PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDAR Emisión:

Codificación y
Revisión
DETERMINACION DEL PARACETAMOL

CONTROL DE CALIDAD

DETERMINACIÓN DE PARACETAMOL HPLC

UTILIZANDO UNA VARIACIÓN DEL MÉTODO
QuEChERS

Integrantes: Luisa Bertha Aduviri Córdova

Katerin Zaida Choque Bautista
Jhulibeth Vega Nuñez
Docente: Miguel Ángel Heredia Baspineiro
Semestre: 6to. semestre
Hito : 5
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DETERMINACIÓN DE PARACETAMOL HPLC

UTILIZANDO UNA VARIACIÓN DEL MÉTODO
QuEChERS

1. INTRODUCCION
El paracetamol es un analgésico y antipirético que se metaboliza a sulfo y glucurono-
conjugados a dosis terapéuticas en su mayor parte a excepción de un 8%
aproximadamente, que se transforma en un metabolito intermedio, muy tóxico (n-acetil-
imidoquinona), que es inactivado en el hígado por medio de su conjugación con el
glutation, siendo excretado por la orina como conjugado de cisteína y ácido
mercaptúrico. Sin embargo, a dosis tóxicas, la generación de cantidades importantes del
metabolito tóxico agota las reservas de glutation, lo que implica que la n-acetil-
imidoquinona se fije a las macromoléculas de los hepatocitos, causando su necrosis.

El paracetamol produce signos de hepatotoxicidad tardíos, siendo rara su manifestación

antes de las 12-18 h, de ahí que tenga especial trascendencia el control analítico y
cuantificación en supuestas intoxicaciones. Así, la ictericia se manifiesta a las 48-72 h y
la necrosis masiva se hace aparente al 4º día, precedida usualmente de un cuadro de
insuficiencia hepática.

1.1. Importancia
La importancia de contar con procedimientos estandarizados y las limitantes que se pueden
topar los diferentes laboratorios de control de calidad, investigación y desarrollo, venta de
servicios analíticos, u otros; son necesarias las validaciones de métodos físico-químicos, cuando
estos no son oficiales, para acondicionar las metodologías analíticas y garantizar la eficiencia y
eficacia en su ejecución para el fin previsto.

1.2. Farmacopea
Con lo que respecta a la metodología para el análisis cuantitativo de paracetamol
(acetaminofén) la prueba oficial aplicable a las tabletas según la Farmacopea de los Estados
Unidos (USP 38) es por la técnica de cromatografía líquida de alta resolución (Delfino,
Radovancich & Sarno, 2006).
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2. APLICACIÓN
2.1. Procedimiento operativo estándar se utiliza para la determinación del
comprimido paracetamol en HPLC

3. REFERENCIAS

3.1. Método dispersivo AOAC 2007.01. Se utiliza acetato de sodio como tampón
en substitución del cloruro de sodio.
3.2. Método europeo EN15662. Similar al método AOAC utilizando cloruro de
sodio, citrato de sodio dihidrato y citrato de sodio sequihidrato, en lugar del
acetato de sodio.

4. RESUMEN MÉTODO

4.1. El paracetamol es un medicamento de venta sin receta médica que se da para

aliviar la fiebre y el dolor. Si se utiliza correctamente, es un fármaco seguro
para tratar una amplia variedad de problemas. Pero si se da en dosis muy altas
puede hacer que el niño se ponga muy enfermo.
4.2. El paracetamol es un analgésico y antipirético que se metaboliza a sulfo y
glucurono-conjugados a dosis terapéuticas en su mayor parte a excepción de un
8% aproximadamente, que se transforma en un metabolito intermedio, muy
tóxico (n-acetil-imidoquinona), que es inactivado en el hígado por medio de su
conjugación con el glutatión, siendo excretado por la orina como conjugado de
cisteína y ácido mercaptúrico

5. PRECAUCIONES DE SEGURIDAD

5.1. Medidas generales de protección

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● Lavarse las manos con frecuencia y al quitarse los guantes.

● Usar guantes cuando se manejen líquidos biológicos.
● Establecer y respetar áreas sucias y áreas limpias.
● No tocar las áreas sin contaminación con guantes contaminados.
● Emplear guardapolvo en laboratorio
● Usar lentes de protección para la manipulación de muestras y reactivos.

6. INTERFERENCIAS

6.1. Se desarrolló el método analítico que es específico porque no detectó

interferencia ni productos de degradación; es lineal para concentraciones de 50
a 150 % del principio activo; es veraz porque su capacidad analítica cercana al
valor real, diferencia significativa en la recuperación a pH 1,2; 4,5 y 6,8; es
preciso, grado de concordancia al 100 % de concentración, resultados
repetitivos y precisión intermedia con CV total menores al 4%; es robusto, sin
diferencia significativa con resultados trabajando muestras al inicio y después
de 24 horas con DSR menores al 2%.

7. MUESTREO Y PRESERVACIÓN

Tomar las muestras de manera manual y los tiempos de muestreo establecidos son de
15, 30, 45, 60 y 75 minutos

8. INSTRUMENTOS Y MATERIAL
8.1.Material
● Pipeta automática de 200-1000 µl
● Tubos de cristal de fondo cónico
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● Agitador o vortex
● Centrifuga
● Pipeta Hamilton 25 µl
● HPLC Perkin Elmer mod. Series 200

8.2.Reactivos
● Acetonitrilo
● Metanol
● Buffer Perclorato-Perclórico pH 2.5
● Agua milli-Q system

9. MÉTODO HPLC
Se utilizó el método HPLC para determinar la equivalencia farmacéutica in
vitro de la combinación de paracetamol

9.1.Desarrollo del método analítico

Para elegir la longitud de onda adecuada se realizó un barrido espectral de 200-900

ŋm con la ayuda de un equipo con detector de arreglo de Diodos, donde los analitos
de interés fueron detectados desde la longitud de onda de 202 hasta 298 ŋm.
Empleando longitud de onda UV a ,298 ŋm para paracetamol.
Se empleó como fase móvil una solución fosfato monobásico de potasio que se
ajustó a pH 3,5 con ácido fosfórico al 85%. Se trabajó a un flujo de 0,5 mL/min
hasta el minuto 7,0 y luego se aumentó el flujo a 1,0 mL/min hasta el minuto 22,0
de forma constante hasta el minuto 35,0; luego se disminuyo el flujo a 0,5 mL/min
hasta el minuto 40,0. También se midió la gradiente de acetonitrilo a los 22,0
minutos en un 20% hasta el minuto 35,0 y luego continuo con fase móvil; la
temperatura de la columna fue de 30ºC y el volumen de inyección de 20µL.
9.2.Técnica de recolección de datos
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Se utilizó una técnica de tipo experimental con elaboración de parámetros

estadísticos que reflejan la validez, objetividad y confiabilidad de la validación de
este método analítico. Los perfiles de disolución fueron cuantificadas a través de la
técnica HPLC. Estos perfiles se compararon a través de un método estadístico
modelo independiente, factor de diferencia (f1) y de similitud (f2).

10. ANÁLISIS DE LA MUESTRA

10.1. Construir una curva patrón que contenga las siguientes

concentraciones de paracetamol: 25, 50 y 100 mg/L.
10.2. Colocar en un tubo de ensayo de fondo cónico 0.2 ml de plasma
de la muestra problema.   
10.3. Agregar 0.2 ml de acetonitrilo al objeto de precipitar las
proteínas.  
10.4. Agitar en vortex durante al menos 2 minutos   
10.5. Centrifugar a 3000 rpm durante 3 minutos   
10.6. Decantar el sobrenadante en un tubo limpio   
10.7. Inyectar 10 µl del sobrenadante en el HPLC   

11. ANÁLISIS DE DATOS

11.1.En los procedimientos de HPLC se valorará el cromatograma. En él se tendrá en
cuenta tanto el tiempo de retención (expresado en minutos) como el área y se comparará
con los obtenidos para los patrones de concentraciones conocidas (25, 50 y 100 mg/L en
este caso).
11.2. Asimismo, se realizará un espectro, comprobando la longitud de onda
característica de la sustancia a investigar. En el caso particular del paracetamol, se
valorará el espectro UV obteniendo una longitud de onda máxima a 245 nm.
12. CONTROL DE CALIDAD
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12.1 .En las pruebas de control de calidad no basta con garantizar las cantidades de
principio activo presente en la formulación farmacéutica, es necesario garantizar la
liberación del fármaco con ensayos de disolución, aunque estas pruebas no fueron
objetivo de nuestro trabajo es importante mencionar su importancia a la hora de aprobar
un medicamento.
13. BIBLIOGRAFÍA
13.1.1.1. Quattrocchi O., Abelaira S., Laba R. Introducción a la HPLC.
Aplicación y Práctica.
13.1.1.2. Validación del método de determinación de uniformidad de contenido
en tabletas de dipirina de 300mg en el laboratorio farmacéutico Oriente.
Revista Cubana de química 21(2): 66-69.
13.1.1.3. Guía de validación de métodos Ente Costarricense de Acreditación
(ECA). Versión: 02
13.1.1.4. AMERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION. Standard Methods for the
Examination of Water and Wastewater. 22nd Edition. Washington, APHA,
2012. 3500-Ca pp 3-65 a 3-66.
13.1.1.5. Farmacopea de los Estados Unidos de América, USP 38-NF 33<2>
Medicamentos orales- pruebas de calidad de productos. Rockville, MD 2015
Vol. 1 pp.71-74.
13.1.1.6. Quattrocchi O., Abelaira S., Laba R. Introducción a la HPLC. Aplicación y
Práctica. Buenos Aires, Argentina, 1992.