INSTRUCTIVO

DEMOSTRACION DE LA
ESPECIFICIDAD ENZIMTICA

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1. OBJETIVOS
1.1 Demostrar la especificidad enzimtica de la enzima de glucosa oxidasa sobre
la glucosa.

2. INTRODUCCION
La glucosa oxidasa es producida por Penicillium notatum. Esta enzima tiene una
afinidad extremadamente marcada por la glucosa. En la presente prctica vamos a
demostrar la especificidad de la enzima sobre un sustrato. Para ello, emplearemos
glucosa y fructosa; dos ismeros que tiene la formula general C6H12O6.
La Glucosa oxidasa (GOD) cataliza la reaccin siguiente:
Glucosa + O2 + H2O2 -----GOD----- cido Glucnico + H2O2.
El H2O2 uno de los productos de la reaccin pude ser determinado utilizando la enzima
Peroxidasa, la misma que al actuar sobre el H2O2 libera Oxigeno, el cual reacciona con
la 4-aminofenazona (4-AF) y el fenol, en forma proporcional a la concentracin de
H2O2.
La reaccin es la siguiente:
2 H2O2 + 4 AF + fenol -----POD---- Quinona coloreada + 4 H2O.

3. MATERIAL METODOS

3.1 Materiales:
Pipetas

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Tubos de ensayos
Bao mara
Cocina elctrica
3.2. Reactivos.
Solucin fructosa.
Solucin glucosa.
Solucin GOD/POD.

4.

PROCEDIMIENTO:
4.1.

PREPARACION DE 3 SISTEMAS.

Utilizando la tabla a continuacin se debe prepara 3 sistemas.

Favor utilizar pipetas individuales por reactivo utilizado (no

contaminar pipetas).

Tabla 01: Sistema Experimentales:

Solucin de Glucosa 1 g/L (mL)

1
-

SISTEMA (Tubos)
2
0.1

3
-

Solucin de Fructosa 1 g/L (mL)

0.1

2.0

2.0

2.0

COMPONENTES Y PROCESO

Solucin GOD/POD (mL)

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Incubar a 37 C por 10 minutos.

Agua destilada (mL)

3.1

3.0

3.0

Mezclar por inversin

Factor=

Posteriormente leer mediante el colormetro a 505 nm la absorbancia.

1.0 g /L
Lectura

Glucosa=|Problemas|x Factor

5. ESQUEMA.
Sistema experimental

GOD-POD

Tubo 1

Glucosa

Fructosa

GOD-POD

GOD-POD

Tubo 2

Tubo 3

Incubar durante 10 minutos a 37C

Agua
destilada
Tubo 1
3.1

Tubo 2
3.0

Tubo 3
3.0

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6. RESULTADO

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7. DISCUSION.

8. CONCLUSION.

9. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS.

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10. CUESTIONARIO.
1. Explicar el diseo experimental:

Cul es el propsito de cada tubo.

Cul es el tubo control? Es necesario ms de un tubo control? Explicar

2. Observar los tubo y anotar sus observaciones en la seccin resultados.

Explicar la discusin y conclusiones.
3. Disear una tabla con resultados.
Resultados
Tubos
1
2
3

1- 520Abs
-0.253
-0.248
-0.256

2-420 Abs
0.005
0.008
0.012

2- 520 Abs
-0.002
-0.013

4. Explique usted los tipos de especificidad enzimtica.

5. Qu tipo de especificidad enzimtica representa glucosa oxidasa.
6. Citar ejemplos de enzima que catalizan reacciones especficas.