CK-NAC Liquiform
: 117
Instrucciones de Uso
Finalidad . Sistema para determinación cuantitativa de la actividad de
la creatina quinasa total (CK) en modo cinético en suero o plasma.
[Solamente para uso diagnóstico in vitro.]
1-3
Principio . La actividad de la creatina quinasa total es determinada
en acuerdo a la secuencia de reacciones expuestas a continuación:
CK
Creatina Fosfato + ADP Creatina + ATP
HK
ATP + Glucosa ADP + Glucosa-6-Fosfato
G-6-PDH
Glucosa-6-Fosfato + NADP 6-PG + NADPH
La CK cataliza la desfosforilación de la creatina fosfato para producir
adenosina trifosfato (ATP), que reacciona con la glucosa en presencia de
la hexoquinasa (HK) formando glucosa-6-fosfato. En presencia de
glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G-6-PDH), la glucosa-6-fosfato es
oxidada a 6-fosfogluconato (6-PG) y reduce el NAD a NADPH.
La velocidad de incremento en la absobancia en 340 nm es proporcional a
la actividad del CK en la muestra.
Características del sistema . El método se basa en las
4
condiciones de reacción optimizadas por Szasz , que incorporó la
activación de la CK con N-acetil cisteína (NAC). El método fue
exhaustivamente evaluado por la International Federation of Clinical
5 en el manejo del reactivo.
Chemistry and Laboratory Medicine (IFCC) , que recomendó su
utilización con las concentraciones de los reactivos más favorables a las
condiciones cinéticas y a los aspectos técnicos del sistema de medición.
5
El sistema CK NAC Liquiform es trazable al método de referencia del IFCC
Ò
y al material de referencia ERM -AD455/IFCC del Institute for Reference
Materials and Measurements.
La utilización del calibrador, que contiene CK-MM y CK-MB humana,
corrige la respuesta del sistema de medición, obteniendo exactitud
deseable de los resultados. La actividad enzimática del CK a el calibrador
5
es trazable al Procedimiento Primario de Referencia del IFCC y al material
Ò
de referencia ERM -AD455/IFCC.
El sistema CK-NAC Liquiform - Labtest utiliza mediciones en modo
cinético y puede ser fácilmente aplicado en ana-lizadores automáticos y
semiautomáticos capaces de medir la absorbancia en 340 nm, aplicando
método bireactivo o monoreactivo.
01 Español - Ref.: 117
Ref.
Metodología . IFCC.
Reactivos
1. ( - Reactivo 1 - Conservar entre 2 - 8 ºC.
Contiene tampón imidazol 125 mmol/L, N-acetil cisteína 25 mmol/L, ADP
2,5 mmol/L, AMP 6,25 mmol/L, diadenosina pentafosfato ³12,5 mmol/L,
acetato de magnesio 12,5 mmol/L, NADP 2,5 mmol/L, hexoquinasa
³5000 U/L, G-6-PDH ³3500 U/L, azida sódica 0,095% y estabilizador.
2. ) - Reactivo 2 - Conservar entre 2 - 8 ºC.
Contiene tampón, glucose 100 mmol/L, creatina fosfato 150 mmol/L,
azida sódica 0,095% y estabilizador.
3. < - Calibrador - Armazenar entre 2 - 8 ºC.
Preparación liofilizada contiendo tampón 50 mmol/L, cloruro de sódio
154 mmol/L, albumina bovina 3,5%, CK-MM y CK-MB de origen humano
y estabilizadores. Ver en el rótulo del frasco, el valor señalado de la
actividad enzimática.
Los reactivos no abiertos, conservados en las condiciones
especificadas, son estables hasta la fecha de expiración impresa en su
rótulo. Durante el manipuleo, los reactivos están sujetos a
contaminaciones de naturaleza química y microbiana que pueden
provocar disminución de la estabilidad.
Precauciones y cuidados especiales
No utilizar el Reactivo de Trabajo cuando se muestre turbio o con señales
de contaminación. Se deben aplicar los cuidados habituales de seguridad
Los reactivos contienen azida sódica, que es tóxica. Se debe tomar
cuidado para evitar la ingesta y en caso de contacto con los ojos se deben
lavar inmediatamente con gran cantidad de agua y procurar auxilio
médico. La azida puede formar compuestos altamente explosivos con
tuberías de plomo y cobre. Así siendo, utilizar grandes volúmenes de agua
para deshacerse los reactivos.
Cuidados con el tiempo de reacción, temperatura de trabajo y pipeteos
son extremadamente importantes para la obtención de resultados
correctos.
Los reactivos deben ser manoseados siguiendo las buenas prácticas de
laboratorio que indican evitar ingestión y contacto con piel, mucosas y
ojos.
El Calibrador es preparado a partir de derivados de sangre humana y fue
ensayado para determinar la presencia de HBsAg, anticuerpos anti-HCV y
anti-HIV presentando resultados negativos. A pesar de haberse utilizado
tests validados y aprobados, ninguno de ellos puede asegurar que
productos derivados de sangre humana estén libres de agentes
infecciosos.
Por lo tanto, los cuidados habituales de seguridad deben ser aplicados en
la manipulación del producto, el que no debe ser pipeteado con la boca.
Se recomienda manipularlo como siendo potencialmente infectivo.
Material necesario y no suministrado
1. Fotómetro con cubeta termostatizada capaz de medir con exactitud la
absorbancia en 340 nm.
2. Pipetas para medir muestras y reactivos.
3. Cronómetro.
Influencias preanalíticas . Inyecciones intramusculares pueden
aumentar en hasta 5 veces la actividad de la creatina quinasa.
El ejercicio físico puede elevar los valores de la CK en hasta 3 veces, con
la consiguiente regresión de los valores 24 horas después. En casos de
ejercicio prolongado, la actividad puede aumentar hasta 24 veces. Este
aumento es menos significativo en individuos mejor condicionados
físicamente.
En el embarazo normal ocurre una disminución significativa de la
actividad de la CK entre la octava y vigésima semana.
Fue observado que la variación biológica individual puede alcanzar los
30% y que la enzima se reduce con la edad, después los 70 años, en
individuos del sexo masculino.
El uso prolongado del torniquete puede producir resultados falsamente
elevados.
Muestra
Se debe crear un Procedimiento Operacional Estándar (POE) que
establezca procedimientos adecuados para la recogida, preparación y
almacenamiento de la muestra. Subrayamos que los errores debidos a la
muestra pueden ser bastante más grandes que los errores acaecidos
durante el procedimiento analítico.
Usar suero o plasma obtenido con EDTA o heparina. La actividad
enzimática es estable 24 horas entre 15 - 25 °C, 7 días entre 2 - 8 ºC y 4
semanas entre -15 ºC y -25 ºC. La muestra debe ser protegida de la
acción de la luz.
Muestras fuertemente hemolisadas no son adecuadas porque pueden
contener niveles elevados de adenilato quinasa, ATP y glucosa-6-fosfato,
capaces de producir resultados falsamente elevados.
Como ningún test conocido puede asegurar que muestras de sangre no
transmiten infecciones, todas deben ser consideradas como
potencialmente infectantes. Así siendo, al manejarlas se deben seguir las
normativas establecidas para bioseguridad.
Para deshacerse de los reactivos y del material biológico, sugerimos
aplicar las normativas locales, regionales o nacionales de protección
ambiental.
Interferencias
Valores de bilirrubina hasta 38 mg/dL y triglicéridos hasta 1000 mg/dL no
producen interferencias significativas.
02 Español - Ref.: 117
Valores de triglicéridos más altos que 1000 mg/dL producen resultados
falsamente disminuidos.
Valores de hemoglobina hasta 120 mg/dL no producen interferencias
significativas. Muestras con valores superiores no deben ser utilizadas
porque pueden contener niveles elevados de adenilato quinasa, ATP y
glucosa-6-fosfato, capaces de producir resultados falsamente elevados.
Preparo del reactivo de trabajo . Mezclar 4 volúmenes de
Reactivo 1 e 1 (un) volumen de Reactivo 2. El reactivo de trabajo es
estable 14 días entre 2 - 8 ºC y 24 horas entre 15 - 25 ºC, mantenido en
recipiente cerrado, mientras no suceda contaminación química o
microbiana.
Para preparar el volumen de reactivo necesario para realizar un test,
mezclar 0,8 mL del Reactivo 1 y 0,2 mL del Reactivo 2.
Identificar el frasco como Reactivo de Trabajo y fecha de preparación.
Para preservar su desempeño el reactivo debe permanecer fuera del
frigorífico únicamente el tiempo necesario para obtenerse el volumen a
ser utilizado. Evitar exposición a la luz solar directa.
Reconstitución del calibrador
Ver Observaciones2 y 3
Remover el cierre de aluminio y retirar cuidadosamente la tapa de goma.
Utilizando una pipeta volumétrica calibrada, añadir al frasco del calibrador
el volumen de agua tipo II indicado en el rótulo. Recolocar la tapa de goma,
dejar en reposo durante 10 minutos y homogeneizar suavemente por
inversión. Antes de utilizar, homogeneizar suavemente y retirar la cantidad
necesaria para uso. Tapar inmediatamente y almacenar entre 2 - 8 ºC.
Después de la reconstitución, el calibrador es estable 30 días se
almacenado entre 2 - 8 ºC, bien vedado y protegido de la luz.
Para almacenamiento por periodo superior a 30 días sugerimos, después
de reconstitución, separar el calibrador en alícuotas y congelar en
temperatura inferior a -10 ºC por hasta 90 días en recipiente
hermeticamente cerrado, protegido de la luz. Para evitar evaporación del
material durante el periodo de almacenamiento es fundamental utilizar
frascos adecuados para congelación (criotubos). Las alícuotas del
calibrador deben ser congeladas solamente una vez.
Para preservar el desempeño, mantener el calibrador fuera de la
temperatura de almacenamiento solamente por el tiempo mínimo
necesario para obtenerse el volumen a ser utilizado.
El Calibrador debe ser manoseado de acuerdo con las buenas prácticas
de laboratorio para evitar contaminaciones de naturaleza química y
microbiana que pueden provocar reducción de la estabilidad.
 Procedimiento Concentración del Calibrador(U/L): 268

Ver Observaciones1,2 y 3. 0,014

Actividad de la CK (U/L) = x 268 = 114
Condiciones de reacción 0,033
Longitud de onda: 340 nm.
Cubeta termostatizada a 37±0,2 ºC. Obtención del factor

Ccal
1. En uno tubo conteniendo 1,0 mL del Reactivo de Trabajo añadir
FACTOR =
0,02 mL de muestra o Calibrador, homogeneizar y transferir DA/min Calibrador
inmediatamente a la cubeta termostatizada a 37 ºC. Esperar por 2
minutos. Actividad de la CK (U/L) = DA/min Test x Factor

2. Hacer la lectura de la absorbancia inicial (A1) disparando el Ejemplo

cronómetro simultáneamente. Repetir la lectura después de 2 minutos
(A2). 268
Factor = = 8121
Para verificar la linealidad de la reacción, hacer también una lectura con 0,033
intervalo de 1 minuto y verificar si la diferencia de absorbancia en cada
minuto es constante. Actividad de la CK (U/L) = 0,014 x 8121 = 114

El procedimiento sugerido para la medición es adecuado para fotómetros Calibración . Usar el Calibrador Ref. 117.3. La actividad enzimática
cuyo volumen mínimo de solución para lectura es igual o menor que de la CK en el calibrador es trazable al Procedimiento Primario de
Ò
1,0 mL. Se debe hacer una verificación de la necesidad de ajuste del Referencia de la IFCC, y al material de referencia ERM -AD455/IFCC.
volumen para el fotómetro utilizado. Los volúmenes de muestra y reactivo
pueden ser modificados proporcionalmente sin perjuicio para el Calibraciones manuales
desempeño de la prueba y el procedimiento de cálculo se mantiene Obtener el factor de calibración al usar nuevo lote de reactivos o cuando el
inalterado. En caso de reducción de los volúmenes es fundamental que se control interno de la calidad indicar.
observe el volumen mínimo necesario para la lectura fotométrica.
Volúmenes de la muestra menores que 0,01 mL son críticos en Sistemas automáticos . Intervalo de calibración
aplicaciones manuales y deben ser usados con cautela porque aumentan Calibración de 2 puntos (blanco y calibrador) al cambiar el lote;
Calibración de 2 puntos (blanco y calibrador) cuando el control interno de
la imprecisión de la medición.
la calidad indicar.
Cálculos . Ver linealidad.
Linealidad
A2 - A1 A2 - A1
El resultado de la medición es lineal hasta 2000 U/L Para valores más
DA/minuto Test = DA/minuto Calibrador =
altos, diluir la muestra con NaCl 150 mmol/L (0,85%), realizar nueva
2 2
medición y multiplicar el resultado obtenido por el factor de dilución.
DA/min Test
Actividad de la CK (U/L) = x CCal Control interno de la calidad . El laboratorio debe mantener un
DA/min Calibrador programa de control interno de calidad que defina con claridad los
reglamentos aplicables, objetivos, procedimientos, criterios para
CCal: concentración del calibrador especificaciones de la calidad y límites de tolerancia, acciones
correctivas y registro de las actividades. Controles deben ser utilizados
Ejemplo para evaluar la imprecisión e desviaciones de calibración. Se sugiere que
las especificaciones para el coeficiente de variación máximo y el error
Test 6,7,8
total sean basados en los componentes de la variación biológica (VB) .
A1= 0,350 A2 = 0,378
Se sugiere utilizar las preparaciones estabilizadas de la línea Qualitrol -
0,378 - 0,350 Labtest para el control interno de la calidad en ensayos de química clínica.
DA/min Test = = 0,014
2
Intervalo de referencia . Los intervalos deben ser usados sólo
Calibrador como orientación. Se recomienda que cada laboratorio establezca su
propio rango de valores de referencia en la población atendida.
A1 = 0,316 A2 = 0,381

0,316 - 0,381
DA/min Calibrador= = 0,033
2

03 Español - Ref.: 117

Niños e Adolescentes9 Repetitividad - Imprecisión intra-ensayo
Edad Maculino (U/L) Feminino (U/L) N Media DE (U/L) CV (%)
01-03 meses 29-303 40-474 Muestra 1 20 122 0,65 0,54
04-12 meses 25-172 27-242 Muestra 2 20 241 1,50 0,62
13-24 meses 28-162 25-177
02-10 años 31-152 25-177 Reproducibilidad - Imprecisión total
11-14 años 31-152 31-172
15-18 años 34-147 28-142 N Media DE (U/L) CV (%)
Muestra 1 20 122 1,48 1,22
Adultos Muestra 2 20 241 2,53 1,05

Mujeres 26-155 (U/L)

Hombres 26-189 (U/L) Sensibilidad metodológica . Limite de detección: 6,2 U/L.
Corresponde a 3 desviaciones estándar obtenidos de una muestra con
Conversión: Unidades Convencionales (U/L) x 0,0167 = Unidades actividad de CKM igual a 117 U/L.
SI (mkat/L).
Utilizándose como parámetro la absorbancia mínima detectable, lo limite
10 de detección fotométrica es de 8,1 U/L, correspondiendo a una diferencia
Características del desempeño
de absorbancia igual a 0,001.

Estudios de Recuperación . En dos muestras con

Efectos de la dilución de la matriz . Dos muestras con valores
concentraciones de CK iguales a 328 y 1233 U/L fueron adicionadas
iguales a 1535 y 1844 U/L fueron utilizadas para evaluar la respuesta del
cantidades de la enzima, obteniéndose los siguientes resultados:
sistema en las diluciones de la matriz con NaCl 150 mmol/L (0,85%).
Utilizando factores de dilución que variaron de 2 a 16 se hallaron
Actividad (U/L)
recuperaciones de entre el 103 y 104%.
Recuperación
Inicial Adicionada Esperada Encontrada
(%) Significado clínico . La creatina quinasa es un dímero compuesto
328 233 561 560 99,8 de subunidades B y M y se presenta en tres formas isoenzimas: MM
1233 233 1466 1456 99,3 (Ck3), MB (CK2) y BB (CK1). La enzima se encuentra en altas
concentraciones en el músculo esquelético, el músculo cardíaco, el
El error sistemático proporcional medio estimado es igual a 0,5 U/L para
cerebro y el tracto gastrointestinal.
el nivel de decisión 122 U/L y 1,0 U/L para el nivel de decisión 241 U/L.
Los estudios de distribución tisular indican que el músculo esquelético se
Estudios de Comparación de Métodos . El método propuesto compone casi en su totalidad de la isoenzima MM con cantidades
5
fue comparado con el método de referencia de la IFCC , obteniéndose los mínimas de la isoenzima MB. El cerebro y el tracto gastrointestinal
siguientes resultados: contienen principalmente isoenzima BB, mientras que el músculo del
corazón es de aproximadamente 80% de la isoenzima MM y 20% de la
MB.
Método Método
Comparativo Labtest
El CK total comienza a subir 6 horas después de la aparición de infarto
Número de muestras 20 20 agudo de miocardio (IAM) y alcanza un máximo después de 12 a 24 horas
Intervalo de concentraciones y mantiene elevada hasta 72 horas cuando no hay un nuevo infarto. Los
85-1172 84-1154
(U/L) valores en el pico pueden alcanzar más de 10 veces el límite superior de
Media de las estimativas los valores de referencia. En pacientes sometidos a terapia trombolítica la
582,8 593,6
(U/L) elevación de CK puede ocurrir antes mediante el aumento de la isoenzima
Método Labtest = 0,996 x MB en resultado a la reperfusión del miocardio isquémico.
Ecuación de regresión
Método Comparativo - 6,851
Coeficiente de correlación 0,999 En el IAM, CK está elevada en los casos de necrosis del músculo del
corazón producida por la miocarditis grave.
Utilizando la ecuación de regresión, el error sistemático total (bias)
estimado es igual a 3,5% para un nivel de decisión igual a 241 U/L y 1,2% Las causas de la elevada CK consecuente a la necrosis o atrofia aguda del
para un nivel de decisión igual a 1245 U/L. Estos errores son menores que músculo estriado son: cirugía de tórax o del corazón (los valores vuelven
el error sistemático analítico de la especificación deseable basada en la a su nivel dentro de 24 a 48 horas), la cardioversión, distrofia muscular
variación biológica que es £±5,8%. progresiva, la esclerosis amniotrófica, polimiositis, la distrofia miotónica
lateral, traumatismos y quemaduras, extensa rabdomiolisis, hipertermia
Estudios de precisión . Los estudios de precisión fueron maligna, hipotermia, estado epiléptico, miopatía endocrina
Ò (hipotiroidismo, acromegalia, hipoparatiroidismo de miopatía) y de
realizados en el sistema Labtest/Labmax 240 , utilizando muestras con
consumo de cocaína.
valores de actividad iguales a 122 y 241 U/L.

04 Español - Ref.: 117

Observaciones 7. Sociedad Española de Bioquímica Clínica y Patología
Molecular, Base de Datos de Variación Biológica. Disponível
1. La limpieza y secado adecuados del material utilizado son factores em:<http://www.seqc.es/article/articleview/330/1/170> (acesso
fundamentales para la estabilidad de los reactivos y obtención de em 04/2006).
resultados correctos.
8. Basques JC. Especificações da Qualidade Analítica. Labtest
Diagnóstica 2005.
2. El agua utilizada en el laboratorio debe tener la calidad adecuada a cada
aplicación. Por ello, para preparar los reactivos y usarla en las 9. Soldin SJ, Brugnara C, Wong EC: Pediatric Reference Intervals, 5.ed.
mediciones, debe tener resistividad ³1 megaohm o conductividad Washington: AACC Press, 2005. p.69-70.
£1 microsiemens y concentración de silicatos <0,1 mg/L (agua tipo II).
Para el enjuague de la vidriería el agua puede ser del tipo III, con 10. Labtest: Dados de Arquivo.
resistividad ³0,1 megaohms o conductividad £10 microsiemens. En el
enjuague final utilizar agua tipo II. Cuando la columna desionizadora está Presentación
con su capacidad saturada ocurre la producción de agua alcalina con
Producto Referencia Contenido
liberación de varios iones, silicatos y sustancias con gran poder de
oxidación o reducción que deterioran los reactivos en pocos días o
1 2 X 24 mL
CK-NAC
incluso horas, alterando los resultados de modo imprevisible. Por ello, es 117-2/30 2 2 X 6 mL
Liquiform
fundamental establecer un programa de control de la calidad del agua. 1 X 1 mL

3. Varios factores alteran el desempeño del calibrador. De entre estos
factores están los errores de reconstitución, homogeneización
inadecuada, contaminación del agua o del material de vidrio y
almacenamiento incorrecto. Sugerimos el cumplimiento de las buenas
prácticas de laboratorio y la verificación de las instrucciones del
fabricante del instrumento y de los reactivos utilizados, relacionadas con
las limitaciones del procedimiento.
4. Para una revisión de las fuentes fisiopatológicas de interferencia en los
resultados y en la metodología se sugiere consultar: <www.fxol.org/>.
Referências
1. Oliver IT. J Lab Clin Med 1963;62:159.
Están disponibles las aplicaciones para sistemas automáticos y semi-
automáticos.
El número de ensayos en aplicaciones automáticas, depende de los
parámetros de programación.
Informaciones al consumidor
[Términos y Condiciones de Garantía]
Labtest Diagnóstica garantiza el desempeño de este producto dentro de
las especificaciones hasta la fecha de expiración indicada en los rótulos
siempre que los cuidados de utilización y almacenamiento indicados en
los rótulos y en estas instrucciones sean seguidos correctamente.

2. Rosalki SB. J Lab Clin Med 1967;69:696.

3. The Committee on Enzymes of the Scandinavian Society for Clinical

Chemistry. Scand J Clin Lab Invest 1979;39:1.
4. Szasz G, Gruber W, Bernt E. Clin Chem 1976;22:650.
5. IFCC. Part 2. Reference Procedure for the Measurement of Catalytic
Concentration of Creatine Kinase. Clin Chem Lab Med 2002; 40 (6):
Labtest Diagnóstica S.A.
CNPJ: 16.516.296 / 0001 - 38
Av. Paulo Ferreira da Costa, 600 - Vista Alegre - CEP 33400-000
Lagoa Santa . Minas Gerais Brasil - www.labtest.com.br
Servicio de Apoyo al Consumidor e-mail: sac@labtest.com.br

635-642.
Revisión: Mayo, 2014 Copyright by Labtest Diagnóstica S.A.
6. Westgard JO, Barry PL, Hunt MR, Groth T. Clin Chem 1981;27:493- Ref.: 230115 Reproducción bajo previa autorización
501.

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06 Español - Ref.: 117