FACULTAD DE INGENIERÍA 

CARRERA DE INGENIERÍA AMBIENTAL

DEMOSTRACIÓN DE LA ESPECIFICIDAD ENZIMÁTICA

CURSO: ECOTOXICOLOGÍA

DOCENTE: CUMPA YUPTON, CARMEN CAROLINA

CICLO: VI

INTEGRANTES:

❖ GUEVARA HUAYLLA, JOSE JESUS - N00244728

❖ QUEZADA BENAVIDES, XIMENA IBETH - N00237385 - (Coordinadora)

❖ REYNA ROSADO, ANDREA SHAMIRA - N00257203

❖ RIVEROS COSTILLA, ANDREA CECILIA - N00253042

❖ ZUMARAN ZAMORA, DIEGO FABRICIO - N00237583

TRUJILLO - PERÚ

2022 - II
Práctica N° 6:

I. INTRODUCCIÓN.

La glucosa oxidasa es producida por Penicillium notatum. Esta enzima tiene

una afinidad extremadamente marcada por la glucosa. En la presente práctica
vamos a demostrar la especificidad de la enzima sobre un sustrato. Para ello,
emplearemos glucosa y fructosa; dos isómeros que tiene la formula general
C6H12O6.

La Glucosa oxidasa (GOD) cataliza la reacción siguiente:

Glucosa + O2 + H2O -----GOD-----→ Ácido Glucónico + H2O2.

El H2O2 uno de los productos de la reacción puede ser determinado utilizando

la enzima Peroxidasa, la misma que al actuar sobre el H2O2 libera Oxigeno, el
cual reacciona con la 4-aminofenazona (4-AF) y el fenol, en forma
proporcional a la concentración de H2O2.

La reacción es la siguiente:

2 H2O2 + 4 AF + fenol ----- POD----→ Quinona coloreada + 4 H2O.

II. OBJETIVOS.

▪ Demostrar la especificidad enzimática de la enzima de glucosa oxidasa

sobre la glucosa.

III. EQUIPOS Y MATERIALES DE LABORATORIO.

3.1. Materiales y Equipos.

▪ Pipetas

▪ Tubos de ensayo
 ▪ Cocina Eléctrica

3.2. Reactivos.
▪ Solución fructosa.
▪ Solución glucosa.
▪ Solución GOD/POD.

IV. PROCEDIMIENTO.

4.1. PREPARACIÓN DE 3 SISTEMAS.

▪ Utilizando la tabla a continuación se debe preparar 3 sistemas.

▪ Favor utilizar pipetas individuales por reactivo utilizado (no

contaminar pipetas).

Tabla 01: Sistema Experimentales:

COMPONENTES Y SISTEMA (Tubos)

PROCESO 1 2 3

Solución de Glucosa 1
- 0.1 -
g/L (mL)

Solución de Fructosa 1
- - 0.1
g/L (mL)

Solución GOD/POD (mL) 2.0 2.0 2.0

Incubar a 37 °C por 10 minutos.

Agua destilada (mL) 3.1 3.0 3.0

Mezclar por inversión

 ▪ Posteriormente leer mediante el colorímetro a 505 nm la absorbancia.

1.0 g/L
𝐹𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 = Lectura

𝐺𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎 = Abs Problemas x Factor

V. ESQUEMA
VI. RESULTADO
VII. DISCUSIÓN
VIII. CONCLUSIÓN

IX. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Carbonero, P. (2001). Complementos de bioquímica, Enzimas. Recuperado

de: https://oa.upm.es/54141/1/ENZIMAS.pdf
2. Vera, F. (2007). Enzimas: Qué son y para qué sirven. Recuperado de:
https://rac.es/ficheros/doc/00552.pdf
3. Nora, B.; Llanos, C. (2008). Distribución de las enzimas en los espacios
extra e intracelular. Recuperado de:
https://med.unne.edu.ar/sitio/multimedia/imagenes/ckfinder/files/files/Carrera
-Medicina/BIOQUIMICA/enzimas.pdf

X. CUESTIONARIO
1. Explicar el diseño experimental:

▪ Cuál es el propósito de cada tubo.

▪ ¿Cuál es el tubo control? ¿Es necesario más de un tubo control? Explicar

2. Observar los tubos y anotar sus observaciones en la sección resultados.

Explicar la discusión y conclusiones.
3. Diseñar una tabla con resultados.
4. Explique usted los tipos de especificidad enzimática.
La especificidad es una característica de mayor relevancia en las
enzimas y es determinante en la regulación del mecanismo celular.
Esta propiedad reduce la variabilidad de sustratos sobre los que una
enzima puede actuar. Se conocen varios tipos de especificidad, entre
 ellos:
● Especificidad óptica: Las enzimas presentan generalmente
una especificidad óptica absoluta por lo menos para una porción
de la molécula del sustrato.

● Especificidad de Grupo: Cuando una enzima actúa solo sobre

grupos químicos y particulares. algunas enzimas actúan sobre
un grupo determinado de moléculas, por ejemplo, las enzimas
que digieren las proteínas: catalizan reacciones hidrolizando
enlaces entre aminoácidos específicos; sin embargo, estos
enlaces serán hidrolizados en cualquier proteína que los
contenga y, por eso, su especificidad es relativa.

● Especificidad de sustrato: Acepta solo un tipo de sustrato.

● Especificidad de reacción: Llevan a cabo una reacción

específica, independiente del sustrato

● Activación energética: No todas las moléculas poseen la

misma energía, ya que tienen un promedio energético lo que
significa que mientras la mayoría de las moléculas tienen un
valor medio energético, algunas lo tienen muy bajo y otras muy
alto.

5. Qué tipo de especificidad enzimática representa glucosa oxidasa.

La reacción de la glucosa oxidasa junto con una reacción auxiliar se ha

utilizado ampliamente para la determinación de la glucosa en los fluidos
biológicos. Se han desarrollado multitud de reacciones auxiliares distintas a
 fin de mejorar la especificidad global del sistema de reacción o para retener
la especificidad inherente de la glucosa oxidasa.

A. La glucosa se oxida por acción de la glucosa oxidasa para dar

ácido glucónico y peróxido de hidrógeno.

B. El peróxido de hidrógeno reacciona en presencia de peroxidasa con HBA

y con 4-aminoantipirina (4-AAP) para dar lugar a un tinte de quinonimina
rojo. La intensidad del color formado es proporcional a la concentración
de glucosa y se puede medir fotométricamente entre 460 y 560 nm.

C. El método utilizado en este reactivo se basa en la reacción indicadora de

peróxido de hidrógeno que une 4-aminoantipirina a un compuesto
fenólico, como propuso inicialmente Trinder.

D. Este método se ha validado en un amplio estudio realizado por Pennock,

él mismo comparó el método de Trinder con otros seis métodos comunes
y descubrió que era muy fiable tanto en lo referente a la exactitud como a
la precisión. Pennock 5 y Sharp 6 y Szasz mostraron adicionalmente que
el método era resistente a los compuestos interferentes bien conocidos,
tales como el ácido úrico, la glutationa y la creatinina. La enzima glucosa
oxidasa (GOD) deriva normalmente del hongo Aspergillus, a veces del
Penicillium. La enzima procede de las glándulas faríngeas de las abejas.

6. Citar ejemplos de enzimas que catalizan reacciones específicas.

A. Hidrolasas: Catalizan reacciones de hidrólisis. Rompen las biomoléculas

con moléculas de agua. A este tipo pertenecen las enzimas digestivas.
B. Isomerasas: Catalizan las reacciones en las cuales un isómero se
transforma en otro, es decir, reacciones de isomerización.
C. Ligasas: Catalizan la unión de moléculas.
D. Liasas: Catalizan las reacciones de adición de enlaces o eliminación,
para producir dobles enlaces.
E. Oxidorreductasas: Catalizan reacciones de óxido-reducción. Ejemplo: La
 glucosa, oxidasa cataliza la oxidación de glucosa a ácido glucónico.
F. Transferasas: Catalizan la transferencia de un grupo de una sustancia a
otra. Ejemplo: la transmetilasa es una enzima que cataliza la
transferencia de un grupo metilo de una molécula a otra.