REPRODUCCIÓN Y CRECIMIENTO 1

MICROBIANO

SEMANA 6

Dra. Sonia Herrera Sánchez

 Introducción
2

 Para que el crecimiento bacteriano tenga lugar es necesario un aporte

adecuado de nutrientes. Todos los microorganismos necesitan C, N, H,
O, S, Py diversos minerales para crecer.
 Muchos necesitan también nutrientes especiales.
 Los microorganismos captan estos nutrientes mediante diversos
mecanismos de transporte a través de las membrana.

MICROBIOLOGIA 20/09/2021
 Reproducción y crecimiento microbiano
3
Proceso de Reproducción y
Crecimiento Microbiano

Fisión Binaria

Crecimiento

Métodos Gráficos

Métodos Matemáticos

Curva de Crecimiento

Fase de Fase de Fase de Fase de

Latencia Exponencial Estac20io/0n9a/r2i0a21 Muerte
Reproducción Procariotes

C U RVA D E C RE C I M I E N T O M IC R O B IA N O
C U RVA D E J A C O B -M O N O D
(S IS T E M A C E RRA D O )
 CURVA DE C RECIMIENTO
5

1) fase de adaptación 2) fase logarítmica (exponencial)

3) fase estacionaria 4) fase de muerte.

MICROBIOLOGIA
 Curva de Crecimiento Bacteriano

•Bacteria en medio
adecuado
•Gráfico de coordenadas:
número de bacterias
(logaritmo) versus lapso de
tiempo.
•Distinta para cada bacteria
•En todas se identifican
cuatro etapas
 Fase de Latencia
 El número de microorganismos no varía
 Adaptación al medio, producción de enzimas
 Tiempo variable: entre una hora a días.
 Tamaño relativo aumentado por división
 Fase exponencial o de crecimiento
logarítmico
 Relación casi lineal entre el tiempo y
el número de elementos.
 Actividad metabólica incrementada
 Depende del tiempo de generación
de cada bacteria
 Los antimicrobianos son mas activos
 Puede haber variaciones entre el
crecimiento in vitro e in vivo.
Fase Estacionaria
 En determinado punto el crecimiento disminuye
 La población no aumenta
 Células nuevas reemplazan a las células muertas
 Actividad metabólica mas lenta
 Células en animación suspendida
 Producción de metabolitos secundarios
🞑 Antibioticos
🞑 Toxinas
 Fase de Esporogenesis para las especies productoras
de esporas
 Fase de declinación o muerte
 Recuento de células disminuye sensiblemente
 El numero de células muertas supera al número de
células vivas
 Acumulación de productos tóxicos
 Disminución de nutrientes
 Aparición rápida : autolimitar diseminación
infecciones
 MATEMÁTICAS DEL CRECIMIENTO DE UNA POBLACIÓN

a)Empezando con una célula, si cada producto de la reproducción se divide

por fisión binaria, la población se doblara con cada nueva generación. Este
proceso puede ser representado con logaritmos (2 elevado a un
exponente).
CRECIMIENTO DE POBLACIONES

❑ La velocidad de crecimiento es el cambio

en el numero de células por unidad de tiempo
❑ El tiempo de generación es el requerido
para duplicar una población de células
❑ Este modelo en el que el número se duplica
por unidad de tiempo se denomina
crecimiento exponencial
❑ Una característica es que al comienzo es bajo
y luego incrementa en una explosión del
numero de células
❑ Se utiliza para ensayar el efecto positivo o
negativo de algún tratamiento sobre el cultivo
 TIEMPO DE GENERACION

❑ En un cultivo creciendo exponencialmente hay una relación directa entre el numero

de células presentes en el momentoinicial (N 0) y en un momentodeterminado del
crecimiento

N= N0 * 2 n

donde N= número final de células y n= número de generaciones

❑ El tiempo de generación “g” de la población celular se calcula

como: g = t/n

donde t= horas o minutos

❑ Los tiempos de generación son usados para ensayar efectos positivos o efectos
negativos
 ¿Qué utilidad tiene conocer las condiciones que un
microorganismos requiere para crecer?

# Obtenerlo en el laboratorio Cultivo

# Combatirlo o
evitar su proliferación
 C ondiciones necesarias para el desarrollo
microbiano
15

❖ Nutrientes
❖Temperatura
❖Oxígeno
❖ pH
❖ Agua

MICROBIOLOGIA
 Condiciones necesarias para el desarrollo
microbiano
16

Nutrientes
S ubstancias que la célula toma del ambiente que
estimula su crecimiento y que las utiliza en
las reacciones catabólicas y anabólicas
Características:
A travesar las barreras celulares
S er utilizado por enzimascelulares
Proveer energía

Proveer subunidades de las macromoléculas

MICROBIOLOGIA 20/09/2021
 C lasificación nutricional de los
microorganismos
❖ Nutrientes

Fototrofos
Q uimiotrofos:

H ipotróficos
 Requerimientos de nutrientes de los
microorganismos

Agua
F uente de C arbono
F uente de N itrógeno
Iones(O ligoelementos)
A lgunos requieren Vitaminas
C ofactores de crecimiento
A lgunos L ípidos
 Requerimientos de nutrientes de los
microorganismos

MACRONUTRIENTES

•F uente de C arbono Inorgánico y orgánico

•F uente de N itrógeno N 2 inorgánico, N 2 orgánico
•Macroelementos P, S , K , M g, C a, N a, F e

MICRONUTRIENTES

•Oligoelementos C r, C o, M n, N i, S e, W, V,
Zn
•F actores de crecimiento Vitaminas, A minoácidos,
Purinas y pirimidinas
 C U L T IVO D E M IC R O O R G A N I S M O S

M edio de C ultivo:
Medio que proporcione substancias nutritivas para los
microorganismos y que les permita desarrollarse, puede ser
considerado como tal.
S e pueden clasificar en:
Naturales: Están constituidos por substancias naturales
tales comopapa, leche, huevo, sangre, etc.
Artificiales: S i esta elaborado con substancias de
composición química conocida se le llama sintético.
S i esta elaborado con substancias de
composición química desconocida y cuyos
componentes no pueden ser analizados se le llama
no sintético
Condiciones necesarias para el desarrollo microbiano:

Temperatura
Los patógenos humanos generalmente se reproducen a
temperaturas similares a las del cuerpo (37 °C ).
C lasificación de las bacterias con base en su temperatura
óptima de crecimiento:
• Psicrófilas(0° a 20°C )
• M esófilas (20° a 40°C )
• Te rmófilas (40° a 60°C )
Condiciones necesarias para el desarrollo microbiano:
pH
La mayoría de los microorganismos crecen en p H cercanos a
la neutralidad, entre 5 y 9, cosa que no excluye que existan
microorganismos que puedan soportar p H extremos y se
desarrollen. Según el rango de p H del medio en el cual se
desarrollan pueden dividirse en:
pH pH
externo interno
Acidófilos 1.0 - 5.0 6.5

Neutrófilos 5.5 - 8.5 7.5

Alcalófilos 9.0 - 10.0 9.5

La mayoría de las bacterias crecen a un p H óptimo de 6.5 a 7.5
C o ndiciones necesariaspara el desarrollo microbiano:

❖ O xígeno
 PROCESOS DE REPRODUCCIÓN DE LAS BACTERIAS

24 Entre los procesos de reproducción de las bacterias tenemos:

FISIÓN BINARIA
 Esun proceso en el cual de la división de una célula resultan dos
(2) células, usualmente ambas células hijas tienen el mismo tamaño
y forma.
 Este es el proceso más común y sin duda el más importante en el
ciclo de crecimiento de las poblaciones bacterianas.
 Enun cultivo en crecimiento la célula bacteriana aumenta de
tamaño, replica su ADN y la pared celular y la membrana
citoplasmática comienzan a crecer hacia adentro a partir de
direcciones opuestas formando una partición conocida como septo.

MICROBIOLOGIA
 Crecimiento Bacteriano
 Aumento de número (no
de tamaño)
 Multiplicación bacteriana:
fisión simple o binaria
🞑 Elongación
🞑 Auto duplicación de ADN
cromosómico
🞑 Tabicado central
🞑 Invaginación membrana
celular
🞑 Síntesis de pared
 PROCESOS DE REPRODUCCIÓN DE LAS
BACTERIAS
26

 Existen en las bacterias otros procesos reproductivos pero son menos

comunes,por ejemplo especies del género Streptomyces producen
muchas esporas reproductivas por microorganismo y cada espora da
origen a un nuevo microorganismo.
 Otras bacterias comolas del género Nocardia, presentan extensos
crecimientos filamentosos los cuales sefragmentan enpequeñas
unidades que al desarrollarse originan nuevosmicroorganismos.
Algunas bacterias como las especies del género Hyphomicrobium se
reproducen por gemación, lo cual consiste en que una célula madre
emite un brote, éste aumenta de tamaño y posteriormente
 se separa como una nueva célula

MICROBIOLOGIA
 EFECTO DE LA CONCENTRACION DE
NUTRIENTES SOBRE EL CRECIMIENTO
27

 Como podemos observar en la figura siguiente, a medida que

aumenta la concentración de nutrientes aumenta la velocidad
de crecimiento hasta llegar a una concentración que ya no es
limitante y se sigue aumentando no aumentará la velocidad
de crecimiento.
 También la concentración de nutrientes tiene efecto sobre la
"cosecha máxima" o crecimiento total ya que una gran parte
del nutriente es convertido en masa celular, si se limita la
cantidad de nutriente se limitará también la cantidad de
material celular
MICROBIOLOGIA
 Tiempo de generación
 Tiempo necesario para la duplicación celular
 Distintiva de cada especie
 Puede influirse por factores estimulantes
 Varían de 20 minutos (Escherichia coli) hasta 24
horas
Técnicas para determinar el número y
viabilidad de las células
 Contar al microscopio el número
de células en un volumen
conocido
 Establecer el número de células
por turbidimetria
 Recuento de elementos viables
por cultivo (Unidad Formadora
de Colonias o UFC)
Efecto de la Temperatura
 Temperatura mínima de crecimiento
 Temperatura óptima de crecimiento
 Temperatura máxima de crecimiento
Sicrófilos
 Requieren bajas temperaturas
 15 – 20 ºC
 La mínima puede ser muy baja
 Bacterias en el fondo del mar y en los polos
Mesófilos
 Rango de temperaturas: 25 – 40 ºC
 Temperatura óptima: 37 ºC ± 1 ºC
 Agentes que afectan al hombre y los animales
Termófilos
 Toleran altas temperaturas
 Temperatura óptima: 55 ºC
 Temperatura máxima: 80 ºC o mas.
Condiciones de pH
 pH : Potencial Hidrógeno. Va desde 0 a 14.
 pH < 6,5 ácido
 pH > 7,5 básico o alcalino
 pH 6,5 – 7,5 neutro Masadecuado para
crecimiento bacteriano
 Bacterias que crecen hasta pH 4 Acidófilas (Por
ejemplo: Lactobacillus)
 Vibrio cholerae : medio alcalino
Presión Osmótica
 Los solutos (sales y azúcares) disueltos se desplazan
a zonas de menor concentración. El agua se
desplaza a zonas de mayor concentración de
solutos
 Una presión osmótica alta causa pérdida de agua
y plasmólisis de la célula
 Halófilas: bacterias que toleran altas
concentraciones salinas
 Halófilas facultativas : toleran hasta un 2 % de
sales
 DISPONIBILIDAD DE AGUA Y
PRESION OSMÓTICA
37

MICROBIOLOGIA 20/09/2021
Condiciones atmósféricas
 Potencial de óxido-reducción o Redox (Eh)
 Respiración bacteriana : reacciones de óxido-
reducción, en cadena
 El aceptor final de electrones o hidrogeniones es
variable
Aerobios
 Requieren oxígeno, aceptor final de hidrógeno
 Formación de H2O y CO2
 Producción de enzima Catalasa :
desdoblamient
o del Peróxido de hidrógeno (H2O2) en H2O y
oxígeno
 Prueba de Catalasa para diferenciar
microroganismos (Staphylococcus de Streptococcus)
Anaerobios
 Viven en ausencia de oxígeno atmosférico
 Aceptor final de hidrógeno : compuesto inorgánico
(NO3 o SO4)
 Fermentación: la fuente de carbono provee
energía, el donador de hidrógeno y el aceptor
final (un compuesto orgánico como ácidos o
alcoholes)
 Muy frecuente en microorganismos orales
Anaerobios
 Anaerobios obligados: no utilizan O2
 Anaerobios moderados: toleran de un 2 a un 8 %
de O2
 Anaerobios aerotolerantes: sobreviven un tiempo en
presencia de O2
 Anaerobios facultativos: aceptan indistintintamente
una situación u otra
Microaerófilos
 Requieren bajas concentraciones de O2 para crecer
 Utilizan el O2 como fuente de energía pero a
concentraciones < 15 %
 Susceptibles a radicales superóxido
 Enzima Superóxido Dismutasa (SOD) : transforma
radicales superóxido en H2O2
 Capnofilas: desarrollan mejor conconcentraciones de
CO2 elevadas
 La cavidad oral presenta todas estas variantes
 Las especies capnófilas aumentan en personas con
alteraciones periodontales
Control de Microorganismos
 Muchos factores estimulantes del desarrollo
bacteriano se usan para preservar alimentos:
🞑 Baja temperatura
🞑 Salmueras
🞑 Dulces
🞑 Salados
🞑 Ahumados
 Otros métodos físicos
de control de crecimiento: Filtración
44

MICROBIOLOGIA 20/09/2021
Medios de Cultivo
 Substancias nutritivas que permiten el desarrollo de
microorganismos en el laboratorio
 Cultivo: brindar condicionesóptimas de crecimiento
 Fáciles de preparar
 Baratos
 Permitir el desarrollo de gran variedad de gérmenes
 Aportar nutrientes adecuados (aminoacidos,
nucleótidos, factores de crecimiento, glucosa, iones
inorganicos)
Medios de Cultivo
 Optimo contenido de H2O y correcto pH
 Requerimientos de O2
 Estéril, evitar contaminaciones
 Incubación: temperatura óptima en estufas
 Clasificación de los medios de cultivo

 Naturales: solo usados para enriquecer

medios (leche, suero, papa)
 Artificiales se preparan en el laboratorio
🞑 Líquidos: caldos
🞑 Sólidos: caldos adicionados de substancias
capaces de solidificar (Agar-agar)
 Medios Complejos: extractos de carne,
levadura, peptonas.
 Medios Enriquecidos: agregado de suero o
sangre
Clasificación de los medios de cultivo

 Medios selectivos: permiten crecer un solo tipo de

microorganismo (substancias inhibidoras)
 Medios diferenciales o indicadores: evidencia
alguna actividad metabólica por cambio de estado
o color propia de un tipo determinado de
microorganismo
 Medios de Transporte: traslado de muestras
biológicas manteniendo las bacterias viables
Cuenta Viable Cuentas
viables: sólo
para células
vivas capaces
de reproducirse

Técnica de estría en placa

Técnica de vaciado en placa

 Cuentas viables: sólo para células vivas capaces de reproducirse

Elcrecimiento implica el aumento de los microorganismos capaces

de formar colonias debido a que sólo se tiene en cuenta el número
de microorganismos viables, esto escapaces de crecer
indefinidamente. Las determinaciones que se utilizan son:
Recuento de colonias

colonias

Unidades Formadoras de
Colonias
51

MEDIDA DE CRECIMIENTO
MICROBIANO

MICROBIOLOGIA
 TÉCNICAS PARA DETERMINAR EL NÚMERO Y
VIABILIDAD DE LAS CÉLULAS

 Contar al microscopio el número

de células en un volumen
conocido
 Establecer el número de células por
turbidimetria
 Recuento de elementos viables
por cultivo (Unidad Formadora de
Colonias o UFC)
 RECUENTO DE
VIABLES

▪ El recuento en placa determina el número de células capaz de generar colonias sobre la

superficie de un medio sólido
▪ Hay dos formas, por siembra en superficie: se siembra 0.1 mLde muestra y se extiende
por la superficie con una barra de vidrio o metal
▪ Obien, por siembra en profundidad: se siembra de 0.1 a 1.0 mLen la placa de Petri y se
agrega el medio sólido fundido (40 ° C) y se incuba
▪ Por este método se pueden usar volúmenes más grandes
▪ Hay que tener en cuenta que el organismo a ser contado resista temperaturas de 40 a 45°
C
▪ El número de colonias que puede ser contado oscila entre 30-300 colonias
 DILUCIONES
▪ Cuando el cultivo es denso se usa
el método de diluciones

▪ Se usan diluciones seriadas en

base 10: 1.0 mL de muestra en
9.0mL de diluyente o bien, 0.5mL
muestra en 4.5mLde diluyente

▪ El número de colonias depende del

inóculo , medio de cultivo y las
condiciones de incubación (medio
de cultivo, temperatura y tiempo de
incubación)

▪ La expresión del resultado será

como unidades formadoras de
colonias por mililitro (ufc/mL) ya
que la ufc puede contener más de
una célula
 FACTORES AMBIENTALES

Se distinguen cuatro grupos:

• Psicrófilos con temperaturas bajas 0-20 º C,
• Mesófilas con medianas 20-45 º C,
• Termófilas más altas 60- 90° C
• Hipertermófilas con muy altas 90-110 º C
• Congelación: existe un límite por el cual es imposible la reproducción, hay
crioprotectores (glicerol y dimetilsulfóxido) que permiten su conservación a temperaturas
(-70 ° C)
• Termofilia:termófilos poseen membranas ricas en ácidos grasos saturados que les dan
estabilidad a altas temperaturas. Las eucariotas están ausentes por encima de
• 60 ° Cdebido a la porosidad de sus membranas
• La temperatura favorece reacciones del metabolismo bacteriano:
FACTORES AMBIENTALES
pH.

Hongos y
algas.
Thiobacillus.
Acidofilos

Staphylococcus
aureus

Alcalofilos

Bacillus
FUNCION DE LA ACTIVIDAD DEL AGUA
 CINETICA DE C RECIMIENTO (1)

59

MICROBIOLOGIA
 CINETICA DE C RECIMIENTO (2)

60

20/09/2021
 VELOCIDAD DE CRECIMIENTO PARA ALGUNAS
BACTERIAS REPRESENTATIVAS BAJO
CONDICIONES ÓPTIMAS.

Organismo Temperatura (◦C) Tiempo de generacion (min)

Bacillus stearothermophilus 60 11
Escherichia coli 37 20
Bacillus subtilis 37 27
Bacillus mycoides 37 28
Staphylococcus aureus 37 28
Streptococcus lactis 37 30
Lactobacillus acidophilus 37 75
Mycobacterium tuberculosis 37 360