S7. Lectura para Informe V2

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toxinas
Revisar
Toxinas Shiga: una actualización sobre los factores del huésped y la biomedicina
Aplicaciones
2,3,*
Yang Liu 1,2,3,* , Songhai Tian 2,3 , Hatim Thaker 2,3 y Min Dong
1
Departamento de Nefrología, The First Hospital of Jilin University, Changchun 130021, China Department
2
of Urology, Boston Children's Hospital, Boston, MA 02115, EE. UU.; Songhai.Tian@childrens.harvard.edu
(ST); hatim.thaker@childrens.harvard.edu (HT)
3
Departamento de Microbiología y Departamento de Cirugía, Facultad de Medicina de Harvard, Boston, MA 02115, EE. UU.
* Correspondencia: ly840604@jlu.edu.cn (YL); min.dong@childrens.harvard.edu (MD)
Resumen: Las toxinas Shiga (Stx) son toxinas bacterianas clásicas y los principales factores de virulencia de
Shigella dysenteriae toxigénica y Escherichia coli enterohemorrágica (EHEC). Estas toxinas reconocen un
glucolípido globotriaosilceramida (Gb3/CD77) como su receptor e inhiben la síntesis de proteínas en las células
mediante la escisión del ARN ribosomal 28S. Son la principal causa de complicaciones potencialmente mortales,
como el síndrome urémico hemolítico (SUH), asociado con casos graves de infección por ECEH, que es la
principal causa de lesión renal aguda en niños. La amenaza de las Stxs se ve exacerbada por la falta de
inhibidores de toxinas y de un tratamiento eficaz para el SUH. Aquí, resumimos brevemente la estructura de Stx,
los subtipos, los modelos in vitro e in vivo , la expresión de Gb3 y HUS, y luego presentamos estudios recientes
que utilizan pantallas de todo el genoma mediadas por CRISPR-Cas9 para identificar los factores de la célula
huésped necesarios para la acción de Stx. También resumimos los últimos avances en la utilización y el diseño
de componentes Stx para aplicaciones biomédicas.
Palabras llave: Toxina Shiga; ECEH; Shigela; síndrome urémico hemolítico; Gb3; LAPTM4A; TM9SF2;
inmunotoxina; toxinas bacterianas; toxinas
Cita: Liu, Y.; Tian, S.; Thaker, H.; Contribución clave: resumimos los últimos avances en la identificación de factores del huésped para las toxinas
Dong, M. Toxinas Shiga: una actualización sobre Shiga y las aplicaciones biomédicas de las toxinas Shiga.
Factores del huésped y biomédicos
Aplicaciones. Toxinas 2021, 13, 222. https://
doi.org/10.3390/
toxinas13030222
1. Introducción
La toxina Shiga (Stx) recibió su nombre del microbiólogo japonés Kiyoshi Shiga, quien identificó
Recibido: 18 febrero 2021
y caracterizó a Shigella dysenteriae en 1897 [1]. Entre las cepas de Shigella dysenteriae, el serotipo
Aceptado: 15 de marzo de 2021
Publicado: 18 de marzo de 2021
1 es el toxigénico que expresa Stx [2]. En 1977, Konowalchuck et al. descubrieron una toxina
citotóxica de aislados de Escherichia coli (E. coli), inicialmente llamada verotoxina o citotoxina de E.
coli por su capacidad para matar células Vero cultivadas [3]. A principios de la década de 1980,
Nota del editor: MDPI se mantiene neutral con
O'Brien et al. reconoció que los aislados de E. coli expresan toxinas muy similares a Stx; los llamaron
respecto a reclamos jurisdiccionales en mapas
publicados y afiliación institucional

toxinas similares a Shiga y designaron a los aislados de E. coli E. coli productora de toxinas similares
aciones. a Shiga (STEC) [4]. Entre las STEC, las cepas asociadas con enfermedades humanas también se
conocen como E. coli enterohemorrágica (EHEC). Pronto se descubrió que estas toxinas pertenecen
a la misma familia Stx y se pueden dividir en dos serotipos: Stx1 es casi idéntico al prototipo Stx en
Shigella dysenteriae, mientras que Stx2 comparte ~56% de identidad de secuencia de proteína con Stx [5].
Cada año, en los Estados Unidos, hay aproximadamente 265.000 casos de infección por
Copyright: © 2021 por los autores.
EHEC [6], que generalmente comienza con diarrea y puede convertirse en disentería y colitis
Licenciatario MDPI, Basilea, Suiza.
hemorrágica. En casos severos, pueden ocurrir complicaciones potencialmente mortales como el
Este artículo es un artículo de acceso abierto
distribuido bajo los términos y síndrome urémico hemolítico (SUH) y trastornos neurológicos. El SUH se asocia más comúnmente
condiciones de Creative Commons con las infecciones por el serotipo O157:H7 de EHEC, y Stx es la causa principal [7]. El SUH tiene
Licencia de atribución (CC BY) (https:// la mayor incidencia en niños y ancianos [8,9] y es la razón principal de lesión renal aguda en niños
creativecommons.org/licenses/by/ [10]. Los pacientes típicamente han desarrollado daño vascular irreversible en el momento en que
4.0/). aparecen los síntomas y no existe un tratamiento específico [7].
Toxinas 2021, 13, 222. https://doi.org/10.3390/toxins13030222 https://www.mdpi.com/journal/toxinas

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Las investigaciones realizadas durante los últimos 40 años han aclarado el mecanismo molecular
subyacente a la toxicidad de Stx, establecido su papel central en la patogenia y arrojado luz sobre
muchas funciones celulares clave. Además, los fragmentos Stx y Stx también se han utilizado como
herramientas para aplicaciones biomédicas. Muchos temas de la biología y las aplicaciones de Stx han
sido tratados en excelentes revisiones exhaustivas en los últimos años [9,11–22]. Aquí, presentaremos
brevemente el modo de acción de Stx y luego nos centraremos en los últimos avances en la identificación
de factores del huésped y la ingeniería de Stx para aplicaciones biomédicas.
2. Estructura y función de Stx
Stx es una toxina AB5 que comprende una subunidad A enzimática (Stx-A, 32 kDa) y cinco
subunidades B idénticas (Stx-B, 7,7 kDa) que forman un pentámero. La subunidad A se conecta
al pentámero de forma no covalente al insertar su región C-terminal en el orificio central [23,24]
(Figura 1). La subunidad A es una N-glucosidasa de ARN, que inhibe la síntesis de proteínas al
escindir el ARN ribosomal 28S [25–27]. La subunidad B es responsable de la unión a los receptores.
El glicoesfingolípido globotriaosilceramida (Gb3, también conocido como CD77) es el principal receptor
de Stx [28]. Los estudios estructurales de cristal usando Stx1-B y un análogo de trisacárido de Gb3
revelaron tres sitios de unión de Gb3 por subunidad B (Figura 1). Por lo tanto, un Stx puede enlazar
hasta 15 Gb3 simultáneamente [29]. Después de agrupar Gb3 en las superficies celulares, Stx se
internaliza mediante vías de endocitosis dependientes e independientes de clatrina [30,31], clasificadas
retrógradamente en la red trans-Golgi (TGN) y más adelante en el retículo endoplásmico (RE), sin
pasar por el endocitosis tardía . vía [32-36]. La subunidad A es procesada aún más por la furina del
huésped y las proteasas similares a la furina (escindiendo entre R251 y M252 de Stx1 y entre R250 y
A251 de Stx2) en la pieza enzimática A1 (27,5 kDa) y la pieza conectora A2 (4,5 kDa), conectando a
la subunidad B. Los dominios A1 y A2 permanecen conectados por un solo enlace disulfuro, que se
reduce dentro del RE. Luego, el dominio A1 se libera del RE al citosol a través de la vía de degradación
de proteínas asociadas al RE (ERAD) para inhibir la síntesis de proteínas [14,37,38].
Figura 1. La estructura de la toxina Shiga: una subunidad A, que se escinde en una pieza enzimática A1 (de color marrón) y una pieza
conectora A2 (de color magenta), y cinco subunidades B (PDB: 4M1U). El enlace disulfuro que conecta las piezas A1 y A2 está
coloreado de rojo. En la vista inferior (panel derecho), se muestran tres sitios de unión del receptor en una subunidad B (de color amarillo).
3. Subtipos Stx
Stx1 y Stx2 tienen múltiples subtipos clasificados según las variaciones de la secuencia de
proteínas. Hasta ahora se han informado tres subtipos de Stx1 (Stx1a, Stx1c y Stx1d) y once subtipos
de Stx2 (Stx2a–Stx2k) [39–42]. Algunas cepas STEC expresan solo un tipo de Stx, mientras que otras
pueden expresar múltiples tipos simultáneamente [39]. La estabilidad de la proteína, la potencia de la
toxina, la preferencia del receptor, la gravedad de los síntomas y los reservorios del huésped
relacionados pueden variar entre los subtipos [39,43]. Por ejemplo, las cepas que producen Stx2a,
Stx2c y Stx2d a menudo se asocian con colitis y HUS en infecciones humanas. Las STEC que
producen Stx2b, Stx2e, Stx2f y Stx2g generalmente se asocian con infecciones animales, como en
ciervos, cerdos, palomas y ganado [17,41,44,45]. Stx2e es el subtipo común que causa la enfermedad del edem
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Las cepas que producen Stx2f se encuentran con frecuencia en palomas y otras aves [47–49]. En 2018, se
identificaron Stx2h y Stx2i en cepas STEC aisladas de marmotas y camarones salvajes, respectivamente
[40,50]. Recientemente se informaron dos nuevos subtipos adicionales, Stx2j y Stx2k, pero aún no se han
aceptado ampliamente. Stx2k se aisló de cepas bacterianas de diversas fuentes, incluidos animales (cabras y
cerdos), carne cruda (res y cordero) y pacientes humanos con diarrea [41,42].
Stx1 y la mayoría de los subtipos de Stx2 reconocen el receptor Gb3. Sin embargo, Stx2e se une
preferentemente a globotetraosilceramida (Gb4), que se sintetiza añadiendo N-acetilgalactosamina a Gb3
[51]. Las diferencias de toxicidad entre los subtipos de Stx se atribuyen parcialmente a las diferencias en la
unión al receptor, y se cree que la baja tasa de disociación de Stx2a con los receptores puede conducir a una
mayor toxicidad debido a una mayor absorción de la toxina [52]. Esta puede ser una de las razones por las
que Stx2a, entre todos los subtipos de Stx2, está implicado en la mayoría de los casos de SUH [53].
4. Modelos de células humanas cultivadas in vitro y modelos animales in vivo
Se ha utilizado una variedad de líneas celulares humanas y células primarias para estudiar Stx, como
las líneas celulares de adenocarcinoma colorrectal HT-29 [54], Caco-2 y HCT-8 [55], células endoteliales
glomerulares [56], células epiteliales tubulares renales . [57], células endoteliales vasculares [58], células HeLa
de cáncer de cuello uterino [59], células de linfoma de Burkitt [60] y células THP-1 similares a macrófagos [61].
Algunas líneas celulares pueden sensibilizarse a Stx mediante la expresión ectópica de Gb3 sintasa exógena
[62,63].
Tian et al. informó recientemente que la línea celular de cáncer de vejiga 5637 era la más sensible a Stx
entre un grupo de líneas celulares de cáncer humano, con dosis de toxina que inducen el 50 % de la muerte
celular a 0,028 (Stx1) y 0,007 (Stx2) ng/mL, respectivamente [ 64]. Esto se debe a que las células 5637
expresan endógenamente altos niveles de Gb3 [64]. Esta línea celular podría servir como un modelo de línea
celular humana conveniente y sensible para investigar la acción de Stx y desarrollar inhibidores de Stx.
La sensibilidad de diferentes líneas celulares a Stx depende no solo de los niveles de expresión de Gb3,
sino también de los microdominios de la membrana, así como de otros factores del huésped involucrados en
el tráfico de toxinas [14,62,65–68]. Por ejemplo, las células ACHN y las células Caki-2, que son dos líneas
celulares de adenocarcinoma tubular renal humano, mostraron niveles drásticamente diferentes de sensibilidad
a Stx2: las células ACHN son muy sensibles mientras que las células Caki-2 no lo son. Un análisis posterior
muestra que tienen niveles de Gb3 similares. El análisis de secuenciación de ARN de los genes expresados
diferencialmente por las células ACHN y Caki-2 identificó RAB5A, TRAPPC6B y YKT6 como factores de la
célula huésped necesarios para la alta sensibilidad de ACHN a Stx2 [68].
Dado que la infección por ECEH se produce en el intestino, los organoides intestinales humanos (HIO)
se han utilizado recientemente como un modelo fisiológicamente relevante para investigar los efectos de Stx
en las células intestinales humanas. Los HIO se pueden derivar de células madre pluripotentes o células
madre intestinales y representan los tejidos del intestino delgado a los que se adhiere ECEH [69,70]. Pradhan
et al. mostró que los HIO expresan Gb3 así como las transcripciones de Gb3 sintasa. La inyección de Stx2a
en HIO in vitro indujo necrosis y la muerte apoptótica de las células. Los HIO también se pueden trasplantar a
ratones, lo que proporciona un método para evaluar el impacto de Stx en los tejidos intestinales humanos in
vivo [71].
Se han establecido varios modelos animales para estudiar la infección por ECEH y Stx [72], incluidos
ratones, ratas, crías de conejo y primates no humanos [12,16]. En ratones, se ha informado la expresión de
Gb3 en la corteza cerebral, las células endoteliales microvasculares de la piamadre y los capilares tubulares
renales. Sin embargo, no hay expresión en el endotelio vascular renal y los ratones no desarrollan SHU con
inyecciones de Stx [73,74]. Se puede establecer un modelo HUS de ratones C57BL/6 utilizando una
combinación de Stx2 y lipopolisacárido (LPS) mediante inyección intraperitoneal (ip) [75]. Estos ratones
desarrollan trombocitopenia, anemia hemolítica, así como insuficiencia renal, similar a la presentación del SUH
en humanos [75]. Estudios previos han sugerido que la vía del inflamasoma NLRP3 (NOD-, LRR- y proteína 3
que contiene el dominio pirina) puede ser desencadenada por Stx, lo que lleva a la liberación proinflamatoria
de IL-1ÿ y muerte celular [76]. Sin embargo, más tarde se descubrió que esta activación del inflamasoma no
estaba mediada por la propia Stx, sino por la contaminación de LPS copurificada con Stx [77]. Aunque EHEC
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normalmente no puede infectar ratones [78-81], se ha desarrollado un modelo alternativo mediante la

expresión de Stx en Citrobacter rodentium, un patógeno de ratón nativo [82]. Un estudio reciente mostró que
las respuestas del inflamasoma mediadas por LPS son inhibidas por Stx en la infección por C. rodentium
que expresa Stx en un modelo de ratón, lo que sugiere que Stx contribuye a la supresión de la defensa del
huésped contra las bacterias [77].
Además de los ratones, también se han utilizado ratas como modelo. La inyección ip de
Stx causa necrosis tubular aguda, poliuria y osmolalidad urinaria reducida en ratas, así como
un aumento de acuaporina tipo 2 y ÿ2-microglobulina en la orina, lo que indica la disfunción de
la reabsorción de agua en los túbulos proximal y colector [83]. Las ratas adultas inyectadas ip
con sobrenadante de cultivo de E. coli recombinante que expresa Stx2 (sStx2) pueden
desarrollar diarrea acuosa, trombocitopenia, anemia hemolítica, microangiopatía trombótica
glomerular y lesión tubular, que puede resultar del efecto combinado de Stx2 y otros factores
bacterianos en el sobrenadante de cultivo [84]. Sin embargo, debido a la baja expresión de Gb3
en las células endoteliales vasculares de los roedores, las ratas destetadas tratadas con sStx2
muestran pocas lesiones microvasculares trombóticas glomerulares asociadas con el SUH, a
pesar de la observación de hiperplasia mesangial glomerular [85].
Gb3 se expresa en el colon de conejos lactantes [86]. Después de la administración oral de Stx2, los
conejos blancos de Nueva Zelanda de tres días de edad mostraron diarrea e inflamación intestinal, pero no
síntomas de SHU [16]. Tanto la inyección intravenosa de Stx2 (1200 ng/kg) como la administración oral de
EHEC pueden causar diarrea, así como daño histológico intestinal y renal en conejos destetados con
cinturón holandés (DB) [87,88].
La distribución y expresión de Gb3 en primates como macacos y babuinos puede parecerse a la de
los humanos [89–92]. Se creó un modelo de babuino mediante la administración intravenosa de Stx (50-200
ng/kg), que provocó trombocitopenia, anemia hemolítica microangiopática y daño glomerular, similar a lo
que se observa en el SHU mediado por Stx en humanos [91,93].
5. Expresión de Gb3 en humanos y síndrome urémico hemolítico (SUH)

En humanos, se ha informado la expresión de Gb3 en el epitelio y endotelio renal, células endoteliales
microvasculares en la lámina propia del intestino, miofibroblastos pericriptales intestinales y subpoblaciones
de linfocitos B en centros germinales [13,14]. Gb3 también se ha encontrado en células del músculo liso del
tracto digestivo, el sistema urogenital, la placenta [94,95], células endoteliales, células ganglionares de la
raíz dorsal en el sistema nervioso periférico [ 14,96] y células endoteliales y neuronas en el sistema nervioso
central [14,97].
Gb3/CD77 también se conoce con otros dos nombres: (1) antígeno del linfoma de Burkitt, ya que se
encuentra en muchas células cancerosas del linfoma de Burkitt [98], y (2) antígeno del grupo sanguíneo
Pk , que pertenece al sistema de grupo sanguíneo humano P1PK. que consta de tres antígenos
glicoesfingolípidos (PK, P1 y NOR). El antígeno PK se expresa en los glóbulos rojos en la mayoría de los individuos
Se ha sugerido que Stx puede unirse a las células sanguíneas y causar hemólisis mediada por el
complemento [99]. Curiosamente, las microvesículas liberadas por las células sanguíneas pueden contener
Stx, que se ha sugerido que media en la circulación y la absorción de toxinas en las células endoteliales y
epiteliales del riñón [100].
El SUH es una microangiopatía trombótica grave caracterizada por lesión renal, anemia hemolítica
microangiopática y trombocitopenia [101]. El SUH causado por la infección por ECEH se conoce como SUH
con diarrea positiva (SUH D+) o SUH típico, mientras que el SUH atípico puede ser causado por otras
infecciones, trastornos del complemento u otras mutaciones genéticas [102]. El SUH por ECEH se presenta
inicialmente con síntomas de colitis hemorrágica y posteriormente incluye anemia hemolítica, trombosis y
lesión renal, lo que provoca debilidad, dificultad para respirar, equimosis cutánea, oliguria, edema,
hipertensión y síntomas neurológicos graves como la epilepsia [9].
La apoptosis de las células endoteliales microvasculares induce edema, mientras que la acumulación
de plaquetas y fibrina puede dificultar aún más el flujo sanguíneo [103,104]. Las plaquetas se reducen, en
parte debido al depósito de microtrombos a lo largo de la pared celular endotelial y al consumo por parte del
sistema dotelial reticuloeno [105]. La trombocitopenia también puede resultar de la unión de Stx a
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plaquetas y megacarioblastos inmaduros en la médula ósea, induciendo su apoptosis [ 106,107 ]. La

destrucción mecánica de los eritrocitos a través de los vasos sanguíneos dañados provoca anemia hemolítica,
que se combina con una reducción de la microcirculación para producir isquemia multisistémica [104].
También se ha propuesto que las respuestas inmunitarias del huésped desencadenadas por Stx en el
intestino y la activación de las células inmunitarias pueden ser otro contribuyente clave al desarrollo del SHU
[108]. El tratamiento actual de EHEC-HUS se basa en la terapia de apoyo. Esto incluye la reanimación con
líquidos, la corrección de anomalías electrolíticas y el control de la hipertensión [34]; a menudo se requieren
transfusiones de sangre y terapia de reemplazo renal [105,109].
6. Factores del huésped recientemente identificados a través de las pantallas

CRISPR-Cas9 El sistema CRISPR (repeticiones palindrómicas cortas agrupadas regularmente
interespaciadas)-Cas9 puede verse como una forma de sistema inmunitario adquirido en bacterias contra
elementos genéticos invasores. Cas9 es una endonucleasa que utiliza secuencias de ARN guía codificadas
en CRISPR para reconocer y escindir ADN objetivo específico [110]. Este sistema se ha convertido en la
actualidad en una potente plataforma tecnológica para modificar fácilmente genes en células eucariotas. En
2014, Shalem et al. y Wang et al. desarrolló un cribado knock-out mediado por CRISPR-Cas9 a escala
genómica en células humanas [111,112]. Usando este poderoso enfoque, cuatro grupos llevaron a cabo de
forma independiente pantallas mediadas por CRISPR-Cas9 en todo el genoma para identificar los factores del huésped
Aunque se utilizaron diferentes líneas celulares y bibliotecas de ARN guía, los factores del hospedador
identificados a partir de estas pantallas participan en gran medida en la biosíntesis de Gb3, lo que indica que el
reconocimiento de Gb3 es el principal paso limitante de la velocidad en la intoxicación por Stx.
Múltiples enzimas localizadas en ER y Golgi están involucradas en la biosíntesis de Gb3 (Figura 2). La
ceramida (Cer) es el precursor de los glicoesfingolípidos. La síntesis de novo de Cer ocurre en el lado citosólico
de la membrana del RE. El complejo serina palmitoil transferasa (SPT) cataliza la conversión de serina y
palmitoil-CoA (Pal-CoA) en 3-dihidroesfingosina (3-KDS). Luego, el 3-KDS se convierte en dihidroesfingosina
(DHS) bajo la catálisis de la 3-cetodihidroesfingominol reductasa (KDSR). Una gama de acil-CoA con cadenas
de ácidos grasos saturados o insaturados se puede incorporar posteriormente en DHS para producir
dihidroceramida (DHC). Este paso es catalizado por enzimas de la familia ceramida sintasa (CERS). El DHC se
oxida aún más a Cer por la dihidroceramida ÿ4-desaturasas (DEGS). La glicosilación de Cer ocurre en Golgi.
Primero, un residuo de glucosa se transfiere a Cer para producir glucosilceramida (GlcCer). Esta reacción es
catalizada por ceramida glucosiltransferasa (UGCG) en el lado citosólico de cis-Golgi. Luego, GlcCer se voltea
hacia el lado del lumen y se transporta al trans-Golgi. Se transfieren dos residuos de galactosa a GlcCer para
producir lactosilceramida (LacCer) y Gb3 secuencialmente. Estos pasos son catalizados por la ÿ-1,4-
galactosiltransferasa 5 (B4GALT5) y la Gb3 sintasa conocida como ÿ-1,4-galactosiltransferasa (A4GALT),
respectivamente [116–118]. SLC35A2 ( translocador de UDP-galactosa) transporta galactosa activa a la luz de
Golgi [64].
En 2018, Tian et al. informaron pantallas de pérdida de función basadas en CRISPR de todo el genoma
para Stx1 y Stx2 usando 5637 células [64]. El mismo año, Pacheco et al. realizó una detección de infección
por ECEH utilizando células HT29 [113]. En 2019 y 2020, se publicaron dos pantallas más para Stx usando
células HeLa [114,115]. Las cuatro pantallas identificaron a los principales actores en la ruta de biosíntesis
de Gb3, como A4GALT, SPTSSA, UGCG, B4GALT5 y SLC35A2. A continuación, se identificaron tres factores
nuevos: LAPTM4A (proteína transmembrana 4 alfa asociada a lisosomas), TMEM165 (proteína transmembrana
165) y TM9SF2 ( miembro 2 de la superfamilia transmembrana 9). Además, la pantalla de Majumder et al.
también identificó el receptor de hidrocarburo de arilo (AHR), un factor de transcripción activado por ligando,
que podría ser necesario para la expresión de varios genes implicados en la vía de biosíntesis de Gb3 [115].
Tian et al. Además, llevó a cabo cribados paralelos utilizando la toxina vegetal ricina, cuya vía de tráfico y
modo de acción son similares a los de Stx pero utiliza una amplia gama de glicanos como receptores. Los
resultados indican que LAPTM4A es específico de Stx, mientras que TMEM165 y TM9SF2 también son
necesarios para la ricina [64].
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Figura 2. Las pantallas CRISPR (repeticiones palindrómicas cortas agrupadas regularmente interespaciadas)/Cas9 identificaron
genes involucrados en la biosíntesis de Gb3, con un diagrama esquemático de la vía de biosíntesis de Gb3 y un resumen de los
principales genes identificados en las pantallas CRISPR/Cas9. Cer: ceramida. ACACA: acetil-CoA carboxilasa alfa. Acil-CoA: acetil-
CoA. Mal-CoA: malonil-CoA. Pal-CoA: palmitoil-CoA. SPT: complejo serina palmitoil transferasa. 3-KDS: 3-dihidroesfingosina. DHS:
dihidroesfingosina. KDSR: 3-cetodihidroesfingominol reductasa. DHC: dihidroceramida. CERS: enzimas de la familia de las ceramidas
sintasas. DEGS: dihidroceramida ÿ4-desaturasas. GlcCer: glucosilceramida. UGCG: ceramida glucosiltransferasa.
LacCer: lactosilceramida. B4GALT5: ÿ-1,4-galactosiltransferasa 5. A4GALT: ÿ-1,4-galactosiltransferasa. UGP2: UDP glucosa
pirofosforilasa 2. GALE: UDP-galactosa 4-epimerasa. SLC35A2 transporta UDP-galactosa desde el citosol al aparato de Golgi. Se
muestran cuatro nuevos factores del huésped: LAPTM4A (proteína transmembrana 4 alfa asociada a lisosomas) puede estar
involucrada en la síntesis de Gb3 de LacCer; TM9SF2 (miembro 2 de la superfamilia transmembrana 9) y TMEM165 ( proteína
transmembrana 165) pueden desempeñar un papel en el mantenimiento de un entorno adecuado en el Golgi para una actividad óptima
de glicosiltransferasa; El AHR (receptor de hidrocarburo de arilo) puede unirse directamente y activar el promotor del gen que codifica
la subunidad A de la serina palmitil transferasa (SPTSSA), que regula el primer paso en la biosíntesis de nuevos esfingolípidos.
LAPTM4A está clasificado como uno de los principales éxitos en las cuatro pantallas y nunca antes
se lo había implicado como un factor huésped de Stx [64,113–115]. LAPTM4A knockout (KO) hace que
las células sean completamente resistentes a Stx1 y Stx2, pero no a otras toxinas de control (ricina y
toxina del cólera). La resistencia de las células LAPTM4A KO está al mismo nivel que las células A4GALT KO.
LAPTM4A es una proteína transmembrana pequeña (233 aminoácidos) pobremente caracterizada con
funciones desconocidas [119,120]. Tian et al. llevó a cabo un análisis lipidómico basado en
espectrometría de masas y descubrió que Gb3 se reduce en gran medida en las células LAPTM4A KO
y que los niveles del precursor de Gb3 LacCer aumentan [64]. Yamaji et al. obtuvo resultados similares
usando cromatografía de capa fina y análisis de radiografía [114]. Estos resultados demuestran que
LAPTM4A es esencial para el último paso de la biosíntesis de Gb3.
Se informó inicialmente que LAPTM4A estaba localizado en endosomas y lisosomas. Sin embargo,
la localización de LAPTM4A parece ser sensible a una etiqueta añadida al extremo N en estos estudios
anteriores [120–122]. Tian et al. encontró que LAPTM4A con una etiqueta C-terminal se localizó en gran
medida en Golgi en tres líneas celulares humanas diferentes [64]. El LAPTM4A endógeno se ha detectado
tanto en el aparato de Golgi como en el lisosoma de lisados de membrana de hígado de rata [119,120].
Estos hallazgos indican que Golgi es al menos uno de los lugares
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que contiene LAPTM4A. Tian et al. también estableció la topología de la membrana de LAPTM4A,
demostrando que sus terminales N y C están ubicados en el citosol, con dos dominios luminales cortos.
Los ensayos de coinmunoprecipitación han demostrado que LAPTM4A puede interactuar con A4GALT,
pero el nivel de expresión y la localización de Golgi de A4GALT no se ven afectados en las células
LAPTM4A KO [64].
Tanto Tian et al. y Yamaji et al. mostró que el requisito de LAPTM4A para la síntesis
de Gb3 no es compartido por su homólogo LAPTM4B [64, 114]. Al construir y evaluar una
serie de proteínas quiméricas entre LAPTM4A y LAPTM4B, Tian et al. determinó que el
segundo dominio luminal de LAPTM4A es necesario para su función en la síntesis de Gb3.
Con base en estos hallazgos, Tian et al. propuso que LAPTM4A sirve como un "activador" específico
para A4GALT [64]. Apoyando esa sugerencia, Yamaji et al. encontraron que la actividad de síntesis de
Gb3 en los lisados celulares de células LAPTM4A KO se reduce en gran medida en comparación con
los lisados celulares de control. También encontraron que los niveles de A4GALT expresados
exógenamente no se ven afectados en las células LAPTM4A KO, aunque los niveles endógenos de
A4GALT en las células HeLa han sido difíciles de detectar [114]. Estos hallazgos sugieren claramente
que LAPTM4A es un cofactor esencial para A4GALT [64,114]. Se requieren estudios futuros para
dilucidar aún más si se requiere LAPTM4A para la actividad enzimática A4GALT y/o su estabilidad. El
mecanismo molecular subyacente a las interacciones LAPTM4A-A4GALT también queda por establecerse.
En contraste con el requisito específico de LAPTM4A para la biosíntesis de Gb3, TM9SF2 y
TMEM165 son necesarios para una amplia gama de procesos de glicosilación, incluida la biosíntesis
de gangliósidos y proteoglicano de sulfato de heparán. Se han identificado en un número creciente de
exámenes genéticos para diversas toxinas y virus [123–127]. Las mutaciones en TEME165 se han
relacionado con trastornos congénitos de la glicosilación en humanos [128].
TMEM165 es una proteína multitransmembrana, localizada en Golgi, que se ha propuesto para
actuar como transportador de Mn2+ para mantener la homeostasis de Mn2+ [129]. Dado que Mn2+
es un cofactor esencial para muchas glicosiltransferasas en Golgi, se requiere TMEM165 para la
biosíntesis de glicoproteínas y glicolípidos. De manera consistente, Tian et al. encontraron que las
células TMEM165 KO tienen niveles bajos no solo de precursores de Gb3 y Gb3, sino también de
gangliósidos. La adición de Mn2+ al medio de cultivo restauró la unión de Stx a las células KO
TMEM165, lo que es consistente con el papel de TMEM165 en la regulación de la hemostasia de Mn2+ [64,12
La función de TM9SF2 sigue siendo desconocida. Contiene nueve dominios transmembrana y
pertenece a una familia de proteínas de membrana altamente conservadas, con cuatro miembros en
humanos (TM9SF1 a TM9SF4). Yamaji et al. mostró que la unión de Stx de las células TM9SF2-KO
puede ser recuperada por todos los miembros de la familia TM9SF, lo que sugiere que los miembros de
la familia TM9SF2 regulan la síntesis de Gb3 mediante un mecanismo conservado [114]. TM9SF2 se
identificó recientemente como un oncogén potencial en el cáncer colorrectal a través de la mutagénesis
del transposón en modelos de ratón y se encontró que estaba sobreexpresado en muchas muestras de
cáncer colorrectal humano [131]. Aunque inicialmente se sugirió que era una proteína endosomal, estudios
recientes que utilizaron anticuerpos capaces de reconocer TM9SF2 endógeno revelaron que se localiza
en gran medida en el aparato de Golgi [113,124]. Las células TM9SF2 KO mostraron una reducción en la
glicosilación de todos los glicolípidos y glicoproteínas, incluido el proteoglucano de sulfato de heparán
[124]. Los lisados de células TM9SF2 KO mostraron niveles de actividad de A4GALT comparables con
los lisados de control, lo que sugiere además que TM9SF2 no está directamente involucrado en la
actividad enzimática de A4GALT in vitro [113,124,132]. El mecanismo exacto por el cual TM9SF2 afecta
la glicosilación sigue siendo desconocido y podría ser multifacético. Es posible que TM9SF2 actúe como
un transportador para mantener la hemostasia de algunos elementos críticos para la glicosilación, aún no
identificados, similar a TMEM165. También es posible que TM9SF2 participe en la biosíntesis de Gb3
mediante la regulación del tráfico retrógrado de lípidos y glicosiltransferasas [64,114]. Tian et al.
encontraron que las células TM9SF2 KO parecen formar grandes vacuolas en el citosol y mostraron un
tráfico endosomal severamente interrumpido de lípidos cargados exógenamente [64]. Este efecto sobre
el tráfico endosómico se ha demostrado para los parálogos de TM9SF2 tanto en Drosophila como en
levaduras, lo que sugiere que TM9SF2 desempeña un papel conservado en este proceso [133,134]. Dado
que TM9SF2 se localiza en el aparato de Golgi, los defectos en el tráfico endosómico podrían ser
secundarios, aunque sigue siendo posible que un nivel bajo de TM9SF2 también se localice en los endosomas.
Toxinas 2021, 13, 222 8 de 19
La pantalla de Pacheco et al. es único en el sentido de que se llevó a cabo utilizando EHEC en lugar de
Stx purificado [113]. Además de Stx, EHEC también muestra su virulencia a través de un sistema de secreción
de tipo III (T3SS), que inyecta un grupo de efectores en las células huésped para interrumpir las funciones celulares.
La línea celular utilizada en la pantalla, HT-29, no es sensible a Stx purificada, pero la incubación con
EHEC provocó la muerte celular a través de efectores inyectados a través de T3SS. El cribado se diseñó
y llevó a cabo con la intención de identificar los factores del huésped necesarios para la virulencia de
T3SS. Sorprendentemente, los principales éxitos estaban todos involucrados en la ruta de biosíntesis de
Gb3, lo que sugiere que Gb3 es fundamental para la virulencia del T3SS, además de su papel como
receptor de Stx, aunque el mecanismo aún no se ha determinado [113]. Estos hallazgos ilustraron aún
más la importancia de la ruta de biosíntesis de Gb3 como diana terapéutica para desarrollar inhibidores
contra Stx y EHEC [64,113–115].
7. Aplicación biomédica de la proteína de la subunidad A de

la toxina Shiga Las toxinas, como la Stx, se desarrollan para lograr tanto la orientación específica
de las células huésped como la entrega eficiente de una carga útil en el citosol de las células objetivo.
Estas propiedades podrían utilizarse para desarrollar nuevas proteínas terapéuticas. Se han realizado
rápidos progresos en la utilización de Stx-A y Stx-B en los últimos años. Stx-A ha sido seleccionado
como una carga útil prometedora en la construcción de inmunotoxinas para atacar y matar células
cancerosas. Las inmunotoxinas son proteínas de fusión compuestas por un dominio tóxico como Stx-A y
un dominio dirigido, que pueden ser fragmentos de anticuerpos monocatenarios, nanocuerpos o cualquier
otro aglutinante de proteínas que pueda reconocer específicamente las proteínas de la superficie celular
expresadas en las células cancerosas [135]. El concepto de inmunotoxinas se propuso y exploró en la
década de 1970 [136], pero este enfoque ha encontrado dificultades significativas, incluida la falta de
especificidad para atacar las células cancerosas, la alta toxicidad sistémica y la generación de anticuerpos
neutralizantes que hacen que la inmunotoxina sea ineficaz. Afortunadamente, muchos de estos desafíos
ahora pueden abordarse. Por ejemplo, se validaron proteínas de superficie celular altamente específicas
en células de mieloma y se desarrollaron anticuerpos específicos contra ellas [137]. Stx-A es una carga
útil ideal para este propósito: (1) es muy potente y se dirige al ARNr 28S; como proteína extraña, sería
difícil que las células cancerosas desarrollaran resistencia a Stx-A; (2) la población no está inmunizada
contra Stx; (3) es una proteína relativamente pequeña (32 kDa), lo que facilita la ingeniería de proteínas.
Una compañía de biotecnología, Molecular Template, ha logrado un progreso emocionante en
la utilización de Stx-A, que ha estado desarrollando inmunotoxinas basadas en Stx-A (llamadas
cuerpos de toxinas diseñados (ETB)). Se han desarrollado y probado tres generaciones de inmunotoxinas.
La primera generación (MT-3724) se basó en la fusión de Stx2-A de tipo salvaje con un fragmento
variable de cadena única (scFv) derivado de un anticuerpo dirigido a CD20, que es un antígeno de
superficie de células B, destinado a tratar linfomas y leucemias (Figura 3A). Este ETB se encuentra
actualmente en múltiples estudios de fase 2 para mostrar actividad de monoterapia. El principal efecto
secundario es el síndrome de fuga capilar, que probablemente se deba a respuestas inmunitarias contra
las proteínas ETB [138–140].
El ETB de segunda generación utilizó un Stx-A modificado que contenía mutaciones para reducir
la inmunogenicidad (desinmunización, Figura 3A). Se creó una mutación representativa, TAK-169,
mediante la fusión de Stx-A desinmunizado con un scFv dirigido a CD38, que es un marcador de células
de mieloma. Datos alentadores sobre primates no humanos han demostrado que TAK-169 se puede
dosificar a niveles más altos que MT-3724 y puede inducir niveles más bajos de respuesta inmunitaria
en comparación con MT-3724 [141,142]. En 2019, a través de una colaboración con Takeda
Pharmaceutical, un primer estudio abierto, multicéntrico y en humanos de fase 1 de TAK-169 comenzó
a inscribir a pacientes en una evaluación de seguridad, resistencia a los medicamentos, eficacia inicial,
farmacocinética (PK) y farmacodinámica (PD) [142].
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Figura 3. Diagramas esquemáticos de ingeniería Stx-A y Stx-B para aplicaciones biomédicas. (A) Tres generaciones
representativas de cuerpos tóxicos diseñados (ETB) construidos con Stx-A de tipo salvaje (primera generación) o
Stx-A desinmunizado (segunda y tercera generaciones). scFv, fragmento variable de cadena sencilla; AST,
tecnología de siembra de antígenos (p. ej., el péptido viral se deriva del citomegalovirus). (B) STC ( transportista
basado en toxinas similares a Shiga) es un sistema de entrega en el que la pieza Stx2 A1 se reemplaza con cargas
de entrega como EGFP. Stx-B-TDP es un sistema de administración que fusiona Stx-B con el dominio de
translocación de exotoxina A de P. aeruginosa (ETA-II) y cargas, por ejemplo, EGFP o N8A (un inhibidor de MDM2), en su ext
Otro diseño, por ejemplo, el monocuerpo Stx-B-TDP-VHL, fusiona ETA-II y cargas (fusión de Von Hippel-Lindau
(VHL) con un monocuerpo) en el extremo C de Stx-B. Se agrega una secuencia de retención de ER adicional
(KDEL) para el transporte retrógrado.
Otra proteína líder de segunda generación, MT-5111, incorpora un scFv diferente, dirigido a HER2.
El sitio de unión de MT-5111 al dominio HER2 está diseñado para ser diferente al de trastuzumab y
pertuzumab, dos anticuerpos comúnmente utilizados contra tumores HER2 positivos. En presencia de
estos anticuerpos monoclonales, MT-5111 aún puede unirse a HER2 e inducir una destrucción celular
eficaz. El ensayo clínico de fase 1 de MT-5111 está reclutando pacientes con tumores sólidos positivos
para HER2 que han progresado después de recibir otros tratamientos aprobados [143,144].
El ETB de tercera generación incluye además la fusión de un péptido extraño viral y Stx-A
desinmunizado a un scFv dirigido a PD-L1 (Figura 3A). El péptido viral se deriva del citomegalovirus (CMV).
Una vez que se administra en las células tumorales diana, el péptido viral se presentará como un antígeno
viral y puede activar las células T reactivas al CMV para reconocer y destruir las células tumorales. Esta
tecnología se conoce como “siembra de antígenos”; este ETB de tercera generación se está sometiendo a
pruebas preclínicas [145,146].
8. Aplicación biomédica de la subunidad B de la toxina

Shiga Stx-B es una herramienta ideal para dirigirse a las células que expresan Gb3. En humanos
sanos, la expresión de Gb3 está muy restringida a unos pocos tipos de células, incluidas las células
dendríticas [13]. Dado que las células dendríticas son células presentadoras de antígenos primarias y
desempeñan un papel fundamental en la inducción de respuestas de células T contra patógenos virales y
tumores, se ha explorado Stx-B para administrar antígenos en las células dendríticas para la presentación
de antígenos [147,148]. Haicheur y Benchetrit et al. descubrió que Stx -B conjugado con ovoalbúmina
(OVA), una proteína modelo antigénica de tamaño completo, administra de manera eficiente péptidos
exógenos en las vías de administración restringidas de MHC de clase I y clase II de células dendríticas de
ratón. Esta vía induce respuestas inmunitarias humorales y celulares sin el uso de adyuvantes [149]. Choy
et al. encontró que los ratones expuestos a Stx1B oral conjugado con el péptido NSP490 de la proteína no
estructural del rotavirus de mono (SA-11) estaban protegidos del ataque de gastroenteritis mediado por
rotavirus. Esto se debe a la fuerte respuesta mediada por Th1, lo que demuestra que la administración de
antígenos virales mediada por Stx-B puede provocar una respuesta tanto humoral como celular en ratones [150]. Ving
Toxinas 2021, 13, 222 10 de 19
puede dirigirse a las células dendríticas in vivo e inducir respuestas sólidas y sostenidas de células T
CD8+ específicas [54,151].
Stx-B también se ha utilizado para desarrollar vacunas contra Stx y EHEC. En 2019, Kordbacheh
et al. construyó el vector HcpA-EspA-Tir-Stx2-B (HETS) e inmunizó ratones BALB/c con la proteína
purificada [152]. Stx1-B y Stx2-B también se han fusionado con lumazina sintasa de Brucella abortus,
una proteína altamente inmunogénica y estable que sirve como andamio para presentar antígenos
extraños. Las proteínas quiméricas provocaron fuertes respuestas inmunes humorales contra diferentes
variantes de Stx en caballos. NEAST (toxina anti-Shiga equina neutralizante) se produce utilizando este
antígeno quimérico y ha superado con éxito los estudios preclínicos y de fase I. Los ensayos clínicos de
fase II/III están en curso en Argentina y están reclutando niños con diarrea sanguinolenta y Stx2 en las
heces [153].
Gb3 también se sobreexpresa en muchos cánceres humanos [154-164]. Por lo tanto, Stx-B ha sido
explorado para dirigirse a células cancerosas para formar imágenes de tejidos tumorales. Viel y Dransart
et al. inyectaron Stx-B marcado con fluoróforo por vía intravenosa en ratones desnudos xenoinjertados
con células HT29 que expresan GFP y estudiaron su distribución. Stx-B se acumuló en xenoinjertos
tumorales HT29 con alta expresión de Gb3. Además, se encontró que la Stx-B fluorescente se eliminaba
lentamente a través de la excreción renal. La tinción de inmunofluorescencia de la sección del tumor
confirmó que Stx-B no solo se acumuló en las células tumorales positivas para Gb3, sino que también
entró en las células epiteliales de la neovascularización que expresa Gb3, así como en los monocitos y
macrófagos alrededor de los tejidos tumorales trasplantados [54]. Stimmer et al. detectó la expresión de
Gb3 en muestras citológicas de cáncer de mama primario y metastásico, así como en xenoinjertos de
cáncer de mama humano (HBCxs) utilizando el conjugado Stx-B-CY3 [156].
Otro estudio de Couture et al. (2011) demostraron que las microvesículas que contienen Stx-B se
pueden usar para marcar células tumorales que expresan Gb3, que genera señales hiperecoicas en
imágenes de ultrasonido, y para imágenes de tumores moleculares y para guiar el tratamiento con
ultrasonido [ 165]. Por ejemplo, las microvesículas Stx-B se pueden utilizar para obtener imágenes por
ultrasonido con contraste de células de cáncer de vejiga que expresan Gb3 [158,166]. Los radiólogos
clínicos ya utilizan ampliamente la tecnología de ultrasonido con contraste , con la ventaja de evitar la
radiación ionizante [167].
Como el uso directo de Stx para la terapia del cáncer probablemente produce una alta toxicidad, se
han desarrollado varias estrategias para utilizar Stx-B para la entrega de cargas útiles citotóxicas alternativas.
La primera estrategia es usar Stx-B para administrar medicamentos que son menos potentes que Stx-A,
reduciendo así los efectos secundarios. Por ejemplo, Tarragó-Trani et al. usó Stx-B para administrar el
fotosensibilizador cloruro e6 (Ce6) a las células Vero positivas para Gb3. Ce6 es un fotosensibilizador de
segunda generación con actividad antitumoral cuando se usa junto con la irradiación. En comparación
con Ce6 libre, se ha demostrado que Ce6-Stx-B es más eficaz para administrar Ce6 en las células diana [168].
En 2007, Alaoui et al. diseñó un profármaco Stx-B-SH mediante la conjugación de camptotecina SN-38,
un compuesto camptocamptoide que inhibe la topoisomerasa I. Cuando se administra a células de cáncer
colorrectal HT-29 positivas para Gb3 y células HeLa, este compuesto induce la muerte de las células
diana [169 ]. Un año más tarde, el mismo grupo vinculó RO5-4864, un ligando con alta afinidad por los
receptores de benzodiacepinas periféricos mitocondriales (mPBR), a Stx-B a través de un brazo enlazador
escindible. El fármaco precursor se escinde intracelularmente para liberar el ingrediente activo, lo que
mejoró la actividad citotóxica y la especificidad antitumoral de RO5-4864 en células cancerosas cultivadas
[170].
En 2015, Batisse et al. combinó Stx-B con un potente derivado de auristatina (monometil auristatina
(MMA)) y optimizó la conjugación del fármaco, lo que demuestra que este sistema de direccionamiento
puede contribuir a la eliminación selectiva de células cancerosas positivas para Gb3 in vitro [171].
El mismo año, Kostova et al. sintetizó Stx-B-doxorrubicina (StxB-Doxo) y Stx-B monometil auristatina F
(StxB-MMAF), dos conjugados citotóxicos con fuerte actividad supresora de tumores en el rango
nanomolar contra las células HT29 [172].
La segunda estrategia consiste en utilizar cargas de proteínas/péptidos dirigidas a vías de
señalización citosólicas para reemplazar la altamente tóxica Stx-A. Esto se puede lograr mediante la
fusión de una proteína de carga directamente a un Stx-A modificado y desintoxicado y luego usando Stx-
B para la orientación y la entrega en células positivas para Gb3. En 2015, Ryou et al. diseñó la toxina similar a Shig
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portador (STC), un sistema de entrega que contiene Stx-B como dominio de unión al receptor y
Stx2A190-297 no tóxico como portador fusionado directamente con la proteína cargada (Figura 3B) [173].
Inspirado por el hecho de que el dominio de translocación de la exotoxina A (PE) de Pseudomonas
aeruginosa (la forma madura de los residuos 252 a 364) puede fusionarse genéticamente con una
variedad de sustancias (incluidas proteínas, enzimas y péptidos) y transportarlas de manera eficiente al
citosol [174], Ryo et al. mejoraron aún más su sistema STC al fusionar Stx-B con el extremo N del
dominio de translocación de la exotoxina A (ETA-II, TDP) de Pseudomonas aeruginosa; el extremo C-
terminal de TDP se fusionó con la carga de proteína que se iba a administrar. La secuencia de retención
de ER (KDEL) se fusionó con el extremo C de la carga para el transporte retrógrado. El TDP desempeña
un papel en el transporte retrógrado de la carga desde el RE hasta el citosol y, sin TDP, la carga no
puede liberarse en el citosol. Los autores utilizaron este sistema y administraron con éxito el péptido
N8A, que es un inhibidor de ratón doble minuto 2 (MDM2) que bloquea la degradación de p53 en las
células. El autor demostró que la inyección de Stx-B-TDP N8A suprimió el crecimiento tumoral in vivo en
modelos de ratón con xenoinjerto sin efectos secundarios significativos [175]. Se ha demostrado que el
mismo sistema de administración administra PEA-15, un regulador de la quinasa ERK, en las células. La
PEA-15 no fosforilada se une directamente a ERK2 y bloquea su función, y mediante el suministro
citosólico de mutantes de PEA-15 con diferentes sitios de fosforilación, así como afinidad por ERK2 a
través de la quimera Stx2B-ETAII, se encontró que el mutante de alta afinidad tiene una fuerte efecto
inhibitorio sobre la proliferación celular al bloquear las funciones intracelulares de ERK2 [176].
En 2019, Schmit y Neopane et al. mejoró aún más el sistema de administración al vincular Stx2B-
ETAII con la proteína de fusión monocuerpo de Von Hippel-Lindau (VHL). Este sistema se dirige a las
células cancerosas, con el objetivo de degradar la tirosina quinasa endógena Lck en las células T
Jurkat y mejorar la inhibición de la señalización del receptor de células T (TCR) [177]. VHL es el
receptor de sustrato del complejo de ligasa Cullin 2 E3. Puede reclutar el complejo ligasa E3 e inducir
la ubiquitinación y degradación de la proteína de fusión. El monocuerpo en este sistema de
administración se puede reemplazar con cualquier sustancia que se una a una proteína intracelular de
interés (POI). En combinación con VHL, un PDI intracelular puede ser objeto de degradación [177].
La inmunogenicidad sistémica de la proteína de la toxina es una posible limitación para la

aplicación generalizada del sistema de administración basado en Stx-B. Las posibles soluciones a este
problema inherente incluyen la eliminación de epítopos inmunogénicos mediante ingeniería de
proteínas, la encapsulación de la proteína [178] y la reducción de la acumulación de proteína mediante
aplicación local (p. ej., inyección intratumoral) [177].
9. Conclusiones
El brote de E. coli en Alemania en 2011, que causó SHU en más de 800 pacientes y 54 muertes,
fue producido por una nueva cepa, O104:H4 [179]. Esta cepa pertenece a la E. coli enteroagregativa en
lugar de las cepas EHEC habituales, pero adquirió virulencia al adquirir un gen Stx2, lo que ilustra la
amenaza continua de Stx de causar brotes importantes y la necesidad de desarrollar contramedidas
eficaces. El progreso reciente en el descubrimiento de factores del huésped y el establecimiento de una
comprensión molecular de la biosíntesis de Gb3 ha proporcionado nuevos objetivos para el desarrollo
de inhibidores que pueden proteger a las células de Stx. La función fisiológica y la distribución tisular de
Gb3 en humanos siguen siendo una cuestión abierta clave. Estudios recientes también han comenzado
a revelar el papel potencial de Stx en la domesticación de las respuestas inmunitarias y establecieron
modelos organoides intestinales humanos para comprender cómo las acciones de Stx pueden beneficiar
a las bacterias. La observación de que EHEC T3SS también requiere Gb3 es intrigante y merece una
mayor exploración. De manera emocionante, la proteína terapéutica basada en Stx ha entrado en
ensayos clínicos, lo que allanará el camino para aplicaciones biomédicas más amplias de herramientas
y terapias basadas en toxinas.
Contribuciones de los autores: Conceptualización, YL y MD; redacción—preparación del

borrador original, YL; redacción: revisión y edición, ST, HT y MD; creación de figuras: ST y YL;
supervisión, ST y MD; Todos los autores han leído y aceptado la versión publicada del manuscrito.
Toxinas 2021, 13, 222 12 de 19
Financiamiento: esta investigación fue financiada por el Borroughs Wellcome Fund (MD tiene el premio Investigator in the Pathogenesis of
Infectious Disease), la American Urologic Association/Urology Care Foundation y la Society of Urodynamics, Female Pelvic Medicine and
Urogenital Reconstruction (to HT) . El APC fue financiado por el Borroughs Wellcome Fund.
Declaración de la Junta de Revisión Institucional: No corresponde.
Declaración de consentimiento informado: No aplicable.
Declaración de disponibilidad de datos: no se aplica el intercambio de datos. No se crearon ni analizaron nuevos datos en este estudio.
El intercambio de datos no se aplica a este artículo.
Agradecimientos: Agradecemos a Xiaozhe Xiong por su ayuda con las figuras. Debido al enfoque limitado de esta revisión, la discusión y
la cita de muchos trabajos significativos e históricos tuvieron que ser excluidas. Pedimos disculpas por esas omisiones y remitimos a los
lectores a muchas revisiones exhaustivas y exhaustivas recientes sobre temas relacionados.
Conflictos de interés: Los autores declaran no tener ningún conflicto de interés.
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2. Estructura y función de Stx

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4. Modelos de células humanas cultivadas in vitro y modelos animales in vivo

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normalmente no puede infectar ratones [78-81], se ha desarrollado un modelo alternativo mediante la

5. Expresión de Gb3 en humanos y síndrome urémico hemolítico (SUH)

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plaquetas y megacarioblastos inmaduros en la médula ósea, induciendo su apoptosis [ 106,107 ]. La

6. Factores del huésped recientemente identificados a través de las pantallas

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7. Aplicación biomédica de la proteína de la subunidad A de

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8. Aplicación biomédica de la subunidad B de la toxina

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La inmunogenicidad sistémica de la proteína de la toxina es una posible limitación para la

Contribuciones de los autores: Conceptualización, YL y MD; redacción—preparación del

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Declaración de la Junta de Revisión Institucional: No corresponde.

Declaración de consentimiento informado: No aplicable.

Conflictos de interés: Los autores declaran no tener ningún conflicto de interés.

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