TINCIÓN DE GRAM

Buitrago Cruz Angie Natalia, Bohorquez Baron Daniela Alejandra, Ortega Lopez Ana Luisa,
Rodriguez Ramirez Valentina, Roncancio Pineda Catalina.
Lugar de realización: Universidad el Bosque. Laboratorio de microbiología.
Fecha de realización: 21/02/2022

RESULTADOS

Las bacterias se dividen fundamentalmente en dos grandes grupos ( Grampositivas, Gramnegativas)

en función de la respuesta que presentan frente a la tinción de Gram que permite distinguir dos tipos
de estructura de pared celular. Para determinar la reacción de Gram se ha utilizado el método de Gram
modificado por Hucker (1923), en el cual se emplea el cristal violeta de Hucker, una solución de lugol
como mordiente y una solución de safranina como colorante de contraste. Esta técnica permite
estudiar la morfología de las bacterias [1,2].

Imagen 1. Agar ambiental. Imagen 2. muestra microscópica

de agar ambiental. Lente 100x

Se tomaron 5 muestras de diferentes lugares para la recolección de bacterias usando un hisopo

previamente esterilizado, humedecido con caldo neutralizante, frotando el hisopo por toda la
superficie y luego en forma de surcos, de lado a lado en el agar de caldo nutritivo, transfiriendo así las
bacterias, tomo este procedimiento se llevó a cabo en un ambiente estéril, teniendo en cuenta siempre
la presencia del calor con el mechero de bunsen; las muestras ya depositadas en el agar se dejaron en
incubación por 8 días a una temperatura de aproximadamente 35 °C. Por otra lado, una vez incubadas
las muestras, se eligió una de ellas para hacer un análisis microscópico, en este caso se tomó una
pequeña muestra del agar ambiental (Imagen 1), el cual se disolvió en una gota de agua en un
portaobjetos, se esterilizó y secó, para fijarla con ayuda de un mechero de bunsen, posteriormente se
cubrió la muestra con gotas de cristal violeta y se dejó por 1 minuto, se lavó y secó; posteriormente se
agregaron gotas de lugol y se dejó por 1 minuto, se lavó y secó; luego se agregaron gotas de
alcohol-acetona por 8 segundos, se lavó y secó, y por último se agregó safranina, se dejó por 30
segundos, se lavó y secó, para posteriormente poner el cubreobjetos y observar en el microscopio.
ANÁLISIS DE RESULTADOS

En esta práctica se pudo evidenciar de forma clara, las bacterias aerobias (Esaú et al., 2014), ya que
estas pueden crecer y vivir en presencia de oxígeno. El cultivo se incubó durante una semana a una
temperatura de 35 °C, para así poder encontrar las bacterias sembradas. La muestra de bacterias
observadas se tomó de una colonia del agar ambiental y se dispuso a observar en el microscopio
óptico con un objetivo 100x, usando aceite de inmersión.

El aceite de inmersión al tener un índice de refracción definido muy similar a la del vidrio, permitió la
observación de la muestra con el lente 100x, teniendo una mejor vista de la morfología de los
microorganismos visualizados (Kaltsein, 2021). En la Imagen 2 se puede observar la morfología
presente en la muestra ambiental como: Cocos en un plano, estreptococos como una cadena de 4-20
cocos agrupados, micrococos observados en dos planos, sarcinas y estafilococos en varios planos
(BYJU’s, 2018).

Dentro de esta prueba se evidenció bacterias gram positivas por su distintivo color violeta, gracias a la
presencia de una pared celular gruesa compuesta por peptidoglucanos y polímeros. La pared celular
retuvo la coloración y debido a que es impermeable, esta se resistió a la decoloración que puede
ocasionar la safranina (Rodriguez & Arenas, 2018).

CONCLUSIONES

● La tinción de gram fue clave para evidenciar qué bacterias poseían una pared celular y de
igual manera, facilitó identificar la morfología de los microorganismos encontrados en la
muestra tomada.
● No hubo presencia de bacterias gram negativas en la muestra obtenida porque la muestra se
tomó desde una sola colonia de bacterias y esto se pudo confirmar al realizar la tinción y
observar que ninguna de ellas se decoloró a tal punto de lograr un color rojizo.

BIBLIOGRAFÍA

● BYJU’s. (2018). Mayor difference between Gram positive and Gram-negative Bacteria.
Tomado de BYJU’s website:
https://byjus.com/biology/difference-betweengram-positive-and-gram-negative-bacteria/
● Esaú, L., Hernández, M., Colín, C., Ortega, S. y Cerón, G. (2014). Las tinciones básicas en el
laboratorio de microbiología. Tomado de https://www.medigraphic.com/pdf(invdis/ir14
1b.pdf
● Kalstein. (2021, Julio 9). ¿Cómo funciona el aceite de inmersión? Tomado de:
https://kalstein.co.ve/como-funciona-el-aceite-de-inmersion/
● Rodriguez, P. Arenas, R. (2018). Hans Christian Gram y su tinción. Tomado de:
https://www.medigraphic.com/pdfs/cosmetica/dcm-2018/dcm182n.pdf