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UNIVERSIDAD INCA GARCILASO DE LA VEGA

FACULTAD DE CIENCIAS FARMACEUTICAS Y


BIOQUIMICAS



Curso: Practica N 4 de Bioqumica ll
Tema: REVELACIN DE ENZIMAS
Alumna: Marlene Alvites Quispe
Profesor: Jack caldern Gmez
Ciclo: 7mo
Turno: Maana


Ao
2014

Introduccin

Las clulas llevan a cabo simultneamente una gran cantidad de reacciones
qumicas necesarias para la vida .muchos de los productos de esas reacciones se
necesitan inmediatamente, y si no fuera por la participacin de las enzimas, algunas
reacciones no se producirn tan rpido.
Las enzimas en su mayora protenas o RNA (riboenzimas) ,son catalizadores
qumicos que agilizan una reaccin que envuelve la formacin o rompimiento de
enlaces qumicos.
Las enzimas trabajan ptimamente bajo condiciones especficas y ciertos cambios
pueden alterar el funcionamiento de la enzima, desactivarla o hasta destruirla.
Algunas enzimas necesitan activadores para cambiar su conformacin de modo que
pueda formarse el complejo enzima-sustrato. Estos activadores se conocen como
cofactores y pueden ser tan simples como iones metlicos. Los cofactores orgnicos
se conocen como coenzimas. Las enzimas pueden afectarse negativamente por
inhibidores que impidan la actividad enzimtica. Estos inhibidores pueden afectar el
sitio activo de dos maneras-.competitivamente, al bloquear el sitio activo, o no
competitivamente, al pegarse en otro lugar de la enzima y alterar indirectamente la
forma del sitio activo.











Objetivo:
Fundamento terico:
LAS ENZIMAS
Son las encargadas de catalizar una reaccin qumica, son sustancia que sin
descomponerse aceleran las reacciones qumicas en los seres vivos, teniendo en
cuenta que intervienen en reacciones que se dan espontneamente pero por ningn
motivo las enzimas van a lograr reacciones imposibles. Pero si ayudan en que en el
interior de nuestro organismo se puedan llevar a cabo muchas reacciones.
El nombre de enzima, que fue propuesto en 1867 por el fisilogo alemn Wilhelm
Khne (1837-1900), deriva de la frase griega en zym, que significa 'en fermento'.En
la actualidad los tipos de enzimas identificados son ms de 2.000. Su variedad se
debe a que un tipo de enzima cataliza un tipo especfico de reaccin.

Efecto de la temperatura sobre la actividad enzimtica
Podemos decir que los aumentos en la temperatura aceleran las reacciones
qumicas ya que por cada diez grados centgrados que se aumentan se duplica al
doble su velocidad de reaccin. Pero recordemos que las enzimas estn compuestas
por polmeros de aminocidos, o sea que son protenas y tambin se pueden
desnaturalizar en cierto grado de temperatura, y una vez llega al punto mximo al
que puede aguantar (grado optimo), esta pierde su actividad cataltica y la actividad
enzimtica disminuye rpidamente hasta anularse.


La Aldehdo oxidasa (AO) es una enzima metablica localizada en el citoplasma . y
est presente tanto en el reino animal como en el vegetal. En los vertebrados,
constituye la pequeo sub-familia de molibdo-flavoenzimas. Requiere un cofactor de
molibdeno (MoCo) y flavina adenina dinucletido (FAD) para su actividad cataltica,
es activa como un homodmero y cada monmero de aproximadamente 150 kDa 1 .
La aldehdo oxidasa tiene una amplia especificidad de sustrato y cataliza la oxidacin
de aldehdos en cido carboxlico as como la hidrozilacin de algunos N-heterociclos
2 . Tambin puede catalizar la oxidacin del citocromo P450 (CYP450) y de los
productos intermedios de la monoamino oxidasa (MAO). Debido a su estructura
nica, distribucin y reconocimiento de sustrato, la aldehdo oxidasa juega un papel
muy importante en la metabolizacin de muchos frmacos.
Las peroxidasas
Son un tipo de enzimas muy extendidas en todo el rbol filogentico de la vida.
Pertenecen a la categora de las oxidorreductasas y segn el Comit de
Nomenclatura de la Unin Internacional de Bioqumica y Biologa Molecular se
clasifican con los nmeros EC 1.11.
En vegetales, es de destacar a la peroxidasa del rbano (horseradish peroxidase o
HRP), que tiene grandes aplicaciones en tcnicas inmunoqumicas y de diagnstico
clnico debido a su gran estabilidad, facilidad de conjugacin con las
inmunoglobulinas y sencillez para detectarla por mtodos colorimtricos utilizando un
gran nmero de reactivos.
Prcticamente todas las peroxidasas son hemoprotenas (excepcin notable es la
glutationa peroxidasa, que es una selenoprotena) y tienen como sustrato comn el
H2O2 o perxido de hidrgeno. La gran afinidad por este sustrato hace que se pueda
unir al hierro del grupo hemo por los dos planos del centro activo, el superior y el
inferior, dando lugar a una inhibicin por exceso de sustrato ya que cuando ambas
posiciones estn ocupadas por el perxido de hidrgeno no es posible la unin del
otro sustrato.
El pirogalol es una sustancia slida, blancuzca, que se disuelve en agua dando
soluciones incoloras, y que se oxida muy fcilmente en presencia de bases como el
hidrxido de sodio (NaOH). En otras palabras, la combinacin de oxgeno y pirogalol
da lugar a otra sustancia (llamada quinona), diferente de las anteriores, cuyas
soluciones acuosas son de color marrn. Esta transformacin se describe
simblicamente como:
Pirogalol + O2 (gas) Quinona
Solucin incolora solucin marrn
Esta capacidad para combinarse con oxgeno hace que el pirogalol sea muy usado
como secuestrante de oxgeno; as, por ejemplo, sus soluciones son muy utilizadas
para purificar gases, eliminando el oxgeno que contienen.



La bencidina es: H2N-R-R-NH2, donde R es un anillo de benceno. Su frmula es
(C6H4NH2)2.
Su propiedad ms importante es que se trata de un indicador analtico para
determinacin de oxidantes. En disolucin en alcohol es incolora. Pero en presencia
de un oxidante se oxida por prdida de dos protones y dos electrones a lo que se
llama su forma "meroquinoidea", que tiene color azul. As pues, en presencia de un
oxidante cambia de color, lo que permite determinar la presencia del oxidante.

Parte experimental:
Materiales:
Pipetas
Gradillas
Pizeta
Beacker.
Reactivos:
Azul de metileno
Vaselina liquida
Pirogalol
Bencidina.

REVELACIN DE ALDEHIDOOXIDASA.
Tubo 1 Tubo 2

5mL de leche 5mL de leche
1mL H2O 1mL aldehdo
1mL de azul de metileno 1mL azul de metileno
Vaselina liquida Vaselina liquida
Bm a 38 C Bm a 38 C


RESULTADOS


REVELACION DE PEROXIDASA
TEST DE BENZIDINA:
El Tubo 1

El tubo 2 (blanco)
1mL de papa (zumo) 1mL de papa (zumo)
0.5 mL de benzidina
II gotas H
2
0
2


Para ser la revelacin de peroxidasas se va usar dos tubos con la misma muestra
Para hacer las comparaciones
Este mismo procedimiento se realiza con:
La mandarina, sandia, papaya, nabo, manzana, uva, kiwi.
RESULTADOS:
En esta prueba despus de homogenizar y dejar en reposo la muestra, en el 1er tubo
se agreg las dos gotas de perxidos se observ un color complejo verde azulado.lo
que significa que es una reaccin positiva.
Esta prueba realizada con el nabo el precipitado fue ms fuerte el color muy intenso
por lo que demuestra que tiene ms oxidante, tiene ms peroxidasas.









TEST DE PIROGALOL
Tubo 1


Trozos de papa

2mL pirogalol

II gotas H
2
O
2


Para ser el test de pirogalol se va usar dos tubos con la misma muestra Para hacer
las comparaciones
Este mismo procedimiento se realiza con:
La mandarina, sandia, papaya, nabo, manzana, uva, kiwi.
RESULTADOS:
En esta prueba se observ que la papa blanca, la papa amarilla, kiwi, sandia dio un
color parduzco amarillento. En la manzana tambin reacciono positivo pero en baja
proporcin a diferencia con el nabo un color parduzco amarillento intenso por el alto
contenido de antioxidante.
Esta misma prueba se realiz con la mandarina pero no se observ reaccin.










REVELACION DE UREASA


RESULTADOS:


DISCUSION
Los aldehdos Tambin estn presentes en la oxidacin de los alcoholes y por lo
tanto cuando tomas bebidas alcohlicas la resaca que se produce en el cuerpo en
gran medida es responsabilidad de los aldehdos. Tambin los aldehdos son
altamente txicos y muy irritantes a la piel.











UN TUBO


2 mL urea
Fenolftalena


0.25 gr harina de soya

Bm a 38 C









REFERENCIA.
1.- http://www.joseacortes.com/galeriaimag/microorganismos/ureasa.jpg
2.- Bioqumica de Harper, 13 edicin.
3.- Laguna, Jose Bioquimica, 2 ed.
4.- Laguna, Jose Bioquimica, 2 ed., Facultad de Medicina, UNAM, Mexico D.F.,
Fournier S.A