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TECNOLOGICO DE ESTUDIOS SUPERIORES DE ECATEPEC DIVISION DE INGENIERIA: QUIMICA Y BIOQUIMICA.

ESPINOSA RAMIREZ ANGEL

EFECTO DEL PH SOBRE LA ACTIVIDAD DE LA AMILASA SALIVAL INTRODUCCION: Se ver el efecto del PH sobre la actividad de la enzima amilasa salival bajo las condiciones establecidas, en presencia del almidn. OBJETIVO GENERAL: Saber la actividad que tiene la amilasa salival sobre el polisacrido y si tiene relacin con el PH. OBJETIVOS ESPECIFICOS: 1) Conocer la reaccin existente entre la amilasa y el polisacrido. 2) Conocer el comportamiento del almidn de manera pura. 3) Conocer el PH y temperatura optima con la que la actividad enzimtica tenga mejor rendimiento. MARCO TEORICO: A) Propiedades del almidn. El almidn es el polisacrido de reserva ms abundante en vegetales y constituye la Principal fuente de nutricin glicdica para la humanidad. Los almidones estn Constituidos por una mezcla de dos componentes: -a-amilosa: cadena lineal de unas 200 unidades de D-glucosa unidas por enlaces a (14). -amilopectina: cadena lineal de D-glucosas unidas por enlaces tipo a(14) con Numerosas ramificaciones a (16). El polmero contiene unas 1000 unidades de Glucosa. La proporcin en que se mezclan la a-amilasa y la amilopectina para formar el almidn depende de la especie vegetal en que aparece el almidn. La a-amilosa se disuelve fcilmente en agua, adquiriendo una estructura secundaria Caracterstica, de forma helicoidal, en la que cada vuelta de hlice comprende seis Unidades glucosa. Esta estructura secundaria, en la que los grupos hidroxilo quedan Hacia afuera, permite que el iodo, al penetrar en el interior del helicoide, confiera a la Disolucin una coloracin azul violcea intensa caracterstica que permite la Identificacin positiva de trazas de almidn. Como esta coloracin no es resultado de Ninguna interaccin covalente, el calentamiento origina la desestabilizacin del Helicoide y la prdida de color, que se recupera al enfriar lentamente la disolucin. La Variacin en el pH tiene un efecto anlogo.
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B) Hidrlisis del almidn. El almidn puede hidrolizarse por medios qumicos o enzimticos. La ebullicin con cidos o lcalis hidroliza aleatoriamente los enlaces glucosdicos entre unidades de glucosa, dando polisacridos de longitud intermedia denominados dextrinas, cada vez menores hasta la obtencin de unidades de glucosa individuales. Los compuestos que se obtienen en la hidrlisis del almidn y el color que producen con el iodo son los siguientes: -Almidn (azul). -Amilodextrinas (violeta). -Eritrodextrinas (rojo). -Acrodextrinas (incoloro*). -Maltosa (incoloro*). -Glucosa (incoloro*). * Tener en cuenta el ligero color amarillo propio del iodo. El almidn tambin puede hidrolizarse enzimticamente. Uno de los enzimas que hidrolizan el almidn es la amilasa, que se halla presente en el jugo pancretico y la saliva. Este enzima ataca al azar los enlaces a (14) del interior de la cadena. As, rinde finalmente unidades de glucosa libre y maltosa. La amilasa no ataca los enlaces a (16), base de las ramificaciones de la amilopectina. Estos enlaces pueden ser hidrolizados por otro enzima desramificador. La ptialina o amilasa salival es una protena enzimtica presente en la saliva. Como todo enzima, la accin que ejerce sobre su sustrato (almidn) depende de una serie de parmetros: pH, temperatura, concentracin de enzima... REACTIVOS Y MATERIALES:

REACTIVOS Amilasa salival 1:10 Solucin de lugol Reactivo de benedict

MATERIALES Tripie Bao Mara Termmetro (100c) Gradilla de asbesto Mechero Bunsen 4 tubos de ensaye Piceta Matraz aforado (50 ml) 4 vasos de precipitados Papel filtro Medidor de PH Embudo

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Agitador Pipeta graduada (10 ml) Propipeta

METODOLOGIA:

OBTENCION DE LA ENZIMA Tras enjuagar la boca se mastica un trozo de papel filtro para la estimulacin de saliva, los lquidos segregados se agregan a cada tubo de ensaye

PREPARACION DE LAS SOLUCIONES Diluir la saliva obtenida con agua destilada 1:10

Diluir el almidn con agua destilada al 2%

Agregar las soluciones a un vaso de precipitados, y otro solo con almidn, medir el PH inicial.

Llevar los tubos de ensaye al bao Mara y termostatizado a 30c durante 30 min.

Despus del tiempo transcurrido sacar los tubos y efectuar las pruebas de lugol y benedict y medir el PH final. Pgina 3 de 4

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CALCULOS Y RESULTADOS: A continuacin se muestran los resultados del muestreo de las enzimas de amilasa salival: TUBO PH 1 1 2 12 3 7 4 7

ANALISIS DE LOS RESULTADOS: En en el muestreo arrojo el pH de cada uno delos tubos, en el que se aprecia que el tubo uno tiene un PH 1 por lo que es un PH muy acido porque contiene HCL. Para el tubo 2 en contrario el PH es bastante bsico por que la solucin que se aplico es NAOH. Para el tubo 3 el PH es bsico por que la solucin solo contiene agua. Para el tubo 4 el PH se mostr de igual manera bsica por el almidn no tubo una solucin en que reaccionara. CONCLUSION: El efecto que se mostr en el PH fue bsico, cido y neutro, pero la actividad enzimtica se mostr sin ninguna variacin. La reaccin existente entre la amilasa salival y el almidn es: que la enzima hidroliza al almidn en los enlaces alfa glucosdicos 1-4 ya que no puede atacar los enlaces 1-6, entonces la hrolisacion del almidn origina el monosacrido glucosa ms el disacrido maltosa. Entonces la enzima acta solo como precursor de la reaccin para que tenga una mayor velocidad de reaccin haciendo que la energa de activacin sea menor. En cuanto a la temperatura es ptima a 37c porque es la temperatura corporal por que a mayor temp. La enzima se desnaturaliza. Para la prueba de ligol solo sirve como identificador de almidon ya que la presencia de este la solucin se tie de color amarillento, y si tiene poco almidon entonces el color es mas tenue.

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