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FACULTAD: CIENCIAS
ESCUELA DE BIOQUÍMICA Y
FARMACIA CARRERA: BIOQUÍMICA
Y FARMACIA
1. DATOS GENERALES:
GRUPO No.: 1
2022/05/ 18 2022/05/30
2. OBJETIVO(S):
2.1. GENERAL
2.2. ESPECÍFÍCOS
3. MARCO TEÓRICO:
ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO
DE UROCULTIVO
Recuento de
microorganismos Identificación
-Oxidasa negativa,
Si es una levadura sembrar una Galería de -Catalasa negativo,
-Sembrar en agar Identificación API 20E. sembrar una galería de
Sabouraud -Incubar a 37ºC/24 horas identificación API Strep.
-Incubar a 28ºC y hacer la lectura de la -Incubar a 37ºC/24
-Realizar una Galería de galería. horas y hacer la lectura
Identificación API C AUX de la galería.
Si es un Bacilo Gram
Negativo -Oxidasa positivo,
-Sembrar en Agar Nutritivo y sembrar una Galería de -Catalasa positivo,
en Agar MacConkey Identificación API 20 NO sembrar una galería
-Incubar a 37ºC /24 horas E. API Staph.
-Incubar a 37ºC/24 horas y -Incubar a 37ºC/24
hacer la lectura de la horas y hacer la lectura
galería. de la galería.
Observar el crecimiento en
Agar MacConkey y
comprobar si es lactosa Observar el crecimiento
positiva o lactosa negativa. en Agar Manitol Salado y
comprobar si es manitol
positivo o manitol
negativo.
ANÁLISIS DE PRUEBAS
BIOQUÍMICAS
-Si crecen colonias -Si crecen colonias rosas- -Si crecen colonias
amarillas es lactosa rojas es lactosa positivo amarillas es manitol positivo
positiva. -Si crecen colonias -Si crecen colonias
-Si crecen colonias azules incoloras es lactosa incoloras es manitol
es lactosa negativa. negativo negativo
Fundamento: si el
Fundamento: la catalasa es un enzima
microorganismo es oxidasa
que desdobla el H2O2 liberando 02.
positiva es capaz de oxidar el
reactivo volviéndolo de color
azul.
RECOLECCIÓN DE LA
MUESTRA
ANTIBIOGRAMA
- Medio Sólido: AGAR SANGRE, AGAR MUELLER HINTON, AGAR EMB, AGAR
MANITOL.
NOTA: Si preparó los medios con anterioridad guardarlos en una nevera a 4ºC.
• Seguir las indicaciones expuestas en cada frasco de medios de cultivo para pruebas
bioquímicas y disponer en tubos de ensayo estériles la cantidad requerida para
cada prueba, cubrir los tubos con un tapón estéril e inclinarlos de modo que se
obtenga la forma de pico de flauta en la superficie del tubo (medio Urea, Citrato,
TSI), para el agar SIM no es necesario obtener la disposición de pico de flauta.
• Dejar en posición inclinada los medios que requieran la disposición de pico de
flauta hasta que solidifiquen.
• Las pruebas bioquímicas a emplearse en la práctica incluyen métodos que
permitan dar indicios sobre qué tipo de bacteria se ha desarrollado en nuestro
cultivo, que incluyen: Prueba de la catalasa, oxidasa, identificación de hemólisis,
sensibilidad a diferentes antimicrobianos, fermentación y crecimiento en agar
manitol salado, producción de gas, etc.
4.4. TINCIÓN
• Las bacterias Gram-positivas presentarán una coloración violeta mientras que las
Gram-negativas la presentarán roja o rosa. La identificación de las bacterias
Gram-positivas puede ser problemática, solamente cuando las bacterias Gram-
positivas se encuentran en crecimiento exponencial (cultivos jóvenes) la reacción
es clara; en fase estacionaria (cultivos viejos).
- Crecimiento bacteriano
- Cambio de pH y color
- Presencia de movilidad
- Presencia de fermentación
- Producción de gas
- Presencia de actividad enzimática
- Producción de ácido sulfhídrico, etc.
5. EQUIPOS Y MATERIALES:
6. RESULTADOS Y DISCUSIÓN:
Agar Sangre
Se tomo dos muestras de dos compañeras utilizando la técnica de estriado y tras
incubar durante 24 h se pudo observar la presencia de colonias pequeñas elevadas de
forma circular con borde redondeado, consistencia cremosa, brillante, coloracion
blanca
Urocultivo
Úrea
Positivo
Positivo: pico
amarillo/fondo amarillo (el
microorganismo fermenta
TSI glucosa lactosa y sacarosa)
presenta burbujas
(microorganismo produce
gas)
Citrato Negativo
Microorganismo:
Klebsiella ozaenae
Este microorganismo en los últimos años se lo ha encontrado o ha sido aislada en
infecciones urinarias, neumonía, meningitis e infección de tejidos blandos.
Normalmente se encuentran dentro de la flora intestinal sin causar ningún daño (Boza
R. et al. 1985)
• OBSERVACIÓN AL MICROSCOPIO
Preparación de la muestra Descripción
Se recogió la muestra con un asa, se
extendió dicha muestra sobre el
portaobjetos, luego se aplicó el cristal de
violeta y se esperó 1 minuto, se enjuago la
muestra con agua y se aplicó el lugol por
1 minuto, safranina por 30 segundos y por
último el decolorante.
Sistema respiratorio
Una vez colocadas las placas en el
microscopio se pudo visualizar la
presencia de bacterias gram negativas de
forma ovalada alargada Unidos en forma
lineal, qué podemos decir que son
streptobacillus
Urocultivo
En la placa de urocultivo se puede
observar bacterias gram positivas en
forma de cocos y Unidas en forma lineal,
por lo que podemos decir que se observan
streptococcus
• ANTIBIOGRAMA
Urocultivo
Antibióticos
Sensible
F300: Nitrofurantoína (presencia de halo
1,5 cm)
Resistentes
FF50: Fosmomycin
OX1: Oxacillin
Sistema Respiratorio
Antibióticos
Resistentes
CLR 15: Clarithromyan
MEM: Entromiana
B 0.04: Bacitracin
OPS: Optochin
2. Discusión
En la práctica realizada se ocupó diferentes agares, para sistema respiratorio se
utilizaron manitol el cual es un medio selectivo utilizado para el aislamiento de
Staphylococcus, basado en la tolerancia que poseen a una alta concentración
cloruro sódico, además sirve como medio diferencial de cepas fermentadoras.
Bilis. Agar sangre siendo un medio enriquecido utilizado para el cultivo de
microorganismos exigentes adecuado para la determinación de reacciones
hemolíticas típicas. Mientras que para urocultivo se utilizaron Agar sangre, Cled
(cistina-lactosa-electrolítico deficiente) el cual es un medio no inhibidor, indicado
para el cultivo y recuento en placa de bacterias procedentes de orina, por ser
deficiente en electrólitos inhibe el crecimiento de Proteus. Agar EMB (eosina y
azul de metileno) el cual es un medio de diferenciación que se utiliza para el
cultivo de Enterobacteriaceae, la inclusión de lactosa en el medio permite
diferenciar a los microorganismos que fermentan el azúcar de los que hacen.
(Prats, 2006)
Para los tubos se utilizaron 4 pruebas bioquímicas los cuales fueron SIM siento
un medio semisólido destinado a verificar la movilidad que se evidencia por el
enturbiamiento del medio o por crecimiento que difunde más allá de la línea de
siembra del microorganismo en estudio, producción de Indol y de sulfuro de
hidrogeno en un mismo tubo, además es un medio de cultivo en el cual la tripteína
y la peptona aportan nutrientes para el desarrollo microbiano. Úrea, medio
utilizado para la identificación de microorganismos en base a la actividad
ureásica, es particularmente útil para diferenciar Proteus spp, Medio TSI en el
cual la lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono fermentables, el
tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción de ácido sulfhídrico,
el rojo de fenol es el indicador de pH, por fermentación de azúcares, se producen
ácidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al color
amarillo en medio ácido, su interpretación es superficie alcalina K/profundidad
ácida A, superficie ácida A /Profundidad ácida A, superficie alcalina K
/Profundidad alcalina K y la presencia de burbujas. (MacFaddin, 2003)
Con respecto a la sensibilidad a los agentes antimicrobianos, la bacteria aislada en
el urocultivo demostró ser sensible a la nitrofurantoína la cual se utilizan
específicamente para el tratamiento de infecciones urinarias las cuales son
producidas por gérmenes o bacterias gram negativos y algunos otros gram
positivos, algunas bacterias sensibles a la nitrofurantoína son los escherichia coli,
staphylococcus aureus, enterococcus faecalis, Critobacter, corynebacterium, etc,
para los microorganismos de Enterobacter y Klebsiella se requiere dosis más altas
y algunas cepas de estos 2 géneros pueden tener resistencia(Galiano, A, s/f); en
la práctica presentó un halo de 1.5 cm por lo cual se define como una sensibilidad
del microorganismo por la nitrofurantoína.
Por otro lado, presentó resistencia a fosfomicina la cual según un metaanálisis en
el cual se investigó el riesgo de selección de mutantes resistentes al tratamiento
con fosfomicina de diferentes tipos de infecciones tanto ordinaria como
respiratoria, dando así que los mutantes más resistentes o con mayor frecuencia
fueron la Klebsiella spp, Enterobacter spp y P. aeruginosa, (Diez M. et al. 2019)
En el caso de la amikacina, la Klebsiella Pneumoniae Radica en sus amplios
patrones de asistencia a los antibióticos los cuales incluyen a grupos de agentes
antibacterianos como son los antibióticos aminoglucósidos dónde podemos
encontrar a la amikacina (Diaz P. et al. 2004), en los cuales tiene un valor de
resistencia el cual se mantiene alrededor del 30% para la amikacina y la
tobramicina en lo cual también se reportan valores superiores en el cual la
amikacina tiene un valor de resistencia del 27 al 49% (De la Parte M. et al 2001).
7. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES:
CONCLUSIONES
RECOMENDACIONES
• Mantener los medios de cultivo cerca del mechero cuando se vaya a realizar la
siembra
9. ANEXOS
NOTAS: ESCUELA SUPERIOR POLITECNICA
CATEGORIA DEL DIAGRAMA: DECHIMBORAZO
FACULTAD DE CIENCIAS
UROCULTIVO
Realización de urocultivo Aprobado Preliminar CARRERA BIOQUÍMICA Y
FARMACIA
Certificado Por aprobar LÁMINA ESCALA FECHA
ELABORADO POR:
Información Por calificar Grupo 1 1 1:1 30/05/2022