SECCION 4 CONTROL MICROBIANO POR AGENTES FSICOS Y QUMICOS Introduccin Los factores fsicos y qumicos tienen un efecto notable

sobre la vida de los microorganismos en el medio ambiente. La presencia y abundancia de los microorganismos estn determinadas no slo por los nutrientes sino tambin por otros factores tales como temperatura, pH, potencial de reduccin, presin osmtica, radiacin y la presencia y disponibilidad de compuestos txicos. Adicionalmente, es necesario tener en cuenta que hay lmites para los factores ambientales por encima y por debajo de los cuales no es posible que los organismos sobrevivan. El conocimiento del efecto de estos parmetros ambientales sobre los microorganismos no slo permiti estudiarlos bajo condiciones controladas de laboratorio sino que posibilit aprender la forma de controlarlos. El control microbiano constituye una de las reas ms importantes de la microbiologa aplicada, principalmente en los relacionados con sanidad y produccin industrial. Se debe tener en cuenta que el efecto del factor fsico qumico elegido para controlar las poblaciones microbianas depende de: El agente qumico y su concentracin La naturaleza y la intensidad del agente fsico El tiempo de exposicin al agente El nmero de microrganismos presentes El tipo de microorganismos El medio en el cual se encuentran los microorganismos

Objetivos Los ejercicios que se llevarn a cabo en esta seccin le permitirn al estudiante evaluar experimentalmente los efectos que tienen algunos de los parmetros fisicoqumicos sobre el desarrollo de poblaciones bacterianas.

Prctica 11. Efecto de la Temperatura Sobre el Crecimiento Microbiano

Existe una temperatura ptima en la que los microorganismos tienen su mayor tasa de crecimiento y actividad metablica. Esta temperatura vara dependiendo del microorganismo. Existe tambin una temperatura mnima por debajo de la cual las clulas estn metablicamente inactivas y existe una temperatura mxima ms all de la cual las clulas no pueden crecer. La temperatura es una forma muy efectiva de controlar el crecimiento de los microorganismos ya que a altas temperaturas, muy por encima de la temperatura mxima, se logra destruir a todos los organismos vivos incluyendo los virus en un proceso llamado esterilizacin. Las altas temperaturas pueden ser aplicadas en forma de calor hmedo y calor seco. El calor hmedo es mucho ms efectivo que el seco para matar a los microorganismos por su habilidad de penetrar en las clulas microbianas. El calor hmedo hace la mayor parte del dao desnaturalizando las protenas y destruyendo las membranas dado que la presencia de las molculas de agua a temperaturas altas ayuda a romper los puentes de hidrgeno que mantienen la forma tridimiensional de las protenas y el calor derrite los lpidos que conforman la membrana. La esterilizacin por calor hmedo se logra en una autoclave dnde se pueden alcanzar temperaturas mayores a los 100 oC, gracias al agua que esta bajo presin. Para matar clulas vegetativas, esporas y para daar la estructura de los cidos nucleicos se necesitan 121oC. La autoclave emplea vapor bajo presin para lograr esta temperatura. Durante el proceso de esterilizacin en la autoclave el material a ser esterilizado se somete a 1.1 kilogramos por centmetro cuadrado. Bajo esta presin el punto de ebullicin del agua se a eleva a 121oC. El tiempo que se deja el material bajo esta temperatura depende del material que se va a esterilizar, generalmente entre 15 y 40 minutos. El calor seco penetra ms lentamente que el calor hmedo y hace la mayor parte del dao oxidando las molculas de los microorganismos. Usualmente se utiliza para esterilizar objetos de metal, vidrio, aceites y objetos en general que no se daan con la excesiva temperatura. La esterilizacin por calor de objetos secos siempre requiere de mayores temperaturas y tiempos ms largos que la esterilizacin de objetos hmedos. Este tipo de esterilizacin se lleva a cabo en hornos a diferentes temperaturas dependiendo del tiempo que se deje el material en el horno. A 171oC la esterilizacin se logra en una hora, a 160 oC en dos horas y a 121oC es necesario dejar el material en el horno por dos horas. Es necesario diferenciar la esterilizacin por calor de la pasteurizacin. Con la pasteurizacin se logra disminuir el nmero de microorganismos a concentraciones que no representen amenazas para la salud, pero no se logra la esterilizacin.

Materiales

Esta prctica se llevar a cabo en grupos de dos estudiantes y cada grupo har las pruebas para una de las especies de bacterias sealadas en la lista de materiales. - Cultivo de Escherichia coli, Staphylococcus sp., Serratia marcencens, Bacillus subtilis y Sacharomyces cereviciae en medio lquido. - RF Glucosa, pH 7.2 (8 tubos cada uno con 5 ml) - Pipeta estril de 1 ml (8) - Mechero Bunsen - Asa redonda - Pipeteador - Autoclave - Bao Mara - Contenedor con desinfectante para desechar pipetas - Marcador de punta fina - Cinta de enmascarar Procedimiento 1. Marque los tubos de RF glucosa con su nombre, fecha, microorganismo con el que le corresponde trabajar. Incluya en la etiqueta el tratamiento de temperatura al que va a ser sometido el tubo de cultivo. Los tratamientos son los siguientes: A = 121oC durante 15 minutos en autoclave H = 90oC durante 15 minutos en agua hirviendo P = 72oC durante 15 minutos en bao Mara C = Control sin tratamiento trmico 2. Utilizando las tcnicas de asepsia, transfiera 1 ml del microorganismo con el que le corresponde trabajar a cada uno de los cuatro tubos de RF glucosa. 3. Deposite la pipeta en el contenedor con desinfectante. 4. Someta los medios inoculados a los diferentes tratamientos asignados 5. Despus de terminado el tratamiento, transfiera 0.1 ml del cultivo tratado a medio fresco RF glucosa. 6. Deposite la pipeta en el contenedor con desinfectante. 7. Incube los medios a 35oC durante 24 horas. 8. Pasado el tiempo de incubacin observe crecimiento y cambios de color del medio de cultivo. 9. Anote los resultados en la tabla 4.1. En la misma tabla anote los resultados de las bacterias asignadas a los otros grupos.

Prctica 12. Efecto de la Luz Ultravioleta Sobre el Crecimiento Microbiano La luz ultravioleta (UV) es un agente esttico que reduce significativamente la cantidad de microorganismos en una poblacin pero no mata por completo a todos los individuos de la poblacin como si lo hacen las altas temperaturas que se alcanzan en la autoclave. La luz UV es muy usada para desinfectar el aire y superficies expuestas. La luz UV corresponde al rango de longitudes de onda que van desde los 100 nm hasta los 400 nm, pero las longitudes de onda ms efectivas para controlar el crecimiento microbiano son las que estn en el rango entre 260 y 270 nm. Este tipo de radiacin no inica afecta a los seres vivos porque provoca que en el momento de la duplicacin del ADN se incorporen mutaciones dentro del genoma. Cuando el genoma es expuesto a la radiacin UV, se produce la formacin de dmeros de timina que consisten en la formacin de enlaces covalentes entre timinas que estn adyacentes. Al repicarse el ADN, la enzima polimerasa, encargada de incorporar los nucletidos complementarios en la nueva cadena a medida que esta se va sintetizando, no puede adicionar nucletidos complementarios cuando encuentra los dmeros de timidina en la hebra molde, por lo tanto se termina la replicacin. La protena UmuD2C del mecanismo de reparacin conocido como SOS, remplaza a la polimerasa en su labor de incorporar los nucletidos complementarios a los dmeros de timidina y as el proceso de replicacin puede continuar nuevamente con la polimerasa. La UmuD2C, evita que la replicacin termine. Sin embargo, incorpora muchos nucletidos a la nueva hebra que no son complementarios a la cadena molde producindose mutaciones en la nueva cadena. Cuando se producen muchas mutaciones se bloquea el metabolismo del organismo y muere. El efecto de la luz ultravioleta puede ser reversado hasta cierto punto exponiendo a la bacteria a la luz visible con longitudes de onda mayores de 300 nm. Estas longitudes de onda disparan un proceso llamado foto reactivacin en el que se activa una enzima que rompe el enlace de los dmeros, permitiendo que sea la polimerasa la que incorpora los nucletidos correctamente a la nueva cadena de ADN. El dao que la luz UV puede causar en los microorganismos depende de: 1) la longitud de onda de ultravioleta usado. La ms letal esta entre 260 y 270 nm, 2) el tiempo de exposicin, 3) la distancia del microorganismo con respecto a la fuente de luz UV y 4) el tipo de microorganismo. Las bacterias que forman endosporas aquellos que tienen pigmentos en la superficie como Micrococcus luteus son ms resistentes a la accin de la luz UV. En esta prctica se van a inocular varios microorganismos en cajas de Petri con agar TSA y sern expuestos a la radiacin UV durante diferentes rangos de tiempo y diferentes distancias a la fuente de luz UV para determinar la mnima distancia y tiempo de exposicin necesarios para afectar los microorganismos. Materiales Esta prctica se llevar a cabo en grupos de dos estudiantes y cada grupo har las pruebas para una de las especies de bacterias sealadas en la lista de materiales.

- Cultivos de Micrococcus luteus, Bacillus subtilis, Escherichia coli, Serratia marcencens y Sarcina en medio lquido. - TSA estril (7 cajas) - Asa redonda - Lmpara UV - Papel aluminio - Marcador de punta fina - Cinta de enmascarar Procedimiento 1. Marque la base de las cajas de Petri con su nombre, fecha y microorganismo con el que va a trabajar. Incluya en la etiqueta el tiempo de exposicin al que va a ser sometida la caja y las distancia: Caja 1: 30 s Caja 2: 1 min Caja 3: 5 min 130 mm 130 mm 130 mm Caja 4: 30 s Caja 5: 1 min Caja 6: 5 min Caja 7: Control 2. Utilizando las tcnicas de asepsia inocule el microorganismo asignado en toda la superficie de las 7 cajas de Petri con TSA estril. 3. Destape las cajas 1, 2 y 3 y cubra la mitad de las cajas con papel aluminio estril. 4. Coloque las cajas a una distancia de 130 mm de la fuente de luz ultravioleta. 5. Exponga cada una de las cajas a la luz UV durante el tiempo indicado. El control no se expone a la radiacin. 6. Remueva el papel aluminio y coloque la tapa de la caja de Petri en su lugar. 7. Envuelva las cajas en papel aluminio. 8. Repita el procedimiento con las cajas 4, 5 y 6, esta vez exponiendo las cajas a la UV a una distancia de 530 mm 8. Incube las cajas, incluyendo el control, en posicin invertida a 35 oC durante 24 horas. 10. Anotar los resultados en la tabla 4.3. Observar crecimiento, formacin y/o ausencia de pigmento y otros cambios que se hayan presentado. 530 mm 530 mm 530 mm

Prctica 13. Efecto de la Presin Osmtica Sobre el Crecimiento Microbiano

En las clulas el agua se difunde a travs de la membrana de la regin de menor concentracin de soluto a la regin de mayor concentracin de soluto. Este fenmeno recibe el nombre de smosis y al suceder crea una diferencia de presin en ambos lados de la membrana semipermeable conocida como la presin osmtica. La tonicidad hace referencia a la diferencia de concentracin de solutos entre la clula v s el medio exterior. En un medio ambiente isotnico, la concentracin de soluto fuera y dentro de la clula microbiana es igual, Por lo tanto no hay movimiento de agua a travs de la membrana plasmtica. En un ambiente hipertnico, si la clula no posee un mecanismo de osmorregulacin, el protoplasma de la clula se plasmoliza debido al flujo del agua hacia afuera ya que la concentracin del soluto en el ambiente es mayor que dentro de la clula. Lo contrario sucede en un ambiente hipotnico. Debido a la mayor concentracin de solutos dentro de la clula el agua fluye hacia dentro por osmosis, de tal forma que la clula puede explotar. Esta situacin no representa un peligro para la mayora de las bacterias debido a la presencia de la pared celular que es lo suficientemente fuerte para soportar las presiones internas que ejerce el agua acumulada en el interior de la clula, sin que esta explote. Una estrategia eficiente para controlar las poblaciones de bacterias es crear ambientes hipertnicos. Por ejemplo, el uso de altas concentraciones de sal para preservar la carne. Sin embargo, es importante recordar que hay microorganismos capaces de crecer en ambientes hipertnicos. Estos son conocidos como osmoflicos cuando requieren altas concentraciones de un soluto orgnico en el medio halfilos cuando requieren altas concentraciones de una sal. En esta prctica de laboratorio se evaluar el grado de inhibicin que ejercen medios de cultivo con diferentes concentraciones de NaCl y glucosa. Materiales - Cultivos lquidos de Escherichi coli y Staphylococcus aureus. - Cajas con TSA estril ms: 5% glucosa (1 caja) 10% glucosa (1 caja) 25% glucosa (1 caja) - Caja de TSA control - Asa redonda - Mechero Bunsen - Marcador de punta fina - Cinta de enmascarar Procedimiento 5% NaCl (1 caja) 10% NaCl (1 caja) 25% NaCl (1 caja)

1. Etiquete todo el material. 2. Con un marcador de punta fina, trace una lnea que divida en dos la tapa posterior de la caja de Petri. 3. Aplicando las tcnicas de asepsia y con ayuda del asa redonda transfiera un inoculo de E. coli a una de las mitades del medio en la caja de Petri marcada como 5% glucosa. Asegrese de que la bacteria quede esparcida sobre toda la superficie de esa mitad del medio. 4. De la misma forma que en el punto anterior, transfiera un inoculo de Staphylococcus aureus a la otra mitad de la caja de Petri. 5. Repita este procedimiento para inocular las otras cajas con diferentes concentraciones de cloruro de sodio y glucosa. 6. Incube las cajas en posicin invertida a 25oC por 48 horas. 7. Despus del perodo de incubacin observe los resultados y regstrelos en la tabla 4.4.

Prctica 14. Control de los Microorganismos por Medio de las sustancias Qumicas Un agente antimicrobiano es un qumico sinttico natural que mata o inhibe el crecimiento de un microorganismo. Aquellos compuestos qumicos que causan la muerte de los microorganismos se conocen como agentes cidas (ejem.: bactericidas, fungicidas virucidas), y aquellos que slo causan inhibicin en el crecimiento de los microorganismos se conocen como agentes estticos (ejem.:bacteriostticos, fungistticos y virustticos). Estos pueden ser de varias clases: Agentes qumicos quimioteraputicos de uso interno. Se usan par controlar las poblaciones microbianas que producen enfermedades infecciosas. Estos agentes no causan dao a las clulas el hospedero y son ampliamente utilizados en medicina clnica y veterinaria. Ejemplos de estas sustancias son los antibiticos y los factores de crecimiento anlogos. Desinfectantes. Son qumicos que matan los microorganismos pero no necesariamente endosporas. Estos se utilizan para controlar el crecimiento microbiano en objetos. Estos compuestos incluyen etanol, isopropanol sulfato de cobre, formaldehdo y gluteraldehdo. Antispticos. Son agentes qumicos que inhiben el crecimiento de los microorganismos y son utilizados para controlar el crecimiento de microorganismos en tejido vivo. Estos compuestos incluyen etanol, isopropanol, detergentes catinicos, perxido de hidrgeno, iodo y nitrato de plata. Sanitizadores. Estos agentes reducen microorganismos a niveles considerados seguros pero no los matan. Estos compuestos incluyen detergentes catinicos y compuestos clorinados como las cloramidas y el hipoclorito de sodio.

El mtodo del disco de papel de filtro se utiliza par a medir que tan efectivo es un agente qumico para controlar una poblacin microbiana. En este mtodo, un disco hecho de papel de filtro se impregna con el agente qumico a evaluar y se coloca en una caja de Petri con TSA previamente inoculado con un microorganismo. Si la sustancia inhibe el crecimiento del microorganismo se observa una zona de inhibicin de crecimiento alrededor del disco. El tamao de la zona refleja la efectividad de la sustancia qumica para controlar el crecimiento microbiano. En esta prctica se evaluar la actividad de varias sustancias qumicas como agentes antimicrobianos. Materiales - Cultivos de Escherichia coli, Staphylococcus aureus y Bacillus subtilis en medio lquido - TSA estril (4 Cajas) - Asa de redonda - Pinzas estriles - Regla - Discos de papel de filtro cortados con una perforadora

- Zumo de limn, extracto de cebolla, enjuague bucal, tego. - Marcador de punta fina - Cinta de enmascarar Procedimiento 1. Con el marcador de punta fina dibuje en la base de la caja de Petri un par de lneas que dividan la caja en cuatro partes iguales (Fig. 4.1). 2. Aplicando las tcnicas de asepsia y con ayuda del asa transfiera un inoculo de E. coli a la caja de Petri e inocule esparciendo el microorganismo sobre toda la superficie del agar. 3. Con ayuda de las pinzas coloque el disco impregnado con extracto de cebolla en el primer cuadrante. En los otros tres cuadrantes coloque los discos impregnados con los otros agentes qumicos a evaluar. 4. Repita este procedimiento con S. aureus y B. subtilis. 5. Incube las cajas en posicin invertida a 35oC por una semana. 6. Pasado el tiempo de incubacin, mida la zona de inhibicin en milmetros con ayuda de una regla. Registre los datos en la tabla 4.5 y determine si el microorganismo es sensible, medianamente resistente o resistente a la sustancia evaluada con base en la siguiente informacin: Zona de inhibicin < 10 mm, resistente Zona de inhibicin < 11 - 15 mm, medianamente resistente Zona de inhibicin > 16 mm, susceptible

Comentario [JSV1]: Figura 4.1. Mtodo de siembra para valorar el efecto en el crecimiento de cuatro diferentes compuestos qumicos: Extracto de cebolla (C), Extracto de limn (L), Enjuague bucal (EB) y Tego (T).

Prctica 15. Efecto del pH en el Crecimiento de los Microorganismos Los microrganismos poseen un pH ptimo y un rango de pH dentro del cual es posible el crecimiento. Los valores ms all de los pH extremos hidrolizan componentes celulares, denaturan las enzimas y afectan la solubilidad de los nutrientes. La mayora de los microorganismos tienen pH ptimos entre 5 y 9. Sin embargo existen microorganismos adaptados a ambientes con valores de pH menores de 3, conocidos como acidfilos y microorganismos adaptados a ambientes con valores de pH mayores de 9, conocidos como alcalfilos. En cualquiera de los dos casos el pH intracelular permanece cercano a la neutralidad ya sea porque los protones se bombean hacia fuera de la clula o porque la clula altera el pH del medio inmediato. Una bacteria de ambientes cidos es Helicobacter pilori que vive en el estmago. Esta bacteria produce grandes cantidades de ureasa la cual es la enzima que degrada la urea y al mismo tiempo disminuye la acidez. Esta bacteria produce una nube de pH neutral alrededor de ella para protegerse del ambiente cido. Con ayuda de un indicador-cido base es posible determinar si el cultivo donde crece un microorganismo tiene un pH cido bsico. Un indicador cido-base es un cido dbil una base dbil. La forma no disociada del indicador tiene un color diferente a la forma disociada. El cambio de color no se da a un pH especfico sino que la coloracin cambia a lo largo de un rango de pH conocido como el intervalo de cambio de color. Uno de los indicadores cido base ms usados en este laboratorio es el rojo fenol con un intervalo de cambio de color de 6.4-8 y un cambio de color de amarillo en condiciones cidas a rojo en condiciones bsicas (Fig. 4.2). En esta prctica de laboratorio se evaluar la capacidad de diferentes microorganismos de crecer en diferentes valores de pH. Materiales Esta prctica se llevar a cabo en grupos de dos estudiantes y cada grupo har las pruebas para una de las especies de bacterias sealadas en la lista de materiales. - Cultivos de Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis y Sacharomyces cereviciae en medio lquido - Medio rojo fenol pH 9 (1 tubo) - Medio rojo fenol pH 7 (1 tubo) - Medio rojo fenol pH 5 (1 tubo) - Medio rojo fenol pH 3 (1 tubo) - Asa redonda - Caja de Petri con agar TSA estril - Mechero Bunsen - Marcador de punta fina - Cinta de enmascarar Procedimiento

Comentario [JSV2]: Figura 4.2. Equilibrio cido base del rojo fenol. En condiciones bsicas, pH > 8 (a) y en condiciones cidas, pH < 6 (b).

1. Etiquete los tubos de ensayo. Incluya en la etiqueta el nombre del microorganismo con el que le corresponde trabajar. 2. Aplicando las tcnicas de asepsia, inocule el microorganismo asignado en todos los tubos de ensayo con diferentes valores de pH. 3. Incube los tubos a 37oC por 48 horas. 4. Al finalizar el perodo de incubacin dibuje sobre la tapa posterior de una caja de petri con TSA estril dos lneas en cruz para dividir la caja en cuatro sectores 6. Utilizando las tcnicas de asepsia inocule cada uno de los sectores con el medio de diferentes valores de pH. 7. Incube la caja en posicin invertida a 37oC hasta la prxima seccin de laboratorio. 8. Verifique si hubo crecimiento o no y consigne los resultados en la tabla 4.6.

Bibliografa Atlas, R.M. & Bartha, R. 2001. Ecologa microbiana y Microbiologa Ambienta. 4ta ed. Addison Wesley, Madrid. 608 pp. Benson, H.J. 2002. Microbiological applications. Laboratory manual in General Microbiology. 8th ed. McGraw Hill. New York.381 pp. Black, G.J. 1999. Microbiology. Principles and Explorations. 4th ed. Prentice Hall. New Jersey. 786 pp. Madigan, M., Martinko, J. & Parker, J. 2002. Biologa de los Microorganismos de Brock. 10th ed. Prentice Hall. New York. 1011 pp. Prescott, L., Harley, J. & Klein, D. 2002. Microbiology. 5th ed. The Mc Graw Hill Companies. New York. 1026 pp. Snyder, L. & Chmpness, W. 2003. Molecular Genetics of Bacteria. 2 nd ed. ASM Press. Washington D.C. 549 pp. Wistreich, G.A. 2003. Microbiology Laboratory. Fundamentals and Applications. 2nd ed. Prentice Hall. New York. 668 pp.

INFORME DE LABORATORIO Prcticas 11, 12, 13 14 y 15. Nombre : ____________________________________ Fecha: ___________________________

1. Preguntas Defina Microorganismo psicrfilo

Microorganismo mesfilo

Microorganismo termfilo

Microorganismo hipertermfilo

Qu tipo de controles se utilizan en un laboratorio para asegurarse de que la autoclave esta funcionando apropiadamente.

Cmo podra demostrar si un microrganismo es termfilo termotolerante?

Qu es el medio rojo fenol y para que se utiliza?

Cul es la diferencia entre los agentes estticos y los agentes cidas usados en el control de las poblaciones microbianas. De dos ejemplos de cada uno de estos agentes.

Porqu la luz ultravioleta slo es til para controlar poblaciones microbianas en el aire en superficies expuestas?

Porqu la enzima ureasa disminuye la acidez?

2. Diagrama de flujo resumiendo el procedimiento a realizar especificado en la prctica.

3. Resultados Efecto de la temperatura sobre el crecimiento microbiano Registre los resultados del efecto de los diferentes tratamientos de temperatura sobre el crecimiento de los microorganismos. Utilice los siguientes smbolos para indicar los resultados. No hubo crecimiento (+), poco crecimiento (+), crecimiento intermedio (++) y crecimiento abundante (+++). Tabla 4.1
Microorganismo
Tratamiento Autoclave Agua hirviendo Pasteurizacin Control Color del medio rojo fenol despus de la incubacin. Qu significa? E. coli Staphylococcus sp. S. marcencens B. subtilis S. cereviciae

Qu microorganismo muestra mayor resistencia a las altas temperaturas? Explique a que se debe esa resistencia.

Fueron todos los tratamientos de temperatura igualmente efectivos para eliminar los microorganismos? Explique.

 Clasifique los microorganismos con base en su temperatura ptima de crecimiento. Tabla 4.2
Microorganismo
E. coli Staphylococcus sp. S. marcencens B. subtilis S. cereviciae

Efecto de la luz ultravioleta sobre el crecimiento microbiano Registre los resultados del efecto de la luz UV sobre el crecimiento de los microorganismos evaluados. Utilice los siguientes smbolos para indicar los resultados: No hubo crecimiento (+), poco crecimiento (+), crecimiento intermedio (++) y crecimiento abundante (+++). Anotar en la tabla, formacin y/o ausencia de pigmentos y otros cambios que se hayan presentado. Tabla 4.3.
Distancia Tiempo 30 s M. luteus B. subtilis Microorganismo E. coli S. marcencens Sarcina

130 mm

1 min

5 min

30 s

530 mm

1 min

5 min

Control

Porque se cubrieron las cajas de Petri inoculadas con papel aluminio antes de introducirlas en la incubadora?

 Qu microorganismos muestran mayor resistencia a la luz UV? Explique a que se debe esa resistencia.

Cul es la distancia y tiempo de exposicin ms efectivos para inhibir el crecimiento de los microrganismos evaluados?

Efecto de la presin osmtica sobre el crecimiento microbiano Registre los resultados del efecto de la presin osmtica sobre el crecimiento de los microorganismos evaluados. Utilice los siguientes smbolos para indicar los resultados: No hubo crecimiento (+), poco crecimiento (+), crecimiento intermedio (++) y crecimiento abundante (+++). Tabla 4.4 E. coli Glucosa (%) 5 10 25 Cloruro de Sodio (%) 5 10 25 Control S. aureus

 Cmo se clasifican estos microorganismos con base en su capacidad de crecer en diferentes concentraciones de solutos?

Explique a nivel fisiolgico cmo hacen los microorganismos para vivir en ambientes que presentan altas concentraciones de solutos.

Control de los microrganismos por medio de las sustancias qumicas Registre la zona de inhibicin (en mm) producida por los diferentes agentes qumicos en el crecimiento de los microorganismos y determine si el microorganismo es sensible, medianamente resistente resistente al agente qumico. Tabla 4.5 Zumo de limn E. coli Extracto de cebolla Enjuague bucal Tego

S. aureus

B. subtilis

 Cul es el microorganismo ms resistente a los diferentes agentes qumicos y a que se debe esa resistencia?

Registre el efecto del pH en el crecimiento de los diferentes microorganismos. Indique el crecimiento con un smbolo (+) e indique el no crecimiento con (0). Tabla 4.6 pH 9 7 5 3 E. coli Microorganismo S. aureus B. subtilis S. cereviciae

Cul es el microorganismo que presenta un mayor rango de tolerancia al pH? Explique porque este microorganismo logra esta tolerancia.

Explique porqu el pH puede controlar el crecimiento bacteriano

4. Lista de referencias bibliogrficas

Figura 4.1. Mtodo de siembra para valorar el efecto en el crecimiento de cuatro diferentes compuestos qumicos: Extracto de cebolla (C), Extracto de limn (L), Enjuague bucal (EB) y Tego 51 (T).

(C) (EB)

(L) (T)

Fotografa tomada por los autores de este manual

Figura 4.2. Equilibrio cido base del rojo fenol. En condiciones bsicas, pH > 8 (a) y en condiciones cidas, pH < 6 (b).

Imgenes tomadas de internet

http://www.google.com.co/imgres?hl=es&tbo=d&biw=1440&bih=719&tbm=isch&tbnid=JoBL7nWWseioEM:&imgrefurl=http://en.wikipedia.org/wiki/File:Phenol_red__acid_base_equilibria.gif&docid=gqE6RSF9N_uvYM&imgurl=http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/2/2a/Phenol_red__acid_base_equilibria.gif&w=738&h=337&ei=2W0aUZfhL4Oc9QSbnICwDg&zoom=1&iact=rc&dur=344&sig=110472449323989415672&page=1&tbnh=123&tbnw=268&start=0 &ndsp=26&ved=1t:429,r:1,s:0,i:79&tx=174&ty=75