Laboratorio de Bioqumica. TEMA: Accin de la amilasa(6) y Determ.

de oxido-reductasas en material biolgico(7)

UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN

MARCOS
FACULTAD DE QUMICA, INGENIERA QUMICA E
INGENIERA AGROINDUSTRIAL
ESCUELA ACADMICO PROFESIONAL DE QUMICA

DEPARTAMENTO ACADMICO DE ORGANICA

LABORATORIO DE BIOQUMICA
Laboratorio N 6 y 7
TEMA

ACCION DE LA AMILASA. Comparacin de la -amilasa de la

saliva y del acido clorhdrico sobre la reaccin de la hidrlisis
del almidn.
Determinacin de las Oxido-reductasas en Material Biolgico.

PROFESOR :

MG. JUAN C. WOOLCOTT HURTADO

Laboratorio de Bioqumica. TEMA: Accin de la amilasa(6) y Determ. de oxido-reductasas en material biolgico(7)

ALUMNO

HORARIO

TIPULA MAMANI, JAVIER

MIERCOLES DE 14:00 A 18:00 HORAS

LIMA, Junio del 2013

TABLA DE CONTENIDO

Pg.

RESUMEN.

INTRODUCCION..

FUNDAMENTO TEORICO....

DETALLES EXPERIMENTALES..

10

DISCUSIN DE RESULTADOS

14

CONCLUSIONES..

18

BILIOGRAFIA..

19

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RESUMEN

La primera prctica tiene como objetivo la comparacin de la actividad enzimtica

con un catalizador no biolgico, usando como enzima a la amilasa salival y como
catalizador no biolgico al HCl, en la hidrlisis del almidn, la misma que se
comprob con el reactivo de Fehling por medio de la reduccin del Cu

2+

a Cu2O(s)

(rojo) por accin de la maltosa (disacrido reductor) formado en la hidrlisis del

almidn. Adems se pudo observar la velocidad de la hidrolisis mediante la reaccin
del almidn con el lugol la cual dio una coloracin azul que luego va decolorndose
por la formacin de la maltosa, lo que manifest que se produjo la hidrolisis.
La segunda practica tiene como objetivo la revelacin de las oxido reductasas en
material biolgico. Usamos la papa, rbano y la leche, a las dos primeras se le
agrego bencidina y perxido ya que estos tubrculos presentan la enzima peroxidasa
la cual va a catalizar la reaccin de oxidacin de la bencidina a difenoquinoidiimina,
esta reaccin se manifest por la formacin de un complejo verde azulado. Debido a
que la leche presenta la enzima aldehidoxidasa se le agrego formaldehido, esta
enzima cataliza la reaccin de deshidrogenacin de diferentes aldehdos lo cual se
puede observar por la decoloracin del azul de metileno.

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INTRODUCCIN

Las enzimas son polmeros de aminocidos, las cuales se encuentran en todos

los seres vivos y que desde el punto de vista bioqumico son protenas que poseen
una capacidad asombrosa para acelerar reacciones qumicas de sntesis y
degradacin de compuestos. stas se distinguen por poseer tres caractersticas
nicas: poder cataltico, especificidad y regulacin, lo cual facilita los diferentes
procesos biolgicos en todo tipo de vida, al igual que en procesos industriales.
Estos catalizadores biolgicos tienen numerosas aplicaciones en diversas reas.
Por ejemplo, el uso de procesos biotecnolgicos para producir productos
qumicos es cada vez ms importante. La variedad de productos que se pueden
obtener por estos procesos es muy amplia, as se pueden encontrar productos
farmacuticos

(insulina,

antibiticos,

hormonas),

especialidades

qumicas

(aminocidos, vitaminas, biopolmeros), alimentos y bebidas (edulcorantes,

bebidas

alcohlicas),

sin

olvidar

ciertos

productos

agrcolas

(pesticidas,

funguicidas, herbicidas) y ambientales (lavado de minerales, concentracin

metales) etc. Los procesos biolgicos utilizan, para realizar las transformaciones
necesarias, clulas vivas o enzimas que ellas utilizan en su metabolismo.
En el presente informe se determina la presencia de enzimas oxido-reductasas en
la leche, jugo de papa y rbano, las cuales son detectadas por mtodos
colorimtricos utilizando diferentes reactivos.

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FUNDAMENTO TERICO
Enzimas:
Las enzimas son protenas especficas que actan como catalizadores de las
reacciones bioqumicas en todos los seres vivos. La actividad enzimtica puede
comprobarse experimentalmente mediante la identificacin y cuantificacin de
los productos formados en las reacciones que ellas regulan. La accin de estos
compuestos proteicos en una reaccin es afectada por la variacin de factores
fsicos y qumicos tales como la temperatura, la concentracin de la enzima y del
sustrato, el pH, etc.

Clases de Enzimas:
Es necesario contar con una clasificacin para sistematizar las diferentes
enzimas que catalizan los miles de reacciones que ocurren en el organismo. A
todas las enzimas se les asignan un numero de clasificaciones enzimtica (EC,
enzyme classification) de cuatro dgitos. El primer digito indica una de las seis
principales clases de enzimas de la tabla. Los dos dgitos siguientes sealan
subclases y subsubclases de sustrato.

Clase 1: Oxidorreductasas
Cataliza la transferencia de equivalentes de reduccin de un sistema
redox a otro.
Clase 2: Transferasas
Cataliza la transferencia de grupos funcionales de un sustrato a otro.
Clase 3: Hidrolasas
Catalizan la transferencia de grupo, pero la molcula aceptora es
exclusivamente una molcula de agua.
Clase 4: Liasas
Denominadas tambin Sintasas. Estn relacionadas con la adicin o
extraccin de H2O, NH3 o CO2
Clase 5: Isomerasa
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Catalizan las reacciones de isomerizacin recolocando los tomos de

una molcula, por lo que no afectan a la composicin del sustrato.
Clase 6: Ligasas
Tambin llamadas Sintetasas, utilizan ATP para catalizar reacciones de
sntesis dependientes de energa.

Clase 1: Oxidorreductasas
En las reacciones, catalizadas por las oxidorreductasas, el sustrato que se
oxida se considera como donador de hidrogeno o electrones, y aceptor pueden
ser sustancias naturales (coenzimas, NAD, FAD, NADP, FMN, CoQ, oxigeno,
compuestos orgnicos, citocromos, etc.) y xenobioticos.
Como ejemplos tenemos a la Peroxidasa y aldehidoxidasa, principales
enzimas en plantas y leche respectivamente.

Peroxidasa:
Esta es una protena grande que consiste de cientos de aminocidos y
que presenta como grupo prosttico un grupo Hem, cuyo tomo central
de hierro forma complejos con diferentes compuestos, como el cianuro
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y la hidroxilamina, inhibiendo su actividad enzimtica. Se encuentra en

los peroxisomas, en los cloroplastos, en las vacuolas y en la pared
celular. La papa y las races del rbano contienen una gran cantidad de
esta enzima. Adems de estar relacionada en la proteccin de la clula
contra daos oxidativos causados por el H 2O2, tambin interviene en el
pardeamiento enzimtico y en los procesos infecciosos, as como en la
elongacin de la raz y en los procesos de lignificacin de la pared
celular.
La funcin normal de la peroxidasa es convertir el perxido de
hidrogeno, producido en ciertas reacciones metablicas, en agua y
oxigeno.

La accin de la peroxidasa se puede medir por la formacin del oxigeno.

La cantidad de oxigeno presente despus de la reaccin puede ser
medida de dos formas: mediante la acumulacin de gas en un sistema
cerrado a un manmetro o por la aparicin de oxigeno qumicamente
activo.

Algunos tintes reaccionan con el oxigeno reactivo (O -2), cambiando de

un estado incoloro a uno con color. La reaccin catalizada por la enzima
forma un producto que entra en una reaccin secundaria con el tinte. La
enzima no se une o afecta al tinte.
En la prctica se utiliz como agente reductor a la bencidina, dando un
color azul intenso al aadir una solucin de rbano y unas gotas de
agua oxigenada.
Reaccin de la Bencidina con el oxigeno formado a partir de la oxidacin
del perxido de hidrogeno por la enzima peroxidasa:

Otro agente reductor utilizado es el pirogalol (1,2,3-bencenotriol), en

donde una prueba positiva se manifiesta por la coloracin marrn-pardo
de la solucin de rbano, perxido de hidrogeno y pirogalol.
La prueba de la bencidina sera preferible a la del pirogalol por ser ms
visible el cambio de color.
Aldehidoxidasa:
La leche es bastante rica en aldehidoxidasa; contiene alrededor de
0,12g/l. Es una flavoprotena, y la molcula de la enzima agrupa dos
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molculas de FAD, dos tomos de molibdeno y 8 tomos de hierro.

Realiza varias reacciones de oxidoreduccin. Puede ser puesta en
evidencia mediante la reduccin del azul de metileno en presencia de
un aldehdo, el formol por ejemplo. El colorante se reduce a la forma de
un leuco derivado incoloro, y es oxidado el aldehdo.
Esta oxidasa es bastante resistente al calentamiento, se destruye a
80C durante 10 segundos. Tiene una curiosa propiedad de aumentar
su actividad tras un tratamiento trmico no desnaturalizante. Este
hecho puede ser consecuencia de la liberacin de la enzima de un
complejo poco activo, o de la desnaturalizacin de un inhibidor.

AMILASA
Accin digestiva:
Est determinada por la AMILASA SALIVAL o TIALINA, sta es una amilasa que
tiene como sustratos:
- almidn
- dextrgeno
- glucgeno.
Sobre el almidn acta produciendo en la etapa final maltosa, pasando por una
etapa intermedia de dextrinas.
AMILASA

ALMIDN

AMILODEXTRINA (azul)

ERITRODEXTRINA (rojo)

ACRODEXTRINA (color yodo, se considera incoloro)

MALTOSA

La AMILASA tiene activadores e inhibidores:

Activadores:
Cloruro
Yoduro
Bromuro
Nitratos
aa (el mejor es la asparagina)

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Calidad de la dieta ( rica en HC la estimulan, pero una rica en lpidos y protenas, no

es buen estimulante).
Inhibidores:
Sales de Hg y Ag (plata)
Protena que est en el germen del trigo
La amilasa, denominada tambin ptialina o tialina, es un enzima hidrolasa que tiene
la funcin de digerir el glucgeno y el almidn para formar azcares simples, se
produce principalmente en las glndulas salivares (sobre todo en las glndulas
partidas) y en el pncreas. Tiene un pH de 7. Cuando una de estas glndulas se
inflama aumenta la produccin de amilasa y aparece elevado su nivel en sangre.
Fue la primera enzima en ser identificada y aislada por Anselme Payen en 1833,
quien la bautiz en un principio con el nombre de diastasa.
En pocas palabras, en biologa es una enzima presente en la saliva, que hidroliza el
almidon de todo alimento.

Clasificacin:
-Amilasa:
(Nombre alternativos: 1,4--D-glucano-glucanohidrolasa; glucogenasa)
Las amilasas son enzimas dependientes de cloruro, completamente afuncionales en
ausencia de iones de cloruro. Actan a lo largo de cualquier punto de la cadena de
los carbohidratos, descomponindolos en dextrina desde la amilopectina. Dado que
puede actuar en cualquier punto de la cadena es ms rpida que la -amilasa. En
los animales es una enzima digestiva mayor y su pH ptimo est entre 6.7 y 7.2.

-Amilasa:
(Nombres alternativos: 1,4--D-glucano-maltohidrolasa; amilasa sacarognica)
Otra forma de amilasa, la -amilasa es tambin sintetizada por bacterias, hongos y
plantas. Acta desde el extremo no reductor de la cadena, catalizando la hidrlisis
del segundo enlace -1,4, rompiendo dos unidades de glucosa (maltosa) a la vez.
Durante el proceso de maduracin de la fruta la -amilasa rompe el almidn en
azcar dando lugar al sabor dulce de la fruta. La amilasa presente en el grano de
cereal es la responsable de la produccin de malta. Muchos microorganismos
tambin producen amilasa para degradar el almidn extracelular. Los tejidos
animales no contienen -amilasa, aunque puede estar presente en microorganismos
saprfitos del tracto gastrointestinal. Tiene un pH ptimo de 12.
-Amilasa:

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(Nombres alternativos: Glucano 1,4--glucosidasa; aminoglucosidasa; Exo-1,4-glucosidasa;

glucoamilasa;
-glucosidasa
lisosmica;
1,4--D-glucano
glucohidrolasa)
Adems de romper el ltimo enlace (1-4) glicosdico en el extremo no reductor de la
cadena de amilosa y amilopectina, liberando glucosa, la -amilasa puede romper los
enlaces glicosdicos (1-6). A diferencia de las otras amilasas esta forma es ms
eficaz en medios cidos y su pH ptimo es de 3. Tambin colabora en el momento de
la excitacin.
Usos:
Las enzimas amilasas son empleadas en la fabricacin de pan para romper azcares
complejos como el almidn (presente en la harina) en azcares simples.
La levadura puede entonces alimentarse de esos azcares simples y convertirlos en
productos de fermentacin alcohlica. Este proceso da sabor al pan y hace elevar la
masa. Las clulas de la levadura contienen amilasas pero necesitan tiempo para
fabricar la suficiente cantidad para romper el almidn. Este es el motivo de la
necesidad de largos tiempos de fermentacin (especialmente para determinadas
masas). Las tcnicas modernas de elaboracin de masas incluyen la presencia de
amilasas para facilitar y acelerar estos procesos.
Algunas amilasas bacterianas se emplean como detergentes para disolver almidones
en determinados procesos industriales.
En la maduracin de frutas la amilasa es sintetizada en la maduracin, degradando
el almidn de las frutas en azcar, y volvindolas ms dulces.

DETALLES EXPERIMENTALES
Prctica N 06:

ESTUDIO DE ACCIN DE LAS ENZIMAS: Accin de la Amilasa Salival.

Reactivos:
Amilasa (Saliva).
cido Clorhdrico 10%.
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Almidn.
Azul de Metileno 0.01%.
Formaldehdo 0.4%.
Jugo de papa.
Leche de vaca.
Extracto de rbano.

Materiales:
Tubos de ensayo.
Gradillas.
Pipetas.
Baguetas.
Termmetro

FUNDAMENTO:
La hidrlisis del glucgeno ( almidn) puede ser catalizada por cidos por
enzimas. En la hidrlisis catalizada por cidos hay un rompimiento desordenado de
enlaces, con la formacin intermedia de todos los posibles oligosacridos y con la
conversin final de estos oligosacridos a glucosa. Las enzimas son ms especficas
con respecto a los enlaces rotos, por ejemplo la alfa-amilasa cataliza la hidrlisis
rpida y ordenada de enlaces internos alfa(1-4) y no hidroliza los enlaces alfa(1-6),
ni maltosa; La alfa-amilasa acta rompiendo el glucgeno inicialmente en dextrinas
ramificadas de peso molecular mediano, formando solamente pequeas cantidades
de maltosa; posteriormente disminuye el peso molecular de las dextrinas, a travs
de rompimientos relativamente lentos dando glucosa y un oligosacrido con un
residuo de glucosa menos.
Los productos finales de la degradacin son: glucosa, maltosa e isomaltosa. Debido
a que durante la hidrlisis, ya sea catalizada por cidos por alfa-amilasa, hay un
incremento de grupo reductores, el progreso de la reaccin puede ser observado
midiendo la cantidad de azcares reductores por reduccin del 3,5-dinitro salicilato.
El grado porcentaje de hidrlisis se determina comparando la cantidad del azcar
reductor formado en un tiempo dado con la cantidad del azcar presente despus de
la hidrlisis acida total.

CURSO DE LA DETERMINACIN:
En tres tubos de ensayo se coloc:

Tubo N 1 : Agua.
Tubo N 2 : 1 mL de cido Clorhdrico.
Tubo N 3 : 1 mL de Saliva Diluda.

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A todos los tubos se le aade 5mL de solucin de almidn (la cual se prepar con
anterioridad diluyendo el almidn starch en agua destilada y calentando para
ayudar a la disolucin) una vez agregada la solucin de almidn se agita cada uno
de los tubos con una bagueta, posterior a esto se coloca los tubos en bao de agua
durante 15 minutos de la siguiente manera:

Tubo N 1 : Bao de agua a 38 C.

Tubo N 2 : Bao de agua hirviendo.
Tubo N 3 : Bao de agua a 38 C.

Una vez pasado este tiempo se dejan enfriar los tubos, una vez fros los tubos se
aadi 2 gotas de solucin de yodo, observndose un cambio de coloracin en la
muestra. Tal como sigue:
MUESTRA

COLORACION

Tubo N 1

Azul

Tubo N 2

Amarilla

Tubo N 3

Amarilla

Para la determinacin de maltosa se tom 1mL de casa solucin, se le agreg 1mL

de reactivo de Fehling, el cual determinar la presencia de maltosa al formase un
precipitado rojo de oxido cuproso.
MUESTRA

FORMACION DE
PRECIPITADO

Tubo N 1

Negativo

Tubo N 2

Positivo

Tubo N 3

Positivo

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Prctica N7:
DETERMINACIN DE LAS DIFERENTES CLASES DE ENZIMAS:
Determinacin de Oxido-Reductasas en material biolgico.

Revelacin de Aldehidoxidasa en la Leche

FUNDAMENTO:
El mtodo de revelado de la enzima aldehidoxidasa se basa en la observacin visual
sobre la decoloracin de azul de metileno, el cual liga el hidrogeno que se desprende
con la participacin de la aldehidoxidasa del sustrato (en este caso la leche).
La enzima aldehidoxidasa cataliza la reaccin de deshidrogenacin de diferentes
aldehdos, como por ejemplo, la del formaldehido.
En este caso el H se transporta hacia FAD, que es el coenzima de la enzima dada
(aldehidoxidasa) y luego sobre el aceptor final (el oxigeno).
Al agregar el azul de metileno (AM) - (el cual es el aceptor artificial de hidrgeno) en
condiciones de ausencia de oxigeno se origina la forma reducida de este (forma leico:
AMH2). Ahora, si la solucin incolora de azul de metileno (AM) se agita entonces
nuevamente adquiere el color azul como producto de su oxidacin.

CURSO DE LA DETERMINACIN:
En dos tubos de ensayo se coloc 5 mL de leche fresca y posteriormente se aadio:

Tubo N 1 : 1mL de agua destilada.

Tubo N 2 : 1mL de formaldehdo.

Luego, a ambos tubos de ensayo se les aadi 1mL de solucin de azul de metileno
(AM) y por ltimo se aade 3 a 4 gotas de aceite de vaselina (para proteger la
muestra lquida del contacto con el oxigeno del aire). Los dos tubos se colocaron en
bao de agua calentado a una temperatura constante de 37 C por un tiempo entre
5 10 minutos. Pasado este tiempo se comparo la coloracin de ambas muestras.
Observndose que la muestra del tubo N 1 tiene una coloracin azul y la del tubo
N 2 no.
NOTA: Nos referimos a la coloracin de todo el lquido no solo de la superficie.
Por ltimo, despus de hacer la comparacin del color, procedimos a agitar
fuertemente los dos tubos observando que la coloracin azul aparece en los dos.

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Revelacin de la Peroxidasa en la Papa y el Rbano

FUNDAMENTO:
Este proceso enzimtico est basado en la capacidad de la Peroxidasa de catalizar la
reaccin de oxidacin de la benzidina a difenoquinoidiimina con perxido de
hidrogeno. El compuesto difenoquinoidiimina, se condensa con la molcula de la
benzidina no oxidada en la formacin de un complejo verde azulado que en algunos
casos por estado de los reactivos o de la sustancia en la que se analiza se ve verde
parduzco.

CURSO DE LA DETERMINACIN:
En dos tubos de ensayo se coloc:

Tubo N 1 : Extracto de papa.

Tubo N 2 : Extracto de rbano.

A cada uno de estos tubos se le aadi 5 gotas de una solucion alcohlica de

benzidina y una gota de perxido de hidrogeno observando un cambio de coloracion
en el caso del extracto de rbano que adquiere una coloracin verde parduzca.

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DISCUSIN DE RESULTADOS
Prctica N 06:

ESTUDIO DE ACCIN DE LAS ENZIMAS: Accin de la Amilasa Salival.

El mtodo usado est basado en la velocidad de hidrlisis del almidn a su vez de

sus diferentes tipos de productos por su hidrlisis obtenindose los siguientes
resultados:
Revelacin

Catalizador

Sustrato de la
Reaccin

Producto de
la Reaccin

Sustrato

Producto

Agua

almidn

almidn

-----------

-------------

Saliva

almidn

maltosa

R. Fehling

Oxido de Cu

Ac. Clorhdrico

almidn

maltosa

R. Fehling

Oxido de Cu

Los resultados expuestos en este cuadro se ven en la siguiente imagen:

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En esta imagen podemos apreciar como el tubo N 1 el cual contena agua dio
positivo al indicador de yodo, esto se debe, a que a diferencia de los otros dos casos,
tubo N 2 y tubo N 3, con el agua no se produce la hidrlisis del almidn, por tanto,
el almidn queda intacto dando la coloracin azul del complejo caracterstico con
yodo. En el caso de la amilasa salival y el acido clorhdrico estos si cambian la
coloracin al agregar el yodo, estos toman una coloracin amarilla la que puede
indicar la presencia de acrodextrinas.

Al realizar la prueba con el reactivo de Fehling observamos que esta sera

innecesaria para el tubo N1 (agua) debido a q no existen productos de hidrlisis y
por tanto ausencia de azucares reductores; en los dos casos siguientes vemos que se
produce la formacin de un precipitado rojo de oxido cuproso debido a la presencia
de la maltosa (azcar reductor). Observemos la siguiente imagen:

Tubo N 3

Tubo N 2

En esta imagen podemos observar la formacin del precipitado de xido cuproso el

cual se presenta con mayor abundancia en el tubo N 2 (amilasa salival) que en el
tubo N 3 (cido clorhdrico) este resultado se debe a que la hidrlisis con la amilasa
salival fue mayor que con el cido clorhdrico debido a que el tubo N 2 estuvo
expuesto a una temperatura mayor que el tubo N 3.

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Prctica N7:
DETERMINACIN DE LAS DIFERENTES CLASES DE ENZIMAS:
Determinacin de Oxido-Reductasas en material biolgico.

Revelacin de Aldehidoxidasa en la Leche

Al realizar la experiencia podemos observar un problema al comenzar, al no contar
con el aceite de de vaselina no se puede proteger la solucin del oxigeno del aire y
por tanto la superficie del lquido reaccionar tomando la coloracin del azul de
metileno como se observa en la primera figura:

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Tubo N 1

Tubo N 2

Aun as podemos notar el tubo de la izquierda, tubo N1, cierta parte de la solucin
ha adquirido la coloracin del azul de metileno, esto se debe a la presencia de
oxigeno del agua; en el otro caso, tubo N 2, vemos que esta coloracin solo se da en
la superficie debido a la presencia del oxigeno del aire.
Despus de calentar vemos que las muestras del tubo N 1 y tubo N 2 se mantienen
incoloras como se ve en la figura:

Posteriormente y con agitacin vigorosa las muestras cambian de coloracin como

se observa en la siguiente imagen:

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Revelacin de la Peroxidasa en la Papa y el Rbano

Los resultados visuales que se obtuvieron al realizar la siguiente experiencia son los
siguientes:

Tubo N 2

Tubo N 1

Podemos apreciar en esta imagen que: En el tubo N 2 se produce la reaccin de la

oxidacin de la benzidina en difenoquinoidiimina, esta conclusin es apreciable
debido a la aparicin verdosa de la solucin, as como tambin podemos decir que
en el jugo o extracto de papa hay ausencia o poca cantidad de la enzima que cataliza
esta reaccin debido a que esta no adquiri la coloracin que determina que la
reaccin se positiva.

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CONCLUSIONES

Las reacciones catalizadas por enzimas son muchos mas rpidas y mas completas
que las correspondientes reacciones no catalizadas.
El incremento de la velocidad en las reacciones catalizadas depende de la colcacin
exacta del sustrato en la proximidad y con la orientacion adecuada respecto al
grupo cataltico.
la -amilasa cataliza la hidrlisis rpida y ordenada de enlaces internos (1-4) y no
hidroliza los enlaces (1-6).
Los productos finales de la degradacin por hidrlisis del almidn son: glucosa,
maltosa e isomaltosa.
La enzima aldehidoxidasa reacciona con la lactosa de la leche , la cual presente un
grupo aldehdo dando las coloraciones especificas al tratarlo con azul de metileno.
En el extracto de rbano hay presencia de Peroxidasa que catalizan la oxidacin de
la benzidina a difenoquinoidiimina.
En el jugo o extracto de papa hay ausencia o poca cantidad de Peroxidasa que
cataliza esta reaccin debido a que esta no adquiri la coloracin verdosa que indica
que el resultado es positivo.

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BIBLIOGRAFA

http://www.scielo.org.bo/pdf/rbfb/v16n1/v16n1a08.pdf
http://members.tripod.com/biol_uprponce/images/pdfs/ag04/Lab_06_Prop_
Enzimas_s.pdf
Bioqumica: Texto y Atlas, Jon Koolman, Editorial Medica Panamericana, 3ra
Edicin, pg. 89.
Bioqumica Mdica, John W. Baynes y Marek H. Dominiczak, Editorial
Elservier, 2da Edicin, pg. 54-56.