PROGRAMA DE INGENIERÍA DE ALIMENTOS

CURSO BIOQUÍMICA

TALLER DE BIOQUÍMICA

LABORATORIO #1

SEPARACIÓ N DE AMINOÁ CIDOS POR CROMATOGRAFÍA DE

PAPEL.

REALIZADO POR:

DOCENTE:

CINDY ELENA BUSTAMANTE VARGAS.

UNIVERSIDAD DE CORDOBA

SEDE BERASTIGUIE.

PROGRAMA DE INGENERIA DE ALIMENTOS

FACULTAD DE INGENERIA

IV SEMESTRE

2022

SEPARACIÓ N DE AMINOÁ CIDOS POR CROMATOGRAFÍA DE

PAPEL
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CURSO BIOQUÍMICA

Observe el video y lea en la guía de laboratorio la práctica correspondiente a la

separación de aminoácidos por cromatografía de papel y responda:

1. Realice un flujograma de la técnica de separación de aminoácidos por

cromatografía de papel. (1 punto)
2. Explique en qué se fundamenta la cromatografía de papel y a qué se refieren
los términos fase móvil y fase estacionaria. (0,5 puntos)
3. ¿Qué naturaleza tienen las fases estacionaria y móvil empleadas? Con una fase
móvil más polar, la separación ¿sería mejor o peor?   Explique (0,5 puntos)
4. ¿Cuál es el propósito de utilizar patrones en los análisis cromatográficos? (0,5
puntos)
5. ¿Por qué la ninhidrina es un revelador adecuado para ser utilizado en la
cromatografía en papel de aminoácidos? Explique y esquematice la reacción
química que ocurre entre la ninhidrina y los aminoácidos. (0,5 puntos)
6. En la Tabla 1, se muestran los datos obtenidos de un cronograma realizado
para identificar los aminoácidos de una muestra. Con base en esta información:
(2 puntos)
a. Calcule el factor de retraso (Rf) para cada uno de los puntos de la muestra
y explique qué significa este factor y cuál es su importancia.
b. Compare los valores de Rf obtenidos con los de los patrones e identifique
cuáles aminoácidos componían la muestra problema.
c. Analice la estructura química de los aminoácidos de la muestra y relacione
los valores de Rf determinados con la solubilidad mostrada por ellos en las
fases estacionaria y móvil.
d. ¿Cuál de las de los aminoácidos es más polar? ¿Por qué? y ¿Cuál es el
menos polar? ¿Por qué?

Tabla 1. Factores de retraso de los patrones usados y distancias recorridas por los
aminoácidos de la muestra en la cromatografía de papel.

Aminoácidos Factor de retención (Rf)

Patrones
Prolina 0,43
Alanina 0,38
Leucina 0,73
Histidina 0,20
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Muestra Distancia recorrida por los aminoácidos

(cm)
A1 2,8
A2 4,8
A3 1,3
Distancia recorrida por el solvente: 6,5 cm

DESARROLLLO.

Introducción.
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En 1906, el botánico Ruso M. Tweet realizó un experimento que

condujo al descubrimiento de lo que hoy conocemos como cromatografía.
Colocó un extracto de pigmentos vegetales en la parte superior de una
columna de vidrio rellena decarbonato de calcio (CaCO3). Al agregar éter,
observó que la mezcla original se separaba en diversas bandas coloridas que
descendían a través de la columna a diferentes velocidades.
La cromatografía es una técnica de separación de sustancias que se basa en
las diferentes velocidades con que son arrastradas cada una de ellas a través
de un medio poroso por un disolvente en movimiento.
La cromatografía en papel es un proceso muy utilizado en los laboratorios para
realizar análisis cualitativos ya que pese a no ser una técnica potente no
requiere de ningún tipo de equipamiento. La fase estacionaria está constituida
simplemente por una tira de papel de filtro. La muestra se deposita en un
extremo colocando pequeñas gotas de la disolución y evaporando el
disolvente. Luego el disolvente empleado como fase móvil se hace ascender
por capilaridad. La separación se realiza en función de la afinidad de los
solutos con las dos fases, las más solubles en agua se quedarán cerca del
punto donde se aplicó la muestra, y las menos solubles en agua y más
solubles en el disolvente llegarán más lejos.

OBJETIVOS
- conocer y aplicar la técnica de cromatografía en capa fina, sus características
y los factores en que ella intervienen.
-

REACTIVOS

PROCEDIMIENTO.

PREGUNTAS

3. ¿Qué naturaleza tienen las fases estacionaria y móvil empleadas? Con una
fase móvil más polar, la separación ¿sería mejor o peor?   Explique
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R/ La fase móvil es un disolvente, conocido como eluyente. la fase estacionaria

esta
quieta todo el tiempo y la fase móvil hace avanzar a los analitos a través de la
fase
estacionaria, es decir, los analitos se mueven en la fase estacionaria pero
impulsados
por la fase móvil. fase móvil es un disolvente no-polar como el hexano o bien
algún disolvente polar y la muestra que va a ser separada.. La fase móvil se
mueve a través
de la cromatografía de capa fina (fase estacionaria) de forma que la muestra
interacciona con la fase estacionaria y se separa. Por lo tanto, un disolvente
polar desplazará las moléculas, incluyendo las más polares, rápidamente a
través de la columna. Si el disolvente es muy polar la elución será muy rápida y
generalmente habrá poca separación de los componentes de la mezcla. Si por
el contrario el disolvente es muy apolar, no eluirán los compuestos de la
columna. Entonces podemos decir que la fase móvil no es lo mejor para esta
técnica de separación llamada cromatografía.

5. ¿Por qué la ninhidrina es un revelador adecuado para ser utilizado en la

cromatografía en papel de aminoácidos? Explique y esquematice la reacción
química que ocurre entre la ninhidrina y los aminoácidos.

R/ La ninhidrina es un poderoso agente y reactivo común para visualizar las bandas

de separación de aminoácidos por cromatografía de igual forma la podemos utilizar
con fines cuantitativos para la determinación de aminoácidos.

La ninhidrina reacciona con todos los Aminoácidos altos cuyo pH estén entre 4 y 8,
como resultado tenemos una coloración que podría variar de azul a violeta intenso,
algo que debemos aclarar es que la coloración por la ninhidrina es independiente a la
coloración original del aminoácido. Cuando trabajamos con la ninhidrina los
aminoácidos libres, en solución acuosa, al momento de ser calentados con ninhidrina
Vamos a tener como resultado una coloración violeta o azul como les explique
anteriormente esta va hacer la reacción química que vamos a observar durante
nuestra proceso de cromatografía en capa fina.

Esquema de reacción química ⚗.

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CONCLUSIÓN.
La cromatografía es un método de análisis que permite separar, aislar e
identificar componentes estrechamente relacionados presentes en
mezclas complejas. Existen diferentes tipos cromatografía en los cuales se
utilizan una fase móvil y una fase estacionaria, los tipos de cromatografía
pueden ser en papel, en capa fina, gas, líquido, en gel y de afinidad, el
que se realizó en la práctica fue cromatografía en papel, cumpliéndose el
objetivo ya que se separaron con éxito los aminoácidos y se pudo observar la
distancia recorrida de cada uno.