BIOINDICADORES VEGETALES

PRACTICA 1

ESTUDIO DE CALIDAD DE AGUA.

Parte 1: PROCESADO DE MUESTRAS EN LABORATORIO

Introducción

Las diatomeas son las algas más utilizadas como indicadores de calidad de agua,
debido a su gran capacidad de respuesta ante las perturbaciones, según reconoce la Directiva
Marco del Agua. Los procedimientos de muestreo y análisis están estandarizados por las
normas europeas CEN /TC 230 EN 13946: 2003, CEN 2004 prEN 14407 y las
correspondientes Normas españolas AENOR 2004, 2005.

Objetivos específicos

El alumno será capaz de:

 Conocer y aplicar correctamente la técnica estandarizada de preparación y fijación de
muestras de diatomeas
 Observar muestras fijadas al microscopio y diferenciar algunas especies de diatomeas
 Conocer algunas especies características de aguas limpias y contaminadas

Procedimiento y Metodología

Se proporcionan muestras de diatomeas de cursos de agua con diferente grado de

contaminación, que se tratarán, fijarán y observarán, identificándose géneros indicadores.

1.- Tratamiento de las muestras

Puesto que la identificación de las diatomeas se basa en la observación de los caracteres

del frústulo, conviene eliminar tanto los posibles recubrimientos externos como los orgánulos
internos que dificultan la observación. Esto se puede realizar con ácidos y/o con peróxido de
hidrógeno. El procedimiento es el que sigue (esquema 1):

 En un tubo de ensayo, colocar 2 ml de la muestra y 8 ml de H2O2, y mantener unas 12-16

h. a temperatura ambiente o 3-5 h en ebullición (para eliminar la materia orgánica)
 Añadir unos 2 ml de HCl hasta que pare el burbujeo (para eliminar el carbonato cálcico)
 Realizar 3-4 ciclos de centrifugado a 1200 rpm durante 4 min., eliminando el sobrenadante
y resuspendiendo con H2O destilada.
 Resuspender con etanol 90% la última vez

2.-Realización de preparaciones permanentes

 Tomar una gota de dicha suspensión y colocar en un cubre (mejor redondo) y dejar
evaporar a Tª inferior a 40º (para evitar la aglomeración de las valvas)
 Depositar una gota de resina de alta refracción p.ej. Naphrax en un porta, colocar el cubre
encima con ayuda de unas pinzas y calentar en una plancha caliente o sobre el mechero.
Cuando se observen burbujas, separar el porta, colocarlo sobre una supeficie plana y fría y
presionar el cubre con las pinzas (para favorecer la repartición de las valvas)
 Dejar enfriar.

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Esquema 1: Procedimiento de tratamiento y fijación de muestras de diatomeas

3.- Observación al microscopio. Identificación.

Las diatomeas son algas unicelulares o coloniales con pigmentos pardos y

amarillentos. Poseen clorofila a y c, caroteno y diversas xantofilas. Su tamaño está
comprendido entre 10 y 500 µm.

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Cada célula está constituída por un frústulo silíceo y con materia orgánica. El frústulo
está formado por dos piezas llamadas tecas que encajan una en la otra como una caja con su
tapadera: la superior o epiteca y la inferior o hipoteca. Las caras superior e inferior se llaman
valvas; las partes laterales se llaman cíngulo. Así, al microscopio, de un mismo individuo se
pueden tener dos visiones: valvar cuando se observa de frente y lateral, cuando se observa de
lado. Las valvas pueden aparecer ornamentadas con:

Rafe: Hendidura sin acúmulo de sílice en la parte central de la valva

Pseudorrafe: Interrupción de la ornamentación en la parte central de la valva
Nódulo: Zonas de mayor grosor en el centro y los extremos de la rafe
Poros: Huecos simples y pequeños
Areolas. Huecos grandes
Estrías: Filas de Poros o areolas
Costas: Engrosamientos de sílice que delimitan las areolas y los puntos
Fíbulas: Engrosamientos muy patentes de sílice

Las diatomeas se dividen en dos órdenes:

Centrales: Con simetría radial, generalmente planctónicas, marinas, sin rafe
Pennadas: Con simetría lateral, generalmente bentónicas, de agua dulce, con rafe o
pseudorrafe.

Actividades: Identificar algunos géneros indicadores de aguas limpias y contaminadas, a partir

de las muestras proporcionadas. Utilizar para ello los esquemas 2 y 3.

¿Para qué se utiliza el HCl?

¿Qué se consigue al centrifugar?

¿Existe un procedimiento estandarizado de tratamiento de las muestras?

Nombrar algunas especies de las muestras estudiadas:

Nombrar géneros/especies indicadoras de aguas limpias

Nombrar géneros/especies indicadoras de aguas contaminadas

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Esquema 2: Clasificación de diatomeas

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Esquema 2(cont.): Clasificación de diatomeas

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Esquema 2 (cont.): Clasificación de diatomeas

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Esquema 3: Clasificación de diatomeas. Clave de los principales géneros

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ESTUDIO DE CONTAMINACIÓN ACUÁTICA.

Parte 2: CALCULO DE INDICES DE CONTAMINACION

Introducción

El cálculo de índices de contaminación acuática puede hacerse mediante el uso

aplicaciones informáticas que facilitan enormemente el trabajo, como el Programa TAX-IBD,
para el cálculo del Índice Biológico de Diatomeas.

Objetivos específicos

El alumno será capaz de:

• Conocer y manejar correctamente la aplicación informática TAX-IBD. Sus principales
utilidades son:
• Identificación taxonómica de diatomeas
• Determinación de la calidad de agua mediante el índice diatómico IBD

Procedimiento y metodología

Se proporciona el CD con la aplicación informática, esquemas de diferentes géneros de

diatomeas indicadoras y 4 inventarios diatómicos, de los que se calculará su índice de calidad.

4.- Identificación de diatomeas

− Instalar el CD en la unidad de lectura y ejecutarlo

− Hacer doble click en el icono TaxIbd
− Seleccionar idioma
− El menú ofrece 4 posibilidades:
Acces the determination key: Clave de determinación
Diatoms introduction. Generalidades de diatomeas y procedimiento de cálculo de
índices. (Intersante para repasar conceptos)
IBD Calculation manual
IBD calculation with Excel
− En cualquier momento se puede consultar un Glosario picando en el icono de la parte
inferior de la ventana
− Seleccionar Acces the determination key para la identificación
− Consultar el glosario cuando sea necesario

Actividades: Seguir los pasos para identificar cada una de las especies cuyas imágenes se
han proporcionado en el esquema 4.

¿Qué especies tienen rafe?

¿Qué especie pertenece al orden Centrales?
¿Qué especie tiene pseudorafe?
¿Qué especie es heteropolar?

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Esquema 4: Imágenes de especies de diatomeas indicadoras para identificar

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5.- Determinación de la Calidad de agua

− Abrir www.omnidia.free.fr/omnidia
− Descargar IBD_NEW.xls
− El archivo contiene 2 hojas:
DOCUMENT PRINCIPAL
CALCUL_IBD (listado con 2120 especies y sus códigos)

− Completar los códigos de las especies buscando en la hoja CALCUL_IBD

− Completar la hoja DOCUMENT PRINCIPAL con el inventario de especies:

Número, fecha, lugar
Taxones (columna A) y su abundancia (columna B)

− El programa completa el documento principal con la denominación de las especies

retenidas y su probabilidad de presencia para cada clase de calidad.

− El valor del índice IBD aparece inmediatamente en la celda B4

− Para construir la gráfica, lanzar el macro (ctrl+Maj+G). Solo se utilizan las 5 especies más
abundantes. Sin embargo, es posible dibujar otras gráficas seleccionando otro rango de
celdas.

− Para introducir otro inventario, iniciar el macro “delete” con las teclas (ctrl+Maj+F)

Actividades: Indicar el valor IBD para cada uno de los inventarios proporcionados, así como su
valor cualitativo de calidad correspondiente, y el color con el que se representa

¿Se puede “predecir” el valor del índice de calidad a partir del inventario con los datos que
conoces?

¿Qué implicaciones medioambientales se pueden deducir de los valores obtenidos?

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Esquema 5: Inventarios para el cálculo de índices diatomicos (IBD)

Rio Semois. Cabecera

Achnanthes minutissima 354

Achnanthes minutissima var. affinis 13
Cymbella affinis 10
Cymbella microcephala 11
Gomphonema pumilum 8
Rhoicosphenia abbreviata 1
Navicula cincta 2
Diatoma tenuis 1

Rio Semois. Curso medio

Navicula lanceolada 20
Fragillaria ulna var. alnus 20
Navicula minima 40
Navicula gregaria 180
Navicula trivialis var. trivialis 20
Gomphonema parvulum 40
Nitzschia palea 60
Craticula accomoda 20

Rio Alharabe, Moratalla, Murcia

Achnanthes minutissima 120

Cymbella affinis 120
Gomphonema parvulum 30
Fragillaria ulna 50
Eunotia archus 40
Navicula cf. radiosa 20
Nitzschia palea 20

Rio Segura, Murcia

Luticola goeppertiana 120

Nitzschia capitellata 100
Nitzschia frustulum (= inconspicua) 80
Nitzschia hungarica 30
Navicula tripunctata 40
Cyclotella meneghiniana 30

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