Universidad San Francisco de Quito 
Laboratorio de Microbiología de Alimentos 
  

Laboratorio N°5: Métodos de recuento de coliformes y E. coli

 

Integrantes: 

Rebeca Ruiz (213673) 

Gabriela Sandoval (211276) 
Rafaela Contreras (210554) 
 
Grupo N°6 
 

Fecha de la práctica: 
03/10/2022 
Resultados
Método: Petrifilm

Dilución Placa 1 Placa 2 Promedio UFC/g Observaciones

Número de
10 -1
INC INC --- ---- colonias superior
al rango contable
No se observaron
10-2 INC INC --- ----
coliformes
Presencia de
coliformes, se
consideró un
cuadrado del
10-3 550 420 485 4,9x105 Petrifilm para
contar los
coliformes y se
multiplicó por
20.
Tabla 1. Recuentos coliformes:

Cálculo:

UFC 485∗103 3 5
= =485∗10 =4,85∗10
ml 1 ml
Resultado del recuento: 4,9x105 UFC/ml; 35°C/24h

Tabla 2. Recuentos E-coli:

Dilución Placa 1 Placa 2 Promedio UFC/g Observaciones

Ausencia de E-
10-1 0 0 0 <1x101
coli
Ausencia de E-
10-2 0 0 0 <1x102
coli
Ausencia de E-
10-3 0 0 0 <1x103
coli

Cálculo:
3
UFC ¿ 1∗10 3
= =¿1∗10
ml 1 ml
Resultado del recuento: <1x103 UFC/ml; 37°C/24h
Método: Número más probable (NMP)

10-1 10-2 10-3 10-1 10-2 10-3

Dilución
Gas MUG
Tubo 1 + + + - - -
Tubo 2 + + + - - -
Tubo 3 + + + - - -
Código
3 3 3 0 0 0
NMP

Coliformes NMP/g: >1100 NMP/g; 35°C/24h

E. coli NMP/g: <3,0 NMP/g; 35°C/24h

Discusiones
El método del número más probable y el recuento de coliformes y E. Coli en medios
cromogénicos son diferentes ya que la presencia de coliformes se manifiesta con la formación
de gas en el interior de los tubos de Durham y turbidez del medio. Para la detección de E.
Coli, los tubos positivos para la presencia de coliformes se iluminan bajo luz UV para
observar la fluorescencia producida por la acción de la enzima β glucoronidasa. El número de
tubos positivos de cada dilución para la formación de gas (coliformes) y para fluorescencia
(E. coli) se indican por separado y se calcular el NMP/ml para cada enterobacteria de acuerdo
con la tabla dada en el laboratorio mientras que para el recuento en placas petrifilm se tiene el
aparecimiento de colonias rojas para las coliformes y verdes-azules para la E. Coli con
pequeñas burbujas en ellas. Cada uno de estos métodos se realiza con diferentes diluciones
desde 10−1 hasta 10−3 y cada una por duplicado o triplicado ya que estas facilitan los
recuentos y la presencia de las enterobacterias, pero la inoculación es distinta teniendo ciertas
limitaciones para obtener un análisis completo o concreto.
Cada uno de los diferentes métodos de recuento poseen sus ventajas y desventajas en
donde se toma en consideración varios puntos como la precisión, funcionamiento y
procedimiento. Lo que respecta al recuento en UFC/g se realizó el método de Petrifilm en el
cual se colocó 1 mL de la dilución 10−1 de agua peptonada con chochos, es decir, la dilución
inicial en el centro del Petrifilm que fue incubado por lo menos 24 horas, lo que resulta que
los errores sean mínimos de acuerdo al espacio en el que crecen las enterobacterias ya que se
ha cubierto casi el 100% de la superficie de contacto, además de que no se necesita de un
medio de cultivo ya que estas placas son altamente selectivas por lo que da una mayor
precisión en la obtención de los resultados porque solo crecen microorganismos a evaluar que
en este caso fueron las enterobacterias (Nore, 2008, p.155-170). Para el caso de recuento de
E.Coli y coliformes las placas Petrifilm contiene nutrientes de bilis rojo-violeta, un agente
gelificante que determina la actividad de la glucuronidasa y otro que facilita la numeración de
colonias, es así que se observó la producción de gas por la fermentación de lactosa con
colonias rojas por lo que se dedujo la existencia de coliformes ya que según AOAC
internacional y el manual de análisis bacteriológica de la FDA establecen que los coliformes
producen ácido causando un oscurecimiento del gel por el indicador de pH y gas que está
atrapado alrededor de las colonias (3M ciencia, 2015, p.1-3) pero para el caso de las E. Coli
la única diferencia es que se tiene colinas de color azul pero esto no se evidenció en las placas
petrifilm de esta práctica del chocho.
El otro método para utilizar fue el del número más probable (NMP) con el cual no se
sabe exactamente el número de colinas presentes si no por el contrario es con el cual se logra
hacer una estimación de la presencia de coliformes y E. Coli que han crecido en el alimento
por las diferentes series de diluciones, es decir, se obtiene datos cualitativos en cuento a
densidades poblacionales donde una única célula viva se desarrolla y produce un cultivo un
tanto turbio (Divaagen, 2021). En si esta metodología tiene la capacidad de estimar el tamaño
de las poblaciones basándose en la selectividad, además de que solo es posible para
organismos vivos y con metabolismo activo volviéndolo el método más rápido y confiable en
comparación a otros que requieren de un medio de cultivo, es así como se lo considera ideal
para identificar la presencia de microorganismos a nivel industrial. Al ser un medio líquido
permite el crecimiento de bacterias como E. coli y coliformes provenientes de una
contaminación fecal o de una mala práctica sanitaria (Ramos, 2014, p.3) donde se evidenció
que al implementar radiación ultravioleta existe fluorescencia para el caso de las E. coli y
turbidez con producción de gas para las coliformes por el efecto de la fermentación de la
lactosa dando así más que características cuantitativas, características cualitativas.
Entre estos dos métodos realizados existe una gran diferencia ya que para el método
del número más probable se tiene una limitación en cuando a la detección de poblaciones que
no poseen más de una célula por mililitro enfocado en microoganismos viables mientras que
por el método petrifilm se determina el número de colonias en una superficie pequeña para de
acuerdo a eso observar un estimado de crecimiento.
 Con este respectivo análisis, en cada método se obtuvo diferentes resultados, para el
caso de las placas petrifilm las cuales se las realizó por duplicado, en la dilución 10−1 no se
evidencio presencia de coliformes ni de E.coli por lo que se lo clasifico como incontable, lo
mismo sucedió en la dilución 10−2 mientras que para la dilución de 10−3 para el caso de los
5 UFC
coliformes se obtuvo 4.9 × 10 a una temperatura de incubación de 35°C por 24 horas y
g
3 UFC
para la E. coli se obtuvo ¿ 1× 10 a la misma temperature de incubación por el mismo
g
tiempo lo que significo la ausencia de crecimiento de E.coli, llegando a la deducción de que
en los chochos no existian indicadores fecales, que según la norma INEN 1529-5 están en un
rango que sobrepasa lo establecido por esta norma.
NMP
En el método del número más probable se obtuvo ¿ 1100 para el caso de las
g
coliformes las cuales se las determinó por la presencia de burbujas en el tubo de Durham en
las tres diluciones anteriores, causada por la fermentación de la lactosa, para lo cual se tomó
como referencia la tabla establecida en el manual. Para los E.coli este método fue diferente
pues se utilización radiación ultravioleta para que mediante la flourescecnia de la enzima β-
NMP
glucoronidasa¿ 3.0  lo que estableció nuevamente la ausencia de esta enterobacteria,
g
indicador fecal.
Entonces, al realizar ambas metodologias de recuento y presencia de coliformes y E.
coli se evidenció que ambas lanzaron la misma deducción de acuerdo a la muestra de chochos
que se analizó ya que no existió presencia de E.coli por lo tanto no habia indicador fecal o
contaminación fecal pero si la presencia de coliformes que sobrepasan la cantidad
estabelecida por la norma ecuatoriana.

Para asegurar la calidad del agua como de los alimentos, es necesario realizar
controles microbiológicos, que permitan aseverar inocuidad alimenticia al cliente como se lo
ha realizado en esta práctica. Para esto se usan los indicadores de contaminación, que son
microrganismos de fácil y rápida detección que se relacionan directamente con la calidad del
alimento (Delvasto & Monroy, 2018). “E. faecalis y E. Coli en particular, se han seleccionado
como indicadores de contaminación fecal debido a su relación con el grupo tifoide-
paratifoide y a su alta concentración en diferentes tipos de muestras” (Delgado et al, 2003).
Pese a que E. faecalis y a E. Coli son considerados los mejores indicadores, se ha demostrado
que E. Coli no siempre identifica la contaminación bacteriana existente dependiendo la
muestra a ser analizada. Los enterococos como el E. faecalis, “se distinguen por su capacidad
para sobrevivir en agua salada y, en este sentido, imitan más a muchos patógenos que los
otros indicadores” (EPA, 2009). En otras palabras, E. faecalis, a diferencia de E. Coli, persiste
más en ambientes acuáticos y en suelos contaminados. Cuando se desean analizar muestras
de agua salada utilizada para la recreación, “escorrentías agrícolas y urbanas, aguas pluviales,
entrada directa de animales a través de la defecación, muda de bañistas, botes, restos de
plantas marinas, aguas subterráneas contaminadas, suelos, sedimentos y arenas” (Boehm &
Sassoubre, 2014), es recomendable hacer un análisis de E. faecalis. Mientras que, en aguas
dulces y productos procedentes de estas, es más factible identificar E. Coli.
 Bibliografía

Boehm, A. B., & Sassoubre, L. M. (2014). Enterococci as indicators of environmental fecal

contamination. En Enterococci: From Commensals to Leading Causes of Drug

Resistant Infection [Internet]. Massachusetts Eye and Ear Infirmary.

Delvasto, A., & Monroy, J. (2018). FORMULACIÓN DE INDICADORES DE GESTIÓN

PARA EL CUMPLIMIENTO Y CONTROL DE SISTEMAS DE CALIDAD E

INOCUIDAD EN PLANTAS DE PRODUCCIÓN DE QUESO. Universidad ICESI.

Díaz Delgado, Carlos; Fall, Cheikh; Quentin, Emmanuelle; Jiménez Moleón, Ma. del

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http://tierra.rediris.es/hidrored/ebooks/ripda/pdfs/Capitulo_20.pdf

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3M. Ciencia. Aplicada a la vida. (2015). Placas Petrifilm  TM para Recuento de E. coli &

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Nore L, Sanchez J. (2008). Estudio Comparativo en técnicas de recuento rápido en el

mercado y placas petrifilm para el análisis de alimentos. Pontificia Universidad

Javeriana: https://1library.co/document/eqo5nkjy-estudio-comparativo-tecnicas-

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%C3%B3n%20uniforme%20de%20las%20poblaciones%20microbianas%20de

%20suelos,platos%20de%20cultivo%2C%20entre%20otros.

Pauta-Calle G, Vázquez G, Abril A., Torres C, Loja-Sari M, Palta-Vera A. (2020).

Indicadores bacteriológicos de contaminación fecal en los ríos de Cuenca, Ecuador.

Maskana, 11(2), 46–57. https://doi.org/10.18537/mskn.11.02.05