UNIVERSIDAC DE SUCRE

FACULTAD DE INGENIERIA
DEPARTAMENTO DD INENIERIA AGROINDUSTRIAL
PROGRAMA DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL

LABORATORIO DE QUÍMICA ORGÁNICA

GUIA DE LABORATORIO PRACTICA N° 2.
CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA

OBJETIVO GENERAL.
 Separar los pigmentos m á s abundantes p r e s e n t e s e n h o j a s d e
e s p i n a c a s utilizando la cromatografía en capa fina.

TEORIA.

La cromatografía en capa fina es otro método para separar, y en algunos casos tratar de
identificar, los dos o más compuestos orgánicos existentes en una mezcla. Esta
técnica se parece en muchos aspectos a la cromatografía en columna

En principio, la realización de una cromatografía en capa fina es muy sencilla. Una

placa de vidrio se recubre con una capa fina de un adsorbente adecuado; en la parte
inferior se deposita una mancha (una gota) con la solución conteniendo el compuesto o
la muestra orgánica que se va a ensayar ; se deja que un disolvente adecuado se
ascienda por la capa de absorbente debido a la capilaridad y el compuesto (o
compuestos) se localiza en la placa bien por su color, en el caso de sustancias
coloreadas, o bien con la ayuda de un indicador (o mediante el empleo de luz
ultravioleta), en el caso de compuestos incoloros.

Los compuestos diferentes ascienden con unas velocidades distintas por la capa de
absorbente en relación al disolvente, y esto ocasiona la separación de los
componentes de una mezcla. En ciertas ocasiones se puede intentar la identificación
de los componentes midiendo la velocidad de migración de las manchas con respecto
al frente del disolvente y comparándola con los compuestos conocidos.

Fundamentalmente sirven las mismas consideraciones, a la hora de determinar la

velocidad a la que un compuesto determinado se mueve a lo largo de la superficie de un
absorbente, tanto para la cromatografía en columna como para la cromatografía en capa
fina. El compuesto móvil es atraído por los puntos más polares del absorbente debido
a las fuerzas electroestáticas siendo reversible esta unión. El disolvente también
interacciona con el absorbente mientras el compuesto lo hace también con el disolvente.
Esta triple interacción entre el soluto, el disolvente y el absorbente fija las velocidades
relativas a las que el frente del disolvente y el soluto asciende por la capa de vidrio.

Al igual que en la cromatografía en columna un soluto más polar está más atraído por
el absorbente que un soluto menos polar. Así, pues los compuestos como los alcoholes
los ácidos carboxílicos, y las aminas son atraídos con más fuerzas que el absorbente
que los compuestos del tipo hidrocarburos o sus derivados halogenados. En

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consecuencia, los primeros compuestos citados ascienden más despacio que los citados
últimamente.

La actividad del absorbente también influye en la velocidad de migración del soluto. Los
absorbentes más activos enlazan más intensamente las moléculas del soluto, siendo la
velocidad de migración de estas por superficie del absorbente relativamente lenta.
Los dos absorbentes más utilizados en cromatografía en capa fina son la alúmina
activada y el gel de sílice. Su actividad está muy influida por su contenido en agua igual
que ocurre en cromatografía en columna. Las muestras más activas son las que
contienen menos agua.

La polaridad del disolvente también influye la velocidad en la que asciende un soluto

por la capa de absorbente. Para un soluto y absorbente dados el cambio de un disolvente
menos polar a otro más polar produce una atracción mayor del disolvente por el soluto y,
por tanto, Éste se desplazar· sobre el mayor absorbente con mayor velocidad.

Es posible calcular el valor del Rf para la cromatografía en capa fina igual que en la
cromatografía en papel. El valor Rf se define como el cociente entre las distancias
recorridas por el compuesto utilizado como soluto y la recorrida por el disolvente en el
mismo tiempo. Los valores Rf para un compuesto dado varían mucho, evidentemente,
al cambiar el disolvente o el absorbente.

MATERIALES Y REACTIVOS

Materiales.

Nombre Cantidad

Mortero y mango 1

Pipetas de 5 mL 2

Tubos capilares 1

Frasco de compotas 3

Hoja de espinaca 1
Llevarla

Reactivos.
 Una Placa cromatográfica de sílica gel de 20 x 20 en aluminio.
 10 mL Etanol.
 1 mL de ácido acético.
 10 mL cloroformo.

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 10 mL diclorometano.
 10 mL acetato de etilo.
 10 mL acetona.
 10 mL hexano.

PROCEDIMIENTO
1. Obtención de los pigmentos.
Triture una hoja de espinaca con etanol, hasta cuando salga un líquido (solución de
pigmentos).

2. Preparación del eluente. Prepare 4 mL de la mezcla de solventes (etanol,

cloroformo, acetato de etilo, acetona, hexano, diclorometano etc.) o use uno solo.
Puede usar las siguientes proporciones:
a) Etanol : Diclorometano = 1:1
b) Etanol : Cloroformo = 1:1
c) Etanol : Acetato de etilo = 1:1
d) Etano : Acetona = 1:1
e) Etanol : Hexano = 1:1

3. Aplicación de la muestra y cromatografía.

Introduzca la punta de un capilar en la solución de los pigmentos. Cuando la solución
haya ascendido en el capilar, retírelo y toque momentáneamente y con mucha
suavidad un punto de la placa, en el centro a 0,5 cm. del borde inferior. Se debe
lograr una manchita circular de unos 3 - 5 mm de diámetro. Si se estima que no
quedo suficiente muestra en la mancha, se puede hacer una segunda aplicación en el
mismo punto. Esperar a que el solvente se evapore de la placa, para cromatografía.

4. Luego con una pinza se coge la placa por su parte superior limpia y se introduce con
mucho cuidado, verticalmente mancha hacia abajo en el cilindro volviendo luego a
separarlo en una cámara (frasco de compotas).
El solvente al entrar en contacto con la parte inferior de la placa empieza a ascender y
cuando llega a la mancha empieza el proceso de cromatografía. Deje que el solvente

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llegue hasta el nivel superior del adsorbente en la placa, retire la placa con cuidado
con las pinzas y deje que el solvente se evapore.
¿Cuántas manchas ve en la placa? ¿De qué color son? ¿Cuál es su posición?
Discuta con el profesor el resultado y repita la experiencia tantas veces como sea
necesario para encontrar el mejor sistema de separación de los pigmentos.

PREGUNTAS
1. ¿Cuáles son los disolventes y reveladores más utilizados en cromatografía en papel y en
capa fina?
2. ¿Cuáles son los tipos de cromatografía más utilizados? describirlos.
3. Describa y explique las fases que componen la técnica de cromatografía en placa fina
4. Qué efectos producen la polaridad de los solventes en el desarrollo de la cromatografía
en capa fina
5. Describa algunas aplicaciones de la cromatografía en capa fina
6. ¿Qué es la cromatografía en capa fina y para qué sirve?
7. ¿Cuál es la fase móvil de la cromatografía en capa fina?
8. ¿Qué es una fase estacionaria en cromatografía?
9. ¿Qué se necesita para hacer una cromatografía?
10. ¿Qué significan los valores de RF en cromatografía?
11. ¿Cómo se utiliza la cromatografía?
12. ¿Qué materiales se utilizan para las fases estacionarias de la cromatografía?

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