FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

CARRERA DE LABORATORIO CLINICO

ANALISIS INSTRUMENTAL

- ACTIVIDADES DE APRENDIZAJE AUTONOMO -

UNIDAD: 1

TEMA:

Ley de Lambert Beer, y su Aplicación en el Laboratorio Clínico.

- DATOS INFORMATIVOS -

SAUL EDUARDO JIMENEZ VERDEZOTO

2° SEMESTRE
“A”

FECHA DE ELABORACIÓN
23/05/2022
 METODOLOGÍA Y HERRAMIENTAS DIGITALES PARA ACTIVIDADES ACADÉMICAS YADMINISTRATIVAS

TEMA
Ley de Lamber Beer y su Aplicación en el Laboratorio Clínico

OBJETIVO GENERAL

Analizar e inferir la ley de Lamber Beer y su aplicación en el Laboratorio clínico.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS

 Adquirir conociemintos sobre la la Ley de Lamaber Beer

 Dar a conocer los equipos de laboratorio clínico que utlizan el método de la ley de
Lamber Beer.
 Justificar e identificar el espectrofotómetros y fotocolorímetros como instrumento en
el área de laboratorio clínico.

MARCO TEÓRICO

Antecedentes

La ley de Lamber- Beer fue descubierta por diferentes personajes a lo largo de la historia
en 1729 por el matemático y astrónomo francés Pierre Bouguer. Luego por el filósofo y
matemático alemán, Johann Heinrich Lambert en 1760 y por último el físico y matemático
también alemán, August Beer en el año 1852.
La ley de Lamber- Beer nos dice que “es un medio o método matemático, el cual es
utilizado para expresar de modo que la materia absorbe la luz. La ley de Beer afirma que la
totalidad de luz que emana de una muestra puede disminuir debido a tres fenómenos” (1)
1. El número de materiales de absorción en su trayectoria, lo cual se
denomina concentración
2. La distancia del trayecto óptico
3. Las probabilidades que hay de que el fotón de esa amplitud particular de onda
pueda absorberse por el material. Esto es la absorbencia o también coeficiente de extinción.
(1)
La ley de Lambert-Beer establece que la absorbancia está directamente relacionada con
las propiedades intrínsecas del analito, con su concentración y con la longitud de la trayectoria
del haz de radiación al atravesar la muestra.
𝑨 = 𝑬𝑪𝑫
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Donde:
A: es la luz absorbida,
E: es la absorción molar,
C: es la concentración de la sustancia absorbida d es la trayectoria recorrida por la luz transmitida
dentro de la muestra (1).
Por medio de una transmisión de luz visible se plantea que un haz de luz de intensidad I0
que incide perpendicularmente sobre una muestra, presentará una interacción entre el haz de luz y
el compuesto de la muestra en el cual resultará radiación incidente absorbida (Ia) y radiación
transmitida (It), de modo que se satisfaga la siguiente ecuación:
𝑰𝑶 = 𝑰𝑨 + 𝑰𝑻
Se define que la transmitancia (T) de una muestra como la cantidad de luz transmitida (I),
que llega al detector y una vez que ha atravesado la muestra, (I t) será la relación de la cantidad de
luz que incidió sobre la muestra I0, la transmitancia se representara en forma porcentual (2).
𝑰𝒕
𝑻 = ( ) ∗ 𝟏𝟎𝟎%
𝑰𝒐
Y la absorbancia se representará de la siguiente ecuación:
𝑰𝒕
𝑨 = −𝑳𝒐𝒈𝟏𝟎
𝑰𝒐
En donde la cantidad de luz absorbida dependerá de la distancia que atraviesa la luz
dentro de la solución. (2)
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Equipos que de Laboratorios Clínicos que realizan la espectrometría

Espectrofotómetro

Utiliza las propiedades de la luz y su interacción con otras sustancias, para determinar la
naturaleza de las mismas. En general, la luz de una lámpara de características especiales es
guiada a través de un dispositivo que selecciona y separa luz de una determinada longitud de
onda y la hace pasar por una muestra. La intensidad de la luz que sale de la muestra es captada y
comparada con la intensidad de la luz que incidió en la muestra y a partir de esto se calcula la
transmitancia de la muestra, que depende de factores como la concentración de la sustancia véase
en figura 1.

Figura 1. El espectrofotómetro GENESYS de Thermo es aprovechado al máximo sus

requisitos para las mediciones de rutina de UV-Vis / Vis de alto rendimiento (4).

Sistema de lectura
La señal que sale del detector recibe diversas transformaciones. Se amplifica y se
transforma para que su intensidad resulte proporcional al porcentaje de
transmitancia/absorbancia. Existen sistemas de lectura de tipo análogo (muestra la magnitud
leída sobre una escala de lectura) o digital (muestra la magnitud leída en una pantalla). Los
indicadores de tipo análogo reciben tradicionalmente el nombre de metros. Su exactitud depende,
entre otros factores, de la longitud de la escala y del número de divisiones que tenga. (Mientras
más divisiones, más exacto). Su principal desventaja es que pueden ser mal leídos, por la fatiga
de los
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operadores o errores, cuando disponen de varias escalas, al tratar de identificar las escalas sobre
las que deben realizar la lectura. (1)
Para el funcionamiento de un espectrofotómetro se requiere lo siguiente:
1. Una fuente de suministro eléctrico de acuerdo con las normas y estándares
implementados en el país. En los países americanos se utilizan, por lo general, voltajes de 110 V
y frecuencias de 60 Hz.
2. Un ambiente limpio, libre de polvo.
3. Una mesa de trabajo estable, que esté alejada de equipos que generen
vibraciones (centrífugas, agitadores).(5)

Fotocolorímetros

El fotocolorímetro es un instrumento que mide la absorción de la radiación electromagnética

de una muestra basándose en la comparación de colores véase en figura 2.

Figura 2. Fotocolímetro (6)

Utiliza filtros para realizar mediciones en las regiones del espectro visible, ultravioleta o
infrarrojo. Este método analítico se puede utilizar tanto en sustancias coloreadas como en
sustancias, que, mediante una reacción, generen la formación de complejos coloreados con
marcadores especiales. Se emplea en determinaciones clínicas, bromatológicas y bioquímicas.
Como ejemplos pueden citarse:

 análisis de sangre

 materiales metalúrgicos
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Analizador de electrolitos
El analizador de electrolitos es un instrumento que puede ser encontrado en los
laboratorios clínicos o de biología, véase en figura 3. Es utilizado en hospitales para medir K+,
Na+, Cl-, Ca2 +, iones Li y TCO2, así como valores de pH, AG en muestras de sangre
completa, suero, plasma, solución de orina diluida. (8)

Figura 3. Analizador de electrolitos

La espectrofotometría de absorción atómica es utilizada para determinación cuantitativa

de diferentes metales en matrices como suelo y agua. El caso específico del sodio y potasio se
han realizado estudios en aguas de riego, permitiendo evaluar la calidad de la mismas en relación
con los nutrientes aportados al área de cultivo. (9)
Los fluidos que circulan por el cuerpo humano contienen electrolitos, éstos son elementos
o minerales que al estar disueltos se disocian en iones y transportan una carga eléctrica El sodio y
el potasio son elementos químicos indispensables para los seres vivos, ambos cationes pertenecen
al grupo de los metales alcalinos y son abundantes en la corteza terrestre 2,8 % (Na) y 2,6 % (K).
(9).
RESULTADOS
El espectrofotómetro se usa en el laboratorio con el fin de determinar la concentración de
una sustancia en una solución, permitiendo así la realización de análisis cuantitativos en donde la
luz, al pasar o interactuar con diversos medios, presenta una serie de fenómenos, entre los que
destacan la reflexión, refracción, difracción, absorción, difusión, polarización y otros que son
utilizados en diversos instrumentos y dispositivos, véase la siguiente tabla 1.
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Región del espectro luminoso Rango de longitud de onda

Ultravioleta 10-200 nm
Ultravioleta cercano 200-280 nm
Luz visible 280-780 nm
Infrarrojo cercano 780-3 000 nm
Infrarrojo medio 3 000-20 000 nm
Infrarrojo lejano 30 000-300 000 nm

Tabla 1. los rangos de longitud de onda en donde se utiliza el espectro luminoso para
realizar pruebas de espectrofotometría
Con respecto a la interacción de la luz con la materia, el siguiente esquema ayuda a
entender la complejidad de los fenómenos que ocurren:

Figura 4. Interacción de luz con la materia (3)

En donde se si aplica la ley de lamber con la siguiente ecuación de manera que la
absorbancia [A] se relaciona con la transmitancia [T]:
𝑨 = 𝑳𝒐𝒈 𝟏 = 𝑳𝒐𝒈 𝑰𝑶 = −𝑳𝒐𝒈 𝟏𝟎𝗌∗𝒄∗𝒍 = 𝗌 ∗ 𝒄 ∗ 𝒍
𝟏𝟎 𝟏𝟎 𝟏𝟎
𝑻 𝑰𝑻

Para el cálculo de la Linealidad fotométrica se deberá realizar un estudio de regresión

lineal de la recta hallada:

Y=a+bX
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Donde b es la pendiente de la recta y a la ordenada al origen. La pendiente b representa la

Linealidad fotométrica. La recta ideal sería Y = X por lo cual la pendiente ideal es 1,00 que
indica que el instrumento responde linealmente en el rango de absorbancias estudiadas.
Por el método de cuadrados mínimos se deberán calcular a y b.

Figura 5. Linealidad fotométrica

En donde su fórmula es:

𝑫𝑬 ∗ 𝟏𝟎𝟎
𝑰𝒎𝒑𝒓𝒆𝒄𝒊𝒔𝒊ó𝒏 𝒇𝒐𝒕𝒐𝒎é𝒕𝒓𝒊𝒄𝒂 = 𝑪𝑽 % =
𝑿

Límites de aceptabilidad:
Precisión óptima: CV% menor de 0,5%
Precisión aceptable: CV% menor de 1%

El valor de transmitancia porcentual es definido como la luz parásita existente en la zona

espectral.

Para el análisis de los electrolitos la concentración de sodio en estas formulaciones ha sido

ampliamente cuestionada a lo largo del tiempo. Principalmente se discute sobre la seguridad de
aquellas sales de rehidratación oral que contienen 90 mmol/L de sodio
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Figura 6. Valores de análisis de los electrolitos la concentración de componentes del

cuerpo.
En la figura 7 se muestran dos de las curvas realizadas para determinar el rango para la
concentración de trabajo. La curva “a” es para el sodio y la curva “b” para el potasio.

Figura 7. Curvas de calibración para análisis de sodio (a) y potasio (b)

DISCUSIÓN

En los resultados de la investigación se pudo entender que la absorbancia es proporcional

a las concentraciones de las especies atenuantes en la muestra de material. La derivación
moderna de la ley de Beer- Lambert combina las dos leyes y correlaciona la absorbancia tanto a
las concentraciones de las especies atenuantes, así como el espesor del material de muestra que
coincide con las investigaciones de Rico (1) y Domínguez (2) de acuerdo con la formulación de
la ley de Lambert Beer
Para los valores de la fotometría se discute que su reultado arroja mediante una ecuación
lineal se basa en la medida de la intensidad y la longitud de onda de la radiación que ha
atravesado y se origina una precisión aceptable.
Primeramente, según la figura 7, en el caso del sodio, se observa que la linealidad se
altera a partir de concentraciones superiores a 1,0 μg/ml, ya que en estos puntos se presenta
mayor desviación respecto a la línea de tendencia. Esto fue habitual en las curvas realizadas, por
lo que se selecciona como rango de trabajo para sodio concentraciones entre 0,5 -1,0 μg/ml.
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Para el potasio, se observó que el punto cinco (Con: 2,0 μg/ml), de la recta presenta una
mayor desviación, por lo que con el objetivo de obtener una mejor linealidad se escoge
trabajar con concentraciones entre 0,5 -1,5 μg/ml.

CONCLUSIONES

Gracias a todo lo anterior, podemos interpretar que la ley de Lambert nos permitirá
conocer la absorción de radiación a una longitud de onda determinada, mediante la absorbancia si
es directamente proporcional a la concentración de la sustancia absorbente.
Se concluye que en los equipos de laboratorio clínico nos permitirá mediante la técnica de
la espectrofotometría determinar la transmitancia de una sustancia y se obtendrá resultados
analíticos que permitirá conocer el resultado optimo para conocer una determinada enfermedad.

RECOMENDACIONES

Se recomienda que se siga la utilización de esta ley para desarrollar un mejor resultado en
sus análisis y poder determinar enfermedades que sigue obstruyendo en la salud de los seres
humanos
El uso del espectrofotómetro y el fotocolímetro prosiga con la digitalización y
modernización de su sistema analítico ya que por medio de la absorbancia y los rangos de
longitud de onda arroja resultados porcentuales que a medidas de los avances tecnológicos su
resultado sea sin margen de error.

BIBLIOGRAFÍA

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y Construcción de un Sistema Dosimétrico Tejido-equivalente Frickegel para aplicaciones en
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en: http://revistaalfim.org/site/php/archivos/RT0201032015-9-16.pdf
2. Domínguez Domínguez R. Desarrollo de un espectrómetro de bajo costo y
desarrollo de una fuente de luz de amplio espectro para estudios de reflectancia difusa. 2014.
3. novachem. Espectrofotometro UV Vis [Internet]. 2019. Disponible en:
https://www.novachem.com.ec/producto/espectrofotometro-uv-vis/
4. Manual de mantenimiento para equipo de laboratorio [Internet]. Washington D. C.;
2005. Disponible en:
https://www.exactas.unlp.edu.ar/uploads/docs/manual_de_mantenimiento.pdf
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sci.com/support/manuals/labfrz2.pdf)
6. Fotocolimetría [Internet]. Argentina; 1950. Disponible en:
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Espectrofotómetros y Fotocolorímetros: Guía práctica de actualización. Acta bioquím. clín.
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http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0325-29572005000400014&lng=es
8. adminCotecno. Analizador De Electrolitos » COTECNO [Internet]. COTECNO |
Equipamiento Científico | Prospecciones, Auscultación, Geofísica, Ingeniería. 2018 [citado el
24 de mayo de 2022]. Disponible en: https://www.cotecno.cl/analizador-de-electrolitos/
9. Alvarado V. Patricia, Peñaloza L. Rosario. Determinación de la sensibilidad y
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