INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL

Unidad Profesional Interdisciplinaria

de Biotecnología

Laboratorio de Métodos Cuantitativos

Reporte 17
DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE CAFEÍNA POR
ESPECTROFOTOMETRÍA UV-VIS

Integrantes:
Arteaga Galicia Leonardo
Caballero Campos Brenda
Ramirez Gatica Ixchel
Rodríguez Bautista Sofia Daniela

Equipo 3
Grupo: 2LM1

Profesores:
Guerrero Pacheco Adriana
Hernández Muñoz Alfonso

Fecha de entrega:
14.05.2021
OBJETIVOS
• Identificar la longitud máxima absorción de la cafeína.
• Cuantificar el contenido de cafeína en muestras comerciales.

INTRODUCCION

La cafeína es un compuesto químico que se encuentra de forma natural en

componentes vegetales como los granos de cacao y café, las hojas de té, las bayas
de guaraná y la nuez de cola, cuyo consumo se remonta a muchos años atrás y se
consume desde hace mucho tiempo. Se añade a una variedad de alimentos como
los pasteles, los helados, los dulces y las bebidas de cola. También las bebidas
llamadas energéticas contienen cafeína, además de otros ingredientes como la
taurina y la D-glucurono-γ-lactona. Se encuentra, asimismo, en combinación con la
p-sinefrina en una serie de suplementos alimenticios que se comercializan con fines
adelgazantes y para mejorar el rendimiento deportivo. Algunos medicamentos y
cosméticos contienen igualmente cafeína. Consumida por los humanos, la cafeína
estimula el sistema nervioso central, y en dosis moderadas aumenta el estado de
alerta y reduce la somnolencia.
La espectrofotometría UV-visible es una técnica analítica que permite determinar la
concentración de un compuesto en solución. Se basa en que las moléculas
absorben las radiaciones electromagnéticas y a su vez que la cantidad de luz
absorbida depende de forma lineal de la concentración. Para hacer este tipo de
medidas se emplea un espectrofotómetro, en el que se puede seleccionar la longitud
de onda de la luz que pasa por una solución y medir la cantidad de luz absorbida
por la misma.
El fundamento de la espectroscopía se debe a la capacidad de las moléculas para
absorber radiaciones, entre ellas las radiaciones dentro del espectro UV-visible. Las
longitudes de onda de las radiaciones que una molécula puede absorber y la
eficiencia con la que se absorben dependen de la estructura atómica y de las
condiciones del medio (pH, temperatura, fuerza iónica, constante dieléctrica), por lo
que dicha técnica constituye un valioso instrumento para la determinación y
caracterización de biomoléculas.
La ley de Lambert-Beer expresa la relación entre absorbancia de luz monocromática
(de longitud de onda fija) y concentración de un cromóforo en solución:
A = log I/Io = ε·c·l

La absorbancia de una solución es directamente proporcional a su concentración, a

mayor número de moléculas mayor interacción de la luz con ellas; también depende
de la distancia que recorre la luz por la solución a igual concentración, cuanto mayor
distancia recorre la luz por la muestra más moléculas se encontrará; y por último,
depende de ε, una constante de proporcionalidad, denominada coeficiente de
extinción, que es específica de cada cromóforo.
La ley de Lambert-Beer se cumple para soluciones diluidas; para valores de c altos,
ε varía con la concentración, debido a fenómenos de dispersión de la luz,
agregación de moléculas, cambios del medio, etc.
La medición de absorbancia de la luz por las moléculas se realiza en unos aparatos
llamados espectrofotómetros. Aunque pueden variar en diseño, en especial con la
incorporación de ordenadores para el análisis de datos, todos los
espectrofotómetros constan de:

1. Una fuente de energía radiante: lámpara de deuterio y tungsteno.

2. Un monocromador para la selección de radiaciones de una determinada

longitud de onda: filtros, prismas, redes de difracción.

3. Un compartimento donde se aloja un recipiente transparente (cubetas o

tubos) que contenga la muestra Pueden ser de vidrio, cuarzo o plástico
transparente. Para medir en UV se deben usar las de cuarzo o sílice fundido,
porque el vidrio no transmite la radiación UV.

4. Un detector de luz y un amplificador convertidor de las señales luminosas en

señales eléctricas.

5. Un registrador o sistema de lectura de datos.

 • OBTENCION DE LA LONGITUD DE ONDA MAXIMA DE LA CAFEINA.

Realizar en el
Preparar una solución espectrofotómetro de
de ppm de cafeína luz UV-Vis un barrido
de 200-350 nm.

Seleccionar la longitud Traza la grafica de

de onda máxima (λ absorbancia vs
max). longitud de onda(nm).

• MEDICION DE LAS OBSERBANCIAS DE CADA UNA DE LAS

SOLUCIONES ESTANDAR DE CAFEINA.
.

Tomar lectura de las

Llenar tabla con los
soluciones estandar a
datos obtenidos
partir de (λ max).

Traza la curva de
Obtener la ecuación
calibración a vs
lineal y el 𝑅2
concentración (mg de
cafeína/L).
 DETERMINACION DE LA CONCENTRACION DE CAFEINA EN UNA MUESTRA
PROBLEMA LIQUIDA.

Tomar 5mL de la
Calentar ligeramente
muestra problema y Dejar enfriar y medir
por agitación para
transferirlos a un vaso 0.2 mL a un matraz
liberar 𝐶𝑂2 contenido.
pp de 10mL. volumétrico de 10 mL

Leer en el Adicionar 1 ml de HCl

espectrofotómetro la (λ 0.1 M y aforar con agua
max) determinada. destilada

• DETERMINACION DE LA CONCENTRACION DE CAFEINA EN UNA

MUESTRA PROBLEMA SOLIDA.

Pesar de la muestra
problema y titular en Disolver con 20 mL de Agitar y filtrar
un mortero. HCl 0.1M

Tomar del filtrado 0.1

Adicionar 1 mL de HCl
Leer en el mL y pasarlos a un
M y aforar con agua
espectrofotómetro la matraz volumétrico de
destilada.
(λ max) determinada. 10 mL.

Interpolar el valor de la
absorbancia en la curva
tipo para conocer la
concentración de
cafeína.
RESULTADOS
ANALISIS DE RESULTADOS

Gráfica 1. Curva de calibración de Cafeína

Gráfica 2. Curva de barrido del Espectro de absorción de la cafeína

De la Gráfica 2, se obtiene una absorbancia máxima de 0.0463 y una longitud de

onda máxima (λ𝑚𝑎𝑥) de 272 nm.
MUESTRA PROBLEMA: ASPIRINA.

Se pesaron 0.2500 g de aspirina se aforaron con 25 mL de etanol al 10 %, no se

obtuvo lectura de esta solución. De esta misma se tomó 1 mL y se aforó ahora a 10
mL y de igual forma no se obtuvo lectura. Se hizo otra dilución con 1 mL y se aforó
a 10 mL y la absorbancia que se obtuvo fue de 0.428.

Masa de la aspirina = 0.6448 g

Obtener los mg de cafeína por pastilla

𝑤(𝑎𝑠𝑝𝑖𝑟𝑖𝑛𝑎) = 0.6448 𝑔
0.2500 𝑔 − − − 25𝑚𝐿 (0.025𝐿)
𝐴(𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎) = 0.428
𝑇𝑜𝑚𝑎𝑛𝑑𝑜 𝑙𝑎 𝑒𝑐𝑢𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑐𝑢𝑟𝑣𝑎 𝑑𝑒 𝑐𝑎𝑙𝑖𝑏𝑟𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑐𝑎𝑓𝑒𝑖𝑛𝑎:
𝑦 = 0.053𝑥 + 0.0292 𝑦 = 𝐴 𝑦 = 0.428
𝐷𝑒𝑠𝑝𝑒𝑗𝑎𝑛𝑑𝑜 𝑥:
𝑦 − 0.0292
𝑥=
0.053
0.428 − 0.0292
𝑥=
0.053
𝑚𝑔
𝑥 = 7.52 (𝑝𝑝𝑚)
𝐿
𝑚𝑔 10 𝑚𝑔
7.52 𝑥 = 75.2
𝐿 1 𝐿
𝑚𝑔 10 𝑚𝑔
7.52 𝑥 = 752
𝐿 1 𝐿
𝑚𝑔
7.52 𝑥 0.025 𝐿 = 18.8 𝑚𝑔 𝑐𝑎𝑓𝑒𝑖𝑛𝑎
𝐿
18.8 𝑚𝑔 𝑐𝑎𝑓𝑒𝑖𝑛𝑎 − − − 0.2500 𝑔
𝑥 − − − 0.6448 𝑔
𝑥 = 48.49 𝑚𝑔 𝑐𝑎𝑓𝑒𝑖𝑛𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑝𝑎𝑠𝑡𝑖𝑙𝑙𝑎 𝑑𝑒 𝑎𝑠𝑝𝑖𝑟𝑖𝑛𝑎
MUESTRA PROBLEMA REFRESCO: COCA-COLA
En un matraz aforado de 25 mL se adicionaron 0.7 mL de alícuota de refresco y se
aforaron con etanol al 10 %. Se toma lectura en el equipo y esta fue de 0.327

Obtener los mg de cafeína/100 mL de muestra

𝐴𝑙𝑖𝑐𝑢𝑜𝑡𝑎 = 0.7 𝑚𝑙
25 𝑚𝐿(0.025 𝐿)
𝐴(𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎) = 0.327
𝑇𝑜𝑚𝑎𝑛𝑑𝑜 𝑙𝑎 𝑒𝑐𝑢𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑐𝑢𝑟𝑣𝑎 𝑑𝑒 𝑐𝑎𝑙𝑖𝑏𝑟𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑐𝑎𝑓𝑒𝑖𝑛𝑎
𝑦 = 0.053𝑥 + 0.0292 𝑦=𝐴 𝑦 = 0.327
𝐷𝑒𝑠𝑝𝑒𝑗𝑎𝑛𝑑𝑜 𝑥:
𝑦 − 0.0292
𝑥=
0.053
0.327 − 0.0292
𝑥=
0.053
𝑚𝑔
𝑥 = 5.619 (𝑝𝑝𝑚)
𝐿
𝑚𝑔
5.619 𝑥0.025 𝐿 = 0.1405 𝑚𝑔 𝑐𝑎𝑓𝑒𝑖𝑛𝑎
𝐿
0.01405 𝑚𝑔 𝑐𝑎𝑓𝑒𝑖𝑛𝑎 − − − 0.7 𝑚𝑙
𝑥 − − − −100 𝑚𝐿
𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝑐𝑎𝑓𝑒𝑖𝑛𝑎
𝑥 = 20.07 𝑑𝑒 𝑐𝑜𝑐𝑎 − 𝑐𝑜𝑙𝑎
100 𝑚𝐿

De acuerdo a la NORMA Oficial Mexicana NOM-218-SSA1-2011, Productos y

servicios. Bebidas saborizadas no alcohólicas, sus congelados, productos
concentrados para prepararlas y bebidas adicionadas con cafeína. Especificaciones
y disposiciones sanitarias. Métodos de prueba. Donde se establece que “las
bebidas adicionadas con cafeína no deben contener más de 33 mg de
cafeína/100mL de producto.”
CONCLUSIONES

Para la muestra de Coca-Cola se obtuvieron 20.07 mg de cafeína, eso quiere decir

que no rebasa el límite establecido de cafeína en una bebida que, según la NOM-
218-SSA1-2011 es de 33 mg de cafeína/100 mL de producto.
El control de calidad del parámetro cafeína es necesario en los productos que la
contienen. Por esta razón, resulta importante el desarrollo de métodos
instrumentales para su determinación en diversas matrices, especialmente en
alimentos.

BIBLIOGRAFÍAS.
●Díaz,N.A. (2015). Espectrometría: Espectros de absorción y cuantificación
colorimétrica de biomoléculas. Recuperado 14 de diciembre de 2020, de
https://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-mol/pdfs/08_ESPECTROFOT
OMETRIA.pdf

●García Martínez, E. (2014). Extracción y cuantificación de cafeína mediante

espectroscopía UV-Visible en café, té y cacao. Recuperado 14 de diciembre de
2020, de
https://riunet.upv.es/bitstream/handle/10251/104055/Garc%C3%ADa%3
BFuentes%3BFern%C3%A1ndez%20-%20Extracci%C3%B3n%20y%2
0cuantificaci%C3%B3n%20de%20cafe%C3%ADna%20mediante%20e
spectroscop%C3%ADa%20UV-Visip.…df?sequence=1
●NORMA Oficial Mexicana NOM-218-SSA1-2011, Productos y servicios. Bebidas
saborizadas no alcohólicas, sus congelados, productos concentrados para
prepararlas y bebidas adicionadas con cafeína. Especificaciones y disposiciones
sanitarias. Métodos de prueba. (2012). Recuperado 14 de diciembre de 2020, de
http://www.salud.gob.mx/cdi/nom/compi/NOM-218-SSA1-2011.pdf