UNIVERSIDAD NACIONAL DEL ALTIPLANO-PUNO

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA
AGRONÓMICA

TEMA:

REPLICACION

INGENIERO:

ASTETE MALDONADO FELIX ALONSO

ESTUDIANTE
CRISTIAN RICHARD QUISPE HUALLPA 195212

CURSO:

GENETICA AGRICOLA Y PECUARIA

SEMESTRE: V

GRUPO: UNICO

PUNO – PERÚ

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Escuela Profesional de Ingeniería Agronómica

REPLICACION
El proceso de replicación, autorreplicación, duplicación o autoduplicación de ADN es
el mecanismo que permite al ADN duplicarse (es decir, sintetizar una copia idéntica). De
esta manera, de una molécula de ADN única, se obtienen dos o más "réplicas". Esta
duplicación del material genético se produce de acuerdo con un
mecanismo semiconservador, lo que indica que los dos polímeros complementarios del
ADN original, al separarse, sirven de molde cada una para la síntesis de una nueva
cadena complementaria de la cadena molde, de forma que cada nueva doble
hélice contiene una de las cadenas del ADN original. Gracias a la complementación entre
las bases que forman la secuencia de cada una de las cadenas, el ADN tiene la importante
propiedad de reproducirse idénticamente, lo que permite que la información genética se
transmita de una célula madre a las células hijas y es la base de la herencia del material
genético.
La molécula de ADN se abre como una cremallera, por ruptura de los puentes de
hidrógeno entre las bases complementarias en puntos determinados: los orígenes de
replicación. Las proteínas iniciadoras reconocen secuencias de nucleótidos específicas en
esos puntos y facilitan la fijación de otras proteínas que permitirán la separación de las dos
hebras de ADN formándose una horquilla de replicación. Un gran número
de enzimas y proteínas intervienen en el mecanismo molecular de la replicación, formando
el llamado complejo de replicación o replisoma. Estas proteínas y enzimas son homólogas
en eucariotas y arqueas, pero difieren en bacterias.

Características generales del ADN

 Es una cadena molecular, quiere decir que es una sustancia constituida por
distintos tipos de moléculas sencillas ligadas entre sí para así ir formando
cadenas.
 Es bastante largo y extremadamente delgado. Si aumentáramos cien veces el
tamaño del núcleo celular alcanzaría el tamaño de la punta de un alfiler,
mientras que el ADN plegado en ese mismo núcleo alcanzaría la longitud de
un campo de fútbol.
 Hay cuatro tipos de eslabones, esos son las moléculas denominadas
nucleótidos en la cadena. Sus nombres son: ácido adenílico (adenina), ácido
guanílico (guanina), ácido citidílico (citosina) y ácido timidílico (timina) y las
abreviaturas, A, G, C, T, para cada una.

Semiconservadora

Tres posibles modelos de replicación.

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a) Conservadora
b) Dispersora
c) Semiconservadora
En cada una de las moléculas hijas se conserva una de las cadenas originales, y por eso
se dice que la replicación del ADN es semi conservadora. Hasta que finalmente se pudo
demostrar que la replicación es semiconservadora, se consideraron tres posibles modelos
para el mecanismo de la replicación:

 Semiconservadora (modelo correcto). En cada una de las moléculas hijas se

conserva una de las cadenas originales.
 Conservadora. Se sintetiza una molécula totalmente nueva, copia de la
original.
 Dispersora, o dispersante. Las cadenas hijas constan de fragmentos de la
cadena antigua y fragmentos de la nueva.

Experimento de Meselson y Stahl.

El experimento de Meselson y Stahl en 1958 permitió demostrar que el mecanismo real
se ajusta a la hipótesis de replicación semiconservadora. Para ello se hicieron crecer
células de Escherichia coli en presencia de nitrógeno-15, un isótopo del nitrógeno más
pesado de lo habitual. En consecuencia, el isótopo se incorporó a las cadenas de ADN que
se iban sintetizando, haciéndolas más pesadas.
Una vez conseguido el primer objetivo, las células fueron transferidas a un medio que
contenía nitrógeno-14, es decir, un medio más ligero, donde continuaron su crecimiento
(división celular, que requiere la replicación del ADN). Se purificó el ADN y se analizó
mediante una centrifugación en gradiente de cloruro de cesio, en donde hay
más densidad en el fondo del tubo que en la parte media del mismo.
En la primera generación (figura 2.b) se obtuvo una única banda de ADN con densidad
intermedia. En la segunda generación (figura 2.c) se obtuvieron dos bandas, una con
densidad ligera y otra con densidad intermedia o híbrida. En la tercera generación se
obtuvieron dos bandas, una ligera (con una abundancia del 75 %) y otra intermedia (con el
25 % restante).
La banda intermedia o híbrida representa una molécula de ADN que contiene una cadena
pesada (original) y otra ligera (recién sintetizada). Las cadenas ligeras representan una
molécula de ADN en la que las dos cadenas han sido sintetizadas (no existían aun cuando
las células se pusieron en presencia de nitrógeno-15).
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El hecho de que cada vez haya más moléculas ligeras y se mantenga el número de
moléculas intermedias demuestra que la replicación del ADN es semiconservadora. Si
fuera conservadora, aparecería siempre una banda pesada y el resto ligeras (figuras 1.a,
1.b, 1.c) . Si fuera dispersante solo aparecerían bandas híbridas de densidad intermedia
en todas las generaciones.1

Secuencial y bidireccional desde puntos fijos

Los orígenes de replicación son los puntos fijos a partir de los cuales se lleva cabo la
replicación, que avanza de forma secuencial formando estructuras con forma de horquilla.
Por otro lado, la replicación se lleva a cabo bidireccionalmente, es decir, a partir de cada
origen se sintetizan las dos cadenas en ambos sentidos.

El origen de replicación
La cantidad de ADN que se puede sintetizar a partir de un único origen de replicación se
denomina replicón o unidad funcional de replicación. El genoma bacteriano es un replicón
único circular. En organismos eucarióticos, la replicación del ADN se inicia en múltiples
orígenes a la vez (hay uno cada 20 kb aproximadamente), es decir, hay varios replicones. 2

En las células eucariotas hay varios replicones.

Los experimentos realizados por Cairns (1963) con bacterias Escherichia coli permitieron
determinar la existencia de ese punto fijo u origen de replicación a partir del cual el
genoma empezaba a replicarse. Los experimentos consistían en mantener un cultivo de E.
coli creciendo en un medio que contenía timidina tritiada (timina marcada con tritio), de
forma que el ADN quedara marcado radiactivamente pudiendo efectuarse una
autorradiografía. A continuación se observaba al microscopio. Los resultados indicaban
que la replicación en E. coli se iniciaba en un punto concreto (OriC)

Secuencialidad
Sueoka y Yoshikawa (1963) realizaron estudios genéticos de complementación
de mutaciones que permitieron determinar que desde los orígenes la replicación avanza de
forma secuencial. Trabajaron con Bacillus subtilis porque era posible obtener cultivos
sincronizados de forma que todas las células del cultivo estuvieran en la misma fase
del ciclo celular. El método consistía en la conjugación bacteriana de cepas silvestres con
cepas mutantes incapaces de sintetizar determinados aminoácidos. Conociendo la
localización de los genes que codifican las proteínas implicadas en la síntesis de los
diferentes aminoácidos en el cromosoma bacteriano, y haciendo crecer las bacterias
receptoras en un «medio mínimo» (donde solo pudiesen crecer las que hubieran recibido
alguno de estos genes), al extraer ADN a diferentes tiempos se observó que, tras la última
extracción aparecía con mayor frecuencia el gen implicado en la síntesis de uno de
los aminoácidos (el correspondiente a la "posición 1"), que el gen adyacente implicado en
la síntesis de otro aminoácido ("posición 2"). De la misma forma, el gen que ocupaba la
"posición 3" aparecía con menor frecuencia que el que ocupaba la "posición 2", y así
sucesivamente.
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Como los primeros genes en replicarse en la bacteria donadora serían los primeros en
transferirse, el experimento permitió demostrar, a partir de las frecuencias relativas de los
diferentes genes en las bacterias receptoras, que la replicación sigue un orden (es
secuencial).

La replicación avanza en forma de horquilla[editar]

Debido a que en la célula ambas cadenas de la doble hélice de ADN se duplican al mismo
tiempo, éstas deben separarse para que cada una de ellas sirva de molde para la síntesis
de una nueva cadena. Por eso, la replicación avanza con una estructura en forma
de horquilla formándose una burbuja u ojo de replicación (también llamada estructura θ
cuando el ADN es circular debido a la similitud entre la letra griega y la forma que adopta
el cromosoma bacteriano en estados intermedios de replicación, no obstante pudiendo
aparecer estructuras alternativas),3 que avanza en dirección a la región de ADN no
duplicado dejando atrás los dos moldes de ADN de cadena simple donde se está
produciendo la replicación.2

Bidireccionalidad[editar]
El movimiento de la horquilla es bidireccional en la mayoría de los casos, es decir, a partir
de un punto se sintetizan las dos cadenas en ambos sentidos. Esto ocurre en la mayoría
de los organismos, pero se dan excepciones en algunos procariontes debido a que los
mecanismos de replicación que tienen lugar dependen de la propia estructura de su
material hereditario (si el ADN es circular, lineal, bicatenario o monocatenario). 3 Así, en
casos particulares como el ADN mitocondrial, algunos plásmidos y algunos genomas
monocatenarios de fagos pequeños, la replicación se da unidireccionalmente pudiendo
haber uno o dos orígenes de replicación.

No obstante, la replicación se puede considerar, de forma general, bidireccional.

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La evidencia experimental del crecimiento bidireccional de la hebra de ADN viene dada por
una técnica basada en el marcaje radiactivo del ADN usando timidina marcada con tritio.
Primero se añade timidina sin marcar y luego marcada con tritio; siguiendo el rastro de
tritio se observa hacia dónde se ha replicado la molécula de ADN. 3 También se puede,
mediante el recuento de copias de genes marcadores, determinar si la replicación es
unidireccional o bidireccional. Otras técnicas se basan en medir la distancia desde los ojos
de replicación hasta los extremos de un ADN lineal (o circular convertido en lineal
mediante enzimas de restricción).

Semidiscontinua[editar]

La replicación es semidiscontínua.

La replicación siempre se produce en sentido 5' → 3', siendo el extremo 3'-OH libre el
punto a partir del cual se produce la elongación del ADN. Esto plantea un problema, y es
que las cadenas tienen que crecer simultáneamente a pesar de que son antiparalelas, es
decir, que cada cadena tiene el extremo 5' enfrentado con el extremo 3' de la otra cadena.
Por ello, una de las cadenas debería ser sintetizada en dirección 3' → 5'.
Este problema lo resolvieron los científicos japoneses Reiji Okazaki y Tsuneko Okazaki en
la década de 1960, al descubrir que una de las nuevas cadenas de ADN se sintetiza en
forma de trozos cortos que, en su honor, se denominan fragmentos de Okazaki. Su
longitud suele variar entre 1000 y 2000 nucleótidos en las bacterias y entre 100 y
400 nucleótidos en eucariontes.
La cadena que se sintetiza en el mismo sentido que avanza la horquilla de replicación se
denomina hebra adelantada o conductora y se sintetiza de forma continua por la ADN
polimerasa, mientras que la que se sintetiza en sentido contrario al avance se denomina
hebra rezagada o retrasada, cuya síntesis se realiza de forma discontinua teniendo que
esperar a que la horquilla de replicación avance para disponer de una cierta longitud de
ADN molde.2
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ADN Polimerasas

El ADN polimerasa es la enzima que cataliza la síntesis de la nueva cadena de ADN a

partir de desoxirribonucleótidos y de la molécula de ADN plantilla o molde que es la que
será replicada. La enzima copia la cadena de nucleótidos de forma complementaria
(A por T, C por G) para dar a cada célula hija una copia del ADN durante la replicación.

Modo de operación
En cada horquilla de replicación, el ADN polimerasa y otras enzimas sintetizan dos nuevas
cadenas de ADN que son complementarias respecto a las dos cadenas originales. Durante
este proceso, el ADN polimerasa reconoce una base nucleotídica no apareada de la
cadena original y la combina con un nucleótido libre que tiene la base complementaria
correcta. Luego, el ADN polimerasa cataliza la formación de nuevos enlaces covalentes
que ligan el fosfato del nucleótido libre entrante con el azúcar del nucleótido previamente
agregado en la cadena hija en crecimiento. De esta forma, el ADN polimerasa sintetiza el
esqueleto de azúcar-fosfato de la cadena hija.

Función correctora exonucleasa 3' → 5' de las ADN polimerasas.

Los ADN polimerasas también realizan otras funciones durante el proceso de replicación.
Además de participar en la elongación, desempeñan una función correctora y reparadora
gracias a su actividad exonucleasa 3', que les confiere la capacidad de degradar el ADN
partiendo de un extremo de este. Es importante que existan estos mecanismos de
corrección ya que de lo contrario los errores producidos durante la copia del ADN darían
lugar a mutaciones.
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Proceso general

 La topoisomerasa relaja la tensión provocada por el superenrollamiento del

ADN al abrirse las dos hebras
 La helicasa rompe los puentes de hidrógeno de la doble hélice, abriendo las
dos hebras, permitiendo el avance de la horquilla de replicación.
 Las proteínas SSB estabilizan las cadenas abiertas y las mantienen separadas
una de otra.
 El cebador fragmentos de ARN que se unen a la cadena molde por puentes de
hidrógeno para que el ADN polimerasa III reconozca donde debe unirse para
empezar a añadir nucleótidos.
 El ADN polimerasa I reemplaza los cebadores de ARN por nucleótidos de
ADN.
 El ADN polimerasa II interviene en la corrección de errores.
 El ADN polimerasa III sintetiza la cadena complementaria de forma continua en
la hebra adelantada y de forma discontinua en la hebra rezagada, ya que solo
puede sintetizar en dirección 5'→ 3'.
 El ARN primasa sintetiza el cebador de ARN necesario para la síntesis de la
cadena complementaria a la cadena rezagada.
 El ADN ligasa une los fragmentos de Okazaki.
El proceso se puede dividir en 3 fases: iniciación, elongación y terminación.

Iniciación
Mediante consumo de ATP en dirección a la horquilla de replicación, es decir, en dirección
3' → 5' en la hebra rezagada y 5' → 3' en la hebra adelantada, la helicasa actúa rompiendo
los puentes de hidrógeno que mantienen unida la doble hélice.3 El siguiente conjunto de
proteínas reclutadas son las denominadas proteínas SSBnota 1 encargadas de la
estabilización del ADN monocatenario generado por la acción de las helicasas, impidiendo
así que el ADN se renaturalice o forme de nuevo la doble hélice, de manera que pueda
servir de molde. Estas proteínas se unen de forma cooperativa, por lo que su unión al ADN
conforme avanza la helicasa es rápida. Por otro lado, conforme las helicasas van
avanzando se van generando superenrollamientos en la doble cadena de ADN por delante
de la horquilla y si éstos no fueran eliminados, llegado a un punto el replisoma ya no
podría seguir avanzando. Las topoisomerasas son las enzimas encargadas de eliminar los
superenrollamientos cortando una o las dos cadenas de ADN y pasándolas a través de la
rotura realizada.2
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Elongación

Enzimas que participan en la replicación de E.

coli: helicasa, proteínas SSB, topoisomerasa, ARN primasa, Holoenzima ADN Pol III.
En el siguiente paso, el ADN Pol III cataliza la síntesis de las nuevas cadenas
añadiendo nucleótidos sobre el molde. Esta síntesis se da bidireccionalmente desde cada
origen, con dos horquillas de replicación que avanzan en sentido opuesto. Cuando el
avance de dos horquillas adyacentes las lleva a encontrarse, es decir, cuando dos
burbujas se tocan, se fusionan, y cuando todas se han fusionado todo el cromosoma ha
quedado replicado.
Puesto que el ADN Pol III necesita de un extremo 3'-OH libre, es necesario que un ARN
primasa catalice la formación de un fragmento corto específico de ARN llamado cebador,
que determinará el punto por donde la ADN polimerasa comienza a añadir nucleótidos.
Así, durante la síntesis, en cada horquilla de replicación se van formando dos copias
nuevas a partir del cebador sintetizado en cada una de las dos hebras de ADN que se
separaron en la fase de iniciación, pero debido a la unidireccionalidad de la
actividad polimerasa de la ADN Pol III, que solo es capaz de sintetizar en sentido 5´ → 3',
la replicación solo puede ser continua en la hebra adelantada; en la hebra rezagada es
discontinua, dando lugar a los fragmentos de Okazaki.
La mitad del dímero del ADN Pol III sintetiza la hebra adelantada y la otra mitad la hebra
rezagada.3 La elongación de la hebra rezagada ocurre por medio del modelo del trombón.
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Hebra rezagada: síntesis de cebadores, unión de fragmentos de Okazaki y eliminación

de los cebadores

Enzimas que participan en la eliminación de cebadores y unión de los fragmentos de

Okazaki. El cebador de ARN está pintado en azul y el ADN que lo reemplaza en
naranja.
En la hebra rezagada, cuando el ADN Pol III hace contacto con el extremo de
otro fragmento de Okazaki contiguo, el cebador de ARN de este es eliminado y los dos
fragmentos de Okazaki de ADN recién sintetizado son unidos. Una vez se han juntado
todos se completa la doble hélice de ADN. La eliminación de cebadores también se da en
la hebra conductora, de síntesis continua, pero debido a que en ésta hay un solo cebador
es un proceso que solo tiene lugar una vez, mientras que en la hebra rezagada se dará
tantas veces como fragmentos de Okazaki haya.
En la eliminación del cebador (también denominado iniciador o partidor) intervienen dos
enzimas: por un lado el ADN Pol I, que va eliminando el ARN con su actividad exonucleasa
3' → 5' y simultáneamente rellenando con ADN mediante su actividad polimerasa 5' → 3'
(proceso denominado nick-traslation). Al final queda rotura (o «mella») entre el extremo 3'-
OH libre y el fosfato 5' de la cadena sintetizada; por último, el ADN ligasa sella esa rotura
catalizando la reacción de condensación entre el grupo fosfato y el OH de
la desoxirribosa del nucleótido contiguo, completando el enlace fosfodiéster; para ello, es
preciso hidrolizar una molécula de ATP
Nota: diversos autores difieren en las enzimas implicadas en esta etapa. Para algunos no
es el propio ADN Pol I la que rellena el hueco tras eliminar el cebador, sino que lo hace el
ADN Pol III (la misma que polimeriza el resto de la cadena). Del mismo modo, algunos
autores siguen empleando el término ribonucleasa o (ARNasa) para referirse al ADN Pol I
en esta etapa, ya que hasta hace poco se desconocía que la propia ADN Pol I tenía la
capacidad exonucleasa 5' → 3, y se pensaba que esto lo realizaba otro enzima, que
recibía este nombre genérico.

Terminación (de los genomas lineales)

El final de la replicación se produce cuando al ADN polimerasa III se encuentra con una
secuencia de terminación. Se produce entonces el desacople de toda la replisoma y la
finalización de la replicación.

Véase también

 Genética molecular
 Ciclo celular
 Mitosis
 Punto de control
 Dogma central de la biología molecular