Guias de Práctica Ciencias de La Salud-Bioquimica Y Farmacia Código de Registro: RE-10-LAB-056 Versión 3.0

GUIAS DE PRÁCTICA CIENCIAS DE LA SALUD-BIOQUIMICA Y FARMACIA
Código de registro: RE-10-LAB-056 Versión 3.0

UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE INMUNOLOGIA Y SEROLOGIA
PRÁCTICA Nº1
NORMAS DE BIOSEGURIDAD
1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO

Todo estudiante de la carrera de Bioquímica –Farmacia en su formación académica y posteriormente en su vida
profesional debe tener las competencias necesarias para enfrentar los dilemas que plantea la Bioseguridad en
la atención de pacientes en el trabajo cotidiano; debe conocer los riesgos en su entorno y evitar que ellos
provoquen un contagio así mismo, al paciente, medio ambiente, familia, animales y otros.
En la formación del personal de salud se debe tomar conciencia de los riesgos y entregar todos los elementos
que permitan crear los mecanismos para enfrentarlos, diseñando las medidas más seguras para ser aplicadas.
Todo esto se debe sustentar en el concepto moral de la responsabilidad “SI CONOZCO EL RIESGO Y SE
COMO EVITARLO TENGO, ENTONCES LA RESPONSABILIDAD DE HACERLO”
Las normas de bioseguridad deben ser absolutas, de aplicación universal, comprometidas con los principios de
la ética y tener como fin la protección del ser humano y su entorno.
DEFINICIÓN.
Conjunto de medidas y normas preventivas, destinadas a mantener el control de factores de riesgo laborales
procedentes de agentes biológicos, físicos o químicos, logrando la prevención de impactos nocivos frente a
riesgos propios de su actividad diaria, asegurando que el desarrollo o producto final de dichos procedimientos
no atenten contra la seguridad de los trabajadores de la salud, pacientes, visitantes y el medio ambiente.
Por tal motivo todas las instituciones de salud deben establecer un:
PROGRAMA DE BIOSEGURIDAD.
La implementación de los programas de Bioseguridad en los organismos de salud surgió a partir de los
importantes estadios o hechos por el Centro de Control de Enfermedades (C.D.C.) de Atlanta (USA), en 1987,
a través de un grupo de expertos quienes estaban preocupados en desarrollar guías para prevenir el V.I.H. entre
el personal de salud, es así como establecen las normas o precauciones
Universales destinadas a proteger a toda persona que está en riesgo de infectarse con sustancias contaminadas
con sangre del paciente portador de V.I.H. virus de la Hepatitis B, virus de la Hepatitis C, entre otros.
Las precauciones universales parten del siguiente principio:
“Todos los pacientes y sus fluidos corporales independientemente del diagnóstico de ingreso o motivo
por el cual haya entrado al hospital o clínica deberán ser considerados como potencialmente infectantes
y se deben tomar las precauciones necesarias para prevenir que ocurra transmisión”
NORMAS BÁSICAS DE BIOSEGURIDAD PARA TOMA DE MUESTRAS EN LABORATORIO DE
INMUNOLOGIA Y SEROLOGIA.
• Utilizar guantes y bata mientras se realiza la obtención de muestras.

• Todas las agujas y jeringas deben ser estériles.
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• Al utilizar una aguja, ésta no debe haber t o c a d o ningún elemento antes de la punción de la piel.
Si llegara a ocurrir accidentalmente, deberá utilizarse una aguja nueva.
• Si no se logra obtener la sangre en la punción inicial, deberá repetirse el procedimiento utilizandouna
aguja nueva en el segundo intento.
• Desinfectar previamente el área de punción. Generalmente el desinfectante de elección es el alcohol.
Puede utilizarse eficientemente, otras soluciones asépticas como el yodo.
• Nunca tocar el sitio de venopunción después de haber sido desinfectado.
• La eliminación de todos los elementos cortantes y punzantes tales como agujas, se realiza en los
guardianes.
• Deberá evitarse re enfundar los objetos punzantes, así como doblar y romper las agujas
• Los tubos de recolección de la muestra que contienen sangre y que son destinados a su eliminación
se deben colocar en bolsas rojas, al igual que algodones, apósitos y demás elementos contaminados
con fluidos biológicos.
2. COMPETENCIA (S).
Establece requisitos que logren reducción el riesgo de exposiciones a agentes físicos, químicos y biológicos
relacionados con el campo de trabajo del profesional.
3.- MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS
EQUIPOS y MATERIALES
Ítem DENOMINACIÓN Cantidad Unidad Observaciones
1 Manual de bioseguridad 1
Diapositivas con material de
2 bioseguridad 2
4.- TÉCNICA O PROCEDIMIENTO

ELEMENTOS DEL SISTEMA DE GESTIÓN DE BIOSEGURIDAD.
Requisitos generales.
• Política de Bioseguridad
• Planificación
• Implementación y operación
• Verificación y acción correctiva
• Revisión
Política de bioseguridad
Se debe especificar claramente los objetivos generales y el compromiso para la mejora continua del desempeño
de procesos y procedimientos
Planificación Se debe:
• Identificar riesgos
2

• Definir estrategias de control y evaluación
• Implementar medidas preventivas y correctivas necesarias
Implementación y operación
Con el fin de facilitar la gestión de Bioseguridad, se debe definir, documentar y comunicar las funciones,
responsabilidades y niveles de autoridad del personal que administra, desempeña y verifica actividades que
tengan efecto sobre los riesgos biológicos, químicos, físicos, instalaciones y procesos del establecimiento de
salud.
La responsabilidad final por la Bioseguridad recae en la Dirección del establecimiento de salud debe conformar
un comité de Bioseguridad, dirigido por el Representante.
Verificación y acción correctiva
Se debe instaurar y mantener procedimientos para hacer seguimiento y medir regularmente el desempeño en
Bioseguridad
Revisión
La dirección de salud debe revisar a intervalos definidos el Sistema de Gestión de Bioseguridad para asegurar
su adecuación y eficacia permanente.
5.- TIEMPO DE DURACIÓN DE LA PRÁCTICA

100 minutos
6.- MEDICIÓN, CÁLCULOS Y GRÁFICOS

Al ser una práctica informativa no se realiza ningún cálculo
7.- CUESTIONARIO
Diseñar preguntas y definiciones (vocabulario) para incentivar al estudiante la investigación bibliográfica.
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PRÁCTICA Nº2
SOLUCIONES
Una solución se define como una mezcla homogénea y estable de moléculas o átomos de dos o más
sustancias. Los componentes de una solución son el soluto y el diluyente, entendiéndose como el diluyente
al dispersor que contiene al componente que se encuentra en menor concentración, al cual se le llama
soluto.
En la práctica, es útil saber que es posible utilizar soluciones de alguna concentración conocida para lograr
concentraciones menores, lo que facilita su control y almacenaje.
Cuando a una solución se le disminuye su concentración adicionando cantidades conocidas del diluyente,
se dice que se efectúa una dilución. Las diluciones pueden expresarse en forma de proporciones (1:2, 1:3,
1:10, etc), en donde el primer dígito representa el volumen de la solución original, mientras que el segundo
número indica el volumen final de la de la solución a la concentración deseada. De esta forma, una dilución
1:8 indica que se tiene un volumen de la solución original más 7 volúmenes de diluyente, dichos volúmenes
pueden referirse a cualquier unidad (mililitros, microlitros, litros, etc).
Cuando se realizan diluciones seriadas, se acostumbra a referirse a que se ha empleado un factor de dilución,
lo que implica que en cada ocasión el factor de dilución multiplica a la dilución inmediata anterior. Es muy
común hacer series de diluciones con un factor de dilución de 2.
2. COMPETENCIA(S):
Define algunos conceptos para efectuar racionalmente los cálculos necesarios relativos a evitar errores en
el análisis.
3. MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS:
1 Suero humano 10 ml Cantidad para un grupo
de 20 estudiantes
2 Solución salina fisiológica 200 Microlitros Cantidad para un grupo
de 20 estudiantes
3 Pipetas de 1 mL graduadas en 0.01 mL 60 Unidades Cantidad para un grupo
de 20 estudiantes
4 Pipeta de 5 mL graduadas en 0.1 mL 20 Unidad Cantidad para un grupo
de 20 estudiantes
5 Tubos de ensaye de 5 mL 10 Unidades Cantidad para un grupo
de 20 estudiantes
6 Gradilla para tubos de 5 mL 10 pzas Cantidad para un grupo
de 20 estudiantes
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4. TECNICA O PROCEDIMIENTO:
• Los estudiantes prepararán diferentes diluciones de suero humano en salina

Fisiológica
• Efectuarán ejercicios de soluciones valoradas y empíricas en pizarra.
5. TIEMPO DE DURACIÓN DE LA PRÁCTICA
100 minutos
6.- MEDICIÓN, CÁLCULOS Y GRÁFICOS:
Los estudiantes presentarán un informe en el que incluyan los cálculos y resultados de la práctica
7.- CUESTIONARIO:
Los estudiantes resolverán 20 problemas que serán presentados en sus informes de prácticas, para afianzar
mediante el ejercicio, las fórmulas matemáticas de aplicación al tema.
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PRÁCTICA Nº3
TÉCNICAS INMUNOLÓGICAS
1. CONOCIMIENTO TEÓRICO REQUERIDO:
Una infección provoca respuesta inmunológica dirigida contra uno o más antígenos. En general se genera una
respuesta humoral y celular y la medición de una u otra puede ser la base para diagnosticar una infección.
La inmunidad celular (Mediada por LiT), puede medirse o valorarse por hipersensibilidad dérmica. La inmunidad
Humoral (mediada por anticuerpos). En las infecciones intervienen principalmente dos inmunoglobulinas IgG
(Infecciones crónicas) e Ig M (Infecciones agudas).
El estudio de la inmunología es un área amplia que cubre la investigación y aplicación clínica, se refiere a
antígenos, anticuerpos y funciones de defensa del huésped mediada por células, en especial en lo que se refiere
a la inmunidad y enfermedad.
Una vez que el microorganismo ha ingresado y ha establecido el sitio primario de infección, se propagan de
manera directa a través de los tejidos o por medio del sistema linfático a la corriente sanguínea. Esta infección
puede ser transitoria o persistente. Ante esta situación se genera una respuesta inmune de defensa, que según
el tipo de antígeno se producen anticuerpos de diferente especificidad. La reacción de antígeno y anticuerpo da
lugar al complejo antígeno-anticuerpo el cual es revelado por alguna técnica inmunológica. Es así que en una
infección también se puede detectar el inmunocomplejo utilizando estas técnicas que poseen una ventaja; el
tiempo de realización es menor al de las técnicas de cultivo tradicional. Es necesario remarcar que en otros
casos es imprescindible el cultivo.
PRUEBAS INMUNITARIAS
Las pruebas inmunitarias se usan para detectar los pacientes que estuvieron infectados (o fueron vacunados)
por un virus en el pasado, lo que confiere inmunidad de por vida a la reinfección.
Las pruebas para anticuerpos antirrubéola se usan en las mujeres en edad reproductiva. Un resultado positivo
(presencia de Anticuerpos de tipo Ig G) indica infección pasada o inmunización, e implica que NO existirá
infección congénita (infección durante la gestación). La ausencia de anticuerpos implica susceptibilidad a la
infección y se debe indicar la vacunación contra la rubéola si la mujer no está embarazada. Las pruebas
inmunitarias contra varicela y sarampión se usan con mayor frecuencia para los profesionales de la atención de
la salud, aquellos que no tienen anticuerpos deben evitar el contacto con los pacientes infectados. El nivel
inmune contra Citomegalovirus útil para los donantes y receptores de transplante órganos, y para los recién
nacidos pretérmino internados en salas de cuidados intensivos que tienen probabilidades de recibir
transfusiones sanguíneas. Los receptores de transplantes son susceptibles a infección por Citomegalovirus del
donante, este le permite al médico diagnosticar y tratar mejor esta enfermedad. Los recién nacidos cuyas
madres nunca estuvieron infectadas por Citomegalovirus son susceptibles a infección primaria grave por este
virus. El Citomegalovirus puede transmitirse por los leucocitos durante una transfusión sanguínea, es por ello
que los recién nacidos negativos para Citomegalovirus solo pueden recibir sangre Citomegalovirus negativa.
USOS DE LAS TÉCNICAS INMUNOLÓGICAS

❖ Diagnosticar infecciones
❖ Identificar microorganismos
❖ Tipificar sangre para bancos de sangre
❖ Tipificar tejidos de trasplantes
❖ Cuantificar inmunoglobulinas, Hormonas, Marcadores tumorales
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2.- COMPETENCIAS:
Reconoce el aporte de las pruebas serológicas al diagnóstico de las diferentes infecciones que se presentan en
el campo de trabajo del profesional.
3.- MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS
Diapositivas con material de técnicas
1 inmunológicas 1 Juego
4.- TÉCNICA O PROCEDIMIENTO
Se describe en forma teórica las técnicas inmunológicas
TÉCNICAS INMUNOLÓGICAS
1. Reacción de Precipitación: Se forma un inmunocomplejo que con el tiempo aumenta de tamaño,
volviéndose insoluble en el medio dando lugar a un precipitado. Estas reacciones de precipitación se pueden
llevar a cabo en dos medios:
1.a. Medios Líquidos: En donde el anticuerpo se encuentra en solución. Ej: Reacción de VDRL
1.b. Medios Gelosados: Aquí el antígeno o anticuerpo está en un soporte (agar-agar, agarosa,
poliacrilamida). Ej: IDRS (inmunodifusión radial simple: En esta prueba el antígeno o el anticuerpo se
incluyen en el agar; esto hace que la reacción antígeno-anticuerpo se produzca con mayor rapidez. Otra
ventaja o utilidad de la IDRS es que se puede emplear para determinar la concentración del antígeno o
de los anticuerpos), que sirve para cuantificar IgM, IgD, IgG, IgA, IgAs
2. Reacción de Aglutinación: Aquí el antígeno está en forma de partícula. Puede ser:
2.a. Aglutinación directa: El antígeno particulado insoluble es aglutinado por el anticuerpo. Ej: Huddleson y
Widal
2.b. Aglutinación Indirecta: Aquí se emplean transportadores a los que se adhiere en la superficie el antígeno
particulado insoluble. Esos transportadores pueden ser:
2.b.1. Partículas de Látex: como ejemplo encontramos: Reacción de Proteína C reactiva, factor
reumatoideo, Determinación de Grupo sanguíneo y factor, HCG, etc.
2.b.2. Hematíes: En este caso la técnica recibe el nombre de Hemoaglutinación. La Hemoaglutinación
se basa en la aglutinación de eritrocitos con anticuerpos específicos, llamados hemaglutininas o
hemolisinas. Ej: HA para Chagas, HA para Toxoplasmosis. También podemos tener:
2.b.2.1. Inhibición de la Hemoaglutinación: Ej: AELO (Antiestreptolisina O)
2.b.2.2. Hemoaglutinación Reversa pasiva: Donde a los hematíes se adhiere el
anticuerpo. Ej: Hepatitis
3. Reacción de Inmunofluorescencia: Se basa en la fluorescencia que emiten determinadas sustancias
(Isocianato de fluoresceína que emite fluorescencia verdosa o la rodamina que emite fluorescencia rojiza),
observándose en un microscopio especial de fluorescencia. Ej: TIF Toxoplasmosis (Test de
inmunofluorescencia para Toxoplasmosis), TIF Chagas
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4. Reacción de Radioinmunoanálisis: En esta reacción el antígeno se marca con un radioisotopo. Ej:
Hormonas, IgE, Marcadores tumorales, HIV, Hepatitis
5. Reacción de Enzimoinmunoánalisis: Se emplea una enzima como marcador que actúa sobre un sustrato
que desarrolla color. Ej: Hormonas, IgE, Marcadores tumorales, HIV, Hepatitis. Existen diferentes tipos de
EIA:
5.a. Elisa Directo: o ensayo ELISA simple de dos capas. Las placas ELISA se preparan recubriendo los
pocillos con las soluciones en las que se sospecha se encuentra el antígeno. Se incuban con anticuerpos
marcados. Es necesario incluir controles negativos que serán muestras del mismo tipo de las analizadas
(sangre, orina, etc.) pero en las que se tenga la certeza de la ausencia del antígeno buscado. Asimismo,
se incluyen controles positivos (soluciones donde se encuentra el antígeno buscado, o bien se le ha
añadido).
5.b. Elisa Indirecto: Es el método más utilizado para la determinación de anticuerpos. Las placas ELISA se
preparan de una forma idéntica a la anterior. Los controles positivos y negativos son los mismos. El
sistema de detección emplea dos anticuerpos uno primario contra el antígeno, y uno secundario marcado
contra el primario. La detección tiene mayor sensibilidad por presentar una amplificación de señal debida
a la unión de dos o más anticuerpo secundarios por cada primario. Es el ensayo más popular, como lo es
la inmunofluorescencia indirecta, pues un mismo secundario marcado y un mismo sistema enzimático
permite cuantificar una gran cantidad de antígenos.
5.c. Elisa Sándwich: ensayo de captura de antígeno y detección mediante inmunocomplejos. Se trata de un
ensayo muy empleado en el que se recubre el pocillo con un primer anticuerpo antiantígeno. Después de
lavar el exceso de anticuerpo se aplica la muestra problema en la que se encuentra el antígeno, que será
retenido en el pocillo al ser reconocido por el primer anticuerpo. Después de un segundo lavado que
elimina el material no retenido se aplica una solución con un segundo anticuerpo anti-antígeno marcado.
Así pues, cada molécula de antígeno estará unida a un anticuerpo en la base que lo retiene y un segundo
anticuerpo, al menos, que lo marca. Este ensayo tiene una gran especificidad y sensibilidad debido a la
amplificación de señal que permite el segundo anticuerpo.
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5.d. Elisa de competición: este sistema también es muy utilizado para la detección de anticuerpos
específicos. Se parte de un anticuerpo (monoclonal o policlonal), frente a un antígeno conocido, que
previamente ha sido inmovilizado en la placa. Se denomina de competición ya que el suero problema es
incubado previamente con el antígeno, antes de incubarlo con el antisuero fijado en la placa, y por tanto
compite con él.
6. Western blot: o Western inmunobloting: empleada para la detección de anticuerpos antivirales. Como los
antígenos complejos se separan en sus componentes individuales durante el procedimiento de Western blot
proporciona un resultado más especifico que otras pruebas serológicas, como el Enzimoinmunoanálisis, por
ello es útil para corroborar un HIV positivo por ELISA. El western blot es un método en biología
molecular/bioquímica/inmunogenética para la detección de proteínas en una muestra de un tejido
homogeneizado o extracto. Implementa gel electroforesis para separar proteínas desnaturalizadas de la
masa. Las proteínas son transferidas desde el gel hacia la membrana (originalmente de nitrocelulosa), donde
son examinadas utilizando anticuerpos específicos para la proteína. Como resultado, los investigadores
pueden examinar la cantidad de proteínas en una muestra y comparar los niveles de presencia entre varios
grupos.
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7. Fijación del Complemento: Se trata de un bioensayo serológico de alta sensibilidad y especificidad que
emplea como sistema indicado la lisis de eritrocitos por el complemento. El complemento es un sistema
formado por una serie de proteínas del suero (C1-C9). Todas ellas, excepto la C1q, se encuentran en forma
inactiva y pueden ser activadas por diferentes mecanismos. La activación por la vía clásica requiere la
reacción de la Ig G o la Ig M con el antígeno. Una vez que se produce esta interacción, la fracción Fc de la
inmunoglobulina se altera de tal forma, que permite la fijación del factor C1q, produciéndose a continuación
una serie de reacciones en cadena que implican la activación de los demás factores del complemento. Si el
primer antígeno se encontraba sobre una membrana celular, la serie terminal de reacciones implicará la lisis
de la célula.
8. Reacción de Polimerasa en cadena (PCR): Esta técnica se fundamenta en la propiedad natural de las
ADN polimerasas para replicar hebras de ADN, para lo cual emplea ciclos de altas y bajas temperaturas
alternadas para separar las hebras de ADN recién formadas entre sí tras cada fase de replicación y, a
continuación, dejar que vuelvan a unirse a polimerasas para que vuelvan a duplicarlas. es una técnica común
y normalmente indispensable en laboratorios de investigación médica y biológica para una gran variedad de
aplicaciones. Entre ellas se incluyen la clonación de ADN para la secuenciación, la filogenia basada en ADN,
el análisis funcional de genes, el diagnóstico de trastornos hereditarios, la identificación de huellas genéticas
(usada en técnicas forenses y tests de paternidad) y la detección y diagnóstico de enfermedades infecciosas.
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9. Pruebas cutáneas: la hipersensibilidad dérmica ofrece ciertas ventajas al determinar con facilidad y rapidez
la respuesta inmunológica (celular) del individuo a la exposición previa a los agentes infecciosos. Ej: Virus
de Herpes simple
5.- TIEMPO DE DURACIÓN DE LA PRÁCTICA
100 minutos
6.- MEDICIÓN, CÁLCULOS Y GRÁFICOS
Al no generarse datos no se realiza ninguna medición
7.- CUESTIONARIO:
Complete el siguiente cuadro:

Ventajas Desventajas Usos
Elisa Directo
Elisa Indirecto
Elisa Sándwich
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PRÁCTICA No. 4
REACCIONES DE AGLUTINACIÓN
La aglutinación es una reacción inmunológica que se efectúa cuando se combinan antígenos particulados con
sus anticuerpos específicos. Esta reacción se ha utilizado ampliamente debido a la facilidad con que se lleva a
cabo y a su relativamente alta sensibilidad, comparada con las reacciones de precipitación (tabla 1). Sin
embargo esta prueba no permite la cuantificación exacta de anticuerpos y los resultados solo pueden expresarse
en función de la dilución mayor del suero que aún permite la observación de un aglutinado, lo cual se denomina
título del suero.
La reacción de aglutinación puede ser activa (directa) o pasiva (indirecta). En el primer caso, los antígenos que
intervienen en la reacción son componentes naturales de la partícula (bacterias, levaduras, eritrocitos, linfocitos,
etc.). En el caso de la aglutinación Pasiva, los antígenos se acoplan en forma artificial a partículas que solo
funcionan como soporte. Las partículas más utilizadas son eritrocitos y partículas de poliestireno (látex).
En ambos casos, la aglutinación puede efectuarse en placa o en tubo tanto en forma cualitativa como en forma
semicuantitativa (título del suero).
Tabla 1. SENSIBILIDAD RELATIVA DE MÉTODOS PARA LA DETERMINACIÓN DE

ANTÍGENOS Y ANTICUERPOS
MÉTODO SENSIBILIDAD APROXIMADA
(por 100 mL)
Inmunoelectroforesis 5 a 10 mg
Difusión radial (Mancini) 1 a 2 mg
Doble difusión (Ouchterlony) < 1 mg
Fijación de Complemento 1 mg
Aglutinación 1 mg
ELISA 100 ng
Inmunofluorescencia < 1 pg
Radioinmunoanálisis < 1 pg
AGLUTINACIÓN ACTIVA AGLUTINACIÓN BACTERIANA
La aglutinación de bacterias es una reacción que se lleva a cabo entre los antígenos localizados en la superficie
celular de estas (cápsula, pared, flagelos, etc.) y la población heterogénea de anticuerpos específicos presentes
en el suero del huésped que estuvo en contacto con el microorganismo en cuestión. Este contacto puede
establecerse en forma natural (infecciones clínicas, o subclínicas) o artificial (vacunación o inmunización de
animales de experimentación).
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Entre las aplicaciones más importantes de la aglutinación bacteriana están la identificación y clasificación de
microorganismos aislados de diversas fuentes (exudados, heridas, sangre, alimentos, aguas negras, etc.) y el
diagnóstico de cuadros infecciosos mediante el hallazgo de anticuerpos específicos en el suero de pacientes.
Así mismo, se emplea para seguir la evolución del proceso en aquellos casos en que exista una correlación
entre el título de anticuerpos y el cuadro clínico.
Aunque la reacción de aglutinación es una prueba semicuantitativa, la simplicidad y alta sensibilidad de la

misma, favorecen su amplio uso.
PRUEBA DE AGLUTINACION EN PLACA PARA FIEBRES ENTÉRICAS - REACCIONES FEBRILES
La infección por gérmenes de diversas especies conduce a una elevación marcada de la temperatura, entre
otros síntomas igualmente inespecíficos, por lo cual se dificulta enormemente el diagnóstico de la enfermedad.
Tales el caso de la fiebre tifoidea causada por Salmonella typhi, las paratifoideas causadas por S. paratyphi A
y S. paratyphi B; la fiebre de Malta, causada por Brucella melitensis, y el Tifo, causado por Rickettsia prowaseki.
Sin embargo, cada uno de estos microorganismos induce una respuesta humoral con la producción de
anticuerpos que pueden fácilmente identificarse con antígenos específicos. En el caso de Rickettsia prowaseki
es muy fácil contar con antígenos provenientes directamente de la bacteria, por lo que se utiliza Proteus OX19,
el cual posee determinantes antigénicos comunes con Rickettsia.
2. COMPETENCIA (S):
Determina la presencia, en suero, de anticuerpos específicos contra el agente causal de diferentes procesos
infecciosos, por medio de reacciones de aglutinación en placa y su relación con el campo de trabajo del
profesional.
MATERIAL POR GRUPO DE 5 ESTUDIANTES
kit Material para un grupo
1 1 juego de antígenos para reacciones 1 de 20 estudiantes
febriles: Antígeno “O” y “H” de
Salmonella Typha
Antígeno “H” deSalmonella paratyphi A
yB
Antígeno de Proteus OX19
Antígeno de Brucella abortus
2 Sueros problema
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Placas de vidrio para pruebas febriles, Material para un grupo
3 divididas en 6 partes 20 Unidades de 20 estudiantes
4 Palillos de madera 2 cajas Material para un grupo
de 20 estudiantes
5 Pipetas de 0.1 divididas en 0.01 20 Unidades Material para un grupo
de 20 estudiantes
6 Charola con hipoclorito de sodio al 10 2 Pza Material para un grupo
% de 20 estudiantes
4. TECNICA O PROCEDIMIENTO.
1. Colocar 1 gota (50 uL) del suero problema en cada una de las 6 divisiones de la placa (una placa porcada
suero). .
2. Agregar una gota de un antígeno diferente en cada división.
3. Mezclar las dos gotas en cada división con la ayuda de un palillo.
4. Mover la placa con movimientos oscilatorios, suavemente durante 2 minutos.
5. Buscar la presencia de un aglutinado en cada mezcla, ayudándose con iluminación directa cerca de una
ventana (una lámpara si hubiera).
6 .En caso de que aparezca aglutinación de alguno de los antígenos con alguno de los sueros, tomar la placa
y depositar los siguientes volúmenes de dicho suero: 0.08 mL,0.04 mL., 0.02 mL,
0.01 mL y 0.005 mL.
7. Agregar una gota del antígeno en cuestión a cada volumen de suero, mezclar bien con unaplicador de madera,
mezclar con movimientos oscilatorios y leer igual que en los pasos 4 y 5.Las mezclas resultantes suero-antígeno
se considerarán equivalentes en reactividad a las diluciones 1:20, 1:40, 1:80, 1:160 y 1:320, respectivamente, de
la prueba en tubo.
5. TIEMPO DE DURACION DE LA PRÁCTICA.
100 minutos
6. MEDICION, CÁLCULOS Y GRÁFICOS:
Buscar la presencia de aglutinación en cada mezcla suero-antígeno. El hallazgo de títulos de 1:20 o 1:40 no
son significativos, puesto que muchos individuos de la población tienen anticuerpos debido a contactos
previos con los gérmenes en cuestión, que no necesariamente representan la presencia de una enfermedad.
Cualquier título mayor de 1:160 debe ser considerado como positivo.
Los resultados tienen valor diagnóstico cuando a un mismo individuo se le practican varias pruebas sucesivas
y se observan cambios en el título de anticuerpos.
7. CUESTIONARIO:
Diseñar preguntas para incentivar la investigación bibliográfica en el estudiante, a criterio y experiencia

del docente
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PRÁCTICA Nº. 5
PCR – LATEX
1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO:

La proteína C reactiva (PCR) es una proteína termolábil cuya movilidad electroforérica se encuentra entre las
zonas alfa y beta globulinas.
Su nombre se debe a la capacidad para precipitar los polisacáridos C de los pneumococos
Es una de las llamadas proteínas de fases aguda y se incrementa en el suero en una gran variedad de
enfermedades inflamatorias o como respuesta a necrosis tisular
Su determinación es importante debido a que se aumenta rápidamente al comienzo de la enfermedad, 14 a 26

horas luego de la inflamación o injuria tisular y desaparece en la etapa de recuperación, apareciendo solo
durante la fase activa del proceso inflamatorio.
Además, su presencia es de valor aun no puede asociarse con una enfermedad especifica.
La PCR se encuentra comúnmente aumentada en: artritis reumatoidea activa, infecciones virales, tuberculosis,
fiebre reumática activa, infarto agudo de miocardio, etc. También se puede hallar luego de una operación
quirúrgica y en gran porcentaje luego de transfusiones sanguíneas. La determinación de PCR no solo indica la
intensidad de la enfermedad sino también la respuesta del paciente a un dado tratamiento.
2. COMPETENCIA (S):
Detecta en suero polisacáridos C de los pneumococos por reacción con un anticuerpo específico
adsorbido sobre un soporte inerte de látex a través de la resolución de problemas.

1 Placa de vidrio 5 Pza Material para un grupo
de 20 estudiantes
2 tapa gotero 5 Pza Material para un grupo
de 20 estudiantes
3 Goteros o pipetas capaces de dispensar 50 Pzas Material para un grupo
los volúmenes indicados de 20 estudiantes
4 Palillos mezcladores descartables 50 Unidades Material para un grupo
de 20 estudiantes
5 Cronómetro 5 Unidad Material para un grupo
de 20 estudiantes
6 Lámpara o fuente de luz 2 Unidades Material para un grupo
de 20 estudiantes
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4. TÉCNICA O PROCEDIMIENTO.
Llevar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente. Agitar el reactivo de látex antes de usar,
vaciando previamente la pipeta del gotero
TÉCNICA CUALITATIVA
1) Preparar muestra diluida 1:20 mezclando 1 gota (50 microlitros) de suero con 1 ml de Buffer
2) En uno de los círculos de la placa de vidrio adjunta al equipo colocar: Reactivo de látex 1 gota (50
microlitros), muestra diluida 1 gota (50 microlitros).
3) Mezclar con palillo descartable hasta obtener una suspensión uniforme en la superficie del círculo.
Inmediatamente disparar un cronometro, balancear suavemente la placa y observar
macroscópicamente el resultado dentro de 3 minutos.
Para una correcta visualización de los resultados debe mantenerse la placa sobre un fondo negro y
ligeramente por encima de un haz luminoso horizontal
TÉCNICA SEMICUANTITATIVA
Los sueros positivos pueden titularse efectuando diluciones seriadas en tubos de Kahn
a) Colocar 1.9 ml de Buffer en el primer tubo y 1 ml en cada uno de los restantes
b) Agregar 0.1 ml de suero al tubo Nº 1 y mezclar, transferir 1ml de esta diluciónal tubo Nº 2 y mezclar
continuando así las diluciones hasta el último tubo, Las diluciones así obtenidas equivalen a 1:20,
1:40, 1.80, 1:160, etc.
c) Ensayar cad dilución según la técnica I
5. TIEMPO DE DURACIÓN DE LA PRÁCTICA.
100 minutos
6. MEDICIÓN, CÁLCULOS Y GRÁFICOS.
Negativo: suspensión homogénea

Positivo: aglutinación que aparece dentro de los tres minutos, se califica de 1 a 4 +
7. CUESTIONARIO:
Diseñar preguntas para incentivar la investigación bibliográfica en el estudiante, a criterio y experiencia del
docente
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PRÁCTICA Nº.6
DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DEL TÍTULO DE ANTIESTREPTOLISINA “O”
1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO.
El anticuerpo antiestreptiolisina O se encuentra presente en casi todas las personas en títulos bajos, debido a
que las infecciones estreptocócicas son comunes, sin embargo un título alto o creciente de antiestreptolisina O,
indica una infección reciente producida por estreptococo beta hemolítico de grupo A, como amigdalitis,
escarlatina, sepsis puerperal, erisipela, etc.
Tiene además especial interés en los procesos que aparecen como segunda enfermedad: fiebre reumática y
glomerulonefritis aguda. Por lo tanto, a pesar de no ser una prueba específica para fiebre reumática, apoya su
diagnóstico cuando lo sugieran la historia y los signos clínicos.
2. COMPETENCIA (S):
• Determina el título de antiestreptolisina O en suero de pacientes con sospecha de fiebre reumática y

relaciona con el campo de trabajo del profesional.

1 Tubos de hemolisis 20 Unidades Material para 20
estudiantes
2 Micropipetas de 10 a 100 Microlitros 5 Pzas Material para 20
estudiantes
3 Micropipetas 5 pzas Material para 20
estudiantes
4 Centrifuga 1 Pza Material para 20
estudiantes
Baño de agua a 37ºC que incluye Buffer Material para 20
5 concentrado 1 Pzas estudiantes
6 Frascos de Agua destilada 2 Frascos Material para 20
estudiantes
Eritrocitos humanos de grupo O, del 1 Material para 20
mismo paciente o de conejo estudiantes
7
Solución fisiológica Material para 20
8 100 Ml estudiantes
4. TÉCNICA .
Preparar diluciones de la siguiente forma: 1:10 (0.2 ml de suero + 1.8 ml de Buffer), 1:100 (0.5 ml de dilución
1:10 + 4.5 ml de Buffer), 1:500 ( 1 ml de dilución 1:100 + 4 ml Buffer). Luego proceder de la siguiente forma:
17

Dilución del 1:10 1:100 1:500 Controles
suero
Tbo Nº 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
Suero diluido 0.2 1 0.8 0.6 0.4 0.3 1 0.8 0.6 0.4 0.2 - -
ml
Buffer ( ml) 0.8 - 0.2 0.4 0.6 0.7 - 0.2 0.4 0.6 0.8 1.5 1
Estreptolisina 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 - 0.5
O (ml)
Mezclar y mantener a baño Maria a 37ºC 15 minutos

Eritrocitos 3 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
-5 % ml
Mezclar agitando ligeramente y mantener en baño Maria a 37ªC durante 15 minutos. Agitar nuevamente y
continuar en baño Maria durante 30 minutos más. Centrifugar 3 minutos a 1500 r.p.m. y leer.
Unidades 50 100 125 166 250 333 500 625 833 1250 2500 (-) (+)
Todd/ml

200 minutos
6. MEDICIÓN, CÁLCULOS Y GRÁFICOS:
El título de la muestra se expresa mediante la inversa de la mayor dilución en la cual se observa ausencia
total de hemolisis.
El tubo 12 (control eritrocitario) no deberá presentar hemolisis mientras que el tubo 13 (control Estreptolisina O)
deberá mostrar hemolisis completa.
7. CUESTIONARIO:
• ¿Qué enfermedades ayuda a diagnosticar?
• ¿Cuál es la finalidad de la prueba?
• ¿Esta prueba se utiliza para realizar el diagnóstico diferencial de que enfermedades?
18

PRÁCTICA No. 7
AGLUTINACIÓN ACTIVA II
Prueba del V.D.R.L. RPR
1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO:
La técnica del V.D.R.L. ha sido descrita como una prueba para el diagnóstico de la sífilis, sin embargo, no es
una prueba específica, debido a que se basa en la detección de anticuerpos contra un lípido que se libera
cuando hay daño tisular (cardiolipina).
Estos anticuerpos se detectan también en personas con otros tipos de procesos infecciosos tales como la
tuberculosis, lepra, malaria, mononucleosis infecciosa, etc, y en pacientes con patologías auto inmunes como
el síndrome anti-cardiolipina, Lupus eritematoso sistémico, entre otras.
Esrto ha motivado que la prueba sea usada solo como tamiz, más que como diagnóstico, y se requiere efectuar
una prueba más específica para la sífilis con los sueros que sean positivos para V.D.R.L.
El antígeno que se usa es una solución alcohólica de cardiolipina, colesterol y lecitina. La reactividad de ese
antígeno se estandariza por comparación con otro antígeno de reactividad conocida.
2. COMPETENCIA (S):
Determina la presencia de anticuerpos que reaccionan con lípidos (cardiolipina, colesterol y lecitina) en una
reacción de aglutinación, como técnica tamiz para la sífilis.

Antígeno de V.D.R.L. concentrado 1 kit Para un grupo de 20
1 (solución alcohólica de cardiolipina, estudiantes
colesterol y lecitina).
2 Diluyente salina amortiguada 100 ml Para un grupo de 20
estudiantes
3 Placas portaobjetos o placas de vidrio Para un grupo de 20
para la reacción 100 Pzas estudiantes
4 Frasco gotero para la preparación de la Para un grupo de 20
solución de trabajo 8 Pzas estudiantes
5 Pipetas de 1 mL graduadas en 0.01 20 Unidades Para un grupo de 20
estudiantes
6 Pipetas de 5 mL 5 Unidades Para un grupo de 20
estudiantes
7 Baño maría a temperatura de 60°C 1 Pza Para un grupo de 20
estudiantes
8 Microscopio óptico Olimpus 7 Pzas Para un grupo de 20
estudiantes
19

a) PREPARACIÓN DEL ANTÍGENO
1. Medir 4 mL. De diluyente en un frasco gotero, tomar 0.5 mL del antígeno concentrado y agregar gota a
gota sobre el diluyente, agitando constantemente después de la adición de cada gota para evitar que el
antígeno se aglutine. Agregar luego 4.1 mL del diluyente lentamente y con agitación constante.
b) INACTIVACIÓN DEL SUERO

1. Inactivar los sueros problema antes de realizar la prueba, calentando 30 minutos.a 56°C o 15
minutos a 60°C, para de complementar el suero y evitar falsas reacciones positivas.
c) PRUEBA DE AGLUTINACIÓN
• Dividir en 2 el portaobjetos, colocar en una división con una jeringa provista de aguja N° 23, una gota
de antígeno y luego añadir 50 uL de suero inactivado, la otra división colocar una gota del antígeno
solo.
• Agitar con movimientos rotatorios durante 2 minutos y leer la aglutinación al microscopio, con
objetivo 10x, Se compara el grado de aglutinación del suero problema con el antígeno solo.
• De ser positiva la muestra y presentar aglutinación efectuar diluciones módulo 2x y repetir la
prueba con cada dilución hasta observar reacción negativa.
• Confirmar la reacción con pruebas específicas para sífilis como ser TPHA y FTA-ABS.
5. TIEMPO DE DURACION DE LA PRÁCTICA.

100 minutos

Negativo: No se observa aglutinación
Positivo débil: Aglutinación ligera (grumos pequeños
Positivo: Aglutinación franca (grumos grandes)
7. CUESTIONARIO:
Diseñar preguntas para promover investigación bibliográfica en el estudiante de acuerdo a la experiencia del
Docente.
20

PRÁCTICA NO. 8
HEMAGLUTINACIÓN Y TIPIFICACIÒN DE LA SANGRE PRUEBA INVERSA Y DIRECTA
1. CONOCIMIENTO TEÒRICO REQUERIDO:
Sistema ABO
Los eritrocitos poseen en su membrana sustancias antigénicas determinadas genéticamente, las cuales pueden
identificarse mediante anticuerpos específicos. El primer grupo de estas sustancias fue identificado por
Landsteiner en 1901, y le llamó sistema ABO, el cual consiste en que un individuo tiene en sus glóbulos rojos
uno, dos o ninguno de los antígenos (A y B) pertenecientes a este sistema. Así, los individuos pueden ser del
tipo A, si solamente poseen el antígeno A; del tipo B, si únicamente tienen el antígeno B; del tipo AB si poseen
ambas, o del tipo 0 si no tienen ninguno de los dos. La naturaleza química de los determinantes antigénicos es
polisacaridica.
Aproximadamente el 85 % de la población posee sustancias con características antigénicas y estructurales

similares a las presentes sobre la membrana de los eritrocitos en prácticamente todas las secreciones
corporales. A estos individuos se les llama secretores.
Los carbohidratos que forman la estructura antigénica A y B en la membrana de los glóbulos rojos, también
están presentes en otros materiales biológicos como bacterias, alimentos y otros agentes ampliamente
distribuidos que constituyen un persistente estímulo. Los humanos reaccionan a este estímulo produciendo
anticuerpos contra aquellos anfígenos que no forman parte de s propia estructura celular. Por esta razón, el
anticuerpo anti-A se produce en personas del grupo O y B, y el anti-B en los del grupo O y A; las personas del
grupo AB que contienen ambos antígenos, no forman dichos anticuerpos. A estos anticuerpos se les llama
isoaglutininas.
Sistema Rh
En 1939, Levine y Stetson reportaron el caso de una mujer con severa reacción hemolítica después de la
transfusión de sangre proveniente de su esposo. El antígeno responsable fue diferente a los ya conocidos en la
época.
En 1940, Lansteiner y Wiener inmunizaron conejos y cobayos con eritrocitos de los monos Macacus rhesus,
basándose en la suposición de que en los eritrocitos de estos monos podrían existir antígenos similares a losde
humanos. El suero obtenido aglutinaba los glóbulos rojos de los monos rhesus y del 85 5 de la población humana
blanca.
Hasta ese momento todo sugería que el supuesto antígeno hallado por Landsteiner y Wiener en monos, y el
supuesto antígeno descrito por Levine y Stetson en humanos, eran el mismo. Posteriores investigaciones
demostraron que los supuestos antígenos eran diferentes; se determinó que la mayoría de los humanos tienen
el antígeno del mono rhesus y además otro diferente, pero relacionado. A sugerencia de Levine, se conservó la
denominación de factor Rh para el anfígeno humano, y se asignó el nombre de LW al antígeno común al hombre
y al mono.
21

A mediados de la década de los 40, se habían identificado cinco antígenos como pertenecientes al actualmente
denominado sistema Rh. Estos cinco antígenos (C, c, D, E, e) se combinan entre si, dando lugar a diversos
patrones antigénicos. El D tiene dominancia antigénica. Los individuos que presentan antígeno D en sus
eritrocitos se denominan Rh (+), y aquellos que no tienen el antígeno D se denominan Rh (-).
Además de los sistemas ABO y Rh pueden ser detectados otros sistemas antigénicos en la membrana de los
eritrocitos (Lewis, Duffy, MN, Ss, Ii, etc.). Estos sistemas se consideran secundarios.
El conocimiento de los antígenos sanguíneos tiene utilidad en la clínica (transfusiones sanguíneas,

compatibilidad materno-fetal), en medicina legal y en pruebas de paternidad. Antropológicamente, se ha
utilizado para estudios de dinámica de poblaciones y también para estudios básicos de especificidad
inmunológica.
2. COMPETENCIA (S):
Identifica los grupos sanguíneos ABO y Rh, como antígenos celulares importantes en transfusiones sanguíneas,
en medicina legal y en la isoinmunización matero-fetal a través de la resolución de problemas que se presentan
en el campo de trabajo del profesional.
1 Centrífuga Clínica 1 Pza Para un grupo de 20
estudiantes
2 Torundas de algodón con alcohol 100 Unidades Para un grupo de 20
estudiantes
3 porta objetos 100 Pzas Para un grupo de 20
estudiantes
4 Pipetas pasteur 25 Pzas Para un grupo de 20
estudiantes
Jeringas descartables de 5 mL con aguja Para un grupo de 20
5 Nª 21 18 Pzas estudiantes
6 Tubos de ensaye de 5 mL. 48 unidades Para un grupo de 20
estudiantes
7 Pipetas de 5 ml 18 unidades Para un grupo de 20
estudiantes
estudiantes
8 palillos de madera 36 unidades Para un grupo de 20
estudiantes
Fco. de sueros tipificadores: anti-A, anti- Para un grupo de 20
9 B, anti-AB 1 kit estudiantes
22

10 Solución de albúmina bovina al 25 % 100 ml Para un grupo de 20
estudiantes
Eritrocitos humanos tipo A, B y O, en Para un grupo de 20
11 suspensión al 5 % 1 kit estudiantes
12 Solución salina fisiológica 100 ml Para un grupo de 20
estudiantes
13 Centrífuga Clínica 1 unidad Para un grupo de 20
estudiantes
Tipificación de grupos sanguíneos: a)

Sistema ABO
Los anticuerpos del sistema ABO son principalmente de la clase IgM, por lo que son altamente
aglutinantes y fijadores de complemento. Por este motivo, la determinación de este sistema es de gran
relevancia en transfusiones sanguíneas.
1. Obtener aproximadamente 5 mL. de sangre venosa y colocarla en tubo sin anticoagulante, dejar retraer
el coagulo a temperatura ambiente y centrifugar para separar el suero del paquete celular.
2. Rotular 5 tubos de 5 mL., de la siguiente manera: anti-A, anti-B, anti-AB y testigo. Rotular otros 3 tubos
diferentes con: A, B, O las marcas deben estar cerca de la boca del tubo.
3. Del mismo tubo donde se dejó coagular la sangre, con una pipeta pasteur tomar eritrocitos del fondo (de
los no atrapados en el coagulo). Colocar una gota de esta suspensión en salina fisiológica para hacer
una suspensión aproximada del 5 %. Colocar una gota de esta suspensión en cada tubo que tiene las
marcas anti-A, anti-B, anti-AB y testigo.
4. Agregar una gota de suero comercial anti-A, anti-B y anti-AB según corresponda a cada tubo marcado;
y en el lugar del tubo marcado como testigo colocar una gota de solución de albúmina al 25 %. Mezclar
con movimientos rotatorios y centrifugar 1 minuto a 1000 rpm. Buscar la presencia de aglutinación
resuspendiendo el paquete celular Suavemente en el fondo del tubo.
5. Para buscar las isohemaglutininas, en los tubos marcados como A, B y 0, colocar una gota del suero del
paciente y agregar una gota de suspensión de eritrocitos al 5 % previamente tipificados de tipo sanguíneo
A, B y 0, según corresponda.
6. Mezclar con movimientos rotatorios y centrifugar 1 minuto a 1000 rpm
7. Buscar la presencia de aglutinación como en el paso 4
RESULTADOS
Por ejemplo, si se observa el siguiente resultado:
Antisuero AntiA AntiB Anti- Sol.

AB Albúmina25%
Aglutinación
- + + -
Indicaría que los eritrocitos analizados corresponden al grupo sanguíneo B De acuerdo al mismo ejemplo, los
resultados esperados por confirmar el grupo sanguíneo serían:
23

Eritrocitos del grupo

sanguíneo: A B 0
Aglutinación
+ - -
Por lo tanto, los eritrocitos problema corresponden a un individuo del grupo B.
24

El grupo sanguíneo en el sistema AB0 se determina de acuerdo a la siguiente tabla:
Reacción de los Reacción del suero con Grupo Sanguíneo

eritrocitos con antígenos
Antisueros comerciales conocidos
Anti-A Anti-B Anti-AB

A B 0
+
+ - + - - A
-
- + + + - B
-
+ + + - - AB
+
- - - + - 0
En caso de que se presente aglutinación en el testigo, se debe a que existen autoanticuerpos antieritrocitos.
b) Sistema Rh
De este sistema, por su mayor inmunogenicidad, solo se determina de forma rutinaria el antígeno D en caso de
requerirse una transfusión sanguínea. Por la naturaleza proteica del antígeno, los anticuerpos inducidos son de
clase IgG, que pueden atravesar placenta y causar hemólisis intrauterina en caso de incompatibilidad materno-
fetal.
POR GRUPO DE 6 ESTUDIANTES
1 Centrífuga Clínica 1 Pza Para un grupo de 20
estudiantes
2 Baño maria 1 Pza Para un grupo de 20
estudiantes
3 Tubos de ensaye de 5 mL. 18 unidades Para un grupo de 20
estudiantes
4 Pipetas Pasteur 3 Pzas Para un grupo de 20
estudiantes
estudiantes
6 Frasco Tipificador comercial anti D 1 Unidad Para un grupo de 20
estudiantes
25

7 Solución salina fisiológica 20 ml Para un grupo de 20
estudiantes
8 Frasco Suero de Coombs 1 Kit Para un grupo de 20
estudiantes
PROCEDIMIENTO
1. A 2 mL de salina fisiológica agregar 4 gotas de sangre con una pipeta pasteur, para obtener una
suspensión de eritrocitos aproximadamente al 5 %.
2. Marcar 2 tubos, uno como Rh y otro como testigo, colocar en cada uno, una gota de eritrocitos
suspendidos al 5 %.
3. Al tubo Rh agregar una gota de suero anti-D y agitar suavemente.
4. Al tubo testigo, agregar una gota de salina y agitar suavemente
5. Centrifugar ambos tubos 1 minuto a 1000 rpm
6. Buscar la presencia de aglutinación, primero en el tubo testigo y luego en el tubo Rh. La presencia de
aglutinación en el tubo marcado Rh, indica que la persona es Rh (+).
7. Si el resultado muestra NO AGLUTINACIÓN, incubar ambos tubos a 37ªC durante 20 minutos y lavar
3 veces con salina centrifugando a 150 rpm durante 2 minutos. Después de la última centrifugación
desechar el sobrenadante y agregar al paquete celular 2 gotas de suero de Coombs, mezclar.
8. Centrifugar por 1 minuto a 1000 rpm.
9. Resuspender suavemente el paquete celular, buscando presencia de aglutinación.
5. TIEMPO DE DURACION DE LA PRACTICA.

200 minutos
Buscar presencia de aglutinación. Si se encuentra en el tubo marcado como Rh, esta persona corresponde
al grupo Du Rh (+). Si en este tubo no hay aglutinación, este individuo esRh (-). El tubo marcado como
testigo debe ser negativo, en el caso de que sea positivo podría tratarse de una respuesta auto inmune.
Para fines de transfusión, el sujeto clasificado como Du, se considerará como donador Rh (+) y receptor
Rh (-).
7. CUESTIONARIO:
Deberán prepararse problemas relativos al tema a fin de que el estudiante pueda afianzar los conocimientos
adquiridos sobre el tema.
26

PRÁCTICA NO. 9
PRUEBA DE COOMBS
(DIRECTA – INDIRECTA)
Marechi en 1908 escribió el principio de la reacción de antiglobulina. Fue hasta 1945, cuando se usó como
prueba inmonohematológica por Coombs, Maurant y Race detectan anticuerpos anti Rh. En 1957 Dacie y
colaboradores definieron la reacción del suero de antiglobulina con componentes de complemento humano.
El suero anti-humano, llamado suero de Coombs se prepara por medio de inyecciones repetidas a los animales
con sueros humanos mezclados del grupo 0, después de eliminar hemolisinas y aglutinas no específicas se
agrega al suero ácido de sodio al 0.1% como conservador. El suero deberá mantenerse entre 2° y 8°C mientras
no esté en uso, para evitar su desnaturalización y contaminación.
Como lo dice su nombre, esta prueba permite establecer la presencia de globulinas; pero puesto que los
anticuerpos son globulinas, permite encontrarlas también.
Los anticuerpos incompletos, entre ellos muchos de los que explican la eritroblastosis fetal y la anemia hemolítica
adquirida, se absorben sobre la superficie de los eritrocitos, pero no los aglutinan. El suero antiglobulina humana
(de Coombs) permite reconocer estos glóbulos rojos sensibilizados al combinarse con los anticuerpos
globulinicos que ya cubren su superficie, con lo cual se produce la aglutinación. Puesto que el suerocontiene
globulinas que neutralizan muy rápidamente los anticuerpos antigobulinas humanas (de Coombs), es evidente
que para identificar los glóbulos sensibilizados es absolutamente necesario remover la totalidad del suero de los
glóbulos mediante lavados repetidos (tres cuando menos) con grandes volúmenes (50 a 100 veces el volumen
de los glóbulos rojos) de suero fisiológico estéril.
El suero de Coombs, es un auxiliar en el diagnóstico por lo que se usa rutinariamente en las siguientes pruebas:
1. Prueba de compatibilidad o pruebas cruzadas.
2. Detección e identificación de anticuerpos.
3. Prueba para la variante del antígeno Rh-D llamada Du.
4. Pruebas de eritrocitos en cordón umbilical a pacientes transfundidos (Coombs directo).
2. COMPETENCIA (S):
Demuestra la presencia de anticuerpos hemoagrupadores absorbidos a las células rojas en vivo (prueba
directa), además de la presencia de anticuerpos absorbidos in vitro.
27

Gradilla metálica Material para 1 grupo
1 5 Pza de 20 estudiantes
2 Tubos de Khan (13 x 75mm). 20 Unidades Material para 1 grupo
de 20 estudiantes
3 Tubos de hemólisis 50 unidades Material para 1 grupo
de 20 estudiantes
4 Pipeta Pasteur con bulbo 10 unidades Material para 1 grupo
de 20 estudiantes
5 Cronómetro 5 unidades Material para 1 grupo
de 20 estudiantes
6 Termómetro de – 10°C a +110°C 5 pzas Material para 1 grupo
de 20 estudiantes
7 Gramos Torundas con alcohol 100 gramos Material para 1 grupo
de 20 estudiantes
8 Lanceta desechable 10 unidades Material para 1 grupo
de 20 estudiantes
9 Centrífuga 1 Pza Material para 1 grupo
de 20 estudiantes
10 Baño maría eléctrico 1 pza Material para 1 grupo
de 20 estudiantes
11 Sangre completa 5 Ml Material para 1 grupo
de 20 estudiantes
12 Suero 3 ml Material para 1 grupo
de 20 estudiantes
PRUEBA DE COOMBS DIRECTA: La prueba directa de Coombs se usa para demostrar la presencia de los
anticuerpos que han fijado en las células del paciente in vivo, por ejemplo, en la enfermedad hemolítica del recién
nacido, en la anemia hemolítica adquirida, etc.
PROCEDIMIENTO
1. Preparar una suspensión al 2% en solución salina normal de las células probadas.

2. Agregue dos gotas de la suspensión de las células preparadas a un tubo de 13 x 75mm.
3. Lavar con solución salina y centrifuge a 3500 r.p.m. durante 1 minuto. Efectúe este lavado tres veces.
4. Después del último lavado, decante lo más posible.
28

5. Agregue dos gotas de suero anti-humano
6. Mezcle bien y centrifugue por 1 minuto a 1500 r.p.m. por 15 segundos.
7. Resuspenda los eritrocitos de los tubos y examine el resultado.
INTERPRETACIÓN
La aglutinación de los eritrocitos del paciente, por el anti-humano, indica que estos se encontraban
sensibilizados por anticuerpos.
PRUEBA INDIRECTA DE COOMBS:

La prueba indirecta de Coombs es utilizada para demostrar la presencia de los anticuerpos circulares que
cubren, pero que no aglutinan, a las células suspendidas en salina. Se efectúa esta prueba combinando “invitro”
a un anticuerpo con antígeno específico. Ejemplo, cuando se hace una prueba anti-D en un suero materno, las
células de la prueba deberán contener el antígeno D.
PROCEDIMIENTO
1. Prepare una suspensión al 2% en solución salina normal de las células seleccionadas para la prueba.
2. Agregue dos gotas del suero que va a probarse a un tubo de Khan.
3. Agregue dos gotas de la suspensión de las células preparadas, al tubo Khan
4. Agregue dos gotas de albúmina bovina solución al 22% al tubo
5. Incube en un baño maría a 37°C por 15 minutos. (la incubación puede prolongarse hasta 60 minutos si
se desea).
6. Saque el tubo del baño maría, llénela con solución salina fresca, centrifugue a 3500 r.p.m.
durante 1 minuto y decante. Lávese tres veces.
7. Después del último lavado, decante lo más posible.
8. Agregue dos gotas de suero Anti-humano y mezcle bien.
9. Centrifugue por 1 minuto a 1500r.p.m. durante 15 segundos.
10. Resuspenda los eritrocitos con una agitación moderada y examine el resultado
5. TIEMPO DE DURACIÓN DE LA PRÁCTICA. 200

minutos
6. MEDICIÓN, CÁLCULOS Y GRÁFICAS.
CONTROLES POSITIVOS Y NEGATIVOS PARA LA PRUEBA ANTIGLOBULINA (COOMBS)
29

1. Prepárese suspensiones al 2% de sangre conocidas como Rh positivas y Rh negativas, en solución
salina. (las muestras de sangre deberán ser de personas normales y sanas cuyas células den una
reacción negativa en la prueba directa de Coombs).
2. Diluya el suero Anti-D (anti-Rho) con solución salina a una proporción a cada de los tubos de ensayo.
3. Coloque dos gotas de las suspensiones preparadas a los tubos de ensaye identificados adecuadamente.
4. Incube a 37°C por 15 minutos. Durante este tiempo, las células Rh negativas permanecerán sin cubrirse
y servirán como el control negativo.
5. Saque los tubos del baño maría. Llene los tubos con solución salina fresca y centrifugue a alta velocidad.
Repita el procedimiento por 3 veces. Decante completamente el sobrenadante después del último lavado
dejando las células depositadas en el fondo de los tubos
6. Agregue dos gotas de suero anti-humano en cada tubo y agítelo bien; centrifugue a 3500r.p.m.
durante 15 segundos.
7. Resuspenda el depósito celular mediante ligera agitación y examine el resultado.
8. Las células Rh positivas estarán aglutinadas mientras que ls células Rh negativas permanecerán sin
aglutinarse.
7. CUESTIONARIO:
1. ¿Qué es un anticuerpo completo?

2. ¿Mencione otras técnicas y métodos para la prueba de Coombs directa e indirecta?
3. Mencione tres causas de error que pueden causar resultados falsos.
4. ¿Qué entiende por eritrocitos sensibilizados?
5. Defina que es un anticuerpo incompleto.
30

PRÁCTICA No. 10
PRUEBAS DE COMPATIBILIDAD O CRUZADAS
1.- CONOCIMIENTO TEÓRICO REQUERIDO:
Aunque la transfusión sanguínea se ha convertido en rutina en la práctica clínica, todavía ocasiona peligros
definidos, inmunitario e infecciosos. La mayor parte de los riesgos puede evitarse mediante pruebas de ambas
sangres, la del donador y la del receptor, antes de la transfusión. La hepatitis sigue siendo la complicación más
importante a pesar del síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) como una consecuencia probable de
transfusiones de sangre y sus componentes.
La transfusión sanguínea puede complicarse por reacción inmunológica o por contaminación de agentes
infecciosos.
Cuando se hacen pruebas cruzadas y selección de anticuerpos antes de la transfusión, es muy raro que se
presenten reacciones de incompatibilidad de los eritrocitos. Las reacciones graves por lo general se deben a
errores administrativos en el rotulado de los tubos de muestra o la identificación correcta del paciente.
La prueba cruzada de la sangre del donador con la del receptor puede constar de dos partes, conocidas como
fase mayor y fase menor.
La fase mayor consiste en mezclar los eritrocitos del donador con el suero del receptor tanto en presencia como
en ausencia del suero de Coombs, mientras la fase menor consiste en mezclar los glóbulos rojos del receptor
con el suero del donador, con y sin el suero de Coombs. La fase mayor recibe ese nombre porque permite
descubrir en el suero del receptor los anticuerpos que suelen presentar la causa más común de las reacciones
hemolíticas graves o fatales ante las transfusiones. La reacción a la transfusión suele ser leve, cuando se debe
a incompatibilidad en la fase menor de la prueba cruzada.
2. COMPETENCIA (S):
Realiza pruebas cruzadas para determinar la compatibilidad sanguínea del donador con el receptor, a través de
la resolución de problemas que se presentan en el campo de trabajo del profesional.
1 Tubos de ensayo 18 Unidades Para un grupo de 20
estudiantes
2 Tubo vacutainer sin anticoagulante 6 Unidades Para un grupo de 20
estudiantes
3 Tubo vacutainer con anticoagulante 6 Unidades Para un grupo de 20
estudiantes
4 Adaptador para vacutainer 6 Unidades Para un grupo de 20
estudiantes
31

5 Gradilla metálica 6 Pzas Para un grupo de 20
estudiantes
6 Pipetas Pasteur con bulbo 6 Unidades Para un grupo de 20
estudiantes
7 Termómetro de – 10°C a +110°C 6 Unidades Para un grupo de 20
estudiantes
8 Lanceta desechable 6 Unidades Para un grupo de 20
estudiantes
9 Torundas con alcohol Csp Pzas Para un grupo de 20
estudiantes
10 Jeringa desechable de 3.0 mL 6 Unidades Para un grupo de 20
estudiantes
11 Ligadura 6 unidades Para un grupo de 20
estudiantes
12 Centrífuga 1 pza Para un grupo de 20
estudiantes
13 Baño maría 1 pza Para un grupo de 20
estudiantes
14 Refrigerador 1 pza Para un grupo de 20
estudiantes
15 Solución salina 0.85%. 100 ml Para un grupo de 20
estudiantes
16 Albúmina Bobina 22% o 30%. 25 ml Para un grupo de 20
estudiantes
17 Suero de Coombs. 10 ml Para un grupo de 20
estudiantes
18 Glóbulos rojos al 5% 10 ml Para un grupo de 20
estudiantes
19 Suero del paciente 5 ml Para un grupo de 20
estudiantes
1. Hacer una extracción de 3ml de sangre al donador y receptor.

2. Preparar una suspensión al 5% de glóbulos rojos en suero fisiológico en un tubo de hemólisis, tanto del
donador como del receptor.
3. Dejar coagular la sangre, desprender el coágulo por medio de un aplicador, centrifugar a 3000r.p.m. durante
5 minutos, separar el suero por medio de una pipeta Pasteur de ambos tubos.
PRUEBAS CRUZADAS (salina)
1. Marcar tres tubos de la siguiente manera: Ds (prueba mayor), Rs (prueba menor) y Ts

(autotestigo).
2. Al tubo Ds colocar dos gotas de suero del receptor más una gota de glóbulos rojos del donador y mezclar
3. Al tubo Rs colocar dos gotas de suero del donador más una gota de glóbulos rojos del receptor y mezclar
4. Al tubo Ts colocar dos gotas del suero del donador más una gota de glóbulos rojos del donador
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5.Centrifugar los tubos Ds Rs y Ts a 3400 r.p.m. durante 30 segundos y observar si hay aglutinación
6. Mezcle y centrifugue a 340 r.p.m. durante 30 segundos y observe si hay aglutinación.
PRUEBAS CRUZADAS (Albúmina)
1. Marcar tres tubos de la siguiente manera: DA (prueba mayor), RA (prueba menor) y TA (autotestigo).
2. Al tubo DA colocar dos gotas del suero del receptor más una gota de glóbulos rojos de donador y mezcle
3. Al tubo RA colocar dos gotas del suero del donador más una gota de glóbulos rojos del receptor y mezcle
4. Al tubo TA colocar dos gotas del suero del receptor más una gota de glóbulos del receptor y mezcle
5. Agregue a los tubos DA RA y TA albúmina bobina 2 gotas si es al 22% y dos gotas si es al 30% y mezcle
6. Centrifugue los tubos DA RA y TA a 3400 r.p.m. durante 90 segundos y observe si hay aglutinación
7. Si no hay hemoaglutinación incube a 37°C durante 15 minutos.
8. Saque los tubos DA RA y TA y centrifugue a 3400r.p.m. durante 90 segundos y observe si hay aglutinación.
9. Si no hay aglutinación lave tres veces con solución salina isotónica.
10. En último lavado elimine totalmente la solución salina remanente
11. Adicione a cada tubo DA RA y TA una gota de suero antiglobulina humana e incubar 15 minutos a 37°C.
12. Mezcle y centrifugue a 3400r.p.m. durante 30 segundos y observe si hay aglutinación.
13. Control de Coombs, realizar los mismo sin solución de albúmina y con solución liss.

200minutos
6. MEDICIÓN, CÁLCULOS Y RESULTADOS.
Se realiza de acuerdo a los resultados obtenidos en la practica 7.
7.- CUESTIONARIO:
• En una prueba cruzada se tiene como donador a un 0 Rh+ y como receptor un ARh+.
• Escriba como se observa la aglutinación en la prueba mayor.
• Escriba como se observa la aglutinación en la prueba menor.
• Escriba si son compatibles y ¿por qué?
• ¿Cuál es la importancia de las pruebas cruzadas?
• ¿Cuáles son las complicaciones que se pueden presentar en una transfusión sanguínea?
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PRÁCTICA No. 11
SEMINARIO INMUNODIFUSIÓN RADIAL C3 - C-4
El estudio de los factores del Complemento es la determinación de los componentes de uno de los factores que
influyen directamente en la inflamación llamada cascada del Complemento, entre estos factores se suelen
determinar principalmente los factores C3, C4, y la actividad del complemento total ó CH50. Los factores del
complemento son nueve proteínas, del C1 al C9. La cascada puede ser iniciada por diversos factores,
principalmente la unión de complejos antígeno-anticuerpo.
El producto final de la cascada es la unidad de ataque de la membrana celular, que genera agujeros en las
bacterias, pero también en ocasiones en células del propio cuerpo (enfermedades autoinmunes). Cuando la
misma bacteria vuelve a infectar a un individuo se produce la activación del complemento por la llamada vía
alterna, desde el componente C3, y desde esta activación se produce la unidad de ataque celular. La actividad
del complemento CH 50 mide la actividad que le queda a la cascada por activarse, si esta actividad es baja es
que el complemento ya está siendo activado por otros factores y se encuentra agotada su capacidad.
¿Para Qué se Realiza Este Estudio?
La actividad de complemento (CH50 o las proteínas individuales de complemento) se miden para determinar si
el complemento está involucrado en el origen o en el proceso de diferentes enfermedades. La actividad de
complemento se mide también para controlar la gravedad o evolución de una enfermedad, tanto como
diagnóstico como para comprobar la eficacia del tratamiento. Por ejemplo, los pacientes con Lupus Eritematoso
Sistémico activos pueden tener niveles bajos de C3 y C4, y estos niveles del Complemento pueden seguirse
como un índice de la actividad de la enfermedad. La actividad de complemento puede variar en partes diferentes
de cuerpo. Por ejemplo, actividad de complemento en la sangre de pacientes con Artritis Reumatoide puede ser
normal o aumentada, pero en el líquido articular se encuentra muy baja. Los niveles del complemento se
encuentran muy disminuidos en graves infecciones bacterianas, por hongos y por parásitos.
2. COMPETENCIA (S)
Conoce los métodos para determinar la actividad del complemento, a través de la resolución de problemas.
3. MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS
1 Diapositivas con material necesario Csp
2 Videos con información csp
4. TÉCNICA O PROCEDIMIENTO
Para realizar este análisis NO se precisa estar en ayunas. El componente C3 del complemento es inestable a
altas temperaturas. Se puede realizar la toma en un lugar apropiado (consulta, clínica, hospital) pero en
ocasiones se realiza en el propio domicilio del paciente. Para realizar la toma se precisa de localizar una vena
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apropiada y en general se utilizan las venas situadas en la flexura del codo. La persona encargada de tomar la
muestra utilizará guantes sanitarios, una aguja (con una jeringa o tubo de extracción).
Le pondrá un tortor (cinta de goma-látex) en el brazo para que las venas retengan más sangre y aparezcan más
visibles y accesibles.
Limpiará la zona del pinchazo con un antiséptico y mediante una palpación localizará la vena apropiada y
accederá a ella con la aguja. Le soltarán el tortor. Cuando la sangre fluya por la aguja el sanitario realizará una
aspiración (mediante la jeringa o mediante la aplicación de un tubo con vacío).
Al terminar la toma, se extrae la aguja y se presiona la zona con una torunda de algodón o similar para favorecer
la coagulación y se le indicará que flexione el brazo y mantenga la zona presionada con un esparadrapo durante
unas horas. La sangre extraída se traslada al laboratorio de análisis en un tubo especial para bioquímica, que
contiene un producto anticoagulante. En general no suelen ser necesarios más de 10 mililitros de sangre para
una batería estándar de parámetros bioquímicos.
Problemas y Posibles Riesgos
1. La obtención mediante un pinchazo de la vena puede producir cierto dolor.

2. La posible dificultad en encontrar la vena apropiada puede dar lugar a varios pinchazos
3. Aparición de un hematoma (moratón o cardenal) en la zona de extracción, suele deberse a que la vena
no se ha cerrado bien tras la presión posterior y ha seguido saliendo sangre produciendo este problema.
Puede aplicarse una pomada tipo Hirudoid® o Trombocid® en la zona.
4. Inflamación de la vena (flebitis), a veces la vena se ve alterada, bien sea por una causa meramente
física o por que se ha infectado. Se deberá mantener la zona relajada unos días y se puede aplicar una
pomada tipo Hirudoid® o Trombocid® en la zona. Si el problema persiste o aparece fiebre deberá
consultarlo con su médico.
5. TIEMPO DE DURACIÓN DE LA PRÁCTICA
100 minutos
6. MEDICIÓN, CÁLCULOS Y GRÁFICOS
Para realizar las interpretaciones se debe conocer previamente los valores normales
VALORES NORMALES DEL COMPLEMENTO

CH 50 75 a 160 U/ml
C1 Inhibidor 16 a 33 mg/ dl
C3 Hombres 88 a 252 mg/ dl
C3 Mujeres 88 a 206 mg/ dl
C4 Hombres 12 a 72 mg/ dl
C4 Mujeres 13 a 75 mg/ dl
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En estos valores puede haber muy pequeñas diferencias por la técnica o por criterios de normalidad propios de
laboratorios concretos, a veces en el rango de valores y otras veces por las unidades a las que se hace
referencia.
VALORACIÓN DE LOS RESULTADOS ANORMALES
La actividad aumentada de complemento puede verse en:
• Cáncer
• Colitis ulcerosa
• Infarto agudo de miocardio
La actividad disminuida de complemento puede verse en:
• Angioedema hereditario
• Cirrosis hepática
• Glomerulonefritis
• Hepatitis infecciosa
• Lupus Eritematoso Sistémico con afectación renal
• Malnutrición
• Rechazo de transplante de órganos
7. CUESTIONARIO
• Condiciones del paciente para la toma de muestra

• Investigue en que situaciones pueden dar resultados falso negativos
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PRÁCTICA No. 12
ELISA DIRECTO TOXOPLASMOSIS: DETECCION DE ANTICUERPOS Ig G Anti. TOXOPLASMA GONDII

EN SUERO
1. CONOCIMIENTO TEÓRICO REQUERIDO
La prueba ELISA TOXO Ig G esta destinada a la detección de anticuerpos clase Ig G contra Toxoplasma gondii
en suero humano.
El Toxoplasma gondii infecta a casi todos los mamíferos y aves. Es el más ampliamente distribuido de los
parásitos intracelulares. El ser humano puede infectarse a través de contaminación fecal o carne crudo, o a
través de inoculación directa vía transfusión sanguínea o transmisión congénita.
Las mujeres embarazadas que adquieren la toxoplasmosis durante el primer trimestre tienen un 25 % de riesgo
de infección fetal produciendo aborto espontaneo, niño nacido muerto o infección grave. 65% de recién nacidos
infectados durante el tercer trimestre del embarazo tienen infección subclínica llegando a desarrollar en un 85 %
corioretinitis o secuelas neurológicas.
PRINCIPIO.
La prueba ELISA TOXO Ig G esta basada en la clásica técnica ELISA. Los micropocillos son recubiertos con
antígenos de Toxoplasma (Toxo –Ag) preparados con parásitos sonicados Toxoplasma gondii (Taquizoitos).
En la primera etapa de incubación, los anticuerpos anti-TOXO (antiTOXO-Ac) contenidos en la prueba o el control
se fijan específicamente a los antígenos inmovilizados. Al final de la incubación, los componentes excesivos son
eliminados por lavado. En la segunda etapa de incubación, se añade un conjugado anti Ig G (Anticuerpos anti Ig G
humana, marcados con peroxidasa) que se fija específicamente a los anticuerpos IgG. Se forman inmunocomplejos
típicos. Después de eliminar el conjugado excesivo por lavado (segunda etapa de lavado) y añadir TMB/Sustrato
(etapa 3), se forma un color azul que se transforma a amarillo después de parar la reacción. La intensidad de este
color es directamente proporcional a la cantidad de anticuerpos antiTOXO Ig G en la muestra.
2. COMPETENCIA (S)
Aplica el método directo para determinar anticuerpos Ig G Anti- Toxoplasma gondii en suero, en la prueba de control
fijándose en los antígenos inmovilizados.
3. MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS.
Ítem DENOMINACIÓN Cantidad Unida Observaciones
d
1 Micropocillos en porta tiras 5 Unidades Para un grupo de 20
estudiantes
2 Control TOXO Ig G negativo 1 Kit Para un grupo de 20
estudiantes
3 Control TOXO IgG positivo 1 Kit Para un grupo de 20
estudiantes
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4 Control TOXO IgG Cut-off 1 Kit Para un grupo de 20
estudiantes
5 Buffer de dilución Ig G 50 Ml Para un grupo de 20
estudiantes
6 Conjugado Anti Ig G 50 Ml Para un grupo de 20
estudiantes
7 Solución de lavado 200 Ml Para un grupo de 20
estudiantes
8 Reactivo Substrato 50 Ml Para un grupo de 20
estudiantes
9 Solución de parada 10 Ml Para un grupo de 20
estudiantes
10 Frasco con Hipoclorito al 10% para 5 Frascos Para un grupo de 20
desechos infecciosos estudiantes
11 puntas para pipetas automáticas de 100 30 Unidades Para un grupo de 20
ul estudiantes
12 Lector de Elisa 1 pza Para un grupo de 20
estudiantes
4. TECNICA O PROCEDIMIENTO
• Seguir el procedimiento exactamente como describe el fabricante en cuanto a la dilución del suero ytodas
las etapas tal como se describe en el inserto del Kit.
• Realizar la lectura llevando a cero de absorbancia el instrumento Lector ELISA.
• Medir la absorbancia después de terminar la reacción usando una longitud de onda tal como describela
técnica.
• Realizar los cálculos de valores de control y punto de corte( Cut-off) Interpretar los resultados
5. TIEMPO DE DURACION DE LA PRACTICA

200 minutos
6. MEDICION, CALCULOS Y RESULTADOS.
De acuerdo a la técnica y los resultados proceder a realizar los cálculos y su posterior interpretación.
7. CUESTIONARIO
• Plantear casos clínicos referentes al tema con interpretación de resultados.

• Comparar resultados realizados de pacientes con muestras frescas y muestras tomadas de
7 a 14 días después.
• Para una estimación cuantitativa de los niveles de anticuerpos antiToxoplasma Ig G en
muestras positivas graficar.
• ¿La manipulación deberá siempre estar de acuerdo con las buenas prácticas de laboratorio?
Los criterios de validación del análisis deben cumplirse siempre. ¿Por qué?
• ¿El significado clínico de cambios en los niveles de IgG especificas anti Toxoplasma gondii debe
interpretarse cuidadosamente?
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PRÁCTICA No. 13
ELISA CITOMEGALOVIRUS (CMV) Ig G

El citomegalovirus (CMV) puede causar infecciones de gravedad variable. A menudo se produce un síndrome
similar a la mononucleosis infecciosa, pero sin faringitis significativa. La enfermedad localizada grave, incluso con
retinitis, puede aparecer en pacientes infectados por HIV y rara vez en receptores de transplantes de órganos y
otros pacientes infectados por HIV y rara vez en receptores de trasplantes de órganos y otros pacientes
inmunodeficientes. La enfermedad sistémica grave se observa en recién nacidos y pacientes inmunodeficientes.
El diagnóstico con pruebas de laboratorio es útil para confirmar la enfermedad grave y se basa en cultivo, pruebas
serológicas, biopsia o detección de antígenos o de ácido nucleico. El tratamiento de la enfermedad grave, en
particular la retinitis, se realiza con ganciclovir y otros antivirales.
2. COMPETENCIA (S):
• Aplica el método directo para determinar anticuerpos Ig G en suero para citomegalovirus.
3. MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS
1 Kits de Citomegalovirus 1 Kits
2 Micropipetas de volumen variable 5 pzas
3 Agua csp
4. TECNICA O PROCEDIMIENTO.
• Preparación de la solución de lavado
• Hacer una dilución 1+100 con la solución Wash y agua destilada
Procedimiento
• Dispensar 100 microlitros de control negativo al pocillo control
negativoDispensar 100 microlitros de estándar 1 al pocillo estándar 1
Dispensar 100 microlitros de estándar 2 al pocillo estándar 2
Dispensar 100 microlitros de estándar 3 al pocillo estándar 3
• Dispensar 100 microlitros de control positivo al pocillo control positivo
• Cubrir la placa e incubar por 60 minutos a 37°C
• Eliminar el contenido y lavar 5 veces con la solución de lavado, eliminar los residuos en
papelabsorbente realizando ligeros golpes
• Dispensar 100 microlitros de enzima conjugado, Excepto al control negativo
• Incubar a T° Ambiente en tre 20 a 25°C por 30 minutos
• Eliminar el contenido y lavar 5 veces con la solución de lavado, eliminar los residuos en papel
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absorbente realizando ligeros golpes
• Dispensar 100 microlitros de sustrato en cada pocillo
• Incubar exactamente 10 minutos a temperatura ambiente en la oscuridad
• Detener la reacción agregando 100 microlitros de sol stop en cada pocillo
• Leer la densidad óptica a 450/620 nm
• La solución es estable 30 minutos después de haber agregado el stop
5. TIEMPO DE DURACION DE LA PRACTICA

200 minutos
6. MEDICION, CALCULOS Y RESULTADOS.

El sustrato o el blanco debe tener una absorbancia con valor menor a 0.1
Control negativo absorbancia valor menor a 0.200
Estandar 1 absorbancia entre 0.350 a 0.850
Control positivo absorbancia entre 0.650 a 3.00
7.- CUESTIONARIO
Realice un flujograma del procedimiento
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PRÁCTICA No. 14
ELISA ANTIGENO DE SUPERFICIE DE LA HEPATITIS B HbsAg
La hepatitis B aguda puede ser asintomática. Los síntomas más frecuentes y relevantes del cuadro agudo
sintomático son: malestar general, astenia, fatiga, fiebre, dolores musculares y articulares, náuseas, vómitos,
orinas oscuras e ictericia acompañados de alteraciones analítica en el perfil bioquímico hepático En la forma
crónica, los síntomas suelen ser leves e intermitentes variante entre pequeñas dispepsias e intolerancias
alimentarias concretas a cuadros de cansancio y astenia más o menos prolongados. El perfil bioquímico presenta
alteraciones de las transaminasas compatible con la presencia de la infección viral.
Hay infecciones que, para producir síntomas muy atípicos y poco relevantes, no son diagnosticadas como tales,
la mayoría de ellas evolucionan de forma espontánea a la curación dejando protección permanente, otros se
hacen crónicas y evolucionan con síntomas poco específicos y elevaciones moderadas y oscilantes de las
transaminasas, la objetivación casual mediante el análisis de la serología específica orientará a su diagnóstico.
La forma fulminante carrera con fallo multisistémico, por anulación de la función hepática con una rápida caída
de los factores de coagulación y alteraciones bioquímicas muy llamativas. Estos pacientes deben ser remitidos
lo antes posible a un centro donde se puedan evaluar para un trasplante urgente.
La coinfección con otros virus puede dar lugar a modificaciones de los síntomas y del perfil bioquímico,
especialmente en la coinfección con el Virus Delta (VDH) que supone un factor de riesgo añadido en la evolución
de las personas que tienen ambos virus.
2. COMPETENCIA (S):
Aplica el método directo para determinar anticuerpos Ig G en suero para Hepatitis B .
3. MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS.

1 Kits HEPATITIS B HbsAg 1 kit Para un grupo de 20
estudiantes
2 Goteros 6 pzas Para un grupo de 20
estudiantes
4.TECNICA O PROCEDIMIENTO.
Paso1 Lleve las muestras y componentes del ensayo a temperatura ambiente si es refrigerada o congelada.
Mezcle bien la muestra antes del ensayo una vez descongelada
Paso2 Abre el empaque y saque el dispositivo. Colóquelo sobre una superficie limpia y plana
Paso 3 Identifique el dispositivo
Paso 4 Con el gotero en posición vertical deje caer tres gotas (60 a 90 microlitros) de la muestra en el pocillo
del dispositivo, asegúrese de no producir burbujas
Paso 5 Dejar reaccionar por 15 minutos
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Paso 6 leer los resultados
5.- TIEMPO DE DURACION DE LA PRÁCTICA
100 minutos
6.- MEDICION, CALCULOS Y RESULTADOS.
Resultado negativo si solo se colorea el alinea del control ( C)
Resultado positivo si se colorea ambas líneas control ( C) y TEST ( T)
Invalido Si la línea del Control ( C ) no se colorea
7.- CUESTIONARIO
1.- Explique el fundamento de la prueba
2.-Indique los cuidados para la recolección de la muestra
3.- Indique las pruebas cruzadas o por que se dan falsos positivos
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PRÁCTICA No. 15
CONTROL DE CALIDAD EN SEROLOGÌA
Las mediciones en el Laboratorio de Inmunología están sometidas a los mismos errores que cualquier medición
en el Laboratorio Clínico.
Los errores pueden ser clasificados como: a) sistemáticos o determinados y b) aleatorios o indeterminados.
Los errores sistemáticos tienen varias causas tales como: defectos en el método, prácticas de análisis
deficientes, mal funcionamiento de los instrumentos, y el uso de estándares no válidos. Estos errores son
usualmente constantes para un método dado y pueden ser contabilizados o medidos.
Los errores aleatorios son inevitables y se reflejan en las fluctuaciones impredecibles que se presentan en el
uso de un método. Indican la incapacidad de reproducir repetidamente la misma relación o resultado. Pueden
ser detectados usando procedimientos estadísticos.
Son dos los términos relacionados con el error: exactitud y precisión.
La exactitud, es la cercanía de un resultado a la media aritmética de un grupo de resultados al valor verdadero,

estimado o aceptado. El error sistemático (error de exactitud) se comprueba cuando los resultados al ser
aplicados a la gráfica de Levy Jennings son consistentemente altos o bajos en relación al valor verdadero. La
determinación de la exactitud de un resultado es imposible cuando no hay un estándar definido para la sustancia
que está siendo medida, especialmente si, diferentes procedimientos dan valores diferentes para el mismo
material.
Precisión es la conformidad o la repetibilidad de un grupo de resultados replicados entre si o el acuerdo entre

observaciones repetidas hechas bajo las mismas condiciones. Las medidas de precisión son calificadas o
explicadas en términos de las posibles fuentes de variabilidad: replicabilidad, repetibilidad y reproducibilidad.
Representa la habilidad de la prueba de dar esencialmente el mismo valor en aplicaciones repetidas sobre un
mismo material y es una medida del error al azar. Muchas fuentes de error se controlan cuando las muestras se
trabajan en duplicado o triplicado, el mismo día, en la misma corrida, por el mismo operador, con los mismos
métodos, estándares y reactivos, el error resultante es al azar error del ensayo.
Replicabilidad: para algunos métodos, cuando los resultados son críticos e intervienen varios analistas que usan
los métodos intermitentemente, pero de manera regular, puede ser deseable estudiar el método para conocer
su repetibilidad, esto incluye el examen de muestras por duplicado o con su réplica en tiempos escalonados.
También sería deseable incluir en el estudio el uso del mismo instrumento o diferentes instrumentos por más de
un analista.
Repetibilidad: proximidad entre los resultados de mediciones sucesivas de la misma cantidad mesurable, sujeta
a las siguientes condiciones:
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- Mismo procedimiento de medición
- Mismo observador
- Mismo sistema de medición
- Misma ubicación
- Mismas condiciones de uso
- Realización sucesiva de todas las mediciones en un tiempo relativamente corto
La repetibilidad de las mediciones generalmente se expresa en forma inversa como la repetibilidad de la
desviación estándar.
Reproducibilidad: proximidad entre los resultados de mediciones de la misma cantidad mesurable, donde las
mediciones se llevan a cabo bajo las siguientes condiciones:
- mismo procedimiento de medición
- distintos observadores
- distintos sistemas de medición
- distintas ubicaciones
- distintos momentos
En las mediciones deberán especificarse las condiciones.
La “reproducibilidad de las mediciones” normalmente se expresa en forma inversa como “la reproducibilidad de
la desviación estándar”
Además de la validez – veracidad de la medición – que se define como la proximidad entre el valor promedio
obtenido de una larga serie de resultados de mediciones y de un valor real. No se le puede proporcionar un
valor numérico a “la veracidad de medición”, pero puede ser expresada como una escala ordinal, por ejemplo
baja, media, alta. Por lo general “la veracidad” se expresa numéricamente por la medida estadística “sesgo de
mediciones”, que está inversamente relacionada con la veracidad. Las mediciones deben ser confiables, esto
es, cuando se repiten en condiciones comparables sobre el mismo objeto, deben arrojar resultados similares.
En serologìa los resultados obtenidos en las pruebas que utilizan diluciones seriadas tienen una distribución
normal logarítmica más que una distribución Gausiana. Es común tomar en serio el dogma de que los resultados
serològicos varían por más o menos una dilución y que además, una diferencia de 4 diluciones es significativa.
Estas ideas que se han estado usando para el control de calidad de las pruebas serológicas resultan aberrantes
en relación al hecho de que estas aseveraciones son vagas e indocumentadas y existe suficiente evidencia de
estas ideas no son ciertas..
El problema de medir variaciones en los resultados de las pruebas serológicas ha sido investigado por los
centros de control de enfermedades infecciosas, los que han propuesto varios métodos de medición de las
variaciones, pero siempre se elige el método más simple y, consiste en convertir los resultados a logaritmos (a
cualquier base conveniente). Se calcula el promedio y la desviación estándar, por las formulas usadas
comúnmente; se convierte otra vez a la forma original (antilogaritmo).
Frecuencias de Distribución
Una de las primeras cosas que debe hacerse en el análisis de datos para control de calidad es determinar la
forma de la frecuencia de distribución. El suero control representa el rango de valores esperados, que puede
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ser seleccionado de muestras de pacientes con énfasis al nivel o titulo critico, Borderline, línea de corte o cuttoff.
Una vez obtenidos los resultados de por lo menos 30 determinaciones de cada uno de los sueros control, deben
examinarse los datos para evaluar si la distribución se adecua a la curva normal gausiana o a una curva
logarítmica normal. Las pruebas estadísticas (ej. Chi cuadrado X2 ) es adecuada para determinar si un grupo de
resultados difieren significativamente de una distribución teórica especifica, pero, en muchos casos podría ser
satisfactoria una aproximación no muy fina . Un primer paso es la preparación de simples histogramas de
distribución de frecuencias, el siguiente paso es calcular el promedio (x), la desviación estándar (Sx), para
determinar si esta primera mirada estadística es aceptable. Por tanto, se debe calcular el promedio, la desviación
estándar aritmética para una distribución normal y, el promedio y la desviación estándar geométricos para una
distribución log-normal.
Gráficos de control de calidad
Como ya se mencionó anteriormente, las mediciones están sujetas a dos clases de errores: al azar y sistemáticos
.
Los errores sistemáticos (errores de exactitud) aparecen desviados, es decir, consistentemente altos o bajos, en
relación al valor verdadero
Los errores al azar (errores de precisión) están determinados por la incapacidad de reproducir repetidamente el
mismo resultado.
El error sistemático se produce comúnmente en el procedimiento de una prueba y provienen de errores

inherentes al equipo, reactivos o calibración. Este error, por lo general es, razonablemente constante día a día.
Un error sistemático temporal podrá dar como resultado un cambio en la calibración de un instrumento o de un
cambio en los reactivos, o el uso de un estándar deteriorado; este error puede ser constante hasta que se
detecte el problema y sea corregido.
Cuando se procesan muchas determinaciones sobre el mismo material, se considera que el promedio es la
mejor estimación del valor verdadero, pero sin estandarización, queda cuestionado el valor verdadero. Es
importante, además, que las muestras de referencia sean certificadas con valores de eferencia definidos o
establecidos adecuadamente y, determinar que los valores observados estén muy próximos a los valores de
referencia que se consideran los valores verdaderos. La determinación de la precisión de un resultado es
imposible cuando no hay un estándar definitivo para la sustancia que está siendo sujeto de medición y
especialmente si, diferentes procedimientos dan valores diferentes para el mismo material. Para muchas
pruebas tanto un material estándar y/o un método estándar son adecuados.
La precisión entonces, se refiere a la habilidad de la prueba de dar esencialmente el mismo valor con
aplicaciones repetidas sobre un mismo material o similar y, es una medida del error al azar.
Muchas fuentes de error se controlan cando las muestras se procesan en duplicados el mismo día y por el
mismo operador y con los mismos métodos, estándares y reactivos. En ese caso, los errores sistemáticos son
constantes (a causa de que ellos fueron constantemente aplicados) y no entran en las medidas de precisión. El
error resultante es un error al azar en la prueba.
La variabilidad en las pruebas inmunológicas puede y debe ser manejado con los mismos métodos que se
aplican a otras pruebas cuantitativas. Los resultados de repetición de la prueba sobre un suero control, deben
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ser acumulados hasta que se disponga de valores suficientes (generalmente alrededor de 30 resultados) para
permitir cálculos reales y razonables del promedio geométrico y de la desviación estándar. Para ello se debe
contar con suero control en cantidad suficiente y adecuado para un período de 6 meses o más, si es posible,
para proporcionar monitoreo continuo o para cuando se hace un cambio del juego de reactivos (Kit de reactivos),
los resultados obtenidos de cada suero control (concentración o título alto y concentración o título bajo y control
negativo o suero de individuos sanos), se usan para construir las gráficas de control de calidad, de manera
similar a las recomendadas en otras áreas del laboratorio. Las gráficas deben mostrar el promedio y los límites
de aceptabilidad superiores e inferiores y proporcionar para el graficado de rutina los resultados del control de
tal manera que las tendencias y desvíos fuera de control resultantes puedan identificase rápidamente. Para
exactitud y precisión deberán hacerse gráficas separadas. Luego, deben calcularse los límites del control, de la
misma manera como se calculan los límites aritméticos. El rango de una desviación estándar geométrica se
expresa como el promedio geométrico multiplicado o dividido por una desviación estándar geométrica, en lugar
de (+/-) una desviación estándar aritmética. El rango para una desviación estándar geométrica incluye todos los
valores entre el promedio geométrico dividido entre la desviación estándar geométrica y el promedio geométrico
multiplicado por una desviación estándar geométrica. El rango de una desviación estándar geométrica para un
grupo de valores con un promedio geométrico de 80 y una desviación estándar de 2, podría ser desde 40 (80
dividido entre 2) a 160 (80 multiplicado por 2).
Para calcular rangos distintos a una desviación estándar geométrica se eleva a la potencia del número del
número de la desviación estándar geométrica deseada. Por ej., el rango para 2 desviaciones estándar es el
promedio geométrico (xG) multiplicado y dividido por la desviación estándar al cuadrado (SG2), y el rango de 3
desviaciones estándar es el promedio geométrico multiplicado y dividido por la desviación estándar geométrica
al cubo (SG3). En el ej. anterior, el rango de 2 desviaciones estándar geométricas (SG ) podría ser desde 20 (80
dividido entre 22) a 320 (80 multiplicado por 22). Y el rango de 3 desviaciones estándar podría ser desde 10 (80
dividido entre 23) hasta 640 (80 multiplicado por 23). No es siempre necesario que los valores sean números
enteros. Los límites de una desviación estándar geométrica de 1.41 para el mismo ej. pueden ser desde 30 (80
dividido entre 21.41 = 2.66) a 213 (80 multiplicado por 21.41).
En algunos casos es fácil usar formas tradicionales en los datos transformados a log y luego los resultados
finales se convierten a la forma original (antilog), luego de que se han calculado los límites.
Idealmente, los límites de control calculados deberán ser comparados con los requerimientos clínicos para un
analito en particular antes de usar una prueba para reportar los resultados del paciente. Si la exactitud, la
precisión y los otros parámetros no satisfacen los requerimientos clínicos, deberá revisarse la metodología por
todas las vías posibles para mejorar el programa. Debe considerarse también, el revisar otros métodos.
Actualmente es difícil cumplir con este ideal a causa de que no existe consenso en los requerimientos clínicos.
Se han propuesto recomendaciones tentativas que deben ser usadas con precaución hasta que se examinen
extensivamente por la comunidad del Laboratorio Clínico.
Significancía estadística
Además, de aceptar la idea de que las pruebas serológicas tienen la variación de más o menos 1 tubo, los
serólogos también han aceptado la idea de que una elevación de 4 veces un título constituye un cambio
significativo. La idea de que una diferencia de título de 4 veces constituye un cambio estadísticamente
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significativo, pasa por alto el hecho de que las variaciones en los exámenes serológicos no son las mismas en
todas las pruebas o para todos los procedimientos.
En la práctica, cada cambio puede o no ser estadísticamente diferente. Si cada Laboratorio midiera la precisión
intralaboratorial para cada prueba podría ser muy fácil reportar al médico, resultados no solo de títulos en sueros
pareados, sino también la probabilidad de que las diferencias fueran estadísticamente significativas. En
muestras individuales, el laboratorio puede proporcionar títulos e intervalos de confianza. Los estimados de
precisión laboratorial pueden provenir directamente de cálculos estadísticos usados para el sistema de gráficas
de control de calidad que posteriormente requerirán poco esfuerzo adicional. Por tanto, se recomienda usar los
métodos descritos. Los laboratorios pueden ejecutar múltiples pruebas de control de calidad de las muestras.
Calcular la variación actual y establecer los gráficos del control de calidad. Estos gráficos se usan para obtener
más precisión cuando las pruebas están fuera de control. Ya que los gráficos están basados sobre medidas de
variación actual y con límites calculados.
Estos métodos también pueden usarse para llenar otras necesidades de estimación de la variación y
significancia, como una diferencia entre resultados o entre pruebas o entre laboratorios, procedimientos o entre
operadores, para medir la variación entre los niveles del analito en poblaciones y para medir la diferencia
estadísticamente significativa entre muestras.
Se recomienda a los serólogos medir la variación actual en las pruebas que ellos puedan ejecutar para que se
establezcan controles con límites aceptables calculados para que la significancia de la diferencia sea calculada
en los resultados.
Diseño y/o selección de un método serológico
En la actualidad existen una variedad de métodos serológicos que se encuentran disponibles para su ejecución
en el Laboratorio Clínico.
Estos métodos poseen diferencias inherentes en sensibilidad, especificidad, valor predictivo y eficiencia.
La sensibilidad y la especificidad pueden describirse tanto en términos de ejecución analítica o de susceptibilidad

de la prueba al error sistemático o a la exactitud de un método en determinar un diagnóstico correcto.
La sensibilidad analítica de un método se define como su capacidad de detectar la cantidad mínima límite de
un analito, es decir, la menor concentración del antígeno del anticuerpo capaz de ser detectada por el método.
Los valores de sensibilidad analítica de las pruebas disponibles en la actualidad se encuentran en el rango de
0.1 a 40 mg/dL, para las pruebas de precipitación hasta aquellos que detectan concentraciones en el rango de
microgramos a nanogramos como el EIA, hasta aquellos que detectan concentraciones menores a 1
picogramos/mL como las pruebas quimiluminiscentes.
La especificidad analítica de una prueba serológica se define como la habilidad del método de detectar solo
el anticuerpo o el antígeno para el cual ha sido diseñado. La detección de sustancias de reacción cruzada,
disminuyen la especificidad de la prueba y crean resultados, falsos-positivos.
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El termino de sensibilidad y especificidad puede también ser utilizado para describir la habilidad de una prueba
de establecer un diagnóstico exacto.
La sensibilidad del diagnóstico de un método se refiere al porcentaje de resultados positivos producidos por
un método de laboratorio en individuos que poseen una enfermedad determinada y puede calcularse mediante
la siguiente fórmula:
B
A= x 100
B + C Donde:
A = % de sensibilidad diagnóstica
B = Número de resultados verdaderos positivos
C = Número de resultados falsos negativos
Por tanto, una prueba que tenga una sensibilidad diagnóstica del 95 % produce resultados positivos en 95
individuos analizados, que tienen la enfermedad en cuestión, pero, podría dar resultados falsos negativos en
cada 5 de 100 individuos que tienen la enfermedad. Pueden variar con el estado de duración de la enfermedad
o muchas variables como sexo, edad, otras enfermedades, medicamentos, etc.
La especificidad diagnóstica de un método es el porcentaje de resultados negativos producidos por una

prueba de laboratorio en individuos en los cuales una enfermedad en particular está ausente, y puede calcularse
de la siguiente manera:
B
A= x 100
B+C
Donde:
A = % de especificidad diagnóstica
B = Número de Resultados verdaderos negativos
C = Número de resultados falsos positivos
De esta manera, una prueba con una especificidad diagnóstica del 95 % podría proporcionar resultados
verdaderos negativos en 95 individuos de cada 100 analizados que no tienen la enfermedad en cuestión, pero,
podrían dar resultados falsos positivos en cada 5 de 100 individuos sometidos a la prueba que no tienen la
enfermedad. El uso de sujetos sanos proporciona el ideal de especificidad que nunca se observa en la práctica
diaria, se puede hacer un estimado de especificidad ideal, pero es necesario la “real”, cuando la prueba va a ser
aplicada a pacientes con enfermedades similares.
En tanto, que la sensibilidad y la especificidad son valores relativamente fijos para una prueba determinada, el
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valor predictivo del método está influenciada por la prevalencia de la enfermedad en la población estudiada.
49

El modelo del valor predictivo desarrollada por Galen y Gambino en 1975 es muy utilizada para evaluar el
funcionamiento adecuado y la efectividad de las pruebas, evaluar los procedimientos de diagnóstico, facilita la
selección de la mejor prueba y la mejor metodología, puede ser expandida a múltiples pruebas y es una
herramienta muy útil para optimizar la selección de pruebas en el laboratorio, las estrategias y la interpretación.
La sensibilidad y la especificidad definen la exactitud de una prueba de laboratorio.
¿Qué es preferible?, ¿una prueba con alta sensibilidad?, ¿mayor especificidad?, ¿mayor valor predictivo positivo
por los resultados? o ¿mayor eficiencia?
No es posible tener todo al mismo tiempo, a mayor sensibilidad baja especificidad.
Se desea la más alta sensibilidad (preferible del 100 %) en las siguientes situaciones:
• La enfermedad es seria y no debería ser equivocado el diagnóstico

• La enfermedad es tratable
• Los resultados falsos positivos no causan un trauma serio psicológico o económico al paciente
Por ej. Enfermedades venéreas, enfermedades infecciosas aquí se requiere la mayor sensibilidad posible, si
se hace un diagnóstico falso-positivo, se puede repetir la prueba.
Se desea la más alta especificidad (preferible del 100 %) cuando:
• La enfermedad es seria, pero no tratable o curable

• El conocer que la enfermedad está ausente tiene valor psicológico o de salud pública
• Los resultados falsos-positivos pueden ocasionar un trauma psicológico o económico al paciente.
Por ej. Esclerosis múltiple, la enfermedad es seria, no tratable ni curable.

Canceres ocultos, no se desean resultados falsos-positivos, se debe optar por la mayor especificidad y
sacrificar la sensibilidad.
Un alto valor predictivo (preferible del 100%) es un resultado esencial en las siguientes ocasiones:
• El tratamiento de un falso-positivo puede tener serias consecuencias, por ej. un cáncer oculto de pulmón
y los únicos tratamientos posibles son lobectomía o radiación. Si estos tratamientos se aplican a un
paciente sin cáncer, las consecuencias pueden ser desastrosas.
Se desea la más alta eficiencia (preferible del 100%) en las siguientes situaciones:
• La enfermedad es seria pero tratable

• Los resultados falsos positivos y falsos negativos son igualmente serios y dañinos, por ej. Lupus eritema
toso sistémico (LES), es una enfermedad fatal, pero tratable.
2. COMPETENCIA (S):
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Presenta conceptos de control de calidad que son peculiares a los resultados de pruebas inmunológicas,
especialmente a las titulaciónes serológicas, a través de la resolución de problemas que se presentan en el
campo de tranbajo del profesional.
3. MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS
Pizarra acrílica y marcadores
Se analizarán y discutirán los procedimientos estadísticos inherentes al control de calidad de las pruebas
serológicas.
5.- TIEMPO DE DURACIÓN DE LA PRÁCTICA.

200 minutos
6. MEDICIÓN, CÁLCULOS Y GRÁFICAS
Con datos propuestos por el docente proceder a realizar las gráficas para su posterior interpretación
7.- CUESTIONARIO
- En que consiste la sensibilidad analítica
- En que consiste la especificada diagnóstica
51

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GUIAS DE PRÁCTICA CIENCIAS DE LA SALUD-BIOQUIMICA Y FARMACIA

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1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO

• Utilizar guantes y bata mientras se realiza la obtención de muestras.

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3.- MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS

4.- TÉCNICA O PROCEDIMIENTO

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Verificación y acción correctiva

5.- TIEMPO DE DURACIÓN DE LA PRÁCTICA

6.- MEDICIÓN, CÁLCULOS Y GRÁFICOS

Diseñar preguntas y definiciones (vocabulario) para incentivar al estudiante la investigación bibliográfica.

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1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO

3. MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS:

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• Los estudiantes prepararán diferentes diluciones de suero humano en salina

5. TIEMPO DE DURACIÓN DE LA PRÁCTICA

6.- MEDICIÓN, CÁLCULOS Y GRÁFICOS:

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1. CONOCIMIENTO TEÓRICO REQUERIDO:

USOS DE LAS TÉCNICAS INMUNOLÓGICAS

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3.- MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS

4.- TÉCNICA O PROCEDIMIENTO

Se describe en forma teórica las técnicas inmunológicas

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6.- MEDICIÓN, CÁLCULOS Y GRÁFICOS

Al no generarse datos no se realiza ninguna medición

Complete el siguiente cuadro:

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1. CONOCIMIENTO TEÓRICO REQUERIDO:

Tabla 1. SENSIBILIDAD RELATIVA DE MÉTODOS PARA LA DETERMINACIÓN DE

AGLUTINACIÓN ACTIVA AGLUTINACIÓN BACTERIANA

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Aunque la reacción de aglutinación es una prueba semicuantitativa, la simplicidad y alta sensibilidad de la

PRUEBA DE AGLUTINACION EN PLACA PARA FIEBRES ENTÉRICAS - REACCIONES FEBRILES

3. MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS:

MATERIAL POR GRUPO DE 5 ESTUDIANTES

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5. TIEMPO DE DURACION DE LA PRÁCTICA.

6. MEDICION, CÁLCULOS Y GRÁFICOS:

Diseñar preguntas para incentivar la investigación bibliográfica en el estudiante, a criterio y experiencia

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1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO:

Su nombre se debe a la capacidad para precipitar los polisacáridos C de los pneumococos

Su determinación es importante debido a que se aumenta rápidamente al comienzo de la enfermedad, 14 a 26

3. MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS:

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6. MEDICIÓN, CÁLCULOS Y GRÁFICOS.

Negativo: suspensión homogénea

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DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DEL TÍTULO DE ANTIESTREPTOLISINA “O”

1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO.

• Determina el título de antiestreptolisina O en suero de pacientes con sospecha de fiebre reumática y

3. MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS:

Código de registro: RE-10-LAB-056 Versión 3.0

Mezclar y mantener a baño Maria a 37ºC 15 minutos

5. TIEMPO DE DURACIÓN DE LA PRÁCTICA.

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