Bioquímica Clinica

FOD Conferencia
Tiempo: 2 horas.
Lugar: Aula.
Tema 1: Metodología en el laboratorio de Bioquímica Clínica.
Sumario: Preparación de reactivos: Soluciones normales, molares y porcentuales. Linealidad de
un método: Curva de calibración. Métodos utilizados en Bioquímica Clínica y sus principios.
Utilidad de estos métodos en el diagnóstico médico.

INTRODUCCION
Pase de lista
Efemérides.
La química Clínica es la rama del laboratorio que estudia la s alteraciones cualitativas y
cuantitativas que ocurren en el organismo desde el punto de vista químico valiendose de métodos
analíticos y es de importancia conocer en esta algunos conceptos:
Reactivo: Toda sustancia que al ponerse en contacto con otra provoca la aparición de un
fenómeno evidente o no, y este puede manifestarse por: desprendimiento de gas, producción de
un color, etc, cuando el fenómeno no es evidente se recurre a artificios químicos como ocurre en
los métodos tritimétricos ( reacciones de neutralización) que para evidencialrlas se necesita un
indicador (Cloro, reserva alcalina y otras reacciones de redox).
La calidad de las investigaciones dependen de la pureza del reactivo , en el caso de los patrones la
dependencia es crítica ya que son soluciones de referencias que permite el cálculo de la sustancia
a evaluar en la muestra.
El reactivo  1 en el laboratorio es el Agua y su calidad depende de su pureza (calidad técnica,
farmacopea, pura para análisis, químicamente pura, desionisada).
Mediante la conductividad eléctrica se puede medir la pureza del agua. ( ver libro Thielamn). El
agua debe almacenarse en plástico, la desionizada debe removerse diariamente. En fotometria de
emisión se usa desionizada ó bidestilada, para hierro y otros metales bidestilada.

DESARROLLO
Objetivos: Interpretar la bioquímica y los métodos que se utilizan en esta rama al preparar
soluciones. Interpretar curvas de calibración.
Definir métodos en bioquímica clínica y sus principios así como utilidad.

SOLUCIONES
Normales: Son aquellas que contienen 1 Equivalente/gramo de sustancia disueltos en 1000 ml de
solución.
Eq/gramo es el peso de la molécula dividido entre el número de oxidación ó valencia.
Ej: Cuantos gramos de KCl, cloruro de potasio, se necesitan para preparar una solución de 1 litro
de disolución 0,2 N, K de 30 gr, Cl de 36,. El peso de la fórmula , o sea peso final de 75 gramos.
75 gr disueltos en 1000 mL de disolvente sería 1N.
75gr----------------------1000ml-----------------1N
X----------------------------------------------------0,2N
X es igual a 75 por 0,2 entre 1, que es igual a 14 gr que son los que se necesitan.
Cuantos gramos de SO4H2 se necesitan para preparar una solución normal de ácido sulfúrico.
S es igual a 32 gr, O 16 gr, e H2 1gr.
Las soluciones normales pueden ser 1N, 3N, 6N, según contengan 1, 3, 6, equivalentes gramos.
También se usan los submúltiplos: 0,5N, 0,25N, 0,1N según contengan 0,5, 0,25, 0,1
equivalentes gramos.
Recordar:
 Al ácido se le añade el agua lentamente.
 Para medir el soluto en unidades de volumen tener en cuenta su densidad.
 Cuando se obtiene el peso de sustancias hidratadas se les suma el peso de las moléculas
de agua que contenga.
 Al pesar tener en cuenta la riqueza del producto o pureza.
Tarea: Prteparar una solución normal de HCL 1,4N para fregar cristaleria de hierro con un
volumen de 1L, densidad en la etiqueta de 1,19 gr y pureza 35. Recordar que la concentración
normal de un producto se busca por la fórmula
CNd%10 10: es una cte, Pf :peso fórmula d: densidad %:pureza.
PF
Molares:
Son aquellos que contienen una molécula gramo de la sustancia disueltas en 1000 ml de solución,
o peso fórmula disuelto en 1000 ml de solución de esa misma forma se preparan las soluciones
molales o molal.
Ej: Cuantos gramos de ClK hay disueltos en una disolución 3 molar
Cl-PM: 36,45 gr
K-PM: 39,10 gr Peso formula 75,55gr
1molar-----------------75,55gr---------------1000ml
3molar----------------- X
Contiene 226,65 gr en 1000 ml de disolución
Prepare una solución molar de SO4H2 , conteste los gramos a disolver.
Las soluciones molares y molales pueden ser 1, 5 según contengan1,5 moléculas gramos de la
sustancia, también pueden ser 0,5, 0,1 molar o molal según contengan 0,5 o 0,1 gramos disueltos
de la sustancia en 1000 ml de solución.
Tarea
Tengo una solución 5 molar de SO4H2 , cuantos gramos necesito del ácido para solo preparar 10
ml de la misma solución 5 molar.
La molécula gramo de SO4H2  98 gramos disuelta en 1000 ml es 1 molar, 98 por 5 es igual a 490
gr en 1000 ml es 5 molar.
490--------------------1000ml------------------5molar
X----------------------10 ml---------------------5 molar
Se necesitan 49 gr en 10 ml y es 5 molar.
Porcentuales
Son aquellas que el peso en gramos del soluto está disuelto en 100gr de disolvente (p/p) o en 100
ml de disolvente p/v.
Ej Preparar una solución de NaOH al 15%
Se pesan 15 gr de la sol de NaOH y son disueltos en 100 ml de agua o de disolvente (p/v).
Tarea
Si tengo 2 gr de una solución disuelta en 500 ml de disolución , cuál sería el porciento de dicha
solución.
Xgr----------------100ml X2 x 1000,4%
2gr-----------------500ml 500
Cuantos gramos de solución se necesitan para preparar 300 ml de disolución, al 8 % en peso.

Linealidad del método

Para la selección de los métodos analíticos se tiene en cuenta su utilidad, sencillez , rapidez,
economía, etc, la linealidad es importante para el equipo y el método en cuestión.
La lineallidad viene dada por la curva de calibración del método, la dificultad de la curva es la
obtención del patrón, como el caso de la bilirrubina colorimétrica y el uso supuesto del patrón de
Hoffman que no es un patrón real , con permanganato de potasio, los patrones para la lienalidad
del equipo son con soluciones especiales o cristales especiales
Pasos a seguir en la curva de calibración.
 Disponer de patrones necesarios a partir de la solución matriz. Usar la fórmula para
obtener cantidad de la solución matriz y solvente para tener concentración deseada
VSm VoxCd Donde: Vsm: Volumen de la solución matriz
Cm Vo: Volumen a obtener Cd: Concentración deseada.
Cm: Concentración de la matriz.
La solución matriz son soluciones de mayor concentración a las deseadas y logran mayor
exactitud en las curvas de calibración, ya que se pesan cantidades mayores para prepararlas.
 Montar los patrones por duplicados y someterlos al método seleccionado.
 Realizar lecturas en densidad óptica o % de tramitancia con filtro o longitud de onda
apropiado
 Llevar los resultados a papel milimetrado si la lectura se realizó en DO o semilogaritmico
si se hizo en % de tarmitancia colocando concentraciones en las ordenadas y las Do O %
de tramitancia en las abcisas, situando el punto en cada intercepción uniendolos con una
línea, si es recta el método es lineal o de lo contrario el método ó el equipo no lo son.
Esquema: Con un ejemplo.
 Una vez escogida la amplitud en cada uno de los ejes debe se r respetada.
Tarea
Realizar una curva de calibración para Hb en fotocolorímetro chino para realizar una tabla de
cálculos, el volumen final de cada patrón será 5 ml con Drabkin. La solución matriz es de 20 g/L.
Cianuro de Hb.
A partir de la matriz buscar concentración de cada patrón, las concentraciones deseadas serán:
0g/L, 4g/L, 8g/L, 12g/L, 16g/L, 20g/L .
Fórmula VsmVoxCd Vsm5x4 Es igual a 1
Cm 20

Número Patrones Drabkin Concentr g/L Dóptica

1 0 5 0 0.000
2 1 4 4 0.090
3 2 3 8 0.180
4 3 2 12 0.270
5 4 1 16 0.360
6 5 0 20 0.450

Hacer una representación gráfica para saber si es lineal o no.

Puede ser utilizada la regla de cálculo circular , si se contara con patrones de Hb cada ves que
leyeramos una muestra. Esta está adaptada para ser usada en medidas fotométricas, equipos que
siguen las leyes de Lambert-Beer. Tienen una escala externa graduada de 0 a 1000
concentraciones y una interna graduada de 0 a 100 en % de tramitancia, ambas se desplazan
paralelas unas a otras con una regla indicadora del centro de forma deseada, las lecturas mayores
de 90 o menores de 10 no se pueden leer y se buscaran la concentración con la fórmula de la
colorimetria Cm  DoM x Cp , buscando la densidad óptica a partir de %T en la tabla.
Dop
En otros casos puede usarse el factor de calibración Fc, esto depende del equipo y asi se obtiene
la concentración de la muestra.
CM Fc x DoM Fc Co
DoP
Los equipos modernos introducen en su memoria el Fc, al obtener el equipo la DoM la memoria
multiplica directamente el Fc dando los resultados.
Constante de adición:
Esto se realiza después de leer los patrones (curva de calibración) y se denomina CA (constante
de adición), SE realiza de la siguiente forma;
CA Es igual a la división de la diferencia de la concentración entre la diferencia de la trasmisión.
Se construye una tabla con las concentraciones correspondientes a cada % de trasmisión sumando
a cada resultado el valor anterior mas la CA en cada intervalo de % de T y concentración.
Para utilizar esta es necesario tener las lecturas en % de T llevando las DO a % de T. Traer de
tarea la curva de HB.
Ej
Patrones Concentración mg/% % de Tramitancia
1 30 60
2 22.5 65
3 15 75
4 7.5 90
5 0 100

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
40
50
60 30 28.5 27 25.5 25 22.5 21.7 21 20.2 19.5
70 18.7 18 17.2 16.5 15.7 15 14.5 14 13.5 13
80 12.5 12 11.5 11 10.5 10
90 7.5 0

Como puede verse para los cálculos fotocoloriméricos pueden utilizarse:

 Curva de calibración en papel.
 Regla del disco circular
 Tabla de constante de adición Formula colorimétrica
 Factor de calibración.
Todas las reglas anteriores son adoptadas para ser utilizadas en la fotocolorimetría.
Métodos en el laboratorio de Bioquímica Clínica.

 Gravimétricos: Primeros métodos que surgieron al aparecer las primeras balanzas con
cierto grado de precisión.
 Volumétricos: Métodos más prácticos que los anteriores y precisos al surgimiento de la
cristaleria, cuidadosamente calibrados.
 Fotométricos:Este significó un paso de avance a fines del sigo XlX basados en la
absorción de la luz por una solución coloreada siendo posible cuantificar sustancias que
no podían medirse con los anteriores métodos por ser engorrosos.
La invención del fotómetro al permitir métodos basados en la absorción de la luz por una
sustancia coloreada hizo posible cuantificar sustancias que no podían medirse por los
anteriores métodos conocidos.
En el siglo XX con la aparición de equipos de separación selectiva de los componentes de la
muestra.(cromatografía, electroforesis,ultracentrifugación), los electrodos para medición
electromédica, la introducción de isótopos radiactivos y la aparición de una gama de
procedimientos de Inmunoanálisis, el empleo de equipos de amplificacióny procesamiento de
imágenes, la entrada de analizadores químicos y hematológicos , la espectrometria de masas y
la resonancia magnética nuclear, el empleo de láser son algunos ejemplos del incesante y
acelerado desarrolllo de la tecnología aplicada al diagnóstico clínico y su utilidad en el
diagnóstico médico.
Preguntas de comprobación
1.-¿ Que es Química Clínica? Es la rama del lab que atiende las alteraciones cuali
cuantitativas que ocurren en el organismo de forma química utilizando métodos ananlíticos.
2.-Que es un reactivo¿
3.-Si el fenómeno de una reacción no es evidente, ¿ que se puede hacer.¿
Se recurre a artificio químicos como métodos titrimétricos, cloro, reserva alcALINA.
4.-¿ Cual es el principal reactivo del lab y cuales son sus caracteristicas?
5.-¿ Que son la soluciones normales, molares y porcentuales?
6.-Mencione los métodos utilizados en el lab.
7.-Diga la utilidad de los métodos desarrollados en el lab.

Conclusiones
Vimos la preparación de soluciones en el lab clínico, la próxima clase hablaremos de métoods
electro ópticos: fotómetros de absorción y de emisión, turbidimetria , nefelometria.Leyes de
Lamber Beer y automatización en el lab.

Bibliografía
Encarta 2005
Principios y metodología en Bioquimica CLinica
;Manual de técnicos de laboratorio.