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Universidad Nacional de Ingeniera

Facultad de Ingeniera Ambiental

CONTROL DEL
CRECIMIENTO
BACTERIANO
EFECTO DE LOS AGENTES FSICOS Y QUMICOS
Informe de laboratorio realizado el mircoles 21 de Mayo de 2014 para el
curso de Microbiologa Ambiental (BO 112)

Integrantes
Delfin Vargas Ricardo Javier

20132551I

Quispe Ochoa Jorge Arturo

20131322F

Contenido
Influencia de la temperatura ___________________________________________________________________________ 1
Introduccin _________________________________________________________________________________________________ 1
Objetivos _____________________________________________________________________________________________________ 1
Metodologa __________________________________________________________________________________________________ 1
Resultados ___________________________________________________________________________________________________ 1
Conclusiones _________________________________________________________________________________________________ 2
Discusiones __________________________________________________________________________________________________ 2

Influencia de agentes qumicos: leja, alcohol y NaCl_________________________________________________ 3


Introduccin _________________________________________________________________________________________________ 3
Objetivos _____________________________________________________________________________________________________ 3
Metodologa __________________________________________________________________________________________________ 3
Resultados ___________________________________________________________________________________________________ 3
Conclusiones _________________________________________________________________________________________________ 4
Discusiones __________________________________________________________________________________________________ 5

Influencia de agentes qumicos: pasta de diente _____________________________________________________ 6


Introduccin _________________________________________________________________________________________________ 6
Objetivos _____________________________________________________________________________________________________ 6
Metodologa __________________________________________________________________________________________________ 6
Resultados ___________________________________________________________________________________________________ 6
Conclusiones _________________________________________________________________________________________________ 7
Discusiones __________________________________________________________________________________________________ 8

Influencia del pH _________________________________________________________________________________________ 9


Introduccin _________________________________________________________________________________________________ 9
Objetivo: ______________________________________________________________________________________________________ 9
Metodologa __________________________________________________________________________________________________ 9
Resultados ___________________________________________________________________________________________________ 9
Conclusiones _______________________________________________________________________________________________ 10
Discusiones ________________________________________________________________________________________________ 11

Antibiograma ___________________________________________________________________________________ 12
Introduccin _______________________________________________________________________________________________ 12
Marco terico ______________________________________________________________________________________________ 12
CUANTITATIVO (Mtodo de dilucin) _________________________________________________________________ 12
CUALITATIVO (Mtodo de difusin en agar) __________________________________________________________ 12
Objetivos ___________________________________________________________________________________________________ 12
Metodologa ________________________________________________________________________________________________ 13

CONTROL DEL CRECIMIENTO BACTERIANO: EFECTO DE LOS AGENTES FSICOS Y QUMICOS

Influencia de la temperatura
INTRODUCCIN
En la siguiente prctica de laboratorio se estudi como era el crecimiento de E. coli a
distintas temperaturas, durante distintos tiempos. Los resultados fueron coherentes con
lo teora.

OBJETIVOS

Determinar la inhibicin bacteriana a medida que se aumenta la temperatura

Observacin macroscpica de la muestras de E. coli

Comparar el resultado obtenido con el proceso de esterilizacin.

METODOLOGA
1. Se prepar un caldo nutritivo
2. Se agreg 10 ml de medio en tres tubos de ensayo
3. Se inocul la cepa ( coliformes) en los tres tubos de ensayo
4. Se asign un tubo de ensayo como tubo de control
5. Se calent por bao mara a 60C por 5 minutos un tubo de ensayo
6. Se calent por bao mara a 100C por 5 minutos un tubo de ensayo
7. Se incubaron los tres tubos de ensayo de 24 a 48 horas
8. Se realiz la lectura macroscpica

RESULTADOS
Al observar la turbidez de los tres tubos de ensayo se obtuvo la siguiente informacin.
1. El tubo de ensayo de control tuvo mayor turbidez, es decir se mostr ms opco.
2. El tubo de ensayo expuesto a bao mara a 60C por 5 minutos present una ligera
turbidez, bastante menor en comparacin con el tubo de control.
3. El tubo de ensayo expuesto a 100 C por 5 minutos presentaba un color casi
transparente.

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CONCLUSIONES
De lo observado y con base en la teora se pudo concluir lo siguiente
1. La elevada turbidez en el tubo de ensayo de control, nos dice que E. coli creci sin
problemas, esto se debe a que antes de la incubacin, no se realiz tipo de
calentamiento, es decir, no hubo reduccin inicial de bacterias por calor.
2. La turbidez media del tubo de ensayo calentado a 60C por 5 minutos, nos demuestra
que el calor tiene capacidad de inhibir el crecimiento bacteriano. No obstante, a
pesar del calentamiento hubo un significativo crecimiento bacteriano, por lo tanto
podemos decir que el calentamiento a 60C por 5 minutos, no es un proceso de
esterilizacin.
3. De la casi transparencia del tubo de ensayo calentado a 100 C por 5 minutos,
podemos decir que la concentracin de E. coli no desapareci, pero se redujo
considerablemente. El calentamiento a a 100C por 5 minutos, tampoco es un
proceso de esterilizacin pero es ms efectivo que el anterior en la inhibicin del
crecimiento de E. coli

DISCUSIONES
De lo realizado anteriormente, se puede observar que al aumentar la temperatura de
calentamiento a un tiempo constante, 5 minutos, la concentracin de E. coli disminuye.
Es decir, existe una relacin proporcional inversa entre la temperatura de calentamiento
y la concentracin de E. coli. Entonces si quisieramos buscar un proceso de
esterelizacin para E. coli, este podra ser un calentamiento a una temperatura mayor de
100C, o tambin podra mantenerse la temperatura constante y aumentar el tiempo.
Un ejemplo de esto es el uso de las teteras domsticas para hervir agua, la tetera emite
un silbido cuando la velocidad de difusin del vapor de agua aumenta, indicando que el
agua est ebulliendo ( = 100C), como el calentamiento se realiz durante un tiempo
considerable (de 10 a 15 minutos) este proceso permite que el agua hervida sea
saludable para el consumo humano, ya que presenta una concetracin demasiada baja
de microorganismos.

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Influencia de agentes qumicos: leja, alcohol y NaCl


INTRODUCCIN
En la siguiente prctica de laboratorio se estudi como era el crecimiento de E. coli en
presencia de leja, alcohol y cloruro de sodio. Los resultados fueron coherentes con la
teora.

OBJETIVOS

Determinar la inhibicin bacteriana ante la presencia de leja

Determinar la inhibicin bacteriana ante la presencia de alcohol

Determinar la inhibicin bacteriana ante la presencia de una solucin de NaCl

Comparar la eficacia inhibitoria de los tres agentes qumicos utilizados

METODOLOGA
1. Se prepar un caldo nutritivo
2. Se verti 10 mL de caldo en 4 tubos de ensayo
3. Se inocularon los tubos de ensayo con E. coli
4. Se design un tubo de ensayo como tubo de control.
5. En un tubo de ensayo se agreg leja, en otro alcohol y en el ltimo, una solucin de
NaCl al 5%
6. Se sembr cada tubo de ensayo, utilizando el asa de kolle, en una placa Petri con el
medio Plate Count Agar
7. Se incubaron los tubos de ensayo y la placa de Petri por 47horas
8. Se realiz la lectura macroscpica

RESULTADOS
Al observar la turbidez de los cuatro tubos de ensayo se obtuvo la siguiente informacin.
1. El tubo de ensayo de control tuvo mayor turbidez, es decir se mostr ms opco.
2. El tubo de ensayo con leja tena una apariencia totalmente traslucida.
3. En el tubo de ensayo con alcohol se observ una leve turbidez.

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4. En el tubo de ensayo con solucin de NaCl al 5%, se observ una turbidez similar al
tubo de ensayo de control
Al observar el nmero de colonias de la placa petri se obtuvo la siguiente informacin.
1. El el cultivo proveniente del tubo de ensayo control, se observaron un gran nmero
de colonias.
2. En el cultivo proveniente del tubo de ensayo con leja solo se observaron dos
colonias.
3. En el cultivo proveniente del tubo de ensayo con alcohol se apreciaron pocas
colonias, en comparacin al cultivo de control
4. En el cultivo proveniente del tubo de ensayo con NaCl al 5% se observaron un gran
nmero de colonias, similar al cultivo de control.

CONCLUSIONES
De lo observado en los tubos de ensayo, la placas petri y con base en la teora se pudo
concluir lo siguiente
1. La elevada turbidez en el tubo de ensayo de control y el gran nmero de colonias en
el cultivo, nos dice que E. coli creci sin inconvenientes, porque al tubo de ensayo no
se le agreg ningun agente inhibidor.
2. La transparencia del tubo de ensayo con leja y las dos colonias observadas en el
cultivo, nos muestra que la leja inhibe el crecimiento bacteriano y de manera
considerable, mas no del todo. Es decir es un eficaz agente desinfectante.
3. La turbidez media del tubo de ensayo con alcohol y las pocas colonias presentes en
el cultivo, permite inferir que el alcohol tiene una ligera capacidad para inhibir el
crecimiento de E. coli.
4. El NaCl al 5% no es un agente inhibidor del crecimiento de E. coli, ya que a pesar de
su presencia en el caldo nutritivo, la bacteria creci en el tubo de ensayo y la placa
petri como si fuese la muestra de control.

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DISCUSIONES
Segn la Federacin Nacional de Asociaciones de Fabricantes de Leja y derivados, la
leja

tiene

una

gran

variedad

de

usos

domsticos

(ver.

http://fenalyd.com/index.php?m=Derivados ), y en la mayora de estos procesos la leja


actua como agente desinfectante. Y efectivamente, con los resultados de esta prctica
podemos cerciorar que la leja tiene un alto potencial para la eliminacin de bacterias,
casi en su totalidad. Asu vez, el alcohol tambin se utiliza como desinfectante en heridas
y en laboratorio, debido a su capacidad para eliminar la carga bacteriana. Sin embargo,
se pudo apreciar una notable diferencia entre la capacidad desinfectante del alcohol y la
leja, si es as, entonces Por qu el alcohol se sigue utilizando y no ha sido reemplazado
del todo por la leja? La respuesta radica en las propiedades fsicas de estas 2 sustancias,
el alcohol es mucho ms volatil que la leja y puede evaporarse ms rpidamente,
adems que el hipoclorito de sodio es un agente oxidante bastante fuerte y al mezclarse
con otras sustancias puede reaccionar generando productos desconocidos.

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Influencia de agentes qumicos: pasta de diente


INTRODUCCIN
En la siguiente prctica de laboratorio se estudi como era el crecimiento de E. coli frente
a la presencia de 4 pastas de dentales: Colgate total 12, Colgate triple accin, Kolynos y
Dento.

OBJETIVOS

Determinar la efectividad antibacteriana de las pastas dentales.

Comparar la efectividad antibacteriana entre las pastas dentales.

METODOLOGA
1. Se escogieron 4 pastas dentales diferentes: Colgate 12 horas, Colgate triple accin,
Kolinos, Dento
2. Se sembraron por diseminacin una muestra de saliva de dos personas diferentes,
en una placa Petri con el medio Plate Count Agar
3. Se hizo una divison imaginaria de 4 cuadrantes en la placa Petri
4. Se agreg una pequea cantidad de pasta dental a cada cuadrante respectivo
5. Se incubaron las placas petri.
6. Se volte la placa pasada las 24 horas de estar en la incubadora, para eliminar el agua
que se poda haber quedado en la placa
7. Luego de 48 horas aproximadamente, se pas a hacer la lectura macroscpica de la
placa

RESULTADOS
De la observacin macroscpica de la placa se pudo obtener algunas de estos resultados:
1. El resultado de la pasta dental Colgate 12 horas (1) , se perdi debido al agua que se
encontraba en ese cuadrante.
2. En el cuadrante de Colgate triple accin (2), se observ un numero bajo de colonias
y un halo formado alrededor de la pasta agregada de 3 cm de dimetro

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3. En el cuadrante de Kolinos (3) , se observ casi el mismo nmero de colonias que el


segundo cuadrante y un halo formado alrededor de 2.5 cm de dimetro
4. En el cuadrante de Dento (4), se observ un mayor nmero de colonias, respecto a
los dos cuadrantes anteriores y el halo formado es de 2 cm de diametro

CONCLUSIONES
1. Colgate triple accin obtuvo el mayor dimetro alrededor de la pasta agregada,
adems que tiene un menor crecimiento bacteriano alrededor, cual nos indica inhibe
mas a este tipo de bacterias que las otras dos pastas
2. Kolinos es el segundo mejor inhibidor, si bien tiene el mismo numero de colonias
alrededor, el dimetro del halo es menor al formado por Colgate triple accion
3. Si bien Colgate triple accin es el mejor agente inhibidor, eso no la hace la mejor
pasta de diente que se puede utilizar ya que las bacterias de la boca son diferentes a
la bacteria utilizada.
4. En el cuadrante de Dento, se observo mayor crecimiento bacteriano y un halo de
dimetro menor a comparacin de los otros dos, lo cual no la hace una mala pasta
dental segn lo especificado en el punto numero 3

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DISCUSIONES
Luego de lo ocurrido con la pasta colgate total 12, podemos decir que trabajar con pasta
de dientes requiere que se considere el comportamiento de la pasta ante el
calentamiento, as como la consistencia de esta. Ya que al parecer, colgate total 12 al
calentarse se diluye con mayor facilidad haciendo ms sencilla su dispersin.
Como se mencion en conclusiones E. coli es una enterobacteria que, por lo general, no
debera estar presente en el tracto bucal, y si hay es producto de la ingesta de alimentos
contaminados. Es por eso que el concluir que una pasta es mejor que otra por inhibir
ms a E. coli no sera correcto. No obstante si la bacteria utilizada hubiera sido
Streptococcus mutans mutans, podra haberse obtenido una mejor comparacin de
calidad.

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Influencia del pH
INTRODUCCIN
En la siguiente prctica de laboratorio se estudi como era el crecimiento de E. coli en
un medio cido, bsico y neutro. Los resultados fueron coherentes con la teora.

OBJETIVO:

Determinar la influencia del ph en el crecimiento bacteriano

Obtener un caldo nutritivo de pH bsico y cido.

Observar entre que intervalo de ph puede an existir crecimiento bacteriano

METODOLOGA
1. Se prepar el caldo nutritivo
2. Se utilizaron tres tubos de ensayo, en los cuales se agreg 10 mL de caldo en cada
tubo de ensayo
3. Se separ el tubo de ensayo de control (tubo N5), al tubo de ensayo N4 se le agrego
3.5 ml de NaOH (0.1 N) y al tubo de ensayo restante (sin nmero) se le agrego 4.5 ml
de HCl (0.1 N)
4. Con ayuda de un potenciometro se realizo la medicin del pH de cada tubo de ensayo.
5. Se inoculo E. coli en los tubos de ensayo
6. Se llev a incubar las tres muestras por 46 horas a 37 C
7. Se realiz la lectura de las muestras (macroscpicas)

RESULTADOS
De la medicin del pH de las soluciones con el potencimetro se obtuvo lo siguiente.
pH

Caracterstica del caldo

Tubo N5

6.9

Neutro

Tubo N4

10.279

Bsico

Tubo sin nmero

2.264

cido

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De lo observado en los tubos de ensayo se obtuvieron los siguientes resultados.


1. En el tubo de ensayo control (tubo N5) se observa mucha turbidez.
2. En el tubo de ensayo N 4 se observa que existe una turbidez bastante leve.
3. El tubo de ensayo sin nmero se mostr totalmente traslcido.

CONCLUSIONES
De lo observado y con base en la teora se pudo concluir lo siguiente
1. La elevada turbidez en el tubo de ensayo de control, nos dice que E. coli creci sin
problemas, esto se debe a que E. coli es una bacteria neutrfila y un pH de 6.9
favorece su crecimiento.
2. En el tubo de ensayo N4 hub un muy bajo crecimiento de E. coli debido a que el
medio en el que se incub era bsico (pH=10. 279).
3.

El que no se haya apreciado turbidez alguna en el tubo de ensayo sin nmero, es


prueba de que en un medio muy cido (pH= 2.264) E. coli no se desarrolla.

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DISCUSIONES
A pesar de que haya sido poco, el hecho de que E. coli haya crecido en un medio de pH=
10.279, nos dice que algunas bacterias de E. coli tiene la capacidad de adaptarse a un
medio de por los menos 3.2 puntos de pH, con respecto al 7 (pH neutro), es decir el
posible rango de pH para que E. coli crezca es de = [3.8, 10.2] aproximadamente. No
obstante ante una variacin mayor E. coli aparentemente deja de crecer, un cultivo en
placa petri del tubo de ensayo con medio cido hubiera confirmado del todo esto ltimo.

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Antibiograma
INTRODUCCIN
Esta prctica no se realiz en laboratorio por falta de material, ms no podemos
prescindir de ella, es por eso que a continuacin se describir como se hubiese realizado
el experimento de haberse tenido los materiales.

MARCO TERICO
El antibiograma es una prueba que sea usa para determinar la sensibilidad de una
colonia bacteriana a un antibitico o grupo de antibiticos.
Permite evaluar la eficacia de un antibitico sobre una bacteria. Ya que permite definir
para cada antibitico, si la bacteria es sensible (antibitico eficaz), intermedio
(antibitico eficaz en ciertas condiciones) o resistente (antibitico ineficaz)..
Entre los mtodos para la realizacin del antibiograma podemos dividirlos en:
CUANTITATIVO (Mtodo de dilucin)
Consiste en la determinacin de la bacteria en concentraciones diferentes de un
mismo antibitico. Se observa el crecimiento de microorganismos mediante la
aparicin de turbidez.
CUALITATIVO (Mtodo de difusin en agar)
Es el ms usado en el laboratorio y consiste en que se determine la
susceptibilidad ante diversos antibiticos entre bacterias de la misma especie.
Este mtodo tiene varias variantes como el mtodo E-test, Kirby Bauer, etc.

OBJETIVOS

Determinar la susceptibilidad de una colonia bacteriana al antibitico empleado

Seleccin de un antibitico que inhiba la colonia bacteriana

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METODOLOGA
1. Se siembra coliformes en una placa petri.
2. Elegimos el antibitico a usar
3. Se sobreponen los discos del antibitico distribuidos de tal manera que no estn
demasiado juntos uno del otro
4. Incubar 24 horas
5. Medir el diametro que se produce alrededor del disco del antibitico
6. Comparar con tablas establecidas

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Una de las tablas establecidas que se tienen seria (Mtodo Kirby Bauer)

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