La Biotecnología moderna

en el contexto ecuatoriano

CASOS DE ESTUDIO
SOBRE EDICIÓN GÉNICA
EN BIOTECNOLOGÍA

>

MÓDULO 3
 OBJETIVO
En esta sección del curso,
nos enfocaremos en analizar
algunos casos de aplicación de
la técnica de edición génica en
investigación biotecnológica.

< >
ACLARACIÓN
Los casos que se analizarán
aquí son reales, tomados de
los artículos científicos de
cada investigación, y que esto
no representa que este tipo de
tecnología se esté aplicando
aún de forma masiva, ni
cotidiana.

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 CASO DE
ESTUDIO #1
En este caso de estudio,
analizaremos dos tipos de
anemias genéticas:

1) la anemia falciforme o
drepanocítica, causada por
una mutación puntual (una
sola letra) en el ADN del gen
de la ß-hemoglobina.

Esta mutación hace que el

glóbulo rojo se deforme y se
presente en forma de media
luna (Figura 1).

Esta anormalidad provoca

que los glóbulos rojos
no pueden transportar

< >
eficientemente el oxígeno y (Figura 1) Glóbulos rojos.
el dióxido de carbono en el
cuerpo, y son reconocidos
por el bazo, el cual los genera un desbalance en la
destruye. formación de la hemoglobina
total, generando glóbulos
También provoca otros rojos anormales, los cuales
síntomas como bloqueos son destruidos por el bazo
arteriales y venosos, (hemólisis), provocando
hinchazón de extremidades, ictericia y otros síntomas.
por la forma anormal de
los glóbulos rojos, ictericia Estas anemias no responden
por la hemólisis provocada a la aplicación de hierro, por lo
por el bazo y en casos muy que el tratamiento estándar
graves, hasta la muerte. para estas enfermedades
consiste en la transfusión
Por otra parte, la ß – permanente de concentrados
talasemia es un trastorno de glóbulos rojos, o
sanguíneo, provocado otra trasplante de médula ósea
mutación puntual (una de un donador sano. Ante la
sola letra) en ADN del dificultad del tratamiento
gen de la ß-hemoglobina, de esta enfermedad, los
haciendo que disminuya la investigadores de este
cantidad de ß-hemoglobina artículo diseñaron una
presente en la sangre, lo que estrategia para corregir estas

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 mutaciones en los genes de y se midió la saturación de
la ß-hemoglobina utilizando oxígeno de estos animales.
el método CRISPR/Cas9 de
edición génica. Como resultado del estudio,
se revirtió en gran medida la
Para resolver este problema anemia falciforme y la beta
diseñaron dos ARNs guía: – talasemia en animales
tratados a nivel experimental,
Uno dirigido a corregir la pues se reestableció la
mutación que causa la cantidad y calidad de la beta
anemia falciforme; y el – hemoglobina en su sangre,
otro dirigido a corregir la alcanzando los niveles de un
mutación que causa la beta – individuo saludable.
talasemia. Para ello aislaron
de la médula ósea de los En este caso, la edición
pacientes enfermos, las génica, aplicada a este
células madre que originarán caso, usando el mecanismo
los glóbulos rojos afectados CRISPR/Cas9 es una prueba
por la anemia falciforme y más del potencial de esta
por la beta – talasemia. técnica para convertirse
en una alternativa de
Luego, estas células tratamiento permanente
se sometieron a para enfermedades

< experimentación en ratones derivadas de mutaciones

para saber si se habían genéticas.
corregido las mutaciones
>
causantes de estas Sin embargo, para que
enfermedades. pueda ser aplicada, deben
afinarse ciertos aspectos
Para ello miraron al técnicos que impedirán
microscopio las células el aparecimiento de
sanguíneas y analizaron los mutaciones indeseadas
contenidos de hemoglobina durante el tratamiento.

ßs ßs (sin editar) ßs ßs (editados)

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 CASO DE
ESTUDIO #2
< >
En otra área de las ciencias
biológicas, un grupo de
científicos buscó mejorar las
características de la cebada
cervecera, modificando la
presencia de unas proteínas
denominadas hordeínas,
que causaban que la
cerveza tenga un sabor
desagradable.
Las hordeínas son unas
proteínas de reserva de la
cebada que representan
aproximadamente el 50%
(Figura 1)
de las proteínas totales del
grano de cebada.
El objetivo del estudio es editar
los genes de las hordeínas,
para evitar su aparecimiento
en el grano de cebada y que
se incremente la calidad de la
cerveza obtenida.
Para este caso en particular, los
investigadores desarrollaron
una metodología de CRISPR/
Cas9 para dirigir la modificación
hacia los genes de las hordeínas.
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< de las hordeínas, lo cual era
La edición consiste en
modificar ciertas secuencias
para inactivar la expresión
de estas proteínas y evitar
que estas se acumulen en
el grano de cebada. Para
ello, utilizaron una variedad
de cebada que la hicieron
crecer en invernadero.
Paralelamente, diseñaron
los ARNs guía y los insertaron
en un vector bacteriano,
junto con el ADN de la
endonucleasa Cas9.
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Este vector bacteriano a su
vez fue introducido en una
bacteria para multiplicarlo
y tenerlo en grandes
cantidades, para después
introducirlo nuevamente en
la bacteria Agrobacterium
tumefaciens y transformar a
las plantas de cebada.
Una vez transformadas y
regeneradas las plantas,
estas fueron analizadas
para ver si efectivamente,
se eliminó el gen de las
hordeínas, analizando la
expresión de los genes
por PCR cuantitativa y
verificando la ausencia de
las proteínas en el grano de
cebada. Como resultados
de la investigación, se logró
silenciar con éxito los genes
el objetivo principal. >
Adicionalmente, los estudios
genéticos determinaron que
no existieron modificaciones
no planificadas en la cebada,
lo que hace que este método
sea totalmente específico.
Finalmente, el perfil proteico
de las hordeínas en la cebada
fue disminuido casi a cero.
Como conclusión de este
caso, esta metodología se
muestra prometedora para
mejorar características
puntuales de ciertos
alimentos, sin afectar a las
otras características como
la productividad, el sabor,
el olor, la contextura, entre
otras.
 CASO DE
ESTUDIO #3

< >
Fotobiorreactor de vidrio tubular para el cultivo de microalgas y otros organismos fotosintéticos.

En la actualidad, la mayor será la alteración en el

necesidad de combustible clima, con las consecuencias
se ha vuelto mucho más que observamos hoy en día.
imperiosa que en años
anteriores. Esta sed Por esta razón, es de vital
insaciable por petróleo importancia la búsqueda
de la humanidad está de otras fuentes de
pasando factura al planeta, combustibles, más amigables
con los niveles de dióxido con el ambiente y que además
de carbono más altos que sean renovables (el petróleo
nunca en la historia. no es renovable, por lo que el
producto de la combustión
Este gas atrapa el calor se acumula).
del sol y lo mantiene en
la Tierra, haciendo que las En esta nueva línea de fuentes
temperaturas aumenten (el de energía renovable están
famoso efecto invernadero) los biocombustibles, que no
alterando de esta forma al son más que combustibles
clima global. similares al petróleo, pero cuya
fuente es capaz de renovarse,
A mayor cantidad de dióxido reciclando el dióxido de
de carbono en la atmósfera, carbono de la atmósfera.

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 Estos biocombustibles en biocombustibles, pero su
pueden ser alcoholes producción sigue siendo baja
(Bioetanol) o aceites todavía.
(Biodiésel). En la actualidad,
las plantas y las algas son Es por esta razón que se hace
los mayores productores necesario el mejoramiento de
de biocombustibles, sin estos cultivos de algas, para
embargo, su producción que aumenten la producción
es marginal, debido a la de estos aceites y su cultivo
< dificultad de cultivarlos, y a
la poca eficiencia energética
de los mismos.
sea rentable, con el fin de
abandonar la explotación y
uso del petróleo como fuente
>
energética (en el mediano y
Las microalgas son largo plazo).
microorganismos
fotosintéticos que colonizan Con estos antecedentes, un
el agua dulce o salada. No grupo de científicos buscó la
son plantas, pero tienen manera de mejorar a la especie
una función similar: captar Phaeodactylum tricornutum,
el dióxido de carbono de la un alga de agua salada que
atmósfera y convertirlo en produce triglicéridos. Los
más algas. Su metabolismo triglicéridos, después de un
es mucho más rápido y proceso de refinamiento
eficiente que el de las plantas, se pueden convertir en un
en cuanto a la fijación de biocombustible.
carbono.
La modificación de esta
Adicionalmente, se ha especie se realizó utilizando
descubierto que las algas la tecnología TALEN para
son una gran fuente aumentar la cantidad de este
de aceites livianos, con triglicérido, por inactivación
potencial para convertirse de una enzima esterasa

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 (enzima que destruye los
triglicéridos).

Para hacerlo, primero

identificaron esta enzima
tioesterasa que degradaba
los triglicéridos (llamada
Hotdog-fold thioesterase
porque tiene la forma de
un perro caliente). Una vez
Phaeodactylum tricornutum.
encontrada, diseñaron una
TALEN para silenciar este
gen. identificar la zona del
ADN que ha sido editada,
La endonucleasa utilizada en acompañado de ensayos
la TALEN permaneció como enzimáticos para determinar
secreto, pues forma parte la actividad residual de la
de un kit comercial. Estos enzima tioesterasa.
vectores con las secuencias
de las TALENS ensambladas Los ensayos de modificación
y ya unidas a la secuencia determinaron que se editó
de la endonucleasa fueron apropiadamente el gen de la
producidos en masa en tioesterasa, evidenciando en

< >
cultivos de bacterias, con el ADN y ARN la modificación
el objetivo de tenerlos en (La edición de la secuencia
grandes cantidades para la y la baja presencia del ARN
transfección. mensajero) y la actividad de
la enzima (Baja cantidad de
Una vez listo el vector con la la misma).
transformación, se modificó
el ADN del alga, utilizando Además, la incidencia
la técnica de biobalística, de modificaciones no
disparando partículas de oro, planificadas fue mucho
cargadas con la secuencia menor, lo que abre las
de la TALEN, a las células de posibilidades de mejorar la
la microalga. Se incubaron producción de estas algas,
durante un tiempo, para sumar esfuerzos en el
esperando que estén listas proceso de renovación de las
para verificar si la edición fue fuentes energéticas que usa
exitosa. la sociedad.

Para comprobar la La investigación en el área

efectividad de la edición,
realizaron PCRs cuantitativas
para determinar la expresión
de la tioesterasa, y luego
una secuenciación para
de la edición génica no se
detiene. Sigue en constante
avance y cada vez se
desarrollan más estudios y
mejoras a la técnica.

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