Método de precipitación con sal

Método rápido, seguro y económico (RM) para extraer ADN de sangre

entera.
La principal ventaja del RM es que es un método no enzimático y el
procedimiento es inorgánico.

Hay dos aspectos importantes en la preparación del ADN: el rendimiento y

el grado de degradación de las muestras de ADN.
 Método de precipitación con sal

Protocolo Equipamiento e insumos

Insumos:
- Ruptura o lisis celular - (NP-40), Sarcosyl, Triton X-100,
Tween-20, Tween-80
-Centrifugación diferencial - Tampón TKM
- Sangre en un tubo Vacutainer
-Centrifugación en gradientes de densidad (tapa morada) que contiene de
EDTA.
-Precipitación selectiva de proteínas por adición de sales - 10% de dodecil sulfato de sodio
(SDS)
- Separación proteica por carga, tamaño y afinidad - NaCl saturado (6M)
- Etanol
Equipamientos:
- Espectrofotometro
- centrifuga
- Incubadora
 Proceso
-Un mililitro de sangre se trata con un volumen igual de tampón de bajo contenido de sal (10 mM Tris-HCl,
pH 7,6, KC1 10 mM, EDTA 2 mM (TKE) que contiene MgCl2 4 mM (TKM)).

-Se agrega 25ul de NP-40 y las células se lisan mediante la inversión del tubo varias veces. La suspensión
se centrifuga a 1000g durante 10 min a RT (temperatura ambiente). El sedimento de leucocitos en su
mayoría se salva y se lava dos veces más con tampón TKM.

-El sedimento final se resuspende en 0,2 ml de tampón TKM. 15ul de 10% de dodecil sulfato de sodio (SDS)
se añade y toda la suspensión se mezcla a fondo y se incuba durante 5 min a 55 ° C.

-Después se añade 75 ul de NaCl saturado (6M), el tubo se mezcla bien y se centrifuga a 12.000 g durante
5 min. El sobrenadante contiene ADN, que se precipita usando etanol.

-ADN se vuelve a disolver en 0,5 ml de 10 mM Tris-HC1, EDTA 1 mM, pH 8,0 (TE).

 Método de precipitación con sal
Rendimiento Calidad

Tiempo de proceso
Los rendimientos de -Este método reduce la
ADN se calculan a partir exposición a compuestos
de la absorbancia a 260 químicos peligrosos
-El tiempo óptimo de la técnica es
nm en un de 1 hr -Barato y libre de inhibidores,
espectrofotómetro y por -Con muestras de sangre
comparación con un almacenadas 24 hrs a 37 cº -Se obtiene una mayor
estándar de ADN de previamente para unos óptimos recuperación de DNA, con
peso molecular en un gel resultados parámetros de calidad e
de agarosa teñido con integridad óptimos para los
bromuro de etidio. análisis moleculares por PCR.
USOS:

El método modificado RM proporciona una forma rápida, segura

y económica de aplicación en estudios genéticos, clínicos y
forenses.