Universidad Católica de Santa María

Escuela Profesional de Medicina Veterinaria y Zootecnia

Microbiología General

INFORME DE PRÁCTICA

A : M V Z. Eloisa Zúñiga Valencia

Docente de Prácticas.

De : Winivere Palacios Valdivia

Alumno

Asunto : Práctica #7: “Sensibilidad Antibiótica”

Fecha : 27/08/2020
 PRÁCTICA #11

“Sensibilidad Antibiótica”
1. INTRODUCCIÓN:

En microbiología clínica es muy importante aislar los agentes causales de

infecciones para identificarlos y determinar su sensibilidad a agentes
antimicrobianos. El antibiograma es el estudio de la sensibilidad in vitro de las
bacterias a los antibióticos, un tipo de agente antimicrobiano. Existen diversos
tipos de antibióticos. Los antibióticos son herramientas imprescindibles para
el tratamiento de infecciones bacterianas con el fin de preservar la sanidad
animal y, por tanto, el bienestar animal y la bioseguridad alimentaria.

2. OBJETIVOS:

 Reconocer la importancia de las pruebas de senilidad antibiótica

 Desarrollar la técnica de Antibiograma.

3. MARCO TEORICO:

La prueba de sensibilidad es una herramienta muy útil porque permite

determinar el antibiótico más adecuado para el paciente. Desafiar al
microorganismo frente a antibióticos con concentraciones conocidas. Busca
determinar la sensibilidad del microorganismo frente a agentes antimicrobianos.
La reacción in vitro en las que esperamos en nuestros pacientes. El reporte que
da el laboratorio no solo nos da el patógeno sino también se receta los
antibióticos que se deberían usar.

 MÉTODOS:

 METODO DISCO DISFUSION DE AGAR:

Se prepara un agar especial Mueller Hinton, después de inocular la bacteria

se deposita círculos de papel impregnados de antibióticos a una
concentración conocida. También se les llama sensidiscos. El papel
humedecido liberara el antibiótico de manera progresiva, donde el
antibiótico difunda va a inhibir el desarrollo bacteriano de manera tal que
cuando se observa el cultivo veremos zona de inhibición de crecimiento
bacteriano y esto será en función al poder que tiene el antibiótico afecta a la
bacteria. Luego de un tiempo de incubación a 37º C durante 24 horas, se
observan los halos de inhibición de cada uno de los antibióticos ensayados
sobre la cepa correspondiente. El diámetro del halo de inhibición del
 crecimiento se utiliza como indicativo de la sensibilidad o resistencia a
cada antibiótico. Medir los diámetros de las zonas de inhibición completa
(incluyendo el diámetro del disco), usando una regla o calibrador. Se debe
mantener iluminada la parte posterior de la placa petri con una luz reflejada
localizada a unos cuantos centímetros sobre un fondo negro. Tener la
precaución de observar la placa siguiendo una vertical directa para evitar
una lectura errónea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo. Se
da una apreciación cualitativa, puede ser que el microorganismo es sensible
a la acción del antibiótico, resistencia lo que significa que la zona de
inhibición es pequeña o intermedio lo que es una reacción de ambos. Es
una prueba cualitativa.

Fig.1: Método disco difusión de Agar

 Factores que influyen en la susceptibilidad antimicrobiana:

Composición del agar Se recomienda no exceder unos 5ml.

Profundidad del agar
Densidad del inoculo Son los microorganismos que han sido preparadas
para ser vertido en la placa, tiene que ser una densidad de microorganismo
estandarizada para que los resultados sean correctos.
Concentración del antimicrobiano en el disco.
Tiempo de aplicación de los discos
Temperatura de la incubación
Tiempo de la incubación
PH del medio

 Agar Mueller Hinton: Tiene una buena reproductibilidad trabaja

estandarizadanmente, tiene un bajo nivel de inhibidores de sulfonamidas,
trimetroprima y tetraclina. Es adecuado para el desarrollo de la mayoría de
bacterias patógenos.
 Existen suficientes datos recopilados que avalan la experiencia de otras pruebas
de sensibilidad realizadas en este medio.

Fig.2: Agar Mueller Hinton

 Estándar de la turbidez McFarland: Es el estándar para preparar el inoculo a

la densidad de microorganismo conocida. El estándar es un tubo de ensayo con
un líquido turbio. Es una turbidez medida, este tubo de ensayo se guarda y se
utiliza para comparar el inoculo. Se prepara con sulfato de bario 0.5 escala de
McFarland. La turbidez no debe de variar.
 Preparación de inoculo: Se necesita cultivo puro, tomo una pequeña
cantidad de este y se diluye en un tubo de ensayo, puede ser caldo
nutritivo, la turbidez debe equivaler al estándar previamente preparado Se
une con un papel con bandas blancas para comparar la turbidez.

Fig.3: Estándar de turbidez McFarland.

 Fig.4: Comparación de turbidez.

 Inoculación: Se toma el tubo, se empapa un hisopo de algodón largo, luego

se aprieta en las paredes del tubo y se siembra las superficies del medio en
forma de estría menuda. Tiene que haber una dispersión homogénea del
microorganismo en todas las superficies del medio para obtener un
crecimiento es césped.

Fig.5: Inoculación en césped.

Se puede colocar también una pequeña cantidad de inoculo, se toma una

espátula metálica y se esparce, en ambos casos se debe obtener crecimiento en
césped. No debemos pasarnos de los 15 minutos en inocular la densidad
bacteriana va a aumentar.
De ahí se aplican los discos de antibióticos, vienen de forma comercial y no se
deben tocar con la mano, se toman con una pinza estéril, se acomodan los discos
sobre la superficie del medio. Se colocan de una forma equidistante, debe de
haber 25mm si se forma un halo de división pueden cruzarse, además el mismo
disco mide 6mm. No se deben de exceder los 15 minutos.

Fig.6: Aplicación de los discos de antibióticos.

 Incubación: Se coloca el cultivo a 25°C durante 24 hrs.

 Lectura: Se mide en mm el diámetro que se ha formado, también se

utiliza un vernier la forma de colocar la medida es el diámetro, se debe de
ir de un borde a otro borde. Aquellos halos más grandes dirán que el
antibiótico tuvo una buena acción. Si los halos son intermedios la acción
del antibiótico fue intermedia.

Fig.7: Medición de los discos de antibióticos.

  Como se selecciona los discos:

Eficacia clínica documentada.

Representatividad de una familia de antibióticos
Disponibilidad de criterios técnicos fiables para la determinación in
vitro de su eficacia clínica.
Estabilidad de la molécula en los discos de sensibilidad.
Presencia en el mercado nacional
Importancia para la vigilancia de la resistencia bacteriana.

 Para cada microorganismo lo antibióticos se puede clasificar dentro

de 2 grupos:

 Grupo 1: En este grupo se encuentran los antibióticos de base

indispensables para orientar el tratamiento de las diferentes
infecciones, cuya inclusión en el antibiograma y reporte de los mismos
es de carácter OBLIGATORIO (Ver sección del agente).
 Grupo 2: Este grupo reúne antibióticos complementarios cuya
inclusión en el antibiograma y reporte es de carácter OPCIONAL, pues
depende de los esquemas de antibioterapia vigentes en cada hospital y
de la epidemiología local de la resistencia bacteriana (Ver sección de
cada agente).

Tabla referencial para evaluación de los halos de inhibición en la prueba de

antibiograma

Medida del halo de inhibición en

Abreviatur Concen mm
Antibiótico
a tr. ug Resistent
Intermedio Sensible
e

Ampicilina AM 10 20 21 – 28 29

Amikacina AN 14 15 -16 17

Aureomicina A 14 15 – 1 19

Bacitracina B 8 9 – 12 13

Cefalosporin CR 14 15 – 17 18
a

Cloramicetin C 12 13 – 17 18
a
Colimicina CL 8 9 – 10 11

Eritromicina E 13 14 – 17 18

Gamrisin G 12 13 – 16 17

Gentamicina Gm 12 13 – 14 15

Kanamicina K 13 14 – 17 18

Lincomicina L 13 14 – 17 18

Meticilina ME 9 10 – 13 14

Ac. NA 14 15 – 18 19
Nalidixidico

Novobiocina NB 17 18 – 21 22

Oxacilina OX 9 10 – 13 14

Penicilina P 20 19 – 28 29

Polimcina B PB 8 9 – 11 12

Estreptomici S 11 12 – 14 15
na

Sulfadiazina SO 12 13 – 16 17

Triple sulfa SSS 10 11 – 15 16

Tetraciclina TE 14 15 – 18 19

Tobramicina TM 12 13 – 14 15

 Resistencias naturales:

Los estafilococs son resistentes ácidos nalidixico, ácido pipemídico y

aztreonam.
Enterococos son resistentes a oxaxiclina, cefalosporinas,
clindamicina y cotrimoxazol.
Acinetobacter son resistentes a Penicilina, Ampicilina, amoxicilina y
cefalosporinas de primera y segunda generación.
Pseudomonas aeruginosa es resistente a Penicilina, Ampicilina,
Amoxicilina, cefalosporinas de primera y segunda generación,
Cefotaxima, Ceftriaxona, Kanamicina, Tetraciclina, Cloramfenicol,
ácidoNalidixico y ácido Pipemidico.
 Las enterobacterias son resistentes a Penicilina, oxaxiclina,
Macrólidos, Clindamicina y Glicopéptidos.

 METODO DE EPSILON TEST E-TEST:

Consiste en tiras de plástico no poroso de 6cm de largo por 5mm de ancho que
incorpora un gradiente predefinido de antimicrobiano equivalente a 15
diluciones. El protocolo para preparar el inóculo es el mismo que para difusión
de disco. Tras la incubación de las placas se puede observar una zona de
inhibición elipsoidal y simétrica.
Se puede determinar mediante lectura directa la concentración inhibitoria
mínima (CIM) la cual será obtenida en el punto en el que el extremo de
inhibición intersección con la tira. Es una prueba cuantitativa.

Fig.8: Método de Epsilon Test E- Test.

 Lectura: La lectura se haría en el punto de intersección. Hay forma de

intersección lo ideal es que esta caiga en un valor numérico.

 METODO DE DILUCIÓN:

Se basa en la determinación del crecimiento del microorganismo en presencia de

concentraciones crecientes del antimicrobiano, que se encuentra diluido en
medio (caldo agar). Determina la Concentración Mínima Inhibitoria CMI y
posteriormente la concentración mímica bactericida CMB. Se utiliza para
evaluar la sensibilidad de bacterias de crecimiento exigente y no exigente.

Se utilizan 12 tubos, en el ultimo no se coloca antibioticos uy en los demás se

colcoan en un cantidad decreciente, a un punto donde no haya antibiotico,
además en todos los tubos se tiene la misma cantidad de microorganismos.
 Fig.9: Método de Dilución.

Tabla con valores para el método de Dilución

4. MATERIALES:

I.1 EQUIPO
 Estufa de incubación.

I.2 MATERIALES
 Placas de agar Mueller Hinton
 2 tubos de 5ml Ringer 1/4 y 1 tubo de 5ml Mueller Hinton
 Discos comerciales de antibióticos
 Cepas bacterianas identificadas.
5. MÉTODOS:

Utilizamos un simulador que nos ayudó a medir bacterias con un vernier y de

esta manera pudimos practicar y tener un conocimiento pleno de cómo medir
bacterias por medio del método difusión de disco. Aplicamos los conocimientos
obtenidos y concluimos los resultados.

6. RESULTADOS:

 Aprendimos sobre los distintos métodos que existentes para realizar

antibiogramas.
 Aprendimos sobre la importancia de los antibiogramas para la carrera de
Medicina Veterinaria ya que nos brinda un tratamiento efectivo con
diferentes antibióticos que serán de gran ayuda.
 Gracias a la práctica con el simulador de medición de discos de antibióticos
sabemos cómo medir cada halo de inhibición.
 Depende del microrganismo del antibiótico usado y su concentración para
poder interpretar la medida obtenida en los halos de inhibición.