Automatización

en Hematología
 Mg. Marden Alfaro G.
 Centrífuga de Microhematocrito

Cámara de Neubauer o Contador Hematológico

Hemocitómetro
Reportye numerico
Reporte grafico(Histogramas)
 LABORATORIO DE
HEMATOLOGIA

ANALISIS DE ELEMENTOS ANALISIS DE

FORMES COAGULACION

RECUENTO DE LEUCOCITOS
RECUENTO DE ERITROCITOS
RECUENTO PLAQUETAS
HEMOGRAMA DOSAJE DE HEMOGLOBINA
(EXAMEN DE HEMATOLOGIA POR HEMATOCRITO
EXCELENCIA)
CONSTANTES CORPUSCULARES
FORMULA LEUCOCITARIA
OBSERVACIONES DE FROTIS DE
SANGRE PERIFERICA (HEMOPARASITOS).
 VENTAJAS DE EQUIPOS
AUTOMATIZADOS
Velocidad.
Reproducibilidad.
Mayor contaje en Nro células.
Reducción de costos.
Obtención de nuevos parámetros
Visualización: histogramas - dispersogramas.
No necesita experiencia laboral.
No tiene sesgos de coloración, distribución y
extendido .
 AUTOMATIZACION DEL HEMOGRAMA
POR ETAPAS

5ta GENERACION
SEMI-
AUTOMATIZADO
AUTOMATIZADO
3ra GENERACION
1ra GENERACION 2da GENERACION FORMULA 4ta GENERACION
NUMERACION DE 3 FORMULA DE 5
GB, GR,PLT, POBLACI POBLACIONES
ONES
HB,HCT,
VCM 7 PAR 8 PAR 18 PAR + 22 PAR RETIC. CD4/CD8
HIS.DIF

1954 1972 1980 1990 1994 1995

PRIMERA GENERACIÓN DE ANALIZADORES
HEMATÓLOGICOS AUTOMÁTIZADOS

 El contador Coulter
Modelo S fue el
primer instrumento
que de manera
automática procesó
datos
multiparamétricos en
sangre :
 Eritrocitos (RBC)
 Leucocitos(WBC)
 Plaquetas (PLT)
 TODO CONTEO CELULAR
COMPARTE TRES PASOS BÁSICOS

 Dilución de la sangre

 Toma de muestra de una

cantidad medida

 Conteo de
partículas.
La Célula
Propiedades fisicoquímicas de
las células
 Variedad de tamaños
 Relación núcleo citoplasma propio de cada
célula.
 Densidad caracterizable y diferente entre
células.
 Malas conductoras de la electricidad
 Se comportan en forma diferente a la luz:
absorben, refractan, difractan y dispersan.
 Composición citoquímica diferente y
caracterizable para cada una.
 VOLUMETRIA
El recuento celular absoluto se realiza conociendo el volumen
preciso de sangre total diluida que atraviesa la abertura
durante el ciclo de recuento
HASTA DONDE SE PUEDE
CONFIAR ?
 Métodos Para el
recuento celular
- Impedancia

- Citometría de Flujo
PRINCIPIOS DE MEDICIÓN DE LOS
EQUIPOS AUTOMATIZADOS

IMPEDANCIA ELECTRICA
DISPERSION DE LUZ
ENFOQUE HIDRODINAMICO
RADIOFRECUENCIA O
CONDUCTIVIDAD
CITOQUIMICA
FLUORESCENCIA.
CITOMETRIA DE FLUJO
 Métodos Para el recuento
celular
 Los sistemas por impedancia fueron los
primeros utilizados para conteo de
partículas, pero tenían varios defectos.
 Los sistemas por citometría de flujo
revolucionaron el conteo celular mediante el
enfoque hidrodinámico.
 El enfoque hidrodinámico también se aplico
en impedancia.
 Equipos automatizados por
impedancia.

El principio de impedancia se
basa en el aumento de la
resistencia producida cuando una
célula sanguínea con baja
conductividad pasa a través de un
campo eléctrico. El número de
intermitencias indica la cifra de
células sanguíneas y la amplitud
de cada intermitencia es
proporcional al volumen de la
célula.
 Impedancia eléctrica
una célula pasa a través
de una apertura por la
cual fluye una corriente
eléctrica continua y
constante en un medio
electrolítico, generará una
variación en la velocidad
de flujo de esta corriente
eléctrica: IMPEDANCIA
ELECTRICA.
 Impedancia eléctrica
El número de pulsos:
NÚMERO DE PARTICULAS

Amplitud del pulso eléctrico:

VOLUMEN DE LA CÉLULA
- Es directamente proporcional
 Enfoque Hidrodinámico

 Alineamiento de Tubo atrapador

Pipeta de muestra

partículas por
medio de dos
fluidos de
Apertura
diferentes Reactivo de
densidades o Cubierta

velocidades.
 Histogramas

 Definición
Representan una
distribución de
frecuencias por la
acumulación de
impulsos, que se generan
cuando las células
atraviesan la apertura de
los electrodos
 Propósito del histograma

 Identificary clasificar la
pauta de variación
 Desarrollar una explicación
razonable y relevante de la
pauta
 HISTOGRAMA
 GRAFICO QUE REPRESENTA
DOS VARIABLES:
-Volumen de la partícula: Eje
de las abscisas (X), en femtolitros.
-Número de partículas: Eje de
las ordenadas (Y):
 HISTOGRAMA DE GLOBULOS
ROJOS
 Para determinar los
GR se diluye la
muestra en un medio
isotónico.
 La curva de GR es
cónica, modal y su
tamaño es de 60 a
120 fl.
Recuento de Glóbulos Rojos

VCM

Zona izquierda Zona derecha :

Evidencia de fragmentos
Citoplasmatico Pasaje de
Grandes Plaquetas coincidencia
Agregados celulares
Globulos blancos
ALTERACIONES EN HISTOGRAMAS

Izquierda: células
microciticas, esquistocitos,
dacriocitos de registro menor
de 60 fl.

Derecha: células
macrociticas, macro
ovalocitos, eliptocitos

Curva Bimodal: existe dos

poblaciones celulares, en
pacientes transfundidos,
anemias una vez iniciado el
tratamiento.
 Histogramas
De Glóbulos Rojos

 .
Desplazamiento a la Izquierda:
Microcitosis

VCM
 Histogramas
De Glóbulos Rojos

 .
Desplazamiento a la Derecha:
Macrocitosis

VCM
 Histogramas
De Glóbulos Rojos
 . RDW Mayor de 15%:
Anisocitosis

RDW
Recuento de Globulos Rojos
(Los Parámetros Calculados)

Ht = Hematocrito Ht = (GR x VCM)/10

HCM = Hemoglobina Corpuscular Media

Hb
CMH = x 10
RBC 10 6/mm3

CHCM = Concentración de Hemoglobina Corpuscular

Media
Hb l
CHCM = x 1000
HTO 10 6/mm3
 MEDICION DE HEMOGLOBINA

Photo-
détecteur

Source
lumineuse
Filtre
Cuve
de
mesure

CIANMETAHEMOGLOBINA
SULFATO LAURIL DE SODIO
 HISTOGRAMA DE GLOBULOS
BLANCOS
 Se diluye la sangre en un
medio que lisa los eritrocitos,
a su vez desprenderá el
citoplasma de los GB
dejando libres los núcleos,
los cuales serán medidos y
contados.
 Los GB se agrupan
formando 3 curvas :
Linfocitos 50 a 100 fl.
Mixtos o Intermedios 100 a
150 fl.
Granulocitos 150 a 380 fl.
 Anormalidades
CURVA DE LINFOCITOS:
Perdida de altura:
disminución del numero
de linfocitos.

Arranque extenso en
Y: células o restos
celulares de menor
tamaño que un linfocito
pequeño
(macroplaquetas,
núcleos de hematíes).
 Anormalidades
CURVA DE LINFOCITOS:

Distribución no
normal a la derecha:
linfocitos atípicos,
aumento de monocitos
o de linfocitos grandes.
 CURVA DE
: GRANULOCITOS
Curva plana o no
existente:
granulocitopenias,
acompañada de
linfocitosis.

Curva extendida a 400

fl con extensión a
mononucleares:
neutrofilia, células de
líneas mas inmaduras
(mielos y metas).
 Histogramas
de Plaquetas
 La curva normal es cónica, modal y su
tamaño es 2 a 20 fl.

Zona de Macroplaquetas,
Agregados plaquetarios, microcitos
Alarmas en el histograma
 PRINCIPALES ALARMAS:

.
 PLTR: Indica que el recuento de plaquetas está por debajo del rango
de normalidad.
 LRI: Indica interferencia en la región baja de plaquetas.
micro plaquetas inclusiones eritrocitarias
fragmentos celulares hemólisis

 URI : Indica interferencia en la región alta de plaquetas.

microcitos Fragmentos de eritrocitos
macroplaquetas satelitismo plaquetario
agregados plaquetarios
 Alarmas por encima del
histograma
 Indica interferencia en la región entre 20 y
40 fl. Se activa por alguna de las siguientes
causas:
Macroplaquetas Esquistocitos
Microcitos Satelitismo plaq.
Agregados plaquetarios
 Anormalidades
No arranque en x:
numero de plaquetas
esta disminuido.

Extendida 25-30 fl:

aumento en el tamaño
de las plaquetas y
están aumentadas.
MÉTODOS DE DISPERSIÓN DE LUZ

BASADOS EN CITOMETRIA DE FLUJO

 Equipos automatizados por
dispersión óptica. Principio
 Está basada en las mediciones de la
dispersión de la luz obtenidas de una
sola célula sanguínea que pasa a
través de un haz de luz (óptico o
láser). Estas células crean una
dispersión hacia delante y lateral las
cuales se detectan mediante
fotodetectores .El grado de dispersión
hacia delante es una mediación del
tamaño de la celular mientras que el
lateral es una medición de la
granularidad de la célula..
 Señales de Dispersión
 La dispersión resulta de la
interacción de la luz con
una partícula que produce
un cambio de dirección)
en todas las direcciones
del espacio.
 Determinan: Tamaño
celular, la membrana, el
núcleo y el material
granular del interior de la
célula, llamado
complejidad.
Método de radio frecuencia

Corriente directa Radio frecuencia

Mide tamaño Mide densidad celular

Sistema óptico de la dispersion
de luz
Dispersogramas
 Son gráficas analíticas, que en base a la
metodología de medición celular, logra
ubicar bi y tridimensionalmente los distintos
componentes celulares de la sangre.
 Permite determinar la densidad celular de
cada población
 Las alarmas son altamente específicas
 Dispersogramas de
Leucocitos
Son los más ampliamente
estudiados
Enorme contribución en el
esclarecimiento de las
series comprometidas con
la patología
Son dependientes de la
metodología de medición.
 Beckman Coulter: VCS
 Volumen
 Conductividad
 Scatter Light
VOLUMEN Y DISPERSION DE LUZ
 MAPSS
Multi Angle Polarized Scatter Separation
– 0° Tamaño
– 10° Complejidad (Estructura Interna)
– 90° Lobularidad (Estructura Nuclear)
– 90D° Refringencia de los Gránulos
 Información de la dispersion de
luz en diferentes ángulos
90°Pol/ 90°dep Granulations
Medida a 0º
sirve para medir el tamaño
celular
10° Structure
Medida a 10º
Faisceau laser 1°/3° (0°) Taille mide la complejidad celular
P Medida a 90º
o
mide la superficie celular y
l
a la estructura interna
r ( lobularidad )
i Medida a 90ºD
s
a mide determinados tipos de
t 1°/3° (0°) Taille
granularidad celular
i 10° Structure
o
n
 Dispersogramas
0°
TAMAÑO

NEUTROFILOS
MONO
EOSINOFILOS
BASO
LINFOCITOS

COMPLEJIDAD 10°
 Dispersogramas

90°
LOBULARIDAD

POLINUCLEARES

MONONUCLEARES

10°
COMPLEJIDAD
 Dispersogramas

90°D
GRANULARIDAD CELULAS CON
GRANULOS REFRINGENTES

CELULAS SIN GRANULOS

REFRINGENTES

LOBULARIDAD 90°
 Dispersogramas

90°D
GRANULARIDAD

EOSINOFILOS

NEUTROFILOS

LOBULARIDAD 90°
 Dispersogramas

90°
LOBULARIDAD
POLI

MONO ZONA DE BLASTOS

TAMAÑO 0°
 Sysmex: ACAS
 Adaptative
 Cluster
 Análisis
 System
 Principios y Tecnología
Escategrama: Areas de Celulas Anormales en el
Canal IMI
RF IMI

Desviacion a la izquieda?

Cumulos de Plaquetas?

Fantasmas
(WBC, RBC, Imm Gran?
PLT, NRBC)

HPC ? CD
Blastos ?
Dispersograma para granulocitos
inmaduros
 Siemmens - Bayer: PANDA
 Peroxidase
 Actity
 Nuclear
 Density
 Analisis
Dispersograma para reticulocitos y
plaquetas opticas
 Citoquímica

•Reacciones desarrollas en el
proceso de automatización para
evidenciar enzimas y otras
moléculas que permitan diferenciar
una célula de otra.
•Puede darse a nivel de membrana,
citoplasmático y núcleo.
Ejemplos de dispersogramas

Sysmex
Ejemplos de dispersogramas

Cell Dyn 3500 - 3700

DISPERSOGRAMA ABBOT
Ejemplos de dispersogramas

1 Ruido electrónico
2 NRBC’ls
3 P laquetas
4 Linfocitos y
Basófilos
5 Células Grandes no
teñidas (LUC)
6 M onocitos
7 Neutrófilos
8 Eosinófilos
Advia
Dispersograma para basófilos
Dispersograma para basofilos
 Autoanalizadores con diferencial de 5 partes

SYSMEX XE ADVIA 210

CELLDYN
COULTER
DISTRIBUCIONES REGIONES DE ALARMA
NORMALES
 parámetros de medición
Autoanali HISTOGRAMAS DE WBC
zador
con
diferencial
de 3
partes

Tipo de Tamaño Células presentes en el

célula en fL rango
Linfocitos 35 - 90 Linfocitos normales y
atípicos
Mononuclea 90 - 160 Mo, Prom, Mye,
res plasmocitos, blastos
Granulocito 160 - 450 Segm, Abast, Metas, eos,
s basófilos
FLUORESCENCIA

(información del RNA/ DNA)

Canal DIFF

D( Estructura Celular Interna )

 FLUORESCENCIA

(Información del RNA/DNA)

Escatergrama DIFF Anormal
RADIOFRECUENCIA ( Conductividad )
La conductividad de las ondas
de radio
A través de las células, nos
revelan su composición
interna
 SYSMEX SF - 3000

SE - 9500
Beckman Coulter

Beckman Gen-S with slidemaker