Reparación del DNA

8. Hay una corrección de errores para asegurar la fidelidad de

las copias.

Diferencias de la replicación en
procariotas y eucariotas
Procariotas
ADN no asociado a histonas
Tamaño del ADN
bacteriano: 1mm
Ciclo Celular: Proceso de
Un origen de replicación y
transformación del cromosoma una burbuja
Fragmentos de Okazaki
Replicación del ADN grandes: 1000nucelotidos
de ADN-ARN
- Proceso enzimático más exacto que se conoce Proceso más rápido
- Exacto: el que menos errores comente
- Tiene mecanismos redundantes
- Redundante: para una misma función hay varios
mecanismos que la realizan DNA polimerasas
Eucariotas
ADN asociado a histonas. La
hebra continua se queda
con las histonas antiguas y
la hebra discontinua con las
nuevas
Tamaño del ADN de un
cromosoma eucariótico:
50mm
Hay varios orígenes de
replicación (hasta 100)
Fragmentos de Okazaki más
pequeños: 100-200
nucleótidos de ADN-ARN.
Proceso más lento (periodo
S de interfase, 6 – 8h)

1. Proceso de duplicación del ADN mediante un modelo Polimerasa Cantidad de Función

semiconservativo subunidades
Pol I 1 Remoción de los
2. Comienza en sitios específicos. primers,
reparacion
3. El proceso de replicación es bidireccional. Pol II (DinA) 1 Reparación
4. Las dos hebras nuevas se van alargando. Pol III (núcleo) 3 Replicación del
cromosoma
5. La replicación siempre se produce de 5’ a 3’, siendo el Pol III 9 Reparacion del
extremo 3’-OH libre el punto a partir del cual se produce la (holoenzima) cromosoma
elongación del ADN. Pol IV (DinB) 1 Reparacion
Pol V (UmuC, 3 Reparacion
6. Como las 2 hebras de ADN son antiparalelas, una de las UmuD’2C)
hebras se sintetiza de forma continua y otra de manera
discontinua.
Algunos Conceptos
7. El proceso de duplicación esta catalizado por enzimas de
ADN polimerasas (aunque intervienen muchas otras enzimas Coenzima: Compuestos orgánicos que facilitan la acción de
en el proceso). las enzimas y pueden unirse temporal o permanentemente a
una enzima.
Holoenzima: Enzima que está formada por una proteína -  Oxidación de las bases (por ejemplo, 8-oxo-7 0.8-
apoenzima - y un cofactor, que puede ser un ion o una dihidroguanina (8-oxoG)) y generación de
molécula orgánica compleja unida - grupo prostético - o no interrupciones de la cadena de ADN por parte de
- una coenzima -. Catalíticamente activa. especies reactivas del oxígeno.
 Alquilación de bases (normalmente metilación),
Apoenzima: parte proteica de una enzima, desprovista de los
como la formación de 7-metilguanina, 1-
cofactores o coenzimas que puedan ser necesarios para que
metiladenina, O6-metilguanina
la enzima sea funcionalmente activa. Catalíticamente inactiva.
 Hidrólisis de bases, como desaminación,
Tabla de comparación de la Pol I y Pol III depurinación y depirimidinación.
 Malfuncionamiento de bases, debido a errores en la
replicación del ADN, en que se inserta una base de
ADN errónea en una cadena de ADN en formación,
se inserta una base que no es necesaria insertar, o
no se inserta una de necesaria.

Cuando hay un mecanismo como estos (oxidación,

metilación), provocado por radiación ultravioleta…

Se generan puente de H entre dos 2 bases

“Cierre de chaqueta}2

Se corre el marco de lectura

Procesividad Capacidad de poner hartos nucleótidos a la vez.

Radiación UV
Polimerasa I: saca nucleótidos del primer (RNA)
- Forma dímeros de taminia
Daño al ADN
- 50-100 tales reacciones por segundo se podrían
Agentes Injuriantes: generan daño en el DNA producir en una célula de la piel durante la
exposición a la luz solar
- Metabolismo celular
- Infección viral
- Radiación Mutaciones del ADN
- Expuesto químico
Los daños provocan mutaciones – variaciones en las
- Errores de replicación
secuencias nucleotídicas
- Activación de checkpoint celular
- Activación de programa transcripcional Las mutaciones pueden darse en tres niveles:
- Reparación de DNA
- Apoptosis  Molecular: (génicas o puntuales). Ocurren en las
bases químicas del ADN, es decir, en sus propias
Tipos de daños del ADN bases nitrogenadas, por algún cambio en los
elementos fundamentales que las componen.
Principales daños al ADN debido a procesos celulares
 Cromosómico: Se altera un segmento de
endógenos:
cromosoma, es decir, mucho más que un gen, y en
 ese sentido pueden perderse, duplicarse o cambiar
de lugar grandes cantidades de información.
 Genómico: Afecta a un conjunto de cromosomas
determinado, ocasionando excesos o faltas de ellos,
y variando sustancialmente el genoma entero del
organismo.
Orígenes de las mutaciones
Naturales Inducidas
Agentes Mutagénicos
Físico Químico Biológico}
Agentes mutagénicos/mutágenos: Agentes dañan o alteran
estructuras y composición del material genético. Producen
mutaciones (oxidaciones, metilaciones, etc.)
Natural: errores en la replicación
Inducidas: antes externos, agentes que producen un daño en
el ADN (físico, químico, biológico)
Agentes mutagénicos
Intercalantes: mismas estructuras que las bases y se
intercalan en el ADN. La ADN polimerasa se para.
Las principales causas de las mutaciones
- Errores durante la replicación
- Lesiones o daños fortuitos en el ADN
- Movilización en el genoma de los elementos
genéticos transponibles
Mutaciones: Cambios en la secuencia de ADN: cambios
puntuales (1nt) inserciones, deleciones
- Espontaneas: Errores en replicación, perdida de
base, …
- Ambientales
*Transiciones:
*Transversiones:
Efecto de alteraciones de la secuencia del DNA
Si el DNA se replica se transmite alteración a nuevas células
Si célula es germinal, se transmite a nueva generación
individuos
Cambio permanente en secuencia ----- mutación
Tipos de mutaciones
reemplazo 1 base por otra (mutación por sustitución)
adición o deleción de 1 o más bases (mutación por inserción o
deleción)
mutaciones silentes:
cambio codón mismo aa
cambio aa sin inactivar proteína (en región no determinante
de función)
mutaciones alteran función de la proteína:
cambio codón da origen a cambio aminoácido
creación codón stop — término prematuro proteína cambio
fase lectura
Consecuencias moleculares de la mutación
Mutación sinónima: AGG – CGG
Arg – Arg
Reparación del ADN
REPARACIÓN- Corrige alteraciones de secuencia del DNA
El DNA, como molécula orgánica compleja está expuesta a:
- Errores durante la replicación
- Agentes químicos reactivos (especies reactivas de
oxígeno)
- Temperatura
- Radiación UV
A pesar de los mecanismos de Reparación algunas
mutaciones escapan a este control
DNA polimerasa
- Hace le proofreading _ lee los nucleótidos ue se van
insertadn y coorgeir
- Exonucleasa – sacar nuleotido que no va e insterra el
que corresponde. Polimerasa I y III. Actividad para
ambos sentidos.
Mecanismo de proofreading
Cambio conformacional de DNA pol luego de la entrada de un
dNTP y antes de formación de enlace fosfodiéster (1 error
en 105)
actividad exonucleasa 3’ – 5’: elimina Nu no apareado en el
término del partidor (1 error en 102)
DNA polimerasa requiere partidor (frecuencia error 1/109 Nu)
RNA polimerasa no requiere partidor (frecuencia error 1/104
Nu)
cuando se rompe el ADN significa un gran daño en el ADN.
Hay perdidas de nucleótidos, por lo que no hay molde. La
célula activa la recombinación homologa (en la meiosis lo que
generamos una variabilidad genética y en ese caso queremos
una recombinación homologa, el mismo mecanismo se usa en
este caso), usa como hebra una d las hebras del cromosoma.
Causas de rotura de doble rotura
Mecanismo se ocupa
- Radiaciones ionizantes (rayos x, g)
- Especies de oxigeno reactivas
- Quimioterápicos (bleomicina)

La mas famosa de los mecanismos proteicos se llama el gen

del braca
Mecanismo de mismatch – cuando hay un desapareamiento
de bases Reparacion del ADN – resumen diapo 25

MMR es una vía conservada que repara los errores base-base
y pequeñas inserciones / deleciones causadas por errores de
incorporación incorrecta durante la replicación del ADN
Sobre DNA recién sintetizado
Dos proteínas: una encuentra el “mismatch” y la otra busca
“nick” cercano para dirigir
Buscan nucleótidos que hace mismatch – nucleótidos “solos”
Se juntan las MSH2 y la MSH6 siempre andan por ahí cuando
encuentran algo buscan a la exonucleasa I y la meten a
reparar el mismatch – corta la parte y llega la polimerasa
(normalmente la I), luego viene la polimerasa (rellena el
nucleótido que saco la exonucleasa) y por último la ligasa.
Enfermedades por fallas en los mecanismo de reparación del
ADN
Enfermedades, con herencia autosómica recesiva,
caracterizadas por la elevada frecuencia de alteraciones
cromosómicas en edades tempranas.
 Síndromes de Inestabilidad Cromosómica, e
implican alteraciones en los mecanismos de
reparación del DNA.
- Elevada incidencia de lesiones cromosómicas
- Alta predisposición al cáncer y una hipersensibilidad
a agentes clastogénicos.

Polimerasa I – pequeños trozos, Okazaki

Polimerasa III – grandes fragmentos

Reparación por excision de bases (foto en el teléfono)

Una base nitrogenada dañada es reemplazada por un

complejo que comienza con una glicosilasa, la que saca la
base nitrogenada y deja un hoyo, ese hoyo se llama sitio AP,
luego viene una endonucleasa que corta en donde quedo el
hoyo. 3’OH queda libre viene la polimerasa y pone los
nucleótidos que la endonucleasa corta (normalmente corta
un pedazo más grande), vuelve una endonucleasa a sacar el Xeroderma Pigmentosum
pedacito. Por último, llega la ligasa. - Descrita por Moritz Kaposi en 1870
Reparación de rupturas de doble cadena – Hay reparación de - Trastorno autosómico recesivo con defectos de la
ruptura de doble hebra reparación del ADN a daño (especialmente UV)
- Afecta a 1:250,000 nacimientos
- Fotosensibilidad extrema (“niños de la obscuridad”)
- Aparición de carcinomas basocelulares y melanomas

Reparación del ADN- Consiste en 6 pasos fundamentales:

 1. BRCA2 pertenece a la familia de genes supresores de tumores
y la proteína está implicada en reparación de cortes en la
doble hebra de ADN.

Las mujeres que presentas estas mutaciones tienen un riesgo

acumulado hasta los 70 años de entre 33- 95% para cáncer de
mama, y entre 4 y 47% para cáncer de ovario.6

El gen BRCA2 está localizado en el brazo largo (q) del

cromosoma 13 en la posición 12.3 (13q12.3).

Mutaciones por inserción o deleción

Dos copias mutadas del gen BRCA2 padecen un tipo de

Reconocimiento y localización lesional / XPA, XPC y XPE
2. Desenrollamiento de la doble hélice del DNA/ XPB y XPD
3. Actividad endonucleasa/ XPF y XPG
4. Acción exonucleasa con eliminación del nucleótido dañado.
anemia de Fanconi con drástica reducción de los niveles de
BRCA2 en las células, acumulando ADN dañado (mutaciones).
Los pacientes con anemia de Fanconi son propensos a
diversos tipos de leucemia, tumores sólidos, especialmente
en cabeza, cuello, piel y órganos reproductores.

5. DNA polimerasa con neosíntesis de nucleótidos

6. DNA ligasa con unión de las hebras contiguas

complememtarias.

Hereditary Nonpolyposis Colorectal Cancer (HNPCC)/Lynch

Syndrome – Síndrome de Lynch

Trastorno
hereditario
por el cual
las
personas
afectadas
tienen una

probabilidad más alta que la normal de padecer de cáncer

colorrectal y otros tipos de cáncer; con frecuencia antes de
los 50 años de edad. También se llama síndrome de Lynch.

Incidencia: 3 a 5%

Presentan adenomas o tumores benignos

El HNPCC está asociado con mutaciones en uno o más de

cuatro de estos genes: MLH1, MSH2, MSH6 y PMS2, siendo
las mutaciones en MLH1 y MSH2 las más frecuentes ya que
están presentes en cerca de 90% de los casos de HNPCC.
Cuando hay una deficiencia en una de esats porteinas no se
recluta la exonucleasa y por tanto no se repara el adn de
manera correcta.

Mutación en el gen BRCA2

(ver tablita)

gen BRCA2. Codifica la proteína BRCA2 ("Breast Cancer Type 2

susceptibility protein")