CROMATOGRAFIA

CROMATOGRAFIA

La cromatografía describe un
procedimiento químico en el
que se separa una mezcla en
su sus componentes
individuales mediante una fase
móvil y una fase estacionaria.

Los procedimientos más

importantes son la
cromatografía en papel,
cromatografía en capa fina, la
cromatografía en columna,
cromatografía de alta
resolución, cromatografía de
gases
Cromatografia HPLC y de gases
 CROMATOGRAMA

• Cromatograma es el resultado gráfico de la

cromatografía.
• Es la representación de la separación
de compuestos por tiempo de
retención.
• Se puede obtener concentración a
través de su interpretación
La cromatografía se puede
emplear como método de
separación y análisis
cualitativo y cuantitativo de
compuestos químicos.
La cromatografía en papel es
del tipo cualitativo

Fase móvil: eluyente

(solvente o mezcla de
solventes)
Fase estacionaria : Polaridad
del papel fijo.
• La separación de compuestos se da por la
interacción de los compuestos entre la fase
móvil y la fase estacionaria.
 Obtener Rf –coeficiente de migración

• b.distancia
de la siembra
hasta el
recorrido del
compuesto
• a. distancia
de la corrida
Rf= b/a
del solvente
• 2. Procedimiento

• Medir el alto de un vaso de precipitados estrecho y de acuerdo a esa medida cortar tiras de papel
filtro Whatman de 1 a 2 cm de ancho
• Marcar una línea a 1.5 cm de uno de los bordes (línea para el sembrado) y doblar la tira en
sentido longitudinal para darle rigidez
• Sembrar la muestra (tinta) utilizando un tubo capilar o directamente un bolígrafo o marcador
• Colocar en el tubo de ensayo una cantidad suficiente de solvente (1-2 ml) de manera que no lave
la mancha
• Sostener la tira cromatográfica de una tapa e introducirla cuidadosamente en el tubo de ensayo
• Proceder al desarrollo cromatográfico hasta que el solvente ascienda hasta 1 o 2 cm por debajo
del borde superior
• Retirar la tira cromatográfica y secar al aire, marcando previamente el frente del solvente
• Visualizar las manchas, marcando el centro de las mismas, determinar el número y color de los
componentes.
• Realizar lo mismo pero con otro sistema de solventes
• Repetir el procedimiento con otra muestra (otra tinta) utilizando los mismos sistemas de solvente.
•
• Realizar al menos tres cromatogramas de cada una de las tintas
• Calcular los respectivos Rf para cada uno de los componentes
• De acuerdo a los cromatogramas obtenidos, identificar el mejor solvente para la separación de los
componentes de cada una de las tintas
•
• Los solventes que se pueden utilizaran son:
• n-butanol, etanol, acetona, eter etílico, agua, HAc y metanol
• Además, se pueden utilizar mezclas binarias o ternarias de los mismos teniendo cuidado de que
se produzcan soluciones homogeneas.
 Solventes utiizados en cromatografía en papel
SOLVENTE

polares AGUA

POLARIDAD MEDIA CH2Cl2

ETER DIETILICO
ACETONA
METANOL
ETANOL
BUTANOL

NO POLARES HEXANO
ETER DE PETROLEO
TOLUENO
ALQUIL BENCENOS
 Visualización de las manchas
• Si los compuestos son
coloreados se pueden observar
las manchas a simple vista. Si
no es así, hay varios métodos
para visualizar las manchas
correspondientes a cada
componente de la mezcla.

1. Utilizar luz ultravioleta

(UV254) para observar el
cromatograma.

2. Utilizar reveladores, por

ejemplo, vapores de yodo que
es un reactivo inespecífico.

3. Emplear reactivos específicos

para desarrollar coloración en
las manchas. Esto se puede
haceraplicando reactivo
especifico con spray.