INSTITUTO SUPERIOR DE FORMACIÓN DOCENTE N°808

“PEDRO Y MARIE CURIE”

PROFESORADO DE EDUCACIÓN SECUNDARIA EN
QUÍMICA.

TRABAJO PRÁCTICO DE
LABORATORIO Nº3

TEMA: EXTRACCIÓN E IDENTIFICACIÓN DE PIGMENTOS

BIOLÓGICOS A PARTIR DE VEGETALES.
MATERIA: QUÍMICA EXPERIMENTAL I.
PROFESORA: JONES, NORMA BEATRIZ.
ALUMNA: CARRO, MAGALÍ AYELÉN.
COMPAÑERO DE LABORATORIO: SUAREZ, JORGE LUIS.
FECHA DE REALIZACIÓN: 01/06/2022 Y 08/06/2022.

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OBJETIVOS.

 Extraer pigmentos de distintas partes de vegetales.

 Separa los pigmentos del extracto obtenido.
 Identificar los pigmentos separados.

INTRODUCCION.

Un pigmento es un compuesto químico (biocromo) que absorbe luz en el rango de longitud de

onda de la región visible. La producción de color se debe a la estructura de la molécula del
compuesto, que reflejará la luz no absorbida y que será percibida por el ojo humano, en donde
se generarán impulsos que serán transmitidos al cerebro y serán interpretados como color.

Los pigmentos biológicos incluyen pigmentos vegetales y animales. Muchas estructuras

biológicas, como la piel, ojos, plumas y cabello contienen pigmentos, como la melanina, que se
encuentra en células especializadas llamadas cromatóforos

En los vegetales, el color que presenta un determinado órgano depende generalmente del
predominio de uno u otro pigmento o la combinación de ellos, la función principal de estos
pigmentos es absorción de la luz necesaria para la fotosíntesis, siendo la clorofila la principal
responsable de este proceso biológica. La clorofila absorbe principalmente luz violeta roja y azul
y refleja luz verde. Generalmente la abundancia de clorofila en las hojas y su presencia ocasional
en otros tejidos vegetales, como los tallos, tiñen de verde estas partes de las plantas. Aunque
en algunas hojas, la clorofila es enmascarada por otros pigmentos y a eso deben su coloración.

Existen diversos tipos de clorofilas, se diferencian en pequeños detalles de su estructura

molecular y que absorben longitudes de onda luminosas algo distintas. Además de las clorofilas,
existe otros pigmentos vegetales, incluyendo carotenoides, antocianinas y betalaínas.

Por cromatografía se pueden separar los distintos pigmentos:

• La clorofila A (verde azulado) constituye de manera

aproximada el 75% de toda la clorofila de las
plantas verdes, estando presente también en las
algas verdeazuladas y en células fotosintéticas más
complejas.
• La clorofila B (verde amarillento) es un pigmento
accesorio presente en vegetales y otras células
fotosintéticas complejas; absorbe luz de una

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 longitud de onda diferente y transfiere la energía a la clorofila A, que se encarga de
transformarla en energía química.
• Las clorofilas C y la D son propias de algas y bacterias.
• Carotenoides: actúan como pigmentos accesorios
en el proceso de la fotosíntesis. Existen dos tipos:
carotenos (color amarillo, naranja o rojo) y
xantofilas (amarillo).

• Antocianinas: su principal función es la

percepción visible para la atracción de animales
para la polinización y la dispersión de semillas
(colores rojos, azulados o violetas).

• Betalaínas: su función es la atracción de

polinizadores y dispersores, la presencia de este
pigmento en plantas es mutuamente
excluyente de la presencia de antocianinas. Se
dividen en dos subgrupos, las betaxantinas (b)
(amarillos a naranjas) y betacianinas (c) (rojo y violeta).

La cromatografía, el método utilizado para la separación e identificación de pigmentos en este

laboratorio, es una técnica de separación física en la cual, los componentes a separar son
distribuidos entre dos fases, una de las fases es estacionaria mientras la otra fase es móvil y se
mueve en una dirección definida.

El término cromatografía fue introducido en 1906 por Tswett, para hacer referencia a la
separación de los pigmentos contenidos en extractos vegetales, conforme éstos se filtraban a
través de una columna rellena con un sólido poroso.

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Por tanto, la cromatografía comprende procesos en los que los componentes de una mezcla,
disueltos en una fase móvil, se van desplazando con diferente velocidad a través de una fase
estacionaria. La adecuada elección de estas fases puede permitir que tales diferencias se
traduzcan en una separación efectiva de los solutos, a la vez que éstos pueden identificarse
atendiendo a su particular velocidad de avance. En cuanto a la naturaleza del proceso
cromatográfico, los componentes disueltos de una mezcla se mueven continuamente entre las
dos fases, se asocian momentáneamente con la fase estacionaria, no migran, mientras todos los
componentes momentáneamente presentes en la fase móvil migran a la misma velocidad que
ésta. Entonces, la separación no ocurre en ninguna de las dos fases, sino que es el resultado de
continuos movimientos de las moléculas entre ellas. Los componentes se separan cuando uno
de ellos pasa a una velocidad diferente en la fase estacionaria respecto del resto. El tiempo
empleado por cualquiera de los componentes en la fase estacionaria depende de su afinidad
por ésta en las condiciones ensayadas.

La cromatografía se divide en: cromatografía en fase líquida y en fase gaseosa. La primera se

subdivide en cromatografía por adsorción, cromatografía de partición en columna y
cromatografía en papel y en placa.

La cromatografía en papel es un método de partición

que utiliza este material como fase estacionaria. La
mezcla a analizar se deposita en una de los extremos
de la tira de papel desde donde el solvente sube o
desciende por capilaridad o por acción de la gravedad
y aparecen, después del desarrollo completo,
numerosas manchas a diferentes niveles. La
visualización o revelado de las manchas que dejan los
solutos sobre la fase estacionaria se hace de diferentes
maneras, dependiendo de la naturaleza de los componentes a separar. Las sustancias
coloreadas dejan manchas visibles, como es el caso de los pigmentos vegetales.

MATERIALES.

Los materiales utilizados para la realización del laboratorio fueron:

 Balanza electrónica.
 Pipeta.
 Tubos de ensayo.
 Vasos de precipitado.
 Gradilla.

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 Probeta.
 Mortero.
 Placa de Petri.
 Jeringa de 20 ml.
 Alcohol etílico 96%.
 Frascos
 Cristalizador
 Papel de filtro
 Papel de filtro de café
 Embudo
 Hoja canson
 Tiza
 Hojas de vegetales (espinaca, remolacha).
 Fruta (maracuyá).

MÉTODOS.

 Actividad experimental realizada el día 01/06/2022: Extracción e identificación de

pigmentos de maracuyá y de hojas de espinaca.
Para realizar esta actividad, primero se colocó la muestra (maracuyá u hojas de espinaca),
previamente despedazada manualmente, en el mortero, luego se agregó alcohol etílico 96%
y se machacó la muestra con ayuda del pilón hasta que el líquido adquirió una coloración
intensa. Se filtró la preparación con la ayuda del embudo y el papel de filtro. La muestra fue
recolectada en tubos de ensayo.

El líquido obtenido luego de la filtración se colocó en una placa de Petri donde se colocó una
tiza y un trozo de hoja canson o papel de filtro de café para que el filtrado ascienda.

5
 Actividad experimental realizada el día 08/06/2022: Extracción e identificación de
pigmentos de maracuyá y de hojas de espinaca.
Para realizar la extracción de pigmentos, los pasos a seguir fueron similares a los del 01/06,
pero con la diferencia de que utilizamos 5g de hojas de espinacas y 5g hojas de remolachas.
Colocamos los 5 g de hojas de remolacha con 20 ml de alcohol etílico en el mortero y se
mezcló hasta obtener un extracto.
Con ayuda de un embudo y papel de filtro, filtramos ese extracto y del líquido obtenido,
retiramos 20 ml para analizar con la aplicación Lab4Chemestry, con el remanente de
extracto, repetimos las cromatografías, en papel de filtro y tiza.
Luego realizamos el mismo procedimiento con las hojas de espinaca.

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RESULTADOS ESPERADOS.

RESULTADOS OBTENIDOS.

Actividad experimental realizada el día 01/06/2022: Extracción e identificación de pigmentos

de maracuyá y de hojas de espinaca por cromatografía.

Cromatografía realizada con hoja de espinaca, para este ensayo se utilizó como fases
estacionarias hoja canson, papel de filtro de café y una tiza.
 Hoja canson: la hoja se cayó en el líquido por lo que no se pudo
concluir con el ensayo, pero al comienzo, se pudo observar como
avanzaba un frente amarillo seguido, un poco más retrasado, por
uno verde.

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 Tiza: en esta cromatografía, en la que también se visualizó como
subían los colores, primero el color amarillo y luego el verde, pero se
colocó mucha cantidad de extracto o se lo dejo en contacto con este
mucho tiempo, por lo que el filtrado rebaso la tiza, quedando toda
color verde.

 Papel de filtro de café: debido al grosor, este papel de filtro tiende a doblarse fácilmente,
por lo que ideamos un mecanismo para que se mantuviera tan recto como sea posible sobre
el líquido, este consistió de un frasco de vidrio con una pequeña cantidad de extracto y
horizontalmente colocamos el trozo de papel de filtro, luego lo tapamos para que no se
evapore tanto el alcohol y, por consiguiente, suban más los pigmentos, pero lo dejamos
mucho tiempo (porque se terminó el horario de clase) y, como consecuencia de la falta de
evaporación, todos los pigmentos completaron el largo del papel.

En ninguno de las tres cromatografías se pudo calcular el rf.

Cromatografía realizada con maracuyá: para este ensayo se utilizó como fase
estacionaria una tiza.

Se visualizó el ascenso de un pigmento color amarillo, que podrían ser xantofilas.

Debido a un mal entendido, no se calculó el rf.

Actividad experimental realizada el día 08/06/2022: Extracción e identificación de pigmentos

de hojas de espinaca y de hojas de remolacha por cromatografía y análisis del filtrado con la
aplicación Lab4Chemestry.

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Cromatografía realizada con hoja de espinaca, para este ensayo se utilizó como fases
estacionarias papel de filtro y una tiza.
 Papel de filtro: se visualizó el ascenso de amarillo y verde.
Color Pigmento sospechado Distancia Recorrida RF
Amarillo Carotenoides 6,5 1
Verde Clorofila 6,25 0,96

 Tiza: se puedo observar el ascenso de tres pigmentos color amarillo,

verde amarillento y verde.
Color Pigmento sospechado Distancia Recorrida RF
Amarillo Carotenoides 7,5 1
Verde amarillento Clorofila b 1,75 0,23
Verde Clorofila a 0,8 0,11

Cromatografía realizada con hoja de remolacha, para este ensayo se utilizó como fases
estacionarias papel de filtro y una tiza.
 Papel de filtro: se distinguen a simple vista tres colores, es decir que por lo menos
hay tres pigmentos en la muestra vegetal.
Color Pigmento sospechado Distancia Recorrida RF
Amarillo Carotenoides 8 1
Verde Clorofila 7,85 0,98
Rosa Betacianina 0,6 0,075

 Tiza: se puede observar la separación de cuatro colores distintos, indicativo de

cuatro pigmentos.
Color Posible pigmento Distancia Recorrida RF
Amarillo Xantófilas/Betaxantinas 3 1
Rosa Betacianina 2,7 0,9
Verde amarillento Clorofila b 1 0,3
Verde Clorofila a 0,7 0,23

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Otras cromatografías:

Realicé dos cromatografías en papel de filtro, con filtrados de compañeros, unos era un extracto
de repollo y el otro era una mezcla de todos los extractos.

En el preparado de repollo, se pueden visualizar pigmentos color violeta y azul, podría tratarse
de antocianinas.

En la mezcla de extractos, en el cual había una combinación de filtrados de hojas de: espinaca,
acelga, remolacha, ciruelo, árbol amarillo; repollo, remolacha (tallo bulbo), se visualizaron 3
colores: rosa, verde y azul, podrían ser de batalaínas, clorofila y antocianinas, respectivamente;
este patrón de manchas tiene sentido ya que las cantidades agregadas de cada extracto en la
muestra mezcla fue al azar y se hizo la cromatografía con muy poca cantidad de muestra.

De izquierda a derecha:
cromatografía en papel de filtro de
repollo, cromatografía en tiza de
repollo y cromatografía en papel de
filtro de mezcla de extractos.

NOTA: Debido a la ausencia de fotos de los resultados

obtenidos en la experiencia del día 01/06, decidí repetir el
procedimiento en mi casa, respetando el procedimiento del
laboratorio y utilizando hojas de espinada como materia
vegetal de partida para el extracto y filtro de café como fase
estacionaria para la cromatografía, debido a que las
condiciones ambientales fueron distintas, los resultados
fueron, como era de esperarse, distintos. Cabe destacar que
se notó la presencia de pigmentos naranjas, infiero que se
tratan de carotenos, los cuales no pudimos visualizar en la
experiencia y me pareció interesante agregarlo en esta nota.

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 Color Posible Pigmento Distancia Recorrida RF
Naranja Carotenoides 7,5 1
Amarillo Xantófilas 6 0,8
Verde claro Clorofila b 3,5 0,47
Verde oscuro Clorofila a 2,9 0,39

Análisis de pigmentos presentes en el filtrado con la aplicación Lab4Chemestry.

 Muestra 1: Espinaca
 Muestra 2: Acelga
 Muestra 3: Remolacha

En la muestra 1 y 2 se ve que predomina la presencia de colores verdes, teniendo mayor

intensidad los de la muestra 2. En la muestra 3 se observan colores naranjas.

CONCLUSIÓN.

En esta práctica de laboratorio se pudo cumplir con los objetivos propuestos, habiendo sido
posible la separación e identificación de los distintos pigmentos presentados en la introducción,
clorofila (a y b), carotenoides (carotenos y xantofilas), antocianinas y betalaínas (betaxantinas y
betacianinas).

La separación de los pigmentos se da por su peso molecular, el tamaño de los poros del filtro
elegido, la distribución tridimensional de la molécula del pigmento y las interacciones débiles
que puedan ocurrir entre: el pigmento con el solvente (alcohol) y el pigmento con la fase
estacionaria (filtros varios y tiza), que determinará una mayor afinidad con uno u otro y por lo
tanto un mayor o menor ascenso.

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Los carotenoides, pigmentos anaranjados, no fueron identificados en ninguna de las
experiencias realizadas en clase, puede que sea por un bajo contenido de dicho pigmento en los
vegetales, o en las porciones vegetales elegidas; es extraña su ausencia en las hojas ya que son
pigmentos auxiliares en la fotosíntesis. Una posible causa a la ausencia de carotenoides en la
cromatografía puede ser una gran afinidad por la fase estacionaria (papel de filtro y tiza), por lo
tanto, que quede retenido más tiempo por esta y termine siendo enmascarada por el verde de
la clorofila. También podría ser que los carotenoides tengan una baja afinidad por el solvente
utilizado (alcohol etílico), esta sospecha, sin embargo, la descarto ya que, como se comentó más
arriba, cuando realice la experiencia de manera casera, utilizando el mismo solvente, si se pudo
visualizar el pigmento en cuestión. Las condiciones medioambientales (temperatura, humedad)
podrían afectar las afinidades pigmento-solvente y pigmento-fase estacionaria, la estructura
tridimensional del pigmento y la velocidad de evaporación del solvente y consecuentemente no
permitir el avance del pigmento. Los filtros utilizados y las condiciones medioambientales (en el
laboratorio y en mi casa) fueron distintas, por lo que, quedaría descartar esas hipótesis.

Las xantofilas, pigmentos carotenos amarillos, y la clorofila, pigmentos verdes, fueron

identificados en los extractos de las hojas analizadas, como era de esperarse, ya que las hojas
son los órganos encargados de realizar la fotosíntesis y, tanto las xantofilas como la clorofila,
son pigmentos cuya función es utilizar la energía lumínica para el proceso fotosintético.

Los pigmentos carotenoides y xantófilas, a pesar de tener

estructura molecular similar, se separan y por lo tanto se
pueden identificar fácilmente por cromatografía,
probablemente, los grupos hidroxilos presentes en las
xantófilas interactúen de alguna forma haciéndolas
permanecer más retrasados respecto a los carotenoides.

Algo similar, ocurre con las clorofilas a y b, a pesar de su gran

similitud molecular, las mínimas diferencias encontradas
(grupo metilo en clorofila a y grupo carboxilo en clorofila b)
hacen que interaccionen de manera diferencial y, por tanto,
puedan separarse por cromatografía.

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Además de clorofila y xantófilas, en las hojas de remolachas, se
identificó la presencia de betalaínas. Las betacianinas, por su color
característico son fáciles de distinguir, pero la intensidad débil podría
indicarnos una menor concentración de este pigmento en comparación
con la cantidad presente en los tallos bulbos, observado en resultados
de compañeros. Las presencias de betaxantinas, no se puede confirmar,
ya que podría no haber, o podrían estar confundiéndose o mezclándose
con las xantófilas.

Debido a que las hojas, como se dijo antes, son órganos fotosintéticos
existe gran probabilidad de que haya pigmentos accesorios a la fotosíntesis como las xantofilas
en las hojas de remolacha, y por ello infiero, con más seguridad, la presencia de este pigmento
que la presencia de betaxantinas, que tienen función reproductora, aunque no descartaría la
presencia de betaxantinas, si no que haría la experiencia nuevamente controlando las
cantidades, tiempos e idénticos filtros para tratar de identificarlas.

Las antocianinas, fueron observadas en el repollo, se distinguieron dos tipos, azules y violetas,
podría tratarse de delfinidina, petunidina o malvidina. Para la cromatografía en papel de filtro
de la mezcla se utilizó muy poca cantidad por lo que ascendió poco, pero se observó una “rayita”
azul arriba, que nos indica que es pequeña de tamaño o tienen poca afinidad por la fase
estacionaria o gran afinidad por el solvente, y por lo tanto se aleja del punto de siembra.

No se puede concluir nada a partir de los coeficientes Rf obtenidos ya que este es una constante
para cada sustancia, siempre que la determinación se realice en las mismas condiciones
operativas en cuanto a tipo de papel, temperatura, tiempo de corrida, solventes usados,
volumen y concentración de las sustancias aplicadas, y en nuestra clase utilizamos distintas fases
móviles, tampoco tuvimos en cuenta el tiempo ni las cantidades.

ACTIVIDADES.
Responder las siguientes preguntas:

 ¿Qué pigmentos lograste separar e identificar en cada muestra vegetal? ¿Fueron los mismos
para todos los vegetales utilizados?

Logre separar e identificar clorofila a, clorofila b, xantófilas, carotenos, betaxantinas y

betacianinas. No, en las hojas de espinacas encontramos clorofila a, clorofila b, xantófilas y
carotenos; en las hojas de remolachas, además de los recién comentados, se identificó
betacianinas y, posiblemente, betaxantinas. Del maracuyá se obtuvo xantofilas.

 ¿Por qué es posible separar pigmentos vegetales utilizando alcohol? ¿Qué otros solventes
se pueden usar?

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 Es posible separar pigmentos vegetales utilizando alcohol porque los pigmentos son solubles
en el alcohol, también se podría haber utilizado cetonas, ésteres, cloroformo, tetracloruro
de carbono, tolueno, etc.

 ¿Cuál es la función de los pigmentos en las plantas?, ¿podría una planta vivir sin pigmentos?

Los pigmentos tienen función fotosintética y atracción de polinizadores y de dispersores de

semillas.

No, las plantas no podrían vivir sin pigmentos, ya que los que son fotosintéticos absorben la
energía de la luz, que excita un electrón que pasa a un estado de mayor energía. Cuando el
electrón cae de nuevo a un nivel de menor energía, la energía que se desprende termina por
impulsar las reacciones químicas necesarias para el desarrollo y crecimiento del vegetal.

 ¿Cuál es el principal pigmento que contienen las remolachas?

Los principales pigmentos que contienen las remolachas son las betalaínas, betaxantinas y
betacianinas.

 ¿Todos los pigmentos vegetales son fotosintéticos?

No, todos los pigmentos vegetales no son fotosintéticos hay algunos cuya función es dar
colores llamativos para atraer polinizadores y dispersores de semillas.

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BIBLIOGRAFÍA.
 Apunte proporcionado por la Profesora.

WEBGRAFÍA.
 http://catarina.udlap.mx/u_dl_a/tales/documentos/lqf/hernandez_m_a/capitulo1.pdf
 https://4.bp.blogspot.com/-G8AfbVwBWsE/WYp79-PQsUI/AAAAAAAAMBg/YjLpJij-
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 https://c8.alamy.com/compes/2gd25nc/alfa-caroteno-y-beta-caroteno-estructura-
quimica-de-caroteno-y-caroteno-2gd25nc.jpg
 https://d1wqtxts1xzle7.cloudfront.net/48551062/extraccion-y-separacion-de-pigmentos-
vegetales-120929012752-phpapp01_1-with-cover-page-
v2.pdf?Expires=1655153778&Signature=QFcC1bhh~TikdEW2vapGJQP1zbhK7qjKIKhP8Wh
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 https://pbs.twimg.com/media/C7XFSXuVwAAjSNU.jpg
 http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0120-548X2008000300002
 http://catarina.udlap.mx/u_dl_a/tales/documentos/lqf/hernandez_m_a/capitulo1.pdf
 https://www.conicet.gov.ar/new_scp/detalle.php?keywords=&id=21218&inst=yes&congr
esos=yes&detalles=yes&congr_id=951857
 https://repositorio.uncp.edu.pe/bitstream/handle/20.500.12894/1231/HUAMAN%20COG
OGA.pdf?sequence=1
 https://www.redalyc.org/journal/339/33960068002/html/
 https://www.degruyter.com/document/doi/10.1515/pac-2017-0111/html
 https://ri.conicet.gov.ar/bitstream/handle/11336/75465/CONICET_Digital_Nro.3655a360-
b03b-44c8-8519-bc747d073f7c_A.pdf?Sequence=2&isallowed=y
 https://revistas.udea.edu.co/index.php/actbio/article/view/330549/20786880
 https://fcf.unse.edu.ar/archivos/series-didacticas/SD-44-Cromatografia-CORZO.pdf

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