Cromatografía de Capa Fina 

 
Identificación de los componentes de una mezcla 
 
[Mauricio Esteban Tapia]​1​, [Nicolas David Torres Rico]​2 
Grupo 6 
25 de Septiembre de 2018 

Resumen 
La  cromatografía  es  un  método  de  separación  que  se  basa  en  diferencia  de  velocidades  con  que los componentes de 
una  mezcla  viajan  por  una fase estacionaria bajo la influencia de una fase móvil, en un proceso de adsorción-desorción. 
Existen varios tipos de cromatografía, donde la cromatografía en capa fina es una de las más reconocidas y utilizadas, ya 
que  tiene  una  alta  eficiencia  y  permite  la  obtención,  separación  e  identificación  de  compuestos;  la  cromatografía  de 
capa delgada se realiza por absorción donde la fase sólida adsorbe los componentes de la mezcla en su superficie.  

 
Palabras clave:​ [Cromatografía], [Capa fina], [separación], [Fase estacionaria], [Fase móvil]. 
 
 
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Introducción   sobre  un  soporte  de  vidrio,  mientras  que  la fase móvil 
es  líquida;  si  la  capa  es muy gruesa se habla, entonces, 
La  cromatografía  fue  inventada  en  el  siglo  XX.  y  de cromatografía preparativa en capa. 
significa  separación  por  color,  aunque  en  la  actualidad 
se  usa  también  para  la  separación  de  mezclas  no  La  cromatografía  en  capa  fina,  o  en  capa  delgada,  es 
coloreadas.  La  International  -union  of  Pure  and  ampliamente  utilizada  en  el  análisis  orgánico,  se  usa 
Applied  Chemistry  (IUPAC)  define  la  cromatografía  para  la  obtención,  separación,  purificación  e 
como  un  método  de  separación,  donde  los  identificación  de  compuestos.  Las  ventajas  de  usar 
componentes  se  distribuyen  entre  dos  fases:  una  fase  este  método  son que no requiere mucho equipo, tarda 
estacionaria, y una fase móvil o eluyente.  poco  respecto  a  otro  tipo  de  cromatografías,  es  muy 
eficiente,  se  logra  la  separación  aún  con  cantidades 
Este  método  basa  su  funcionamiento  en  la  diferencia  muy  pequeñas  y  el  uso  de  adsorbentes  inorgánicos 
de  velocidades  en  que  los  componentes  de  una  facilitan el reconocimiento de compuestos incoloros. 
mezcla  viajan  por  la  fase estacionaria bajo la influencia 
de  la  fase  móvil,  en  un  proceso  de  El  revelado en la cromatografía de capa delgada puede 
adsorción-desorción.  Esta  diferencia de velocidades se  ser  descendente,  ascendente,  bidimensional,  múltiple 
presenta  por  las  distintas fuerzas intermoleculares que  en  la  misma  dirección,  radial  o  en  escala  preparativa  ; 
tienen  los  componentes  de  la  mezcla  con  la  fase  en  el  revelado  ascendente  el  eluyente  asciende  por la 
estacionaria;  así,  entre  más  fuertes  sean  estas  fuerzas,  placa debido a la capilaridad. 
más se retrasa el movimiento del compuesto.  En  la  cromatografía  de  capa  fina  es  importante el tipo 
Se  clasifica  según  el  principio  de  separación,  éste  de  adsorbente  por  lo  que  se  les  debe  conocer  o 
puede  ser  por:  adsorción  (de  la  que  se  habla  a  determinar  la  solubilidad,  acidez  y  si  reacciona  con  el 
continuación),  partición,  intercambio  iónico,  exclusión  sorbente  o  con  el  eluyente.  Algunos  ejemplos  de 
de  tamaño  o  por  afinidad.  En  la  separación  por  adsorbentes  son:  alúmina,  tierra  diatomacea,  celulosa 
adsorción la fase sólida adsorbe los componentes de la  o  sílica  gel;  la  sílica  gel  dependiendo  de  cantidad  de 
mezcla en su superficie, se basa en el equilibrio entre la  agua  que  contenga  puede  actuar  como  adsorbente  o 
diferente  adsorción  molecular  entre  el  sorbente  como  soporte  para  la  partición,  y  es  un  buen 
pulverizado  y  las  sustancias  a  separar  y  la  acción  de  adsorbente para sustancias polares. 
desplazamiento ejercida por el eluyente.  Ahora,  la  fase  móvil  se  clasifica en:solvente, revelador, 
La  cromatografía  también  se  puede  clasificar  según  el  eluyente  o  desplazante  según  su  función.  Esta  fase 
tipo  de fase estacionaria, así: de adsorción en columna,  debe  ser  una  sustancia  en  la  que  los  componentes de 
líquido  de  alta  eficiencia,  de  partición  de  gas-licuado,  la  mezcla  no  sean  solubles,  se  debe  comparar  su 
de  partición  en  columna,  de  partición  en  papel,  con  polaridad con la de los componentes. 
fluidos  supercríticos,  electroforesis  capilar  o  Para la caracterización de las sustancias presentes en la 
cromatografía  en  capa  fina.  En  este  último  tipo,  mezcla se usa la siguiente relación: 
cromatografía  en  capa  fina,  la  fase  estacionaria  está 
formada  por  capas  de  30  nm  de  espesor  puestas  Rf = XX recorrida
recorrida por la mancha
por el eluyente
​Ec. 1 
1
  ​Estudiante  de Ingeniería Química, Universidad Nacional de ​Colombia,  Usualmente  se  fija  la  distancia  recorrida  por  el 
Facultad  de  Ingeniería,  Dpto.  Ingeniería  Química  y  Ambiental. 
eluyente  igual  a  diez  centímetros,  por  lo  que  la 
Colombia. E-mail: metapiaa@unal.edu.co. 
2
  ​Estudiante de Ingeniería Química, Universidad Nacional de ​Colombia.  expresión queda expresada así: 
Facultad  de  Ingeniería,  Dpto.  Ingeniería  Química  y  Ambiental. 
Colombia. E-mail: nidtorresri@unal.edu.co. 

1
 X recorrida por la mancha
hRf = ​Ec. 2  Resultados 
10 cm
Si  se  quiere  proceder  con  mayor  exactitud,  se  hace  A  continuación  se  muestran  los  resultados  obtenidos 
migrar  junto  con  la  sustancia  una  sustancia  de  durante  la  práctica  según  el  eluyente  utilizado  de  una 
referencia, tal que:  serie eluotrópica. 

X recorrida por la mancha Luego  de  haber  realizado  la  cromatografía  con  tres 
Rst = X recorrida por la sustancia de ref erencia
​Ec. 3  eluyentes,  se  propuso  un  eluyente  o  mezclas  de 
eluyentes  para  poder  separar  mejor  la  mezcla  de 
Esta valor está reportado en la literatura como:  colorantes. 
hRf sustancia problema
hst = hR sustancia de ref erencia
​Ec. 4   
● Eluyente: Éter de petróleo (poco polar)  
 

Materiales y Método 
Método 
● Cromatografía de capa fina 

 
Diagrama de Flujo 1. ​Diagrama de Flujo de la cromatografía 
de capa fina 

● Separación de una mezcla de colorantes   

 
● Eluyente: Acetona (medianamente polar) 

 
Diagrama de Flujo 2. ​Diagrama de Flujo separación de una 
mezcla de colorantes. 

En  el  anterior  diagrama  (Diagrama  de  Flujo  2)  la 

preparación  de  las  placas  se  refiere  al  proceso  de 
calentarlas  un  poco  con  el  fin  de  retirar  el  agua  que 
contienen,  para  que  actúen  correctamente  como  la 
fase estática. 
   
Materiales y Reactivos   
Se  emplearon  3  cámaras  cromatográficas,  8  ● Eluyente: Metanol (altamente polar) 
placas  con  sílica  gel  como  fase  estacionaria. 
Como  eluyentes  se  utilizó  éter  de  petróleo, 
diclorometano  y  metanol;  para  la  propuesta  de 
mezcla  de  eluyentes  se  usaron  2  de  los  eluyentes 
anteriores. 

2
  
 
Inicialmente  se  propuso  el  uso  de  diclorometano  para 
realizar  la  cromatografía  obteniendo  los  siguiente   
resultados: 
Análisis y Discusión  
● Eluyente:Diclorometano 
Para  la  detección  de  los  colorantes  que  contenía 
nuestra  muestra  problema  se  procedió  al  montaje  de 
una  cromatografía  de  capa fina siguiendo lo propuesto 
para  realizar  una serie eluotrópica, es decir, realizar una 
experimentación  con  eluyentes  de  baja,  media  y  alta 
polaridad;  para  este  caso  se  utilizó  Éter  de  petróleo 
(menor  polaridad 0,1), Acetona (media polaridad 5,4) y 
metanol (alta polaridad 6,6) 
Como  podemos  observar  en  los  resultados obtenidos, 
cuando  se  utilizó  como  eluyente  el  éter  de  petróleo, 
éste  no  logró  arrastrar ninguna de las sustancias lo que 
nos  quiere  decir  que  su  polaridad  y  afinidad tanto con 
la  muestra  problema  como  con  las  sustancias  patrón 
para  su  identificación  fue  muy  baja,  impidiendo  su 
desplazamiento. 
Caso  contrario  es  el  presentado  al  realizar  el  análisis 
con  acetona  y  metanol,  donde  la  afinidad  fue 
suficiente  para  arrastrar  con  el  paso  del  eluyente  la 
mayoría  de  muestra  hasta el punto final, esto debido a 
que  las  sustancias  según  la  literatura  presentaban 
  solubilidad  en  acetona  y  alcoholes,  exceptuando  el 
patrón  de  Rojo  de  metilo,  lo  que  nos  da  un  indicio  de 
  que  este  se  encuentra  presente  en  nuestra  muestra 
problema a analizar. 
Posteriormente,  luego  de  observar  los  resultados 
usando  el  diclorometano  se  propuso  una  mezcla  de  Debido  a  que  la  acetona  se  utilizó  como  eluyente  de 
eluyentes  donde  se  adicionó  2  moles  de  media  polaridad  y  se  presentó  un  arrastre  casi 
diclorometano  por  cada  mol  de  eter  de  petroleo, esto  completo  de los colorantes a analizar, nos disponemos 
se  propuso  porque  dan  una  mezcla  de  polaridad  a  utilizar  Diclorometano  (  3,4  )  como  nueva  sustancia 
adecuada  para  que  los  componentes  de  la  muestra  de  media  polaridad,  para  este  caso  se  encontró  un 
problema  recorran  distancias  más  óptimas  para  su  muy  buen  desplazamiento  de  cada  sustancia, 
identificación, desde el punto de aplicación.  permitiéndonos  realizar  una  buena  identificación  de 
las  sustancias  que  contenía  la  muestra  problema,  que 
● Eluyente:  Diclorometano-Éter  de  petróleo  para  este  caso  era Sudan II y Rojo de metilo con un  Rf
(2-1) 
de 49,2% y 18,6% respectivamente. 
Para  tener  una  visualización  más  clara  de  lo  sucedido 
en  la  experimentación  se  propone  disminuir  la 
polaridad  de  la  mezcla  y  así  poder  percibir  mejor  la 
diferencia  entre  los  patrones  y  la  muestra,  por  qué  se 
realiza  una  mezcla  de  diclorometano-etanol (2:1) en la 

3
que  se  obtiene  los  valores  de  Rf   18,32%,  43,51%,  dificultará  la  adsorción  en la fase móvil y por ende 
25,40% y  36,51% para los patrones de Rojo de metilo,  su  ascenso por la placa. Adicionalmente, se podría 
Sudan  II,  p-nitrofenol  y  m-nitroanilina  presentar  un  ensanchamiento  en  la  banda  y  por 
respectivamente,  de  los  cuales  coinciden  como  se  consiguiente  baja  resolución  en  la  mancha, 
sospechaba  los  valores  de  Sudan  III  y  rojo  de  metilo  haciendo  necesaria  la  determinación  del  número 
(44,27%, 18,32% ),   de  platos  teóricos  de  la  placa  y  quizás  aumentar 
dicho número. 
Con  fines  visuales  se  representa  gráficamente  lo 
obtenido  en  el laboratorio, obteniendo lo mostrado en  iv. ¿​ Cuales son las diferencias entre cromatografía líquida 
la siguiente figura:  y de gases? 

La  diferencia  radica  en  que  en  la  cromatografía  de 

gases  la  fase  móvil  no  interacciona  con  las  moléculas 
del  analito,  utiliza  disolventes  polares  y  la  única 
función de este método es el transporte del analito por 
la  columna,  mientras  que  en  la  cromatografía  de 
líquidos,  la  fase  móvil  es  necesaria,  participando  en 
esta  un  solvente  líquido  que  puede  ser  una  sustancia 
pura  o  una  mezcla  de  diferentes  solventes 
caracterizando  la  velocidad  de  elución  y  la  resolución 
de cada mancha para su análisis posterior. 

v.  ​Profundización  sobre  fluorescencia  para  sustancias 

incoloras 
Los  indicadores  para  la  luz  ultravioleta  permiten 
  localizar  algunos  de  los  compuestos  separados, 
evitando  de  ésta  manera  las  reacciones  de  coloración 
Este  comportamiento  permite  estimar  que  los valores  que los altera químicamente. 
obtenidos  de  Rf para  la  mezcla  propuesta  presentan 
una  mayor  distancia que los eluyentes puros, haciendo  Por  lo  anterior,  existen  placas  que  traen  impregnadas 
más  fácil  la  identificación  y  clasificación  de  cada  uno  un  indicador  de  fluorescencia  para  facilitar  la 
de las sustancias que componen la mezcla.  identificación  de  las  muestras,  de  otro  modo  se  haría 
necesario  pasar  la  placa  a  una  etapa  de  revelado  que 
  sustancialmente  se  hace  bajo  la  influencia  de  la  luz 
Cuestionario  ultravioleta,  para  ello  se  puede  utilizar  una  fase 
estacionaria  que  contenga  un  indicador  de 
i​.  ​¿Qué  ocurre  si  al  introducir  la  placa  en  la  cámara  fluorescencia  (F254  o  F366)  En  los  indicadores 
cromatográfica,  el  nivel  de  eluyente  alcanza  el  sitio  de  enunciados,  el  subíndice  representa  su  longitud  de 
aplicación de la mancha ?   onda  de  excitación.  También  podría  accederse  a  la 
introducción  de  la  placa  en  vapores  de yodo o el rocío 
Si  el  nivel  del  eluyente  alcanza  la  mancha  de muestra  de una solución de Agua – Ácido Sulfúrico. 
lo  que  va  a  pasar  es que dependiendo de la naturaleza 
de  la  muestra  esta  se  va  a  diluir  en  el  solvente,  El  indicador  que  se  adiciona  a  los  sorbentes  para  que 
generando  un  error  experimental  y  pérdida  del  produzca  una  intensa  fluorescencia  cuando  se  excitan 
material a estudiar.  con  luz  U.V.  de  onda  corta  (234  nm) es generalmente 
el  silicato  de  zinc  activado  con  magnesio,  en  una 
ii.​ ¿Cuál es el efecto de la polaridad en la cromatografía?  proporción  del  2%.  Los  compuestos  presentes  en  la 
placa  que  absorben  esa  longitud de onda contrastarán 
La  polaridad  en  la  cromatografía  es  muy  importante,  en  forma  de  manchas  oscuras  sobre  un  fondo  verde. 
ya  que  de  esta  propiedad  depende  la  velocidad  de  De  manera  análoga,  el  indicador  que  permite  el 
migración de las sustancias, por la relación entre la fase  revelado  con  luz  U.V.  de  longitud  de  onda  larga  (366 
móvil  y  estas.  Debido  a  eso,  es  necesario  el  nm)  es  generalmente  fluoresceína  sódica  que  emite 
establecimiento de series eluotrópicas que se encargan  una  fluorescencia  azul  sobre  la  cual  resaltarán  las 
de  clasificar  los  solventes  teniendo  en  cuenta  su  manchas  oscuras,  correspondientes  a  los  compuestos 
polaridad,  del  menos  al  más  polar.  Los  compuesto  que  absorben  a  esa  longitud  de  onda.  También, 
polares  tienen  afinidad  con  solventes  polares, y los no  pueden  detectarse  sustancias  que  no  absorben  a  esas 
polares  con  solventes  no  polares;  del  mismo  modo  longitudes  de  onda  porque  se  disminuye  la 
aquellas  sustancias  que  son  menos  afines  a  la  fase  fluorescencia  en  el  sitio  correspondiente,  por  ejemplo 
móvil  y  presentan  afinidad  por  la  fase  estacionaria  se  lípidos y esteroides saturados. 
quedarán en el camino. 
vi.  ​Parámetros  de  la  cromatografía  líquida  de  alta 
iii.  ¿Cuales  son  las  consecuencias  de  una  columna  mal  eficiencia. 
empacada?  
La  cromatografía  de  alta  eficiencia  se  fundamenta  en 
La  volatilidad  es  un  parámetro  de un gran número  impulsar  mecánicamente  el  eluyente  con  ayuda  de 
de  sustancias  analizadas  por  medio  de  una  bomba  y  de  éste  modo  el  proceso  sucederá  con 
procedimiento  cromatográficos.  Si  la  sustancias  una  mayor  velocidad  a  la  presentada 
bajo  análisis  tiene  una  alta  volatilidad,  se 

4
convencionalmente  ya  que  en  esencia,  como  el  en  cromatografía  de  capa  delgada:  ácido  acético, 
eluyente  no  asciende  por  capilaridad  o  no  desciende  acetaldehido, 2-octanona, metano y 1-butanol. 
por gravedad éste proceso se agiliza.  
ix.  Que  efecto  se produce si se siembre mucha muestra en 
Éste  tipo  de  cromatografía  se  lleva  a  cabo  la cromatoplaca. 
especialmente bajo las siguientes consideraciones: Alta 
sensibilidad,  adaptación  a  determinaciones  Si  se  siembra  mucha  muestra  en  la  cromatoplaca 
cuantitativas,  separación  de  especies  no  volátiles,  pueden  pasar  lo  siguiente:  la  muestra  se  puede 
separación de especies termolábiles.  desperdigar  de  manera  errónea  provocando  que  se 
mezcle  con  otras si se tiene, o que la muestra se diluya 
De  igual  manera,  este  tipo  de  cromatografía  está  en el solvente y caiga en el recipiente. 
basada  en  el  descubrimiento  de  que  las  separaciones 
cromatográficas  mejoran  mucho  si  la  fase estacionaria  x.  Se  observa  una  mancha  con  un  Rf  de 0,62 después de 
está  formada  por  partículas  esféricas  de  tamaño  desarrollar  la  cromatoplaca para una mezcla de reacción 
uniforme  y  muy  pequeñas.  El  tamaño  reducido  de  la  ¿  prueba  esto  que  usted  tiene  solamente  un  producto 
partícula  asegura  tener  una  gran  área  superficial  para  presente? Explique. 
adsorber  mejor  y  una  forma  esférica  permite  un 
La  definición  del  Rf  se  da  como  la  relación  entre  la 
empacamiento  estrecho  y  uniforme.  En  la  práctica  se 
distancia  recorrida  por  el  centro  de  la  mancha  de  la 
suelen  utilizar  microesferas  recubiertas  de  sílice,  de 10 
sustancia  desde  el  punto  de  aplicación  y  la  distancia 
a  25  de  diámetro, preparadas especialmente. Sólo 15 g 
recorrida  por  el  eluyente  también  desde  el  punto  de 
de  estas  micro  esferas  ocuparían  una  superficie igual a  aplicación,  ya  que  cada  sistema  sorbente-eluyente 
la  de  un  campo  de  fútbol  americano.  Se  requieren 
tiene  un  Rf  característico  esto  nos  indica  que 
bombas  de  alta  presión  para  hacer  pasar  el disolvente 
efectivamente solo habría un producto presente. 
a  través  de  una  columna  de  cromatografía  de  alto 
rendimiento  y  se  usan  detectores  electrónicos  para  xi.  De  qué  manera influyen la saturación de la cámara en 
monitorear  la  aparición  de  material  eluido  de  la  el proceso de separación. 
columna. 
Se  deja  saturar  la  cámara  para  evitar  algún  cambio  en 
vii.    En  qué  orden  (  de  arriba  hacia  abajo)  se  puede  la  presión  debida  a  la  presencia  de  otros  compuestos 
esperar  encontrar  los  siguientes  compuestos:  naftaleno,  en  la  atmósfera  de  la  cámara,  de  esta  manera  se 
ácido  butírico  y  acetato  de  fenilo  en  un  gel  de  placa  de  asegura la reproducibilidad del experimento. 
TLC de sílice desarrollada con diclorometano. 
Conclusiones 
❖ La  cromatografía  de  capa  delgada  exige 
realizar  la  prueba  con  los  patrones  ya  que  el 
valor  de  la  velocidad  de  un  compuesto 
depende  de  las  condiciones  donde se realice 
el experimento. 
❖ El  conocimiento  de  características propias de 
los  compuestos,  como  la  solubilidad  de  los 
mismos  en  los  eluyentes ayuda a determinar 
rápidamente un límite a la serie eluotrópica. 
❖ La  mezcla  de  eluyentes  debe  estar enfocada 
a  repartir  de  manera  más  amplia  y  explicita 
los  colores  de  la  muestra  y  de  los  patrones, 
permitiendo  una  diferenciación  clara  de  cad 
uno. 
❖ La  muestra  problema  analizada  contenía 
Rojo  de  Metilo  y  Sudán  III,  ya  que  según  la 
mezcla  propuesta  los  compuestos 
p-nitrofenol  y  m-nitroanilina  no  se 
encontraban presentes. 

Referencias 
 
[1]  Guerrero,C  y  Polania,  W.  2015.  ​Guías  de  laboratorio 
Según  el  orden  mostrado  en  la  tabla,  el  orden  de  para  un  curso  introductorio  de  química  orgánica. 
Colombia .pp 39-44. 
aparición en diclorometano será: 
[2]Truter,  E.  V.,  Morris,  L.  J.,  Criddle,  W.  J.,  Halpaap, H., & 
Shellard,  E.  J.  (1965).  Thin-layer  chromatography. 
1. ácido butírico 
Proceedings  of  the  Society for Analytical Chemistry,​  ​2​(7), 
2. Acetato de fenilo (ester)  113-116. 
3. Naftaleno ( hidrocarburo aromático)  [3]Valcarcel  Cases,  M.  (1988).  TECNICAS  ANALITICAS  DE 
SEPARACION. Barcelona : Reverte S.A. 
viii.  Organice  los  siguientes  compuestos  en  orden  [4]Stahl,  E.,  &  Chromatography, T. L. (1969). A Laboratory 
creciente  de  Rf  empleando  sílica  como  fase  estacionaria  Handbook. ​Thin-layer chromatography​, p-669. 
[5]H.  H.  Strain  "Chromatographic  Adsorption  Analysis", 
Interscience Publ., Inc., New York (1942)