transición sería el A..X..B , en donde el X se ha liberado
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solo parcialmente de A y no ha sido completamente recibido Características de las enzimas durante la reacción.
por B (Figura 6)
1.- La enzima mantiene su configuración globular al final de
A-X + B = A..X..B  A + X-B la reacción, por lo tanto, es reutilizada para catalizar
Intermediario o de muchas reacciones idénticas, hasta que se desnaturaliza
transición
Por eso se requiere poca enzima para convertir altas
Figura 6. Formación del compuesto de transición o
concentraciones de sustratos, ejemplo en la digestión del
intermediario A..X..B antes de convertirse en producto
almidón de los alimentos (de harina de maíz, de trigo, de
Las enzimas aumentan la velocidad de reacción porque yuca, de plátano) que pueden ser 200 gramos de almidón en
disminuyen la energía requerida para formar la estructura un plato de comida, solo se requieren miligramos de la
de transición (Figura 7) por eso con enzimas, la velocidad de enzima amilasa
la reacción aumenta, hay más producto por unidad de
2.-Las enzimas no modifican la constante de equilibrio (Keq)
tiempo
de la reacción, pero aumentan la velocidad de la reacción
Con las enzimas no se obtiene más producto porque la
Sin enzima constante de equilibrio que representa la relación
A..X..B
Con enzima Producto/Sustrato no cambia. La enzima aumenta la V de la
Energía libre, G
Energía libre, G

∆G*
A-X
A-X
X-B
Tiempo de reacción
Figura 7. Con enzima disminuye la barrera energética
para convertir sustratos en productos. Disminuye la
energía ∆G* para formar el estado de transición A..X..B
La energía libre de Gibs ( G ) es la energía requerida para
una reacción, cuando se mide la diferencia entre el
sustrato y el estado de transición se escribe ∆G*
A..X..B
∆G* reacción, la hace más rápida, pero no aumenta la cantidad
de producto, esto equivale a decir que se llega al equilibrio
X-B
en menor tiempo. Del ejemplo anterior, 200 gramos de
almidón van a producir la misma cantidad de glucosa con
Tiempo de reacción
una digestión lenta o rápida, pero el tiempo es importante
para los eventos fisiológicos, por ejemplo, la enzima amilasa
pancreática digiere el almidón en pocos minutos,
importante porque luego del vaciamiento gástrico al
duodeno, viene la absorción y el tránsito hacia el intestino
grueso del contenido no absorbido. Si no se absorbe a
tiempo estos nutrientes no serán aprovechados por el
paciente y quizás lo utilicen las bacterias.

Parámetros que influyen en las reacciones catalizadas por
enzimas. Evaluaremos el efecto de dos variables que
afectan la estructura de las proteínas y por tanto a las
enzimas: la temperatura y el pH, también el efecto de la
concentración de sustrato [S] en la velocidad de reacción.
Bajas temperaturas disminuyen el movimiento de las
moléculas en medio acuoso y altas temperaturas rompen los
enlaces débiles y los puentes de hidrógeno, modificando su
estructura globular. Si iniciamos la evaluación aumentando
la temperatura desde 20 oC, aumentará la colisión entre los
sustratos y la enzima y por tanto aumentará la velocidad de
reacción, pero el aumento de temperatura modificará la
forma con máxima actividad de la enzima, por eso la
mayoría de enzimas tienen una temperatura óptima, en el
organismo humano la T óptima es 37 oC (Figura 8)
Figura 8. Efecto de la temperatura en la velocidad de una
reacción enzimática
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El pH modifica las cargas de los grupos ionizables amino y
carboxilo (Figura 9) que cambiarán la estructura terciaria.
~~~NH2 + H+ = ~~~NH3+
~~~COO- + H+ = ~~~COOH
Figura 9. Cambio de estructura de los grupos ionizables de
las enzimas por los protones (H+)
Si la actividad óptima de una enzima está relacionada con
las cargas positivas y negativa de la molécula, entonces
existe un pH óptimo para cada enzima. Este pH óptimo en
el organismo varía dependiendo de la célula o cavidad del
órgano donde cumple su función. Por ejemplo la enzima
lipasa lipoproteica de la sangre tiene un pH óptimo de
7,35, pero la pepsina que se sintetiza a partir del
pepsinógeno secretado por las células de las glándulas
fúndicas u oxínticas del estómago tienen un pH óptimo de
aproximadamente 1 (Figura 10).
Figura 9. pH bajo o alto respecto al pH óptimo, disminuye
la velocidad de una reacción enzimática

El aumento de la concentración de sustrato, aumenta la
velocidad de la reacción hasta que toda la enzima se satura de
sustrato en su sitio activo. Cuando la enzima está saturada no
aumenta la velocidad de la reacción con la adición de
sustrato, entonces se habrá alcanzado la velocidad máxima.
La forma de la curva que relaciona V y [S] varía dependiendo
de la estructura de la enzima y del tipo de reacción.
Se describe la relación hiperbólica que caracteriza a las
reacciones que siguen la cinética de Michaelis-Menten donde
la reacción es de un solo sustrato y un solo producto y la
constante de equilibrio de la unión del sustrato con la enzima
( S + E = SE ) no es muy grande, por tanto existe enzima con
sitios activos libres para unirse al sustrato que se adicione,
hasta que la enzima se sature (figura 10). En la cinética de
Michaleis-Menten también se establece que el complejo SE
forma producto y libera la enzima de forma irreversible. Las
dos reacciones consecutivas: S + E = SE  P + Enzima
f cantidad de sustrato que permite alcanzar la mitad de la
i relación V vs [S], no obstante, en la figura 12 se incluyen
Figura 10. Efecto del aumento de [S] sobre la velocidad
enzimática, considerando la cinética de Michaelis-Menten
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A concentraciones elevadas de sustrato, la enzima está
saturada porque la velocidad de reacción no incrementa
en la proporción que ocurre entre los puntos i f de la figura
10. La saturación de una enzima significa que todas las
moléculas de enzimas tienen el sitio activo interactuando
con el sustrato (Figura 11)
Figura 11. Representación de una enzima saturada con el
sustrato (color rojo) y el producto (color azul) saliendo del
sitio activo
Existen dos parámetros importantes en la curva de la
figura 10: La velocidad máxima (Vmax) y la constante de
Michaelis-Menten (Km). La Vmax es la velocidad de la
reacción cuando la enzima está saturada y la Km es la
Vmax (Figura 12). La figura 10 y 12 representan igual
los parámetros Vmax y Km.
Considerando las características de la reacción:
S + E = SE  P + Enzima, evaluada por Michaelis y
Menten con una reacción de un solo sustrato y donde la
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velocidad depende solo de la [S], la relación
matemática entre la velocidad de formación de
producto y [S] es la ecuación de Michaelis y Menten:

Vmax [S]
V formación de P = ----------------
Km + [S]

De esta ecuación, si V formación de P es igual a ½ de

Vmax, al reemplazar:

Vmax [S]
½ Vmax = ----------------
Km + [S]
Reordenando: Figura 12. En la cinética de Michaelis-Menten, Km es igual a
[S], cuando la velocidad de formación de producto es ½ de V
Vmax . (Km + [S]) = 2 Vmax . [S] máxima

Eliminando Vmax a ambos lados de la igualdad La enzima que posea un Km menor, requiere poco sustrato
para alcanzar la Vmax / 2, por tanto a Km menor, hay mayor
Km + [S] = 2 [S] afinidad de la enzima por el sustrato porque con poco
sustrato alcanzará el mismo valor de ½ Vmax respecto a otra
Equivale a enzima que posea un Km alto.
Km = [S]
igualdad que se cumple sólo si la velocidad es ½ de
Vmax
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Inhibidores enzimáticos. Las células requieren V
concentraciones específicas de las sustancias que la
componen. Las enzimas favorecen la síntesis pero las Vmax no cambia
reacciones deben ser reguladas para alcanzar valores
normales de concentración.
En algunas condiciones fisiológicas, las enzimas deben curva color rojo es con
estar muy activas y en otras deber ser inhibidas, por Inhibidor competitivo
ejemplo en los hepatocitos (células hepáticas) de un
individuo sano cuando los niveles de colesterol son [S]
elevadas, se inhibe la enzima HMGCoA reductasa que
participa en la síntesis del colesterol. El colesterol y los
fármacos derivados de estatina inhiben esta enzima. Figura 13. Efecto del inhibidor competitivo (línea color
rojo). La Vmax no cambia, pero Km aumenta con el
Los inhibidores se clasifican según su mecanismo de Inhibidor competitivo
acción en:
Inhibidores reversibles Los inhibidores no competitivos ejercen su acción de
Inhibidores irreversible forma reversible en regiones distintas al sitio activo,
Los Inhibidores reversibles se clasifican en reversibles disminuyen la V max pero no modifican la Km (Figura 14)
competitivos y reversibles no competitivos. Los
inhibidres competitivos tiene similitud estructural con
el sustrato de la reacción, por tanto compiten con el
sustrato por el sitio activo, pero no forman producto
como el sustrato, no obstante, mediante este
mecanismo disminuye la velocidad de formación de
producto, pero a altas concentraciones de sustrato,
queda anulada la acción del inhibidor, alcanzando con
este inhibidor la misma velocidad máxima que la
reacción sin el inhibidor (Figura 13). Con los inhibidores Figura 14. Efecto del inhibidor no competitivo (línea color
competitivos, la Vmax no cambia, pero Km aumenta rojo). La Vmax disminuye, pero Km no se modifica con el
Inhibidor no competitivo

Inhibidores irreversible: El inhibidor irreversible se une
permanentemente a la enzima. Útil si el inhibidor de la
enzima es un fármaco o producto natural y se une a una
enzima de células cancerosas. Pero también hay
venenos que se unen de forma irreversible a las enzimas
de las células sanas, por ejemplo el mercurio de la
industria minera y el plomo o el estaño cuando se
calienta para fundirlo en la industria de baterías.
Figura 15. La hormona insulina regula la glucólisis por acción
activadora del 5AMP sobre una enzima alostérica
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6.- Enzimas alostéricas
Estas enzimas poseen sitios activos (donde el sustrato se
convierte en producto,) y sitios reguladores (donde
actúan activadores e inhibidores de la enzima). Por lo
general la integran varias cadenas polipeptídicas, la
enzima de la figura 1. La cinética de estas enzimas no es
hiperbólica, no sigue la propuesta de Michaelis Menten,
más bien es de forma sigmoidea
Las enzimas alostéricas participan en dos eventos:
1.- En el control hormonal del metabolismo. Las
hormonas de forma directa o indirecta activan o inhiben
las enzimas alostéricas, por ejemplo la hormona Insulina
aumenta la concentración del 5AMP (5adenosin
monofosfato), que activa la enzima convertidora de la
frustosa 6-fosfato (F6P) en frustosa 1,6 bifosfato (F 1,6BP)
de la glucólisis (Figura 15) que estudiaremos en una
unidad 7 de la asignatura bioquímica.
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2.- Las enzimas alostéricas participan en el control por
retroalimentación donde los productos de otras
reacciones inhiben la enzima alostérica de reacciones
ubicadas al inicio de la vía metabólica (Figura 16), el
ATP inhibe la enzima alostérica de la primera reacción
S1S2. Observe que el ATP también inhibe la
reacción S5 S6 en este caso hipotético, de esa forma
controla la cantidad de ATP que se pueda sintetizar por
esta vía metabólica (vía es un conjunto de reacciones
que en secuencia conduce a la formación de un
producto)

S6 S7 P1 (ATP)

E5 -
S1 S2 S3 S4 S5
E1
S6 S7 P2
Inhibición de la
enzima E1 por el ATP

Figura 16. Control por retroalimentación de una vía

metabólica, mediante la inhibición de la primera reacción
por el producto final de la vía metabólica
 Cuestionario de la Unidad Enzimas
1. Defina: apoenzima, cofactor, sitio activo y sitio regulador de las enzimas
2. Diferencie las enzimas oxido-reductasa e hidrolasa
3. Explique los marcadores enzimáticos hepático
4. Explique los marcadores enzimáticos cardiaco
5.- Defina el término “isoenzimas”
6. ¿Cuál es la función de las enzimas amilasa y lipasa?
7. ¿Cuál es la función de la enzima lactasa y proteasa?
8. Defina: velocidad de una reacción química en función del
a) sustrato y
b) del producto

9. Defina “estado de transición de una reacción” y describa cómo influyen las enzimas en la energía de transición
10. Mencione dos características de las enzimas
11. ¿Por qué bajas temperaturas, disminuyen la velocidad de las reacciones enzimáticas?
12. ¿Por qué altas temperaturas, disminuyen la velocidad de las reacciones enzimáticas?
13. ¿El pH modifica la actividad de las enzimas?, explique su respuesta
14. Bajo que circunstancia considera que una enzima está saturada?
15. ¿Qué es la velocidad máxima de una enzima y que rpresenta la Km de una enzima que sigue la cinética de Michaelis-
Menten?
16. ¿Describa los inhibidores competitivos y que efectos producen en la velocidad máxima?
17 ¿Describa los inhibidores no competitivos y que efectos producen en la velocidad máxima?
18. Explique la relación entre una enzima alostérica y la hormona insulina
19. ¿Qué es el “control por retroalimentación” en las reacciones enzimáticas?