GUIA DE PRACTICAS DE LABORATORIO

CURSO DE HIDROBIOLOGIA

PRÁCTICA Nº 11
PERIFITON Y FITOPLANCTON DE AGUAS CONTINENTALES

INTRODUCCIÓN. -

El término perifiton describe a la comunidad microbiótica que vive sobre sustratos sumergidos
de diferente naturaleza (sustratos duros, vegetación acuática viva y muerta,); e incluye
microalgas, bacterias, hongos y protozoos. Diferentes grupos de algas forman parte del perifiton
(diatomeas, clorofitas, etc.), así como las cianobacterias.

Los términos epiliton, epifiton y epipelon se refieren a los sustratos que colonizan las algas, que
son sustratos pétreos, vegetación acuática y sedimento, respectivamente.

Las diatomeas son el grupo más diverso de las microalgas bentónicas; suelen constituir el 80-
90% de la comunidad del perifiton. Las diatomeas en particular se pueden utilizar para
determinar la calidad de agua utilizando los siguientes índices:

Indice Diatómico General (I.D.G.)

Índice IPS (Indice de Polusensibilidad Específica)
Índice IBD (Indice Biológico de Diatomeas)

Por otro lado, el fitoplancton representa la comunidad de microorganismos, en su mayoría

fotosintéticos, (microalgas, cianobacterias, flagelados heterótrofos y otros grupos sin clorofila)
que vive suspendida en la masa de agua.

OBJETIVO.-
• Conocer la estructura de la comunidad de perifiton y fitoplancton en muestras de agua
lótica y lentica.
• Conocer la calidad de agua de un río mediante el índice biotico de diatomeas.

MATERIALES.-
• Muestras de agua
• Alcohol
• GPS
• Red de fitoplancton
• Multisonda con sensor de oxígeno, temperatura, conductividad y pH
• Frascos de plástico
• Solución de H2O2 al 50% (100 volúmenes).
• Solución de HCl
• Formol 4%
• Solución de Lugol
• Agua destilada
• Etanol al 75 %
• Equipos de microscopia óptica.
• Microscopio invertido
• Cámara o cubeta de sedimentación
• Cocina eléctrica con plato difusor de calor.
• Centrifuga 53
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• Material de vidrio (bazo precipitado, tubos de ensayo, láminas portaobjetos, laminillas

cubreobjetos, etc.)
• Pipetas Pasteur limpias.
• Tubo de centrífuga
• Gradillas
• Elementos de seguridad: Gafas, bata, tapabocas, guantes, mascarilla.
• Para láminas permanente se requiere un medio de montaje con un índice de
refracción superior a 1,6.

Preparación de Solución de Lugol : Disolver 100 g de KI en 1 litro de agua destilada, añadir 50

g de cristales de yodo y agitar hasta que se disuelvan; añadir 100 g de ácido acético glacial y
decantar.

TRABAJO DE LABORATORIO

Perifiton
1.- Preparar láminas permanentes de las muestras de perifiton por estación y contar mínimo
400 valvas de diatomeas y calcular abundancias relativas.
2. Calcular los índices de diversidad e Índice Diatómico General de Diatomeas por estación.
3. Elaborar un catálogo de las especies más comunes de diatomeas encontradas.

Fitoplancton
1.- Preparar láminas temporales de las muestras de fitoplancton por estación y contar
mínimo 500 organismos método lámina -laminilla, hacer los cálculos correspondientes para
las abundancias.
2. Calcular los índices de diversidad
3. Elaborar un catálogo de las especies más comunes de fitoplancton encontradas.

1. PERIFITON

TRATAMIENTO DE ALGAS NO BLANDAS (DIATOMEAS)

Existen diferentes métodos para limpiar diatomeas, sin embargo, el más recomendado es el
método del peróxido caliente el cual se detalla:

Método con peróxido de hidrógeno caliente

Homogenizar la muestra agitando y transferir entre 5 ml y 10 ml de suspensión a un vaso de

precipitados o a un tubo de ebullición.
Añadir aproximadamente 20 ml de peróxido de hidrógeno y calentar en una placa calefactora
aproximadamente 90 ± 5 °C hasta que toda la materia orgánica se halla oxidado (normalmente
unas 3 horas).
Quitar el vaso de precipitados o el tubo de ebullición del calor.
Si se requiere añadir unas cuantas gotas de ácido clorhídrico para eliminar el carbonato cálcico
cuando la muestre este fría.
Transferir el contenido del tubo de ebullición a un tubo de centrífuga. Llenar hasta arriba con
agua destilada y centrifugar 3 veces a 1000 rpm por 2 minutos, resuspender con agua destilada
entre cada centrifugada.
.
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Montaje:
Agitar la suspensión de diatomeas y con la ayuda de una pipeta Pauster, adicionar 1 o 2 gotas
de la suspensión sobre un cubreobjetos, agregar etanol al 75 % sobre la lámina cubreobjetos.
Llevar el cubreobjetos a una cocina a 30 °C aprox. dejar que la muestra se evapore.
En una lámina portaobjetos adicionar 1 gota de solución de montaje y llevar a calor.
Para láminas permanentes se puede utilizar una resina de alto índice de refracción como
Naphrax, Zrax o Hyrax entre otros.

2 . FITOPLANCTON

Se dispensa 0.2 ml de muestras fijadas con solucion de lugol y se coloca en la lámina para
luego ser observadas en el microscopio.

3. INDICE DIATÓMICO GENERAL (I.D.G.)

El I.D.G. se calcula exclusivamente con los taxones pertenecientes a las diatomeas usando los
valores de referencia de Sensibilidad (S) y Variabilidad o valor indicativo por género (V) del
Anexo 1; para luego obtener la calidad de agua según la Tabla 1.

∑𝑗𝑗=1 𝐴𝑗𝑆𝑗𝑉𝑗
𝐼𝐷𝐺 = … … … … … … … … … … … … … … … … … … . . (1)
∑𝑛𝑗=1 𝐴𝑗𝑉𝑗
Donde:
Aj=Abundancia
Sj= Sensibilidad a la polución de cada género
Vj= Valor indicativo o variabilidad del género

Tabla 1. Clasificación de la calidad de las aguas adoptadas según el índice IDG. (tomado de
Iturra-Medina, 2011).
Valor Significado
IDG > 4.5 Calidad biológica optima
4 < IDG < 4.5 Calidad normal. Contaminación débil
3.5 < IDG < 4 Contaminación moderada
3 < IDG < 3.5 Contaminación media
2 < IDG < 3. Desaparición de especies sensibles. Contaminación fuerte
1 < IDG < 2 Contaminación muy fuerte
IDG = 0 La población es considerada como inexistente. Contaminación tóxica

MÉTODO DE EVALUACIÓN.-

Cada estudiante deberá entregar en un informe los datos del trabajo de laboratorio incluyendo
tablas, graficos y catálogo de especies de perifiton y fitoplancton. Los resultados se compilarán
por grupo de prácticas.

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GUIAS RECOMENDADAS PARA DETERMINACIÓN DE ORGANISMOS

• Manual de las Diatomeas Peruanas (1999). Alejandro M. Fernandez.

• Catalogo y Claves de identificación de organismos fitobentonicos utilizados como
elementos de calidad en las redes de control de estado ecológico. (2012). Ministerio de
Agricultura, Alimentación y medioambiente. España.
• The Freshwater Algal Flora of the British Isles. An identification Guide to Freshwater and
Terrestial Algae (Whitton, John, & Brook, 2011).
• La página web ‘’ AlgaeBase’’.
• La página web ‘’ DIATOMS of the United States’’.
• https://www.juntadeandalucia.es/medioambiente/portal_web/rediam/contenidos_ordenaci
on/PDF/Atlas_Org_Planctonicos_1.

CONCLUSIONES.-

……………………………………………………………………………………………………………
……………………………………………………………………………………………………………
……………………………………………………………………………………………………………

BIBLIOGRAFÍA.-

Iturra-Medina, Claudia A. 2011. Establecer las bases para un sistema de monitoreo de la

Calidad de aguadas del parque nacional llanos de challe, utilizando las comunidades acuáticas
como bioindicadores. Memoria de Título. Universidad de Chile.
Coste, M. y H. Ayphassorho. 1991. Étude de la qualité des eaux du Bassin ArtoisPicardie a
l‘aide des communautés de diatomées benthiques (Application des indices diatomiques).
Rapport Cemagref. Bordeaux-Agence de l‘Eau Artois. Picardie, Douai. France. 227p.
Conceptos y técnicas en ecología fluvial 2009. Cap. 12. La biota de los ríos: Los
Licursi M. y N.Gomez . 2003. Evaluación de la calidad del agua en sistemas lóticos de la llanura
pampeana argentina a partir del empleo de diatomeas. Biología Acuática (21):2003.
The Diatoms. Biology & Morphology of the genera (Round, Crawford, & Mann, 1990).

The Freshwater Algal Flora of the British Isles. An identification Guide to Freshwater and
Terrestial Algae (Whitton, John, & Brook, 2011).
Universidad Nacional Mayor de San Marcos. UNMSM. (2014). Métodos de colecta,
identificación y análisis de comunidades biológicas: plancton, perifiton, bentos
(macroinvertebrados) y necton (peces) en aguas continentales del Perú. (Museo de
Historia Natural, 2014)

CHE. Confederación Hidrográfica del Ebro Según la Directiva Marco del Agua. (2007).
Metodología para el establecimiento del estado ecológico del agua según la Directiva Marco
del Agua (Protocolo de muestreo y análisis para Fitoplancton, Fitobentos (Microalgas
Bentónicas), Macrófitas, Invertebrados Bentónicos e Ictiofauna.

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ANEXOS
Anexo 1: Valores de Sensibilidad a la contaminación(S) y Valor indicador de contaminación (V) del IPS
(Tomado de Licursi M. y N.Gomez , 2003)

S V Especie
CATO 2 1 Cyclotella atomus Hustedt
CMEN 2 1 Cyclotella meneghiniana Kützing
CSTR 2 3 Cyclotella striata (Kützing) Grunow
CAFF 4 2 Cymbella affinis Kützing
CCIS 4 3 Cymbella cistula (Ehrenberg) Kirchner
CLAN 4 2 Cymbella lanceolata (Ehrenberg) Van Heurck
CMIN 4, 2 Cymbella minuta Hilse ex Rabenhorst
CSLE 58 2 Cymbella silesiaca Bleisch in Rabenhorst
CTMD 4 2 Cymbella tumidula Grunow in A. Schmidt & al.
DELE 4 2 Denticula elegans Kützing
DPSO 5 2 Diploneis pseudovalis Hustedt
DPUE 5 3 Diploneis puella (Schumann) Cleve
EADN 4 3 Epithemia adnata (Kützing) Brébisson
ESOR 4 2 Epithemia sorex Kützing
EDIO 5 3 Eunotia diodon Ehrenberg
EFAB 5 3 Eunotia faba (Ehrenberg) Grunow
EMON 5 2 Eunotia monodon Ehrenberg
EPEC 5 2 Eunotia pectinalis (Dyllwyn) Rabenhorst var. pectinalis
EPRA 5 1 Eunotia praerupta Ehrenberg
ERAB 5 3 Eunotia rabenhorstii Cleve & Grunow in Van Heurck
ESUD 5 3 Eunotia sudetica O. Müller
ETRD 5 3 Eunotia triodon Ehrenberg
FCAP 4 1 Fragilaria capucina Desmazières
GPAR 2 1 Gomphonema parvulum (Kützing) Kützing
GPSA 3 1 Gomphonema pseudoaugur Lange-Bertalot
GSCL 5 2 Gomphonema subclavata Grunow
GTRU 4 1 Gomphonema truncatum Ehrenberg
GYAC 4 3 Gyrosigma acuminatum (Kützing) Rabenhorst
GYAT 4 3 Gyrosigma attenuatum (Kützing) Cleve
GSCA 2 3 Gyrosigma scralproides (Rabenhorst) Cleve
GSPE 4 3 Gyrosigma spencerii (Quekett) Griffith et Henfrey
HVIR 1 3 Hantzschia virgata (Roper) Grunow
HAMP 1 3 Hantzschia amphioxys (Ehrenberg) Grunow
MVAR 4, 1 Melosira varians Agardh
5
NAMP 2 2 Nitzschia amphibia Grunow
NAMH 0 0 Nitzschia amphibioides Hustedt
NIAN 3 3 Nitzschia angustata (W. Smith) Grunow
NBRE 2, 3 Nitzschia brevissima Grunow
8
NICA 2 2 Nitzschia calida Grunow
NCPL 1, 3 Nitzschia capitellata Hustedt
3
PACR 5 3 Pinnularia acrospheria Rabenhorst
PAPP 5 3 Pinnularia appendiculata (Agardh) Cleve
PBRT 5 3 Pinnularia borealis Ehrenberg var. rectangularis
PLEV 2 3 Carlson
Pleurosira laevis (Ehrenberg) Compere
RSIN 4 1 Reimeria sinuata (Gregory) Kociolek & Stoermer
RCUR 4, 1 Rhoicosphenia curvata (Kütz.) Grunow ex. Rabenhorst
8
RGBL 5 3 Rhopalodia gibberula (Ehrenberg) O. Müller
RBRE 0 0 Rhopalodia brebissonii Krammer
RGIB 5 3 Rhopalodia gibba (Ehrenberg) O. Müller
RMUS 3 3 Rhopalodia musculus (Kützing) O. Müller
STAC 5 2 Stauroneis acuta W. Smith
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Anexo 2: Abundancias hipotéticas de diatomeas de 4 estaciones de muestreo con 5 repeticiones en cada una. Las abundancias se brindan en celulas por mililitro (E:
Estación. R: Repetición).

Estación 1 Estación 2 Estación 3 Estación 4

R1 R2 R3 R4 R5 R1 R2 R3 R4 R5 R1 R2 R3 R4 R5 R1 R2 R3 R4 R5

Cyclotella atomus 3 2 2 3 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Cymbella lanceolata 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Denticula 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Diatoma 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Diploneis 72 97.5 105 95 55 8 7 4 10 7 13 14 18 20 20 0 0 0 0 0
Ephitemia 3 0 2 2 2 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Melosira varians 14 17 19 12 12 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Nitzschia angustata 39 40 35 30 32 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Fragilaria capucina 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Nitzschia dissipata 0 0 0 0 0 5 2 1 0 2 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Nitzschia amphibia 0 0 0 0 0 1 1 2 5 5 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Pinnularia borealis 289 201 171 224 20 4 3 0 2 2 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Rhoiscophenia 0 0 0 0 0 2 5 4 0 2 2 7 2 5 3 0 0 0 0 0
Reimeria sinuata 0 0 0 0 0 4 2 2 5 2 1 3 7 10 3 16 14 4 8 13
Stauroneis 0 0 0 0 0 1 1 4 4 1 4 4 6 4 10 0 4 0 3 4
Pleurosira laevis 0 0 0 0 0 1 0 2 0 4 3 5 2 7 7 4 5 3 0 0
Surirella 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 2 1 1 2 5 1 2 4 5 4
Rhopalodia gibba 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 7 1 6 1 1 3 1 1 4 1
Tabellaria 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 9 6 0 1 0 2 0 5 5
Tetracyclus 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 7 7 2 8 3 25 37 14 22 21
Thalassosira 0 0 0 0 0 6 5 7 9 10 7 7 0 10 5 0 0 0 0 0
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Anexo 3: Fotomicrografías de las especies de diatomeasA. Cocconeis placentula. B.

Epithemia sorex. C. Nitzschia inconspicua. D. N. palea. E. Navicula lanceolata. F. Melosira
varians. G. Ulnaria ulna. H. Rhoicosphenia abbreviata. I. Diatoma moniliformis. J.
Pleurosira laevis. K. Hannaea arcus.

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