NOMBRE: Maria Fernanda Villarreal Arenas (01210022024)

Geraldine Rodríguez Torrecilla (01210022035)

Nikol Xiomara Peñuela Quintero (01210022047)

PROGRAMA: instrumentación quirúrgica

TÍTULO PARÁCTICA: Aislamiento y Siembras Microbianas

FECHA DE LA PRÁCTICA: 04/ marzo de 2022

INTRODUCCIÓN

Con el desarrollo de este laboratorio, pretendemos visualizar la correcta forma de aislar bacterias
por la técnica de aislamiento por agotamiento. La cual consiste en sembrar en un medio de cultivo
(agar sangre, agar Mac Konkey y agar nutritivo) de tal forma que los microorganismos formen
colonias a lo largo de todo el medio. También contamos con otros medios de cultivo para bacterias
como son los tubos con caldo y para los hongos tenemos el agar Sabouraud en donde fueron
aislados hongos ambientales.

Asimismo, esperamos ver las muestras recolectadas de manera macroscópica para describir las
colonias gracias a su forma, color, borde, etc; y de manera microscópica con el fin de observar
que tipo de bacterias encontramos en las colonias tomadas de los medios de cultivo, las hifas y
esporangios de los hongos y el crecimiento de la bacteria en los hongos con biselados, líquidos y
rectos.

METODOLOGIA

RESULTADOS
Figura 1. Agar Sangre, muestra Figura 2. Agar Sangre, Figura 3. Agar Sangre,
de mucosa (boca) muestra de mucosa (boca), muestra de mucosa (boca),
vista microscopio vista microscopio 100x
estereoscópico Tinción de Gram

Figura 4. Agar Sabouraud, Figura 5. Agar Sabouraud, Figura 6. Agar Sabouraud,

muestra hongos ambientales hongos ambientales, vista hongos ambientales, vista
microscopio estereoscópico microscopio 40x tinción de
azul de lactofenol
 Figura 7. Agar Mac Konkey, Figura 8. Agar Agar Mac
muestra del baño Konkey, muestra del baño
vista microscopio 100x

Figura 9. Agar Nutritivo, Figura 10. Agar Nutritivo, Figura 11. Agar Agar
muestra de pantalla de celular muestra de pantalla de Nutritivo, muestra de
celular, vista microscopio pantalla de celular, vista
estereoscópico microscopio 100x

Figura 13. Agar forma recta, Figura 14. Agar forma de

Figura 12. Agar forma medio bacteria Pseudomonas bisel, bacteria
líquido, bacteria Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas aeruginosa
aeruginosa

ANÁLISIS Y DISCUSIÓN DE RESULTADOS

Las bacterias crecen en medios de cultivo en forma de colonias y adoptan formas, colores y
aspectos diferentes, dependiendo de la composición del medio y del tipo de bacteria. En la
primera práctica del laboratorio se utilizaron algunas muestras del entorno que nos rodea teniendo
como resultado bacterias Gram positivas y Gram negativas.

Para un correcto aislamiento de bacterias empleamos la técnica por agotamiento, utilizando así
hisopos previamente estériles para recolectar las muestras de los diferentes objetos, esto con el
fin que nuestra muestra no se contaminara; el primer aislamiento empleado en el laboratorio fue el
agar sangre, para este recolectamos muestras corporales (boca) teniendo un crecimiento positivo,
generándose así una amplia proliferación de colonias, cabe recordar que el medio de cultivo agar
sangre tiene “una conservación de los eritrocitos íntegros favoreciendo la formación de halos de
hemólisis nítidos, facilitando la diferenciación de algunas especies hemolíticas.” (1) Esto nos
permitió diferenciar las colonias que se generaron y ver su amplia evolución, a la vista del
microscopio pudimos evidenciar que la mayoría de bacterias tienen como morfología bacilos Gram
positivos. (figura N°3)

El segundo aislamiento utilizado en el laboratorio fue el Agar MacConkey, este Agar es un medio
de diferenciación selectivo para el aislamiento y la diferenciación de Enterobacteriaceae y diversos
bacilos Gram negativos en muestras clínicas y no clínicas. Es por ello que la muestra recolectada
fue del baño, generando así un incremento considerable, en nuestro agar se puede identificar
macroscópicamente unas bacterias grandes, con aspecto mate y una consistencia mucoide,
(figura N°7), a nivel microscópicamente pudimos evidenciar su morfología siendo esta Bacilos en
cadena Gram negativos (figura N°8)

El tercer aislamiento empleado fue el Agar Nutritivo. Es usado normalmente como rutina para
todo tipo de bacteria. Es muy útil porque permanece sólido incluso a relativamente altas
temperaturas. Además, el crecimiento bacteriano en este agar lo hace en la superficie, por lo que
se distinguen mejor las colonias pequeñas. Además, es utilizado para propósitos generales, para
el aislamiento y recuento de microorganismos con escasos requerimientos nutricionales. Su uso
está descripto en procedimientos para el análisis de alimentos, aguas y otros materiales de
importancia sanitaria. La muestra empleada fue de la pantalla del celular dándonos como
resultado macroscópicamente unas bacterias medianas – grandes, brillantes, (figura N°10) a nivel
microscópicamente su resultado morfológico fue cocos en racimos Gram positivos. (figura N°11)

El ultimo aislamiento a nivel de cajas de Petri fue el Agar Sabouraud, este es un medio no
selectivo para el cultivo y mantenimiento de hongos patógenos y no patógenos, El medio
contiene peptonas y una elevada concentración de glucosa que favorece el crecimiento de los
hongos sobre las bacterias. “Es utilizado para el cultivo de hongos, especialmente dermatofitos,
aunque también pueden desarrollarse en él cierto tipo de bacterias filamentosas tales
como Nocardia.”(2). debido a esto la toma de la muestra se empleó diferente, para obtener un
resultado positivo de crecimiento de los hongos nos dirigimos a un área abierta con vegetación,
dejamos la caja de Petri previamente dispuesta con el Agar en el suelo aproximadamente 10
minutos, esto con el fin que las esporas y microorganismos del ambiente se introdujeran en el
agar. Pudimos obtener un crecimiento positivo, a nivel macroscópicamente evidenciamos que es
un hongo con aspecto Algodonoso y Aterciopelado, microscópicamente vimos su correcta
coloración, además de sus hifas aseptas y sus respectivos esporangios (figura N°6)

En la última parte del laboratorio utilizamos Agar nutritivo en tubos, cada uno de ellos con
diferentes técnicas de aislamiento, el primero tiene por nombre agar líquido, el método utilizado
para este consistió en tomar con un asa bacteriológica, esterilizada, una cantidad de inoculo, se
introduce en el centro del medio líquido, agitándose, no tocando la pared del tubo. (figura N°12)
El segundo método utilizado fue la Siembra por picadura: con un Asa recta, tomamos la muestra,
y la introducimos en el tubo de ensayo hasta que la muestra quede bien impregnada al agar.
(figura N°13). Por último, utilizamos el método de Siembra por estría (en tubos de agar inclinado):
Muestra de material en asa de siembra, deslizar en zigzag, empezar por superficie más profunda
(figura N°14)

Con lo anterior, ¿el uso del aceite de inmersión en los montajes y observaciones microscópicas
 del objetivó 100x es indispensable para una correcta visualización?

Claramente el aceite de inmersión es un elemento indispensable, gracias a su contextura al ser un

líquido viscoso y transparente tiene un alto índice refractivo. Por este motivo es muy utilizado en
las observaciones microscópicas, ya que brinda la propiedad de concentrar la luz cuando esta
pasa a través del objetivo de 100X del microscopio, aumentando su poder de resolución.

CUNCLUSIONES:

 La preparación adecuada de un medio de cultivo nos permite disponer de los nutrientes y

condiciones necesarias para favorecer el crecimiento de los microorganismos
en el laboratorio.


BIBLIOGRAFÍA

1) Laboratórios Ltda, L. (2019). AGAR SANGRE [Ebook]. Recuperado el 5 de marzo de 2022, de

https://www.laborclin.com.br/wp-content/uploads/2020/02/540195-BIPLACA-SANGRE-AGAR-TSA-
2X10mL-10PL.pdf.
2) Agar Sabouraud - Wikipedia, la enciclopedia libre  . Es.wikipedia.org.  (2019). Recuperado el 5 de
marzo de 2022, de https://es.wikipedia.org/wiki/Agar_Sabouraud.
3) Mac Conkey Agar .  [Libro electrónico] (pág. 1).  Recuperado el 6 de marzo de 2022, de
https://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_60707267ecda2.pdf.
4) AGAR NUTRITIVO  . Probiotek.  (2020). Recuperado el 6 de marzo de 2022, de
https://www.probiotek.com/productos/reactivos/medios-de-cultivo-reactivos/agar-nutritivo/.
5) Sabouraud Dextrosa Agar  . (2015).  [Libro electrónico] (pág. 1). Recuperado el 6 de marzo de
2022, de https://www.bd.com/resource.aspx?IDX=22894.
Fundaci

ANEXOS

TABLA 1. Diferenciación de bacterias y hongos

AGAR AGAR AGAR NUTRITIVO

SANGRE MACCONKEY
 TIPO DE MUESTRA Muestra de mucosa Muestra del baño Muestra pantalla del
(boca) celular
CRECIMIENTO + + +
AISLAMIENTO Por agotamiento Por agotamiento Por agotamiento

DIBUJO DE LO
OBSERVADO
(color, colonias
presentadas)

Forma de colonia Puntiforme Circular Puntiforme

Color de colonia Blanco verdoso Durazno con rojo Blancas y amarillas
Tamaño Pequeñas Grandes Medianas
Borde Ondulado Redondeado Redondeado
Elevación Elevado - umbilicada Elevado - planoconvexo Elevado - convexo
Aspecto Brillante - opaca Mate – translúcido Brillante - opaca
Consistencia Duro Mucoide Mucoide
Tinción de Gram – Bacilos en cadena, Bacilos en cadena, gram Cocos en racimos, gram
agrupación gram positivos negativos positivos
Microorganismos bacterias aerobias y Coli, el Norovirus, la staphylococcus,
probables anaerobias, ambas Salmonella o las staphylococcus aureus,
grampositivas y Campylobacter, que micrococcus, streptococcus,
gramnegativas. Dentro pueden provocar diarreas, corynebacterium y bacillus.
de estas, sobresalen los gastroenteritis e
géneros Lactobacillus, infecciones urinarias,
Actinobacillus, entre otras
Staphylococcus o
Streptococcus.
Conclusión (coherencia
de lo observado vs lo
esperado)

Hongos
AGAR SABOURAUD
Aspecto
Algodonoso
Aterciopelado
Color
Blanco
Gris
Negro
Cobrizo

Preguntas de la guía

1. ACTIVIDAD DE PROFUNDIZACIÓN

a. Describa la composición química de cada uno de los medios de cultivo utilizados en la

 práctica. Tipo de medio.
RTA:

- Agar sangre: El medio contiene, peptona de caseína y extracto de levadura que proveen
nitrógeno, carbono, aminoácidos y vitaminas. Proteoma peptona es la fuente de nitrógeno
para la sangre. El equilibrio osmótico se mantiene gracias a la concentración de cloruro de
sodio y el agar utilizado como agente solidificante. (1)
- Agar Mac Konkey: En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios
para el desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la mezcla de
sales biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran
parte de la flora Gram positiva. (4)
- Agar nutritivo: El medio contiene extracto de carne, peptona y agar, siendo una formulación
suficiente para el desarrollo de los microorganismos. El extracto de carne proporciona al
medio fuente de carbohidratos, de nitrógeno y vitaminas. El empleo de este medio es de
acuerdo al tipo de estudio por realizar. (5)
- Agar Sabouraud: Sabouraud Dextrose Agar es un medio de peptona suplementado con
dextrosa para favorecer el crecimiento de hongos. Las peptonas son fuentes de factores de
crecimiento nitrogenados. (6)

b. ¿Por qué deben realizarse varios pases de una colonia antes de su identificación?
¿Por qué los microorganismos presentan diferencias morfológicas al ser sembradas
en diferentes medios, teniendo en cuenta los medios que sembró cada grupo?

RTA:
- la identificación bacteriana y la caracterización completa solo es posible tras el
aislamiento de la bacteria y la obtención de cultivos puros. Por ello el primer
problema al estudiar una bacteria es su aislamiento del resto de los
microorganismos presentes (en una muestra patológica, de agua, de suelo, de
alimentos, etc.). Una vez que se ha logrado el aislamiento es posible obtener la
bacteria de interés en cultivo puro.

c. Establezca cuales son los principales microorganismos de la cavidad bucal

(Bacterias, hongos, Protozoos).

RTA: A las bacterias de la boca, junto con otros microorganismos, se les conoce como microbiota
oral. Esa población no es fija, sino que está cambiando continuamente, incluso debido a factores
tan simples como bostezar, besar o comer ciertos alimentos.
En general, dentro de la boca predominan las bacterias aerobias y anaerobias, ambas
grampositivas y gramnegativas. Dentro de estas, sobresalen los géneros Lactobacillus,
Actinobacillus, Staphylococcus o Streptococcus. Veamos esto con mayor detalle.
En la saliva predominan los cocos grampositivos anaerobios facultativos, los cuales representan
alrededor del 44 % de la población bacteriana; le siguen los cocos gramnegativos anaerobios
estrictos, que representan alrededor del 15 %. Los bacilos anaerobios facultativos grampositivos
tienen un porcentaje similar.

d. Averiguar la composición de la Placa Bacteriana y los pasos que se dan para la

formación de está. (Presentar imágenes)

e. Realizar un mapa mental correlacionando los procesos de tinción, siembra y cultivo

 bacteriano.

2. ACTIVIDAD DE PRE-LABORATORIO:

 ¿Qué indicaciones o recomendaciones se deben tener en cuenta para la toma de

muestras clínicas?
Rta: La manipulación inapropiada puede convertirse en una fuente de riesgo biológico para las
personas que están en contacto o para el medio ambiente. Utilizar los elementos de protección
personal necesarios para evitar exposición con riesgo biológico, de acuerdo con la fuente de la
muestra.
 Protección ocular: gafas o mascarilla con visera.
 Mascarilla.
 Guantes.
 Bata.
 Contenedores para especímenes, a prueba de fugas y de fácil sellamiento.

Cumplir con las recomendaciones de manejo de elementos corto punzantes:

 No re enfundar agujas.
 Disponer y utilizar adecuadamente el contenedor para corto punzantes.
 No transportar jeringas con agujas. Se recomienda transferir el aspirado a un tubo
estéril.

 ¿Razón por la cual la técnica de siembra por agotamiento es la más utilizada

en el procesamiento de muestras clínicas?
Rta:

 ¿Cuáles son los pasos para la coloración de Gram?

Rta: