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Lisis de membranas: proteinas y lipidos

Solubilizacion de lipidos
Ruptura o lisis de membranas para extraction
de ADN
 SELECCION DEL METODO DE
EXTRACCION
• Acido nucleico diana ADN/ARN

• Material inicial y estado Tejido, Bacteria,Sangre, etc

• Resultados deseados: Pureza, rendimiento, tiempo,

• Uso posterior: PCR, RTPCR, clonacion, cDNA

METODOS DE EXTRACION
• FISICOS: Trituracion, lisis hipotonica, congelacion, pelas metalicas

• QUIMICOS: Sales de Guanidio, SDS ,CTAB, soluciones alcalinas, solvents

organicos

• ENZIMATICOS: Lizosima, liticasa, lisostafina, proteinase K

Importante: Inactivacion de nucleasas

,METODOS DE PURIFICACION
• Extraccion y precipitacion etanolica/isopropanol

• Cromatografia: permeasion sobre gel, adsorcion selective

Intercambio ionico, union por afinidad

Centrifugacion

Separacion por afinidad: particulas magneticas, streptavidina, ARNm

Preguntas pre y pos Laboratorio

EDTA y SDS. ¿Cuál es la función de estos dos reactivos ?

En la remoción de proteínas se utilizan enzimas, mencione cuáles y cómo actúan.
En que consiste el reactivo Tris y para que se usa?

¿En que consisten las diferencias durante la extracción de ADN procariota en

Bacterias Gram Positivas y Gram negativas . Explique
Como se extrae ADN plasmidico, y como se diferencia del ADN bacteriano
¿Qué conclusiones saca al comparar las diferentes técnicas o kit de extracción de
ADN?
Siembra en medio LB y paso a tubo
eppendorf
Columna con membrana cromatografica:
silica, celulosa, intercambio ionico
Paso del lisado por la columna
Video extraccion de ADN bacteriano

• https://www.youtube.com/watch?v=tcPgdR9_t64
• https://www.youtube.com/watch?v=1PisbDHKXTU
Colonias azules metodo IPTG Xgal
blue/white