Introducción

Las bacterias del género Neisseria son cocos Gram negativos, inmóviles que se agrupan
en pares en diplococos, cuya forma se ha comparado a granos de café. Son aerobios y
anaerobio facultativos, las especies patógenas son exigentes desde el punto de vista de
sus requerimientos nutricionales (agar sangre o agar chocolate), de temperatura (crecen
a 37º pero no a 22º) y atmosféricos (atmósfera con 5 a 7 % de CO2). Son oxidasa
positivos. Estos requerimientos de cultivo, así como el patrón de fermentación de
distintos azúcares (en especial glucosa, maltosa, sacarosa, lactosa y fructosa) se utilizan
para diferenciar las distintas especies de Neisseria El género Neisseria comprende dos
especies patógenas para el hombre; siendo éste el único reservorio conocido: N.
meningitidis y N. gonorrhoeae. Otras especies de Neisseria no patógenas, se encuentran
habitualmente formando parte de la flora normal de la orofaringe.
El género Streptomyces, está representado por un gran número de especies que habitan
ambientes acuáticos tanto de agua dulce como marina, y terrestres, de preferencia de
suelos alcalinos y neutros. Se caracteriza por ser filamentosos, los filamentos aéreos
pueden ser rudimentarios o extensos, y pueden presentarse en forma de espiral, hélices o
con ramificaciones múltiples. En estos filamentos se originan las esporas denominadas
"conidias", que se disponen a menudo en cadenas. Las diferencias con la forma y
disposición de los filamentos aéreos y las estructuras que sostienen las esporas, se
utilizan para diferenciar grupos de Streptomyces.

Metodología y materiales
MATERIALES PARA AISLAMIENTO - Género Neisseria

Muestra: SECRECION SECRECION URETRAL

NASOFARINGEA

LCR
Agar chocolate o agar Es un medio de cultivo
Thayer - Martin enriquecido y no
selectivo. Es una variante
del agar sangre. Contiene
glóbulos rojos que han
sido lisados por el suave
calentamiento a 56 °C.
Este agar se usa para el
delicado y exigente
crecimiento de bacterias
respiratorias
1 tubo con medio de Permite conservar y
transporte: Medio Stuart transporten infinidad de
microorganismos
patógeno

1 tubo con agar Para la recuperación y

tripticasa soya aislamiento de toda clase
de bacterias,
grampositivas y Gram
negativas aerobias
Jarra de Brewer
Para la incubación en
anaerobiosis

Asa bacteriológica Sirve para la siembra por

estrías e inoculaciones
en general.

MATERIALES PARA IDENTIFICACIÓN DE Género Neisseria

Batería de Gram Para realizar la tinción

Gram

Agua oxigenada o Para la prueba de

peróxido de catalasa
hidrógeno (H2O2)

Reactivo oxidasa Se utiliza en la prueba de

oxidasa de Kovacs como
reacción cualitativa en la
identificación de bacterias
gram negativas no
 fermentadoras.
Tubo con caldo Se utiliza para el
nutritivo cultivo general de una
amplia variedad de
microorganismos que
no sean muy exigentes
nutricionalmente
1 placa de agar sangre
de carnero

1 tubo con medio Determinar si el

gelatina microorganismo es capaz
de degradar la gelatina.

Tubo con caldo Para observar reducción

nitrato de los nitratos

Tubos con medio Fermentación de

semisólido de los Carbohidratos
carbohidratos:
glucosa, maltosa,
sacarosa, lactosa y
manitol

Placa con agar

sacarosa al 5%

Lamina de vidrio
Láminas porta objetos rectangular utilizada
para realizar
observaciones en el
microscopio.

METODOLOGÍA
Género Neisseria:
a. Aislamiento.
Sembrar una asada de la muestra en placa de agar chocolate, utilizando la técnica de
agotamiento y estría.

Se procederá a incubar la placa a 37ºC durante 24 horas con atmósfera de CO2 al 5%

(Jarra de Brewer)

Para luego observar las colonias características: 1 - 3 mm, lobuladas o circulares,

brillantes, transparentes u opacas, pigmentadas, de elevación media, mucoides o
pastosas

Transferir la colonia seleccionada en un tubo con agar tripticasa soya, incubar a 37ºC
por 24 horas para obtener cultivo puro.

b. Identificación
Hacer la prueba de catalasa y oxidasa para confirmar la positividad, sobre una lámina
porta objetos, limpia y desengrasada, colocar una gota de agua oxigenada, luego añadir
una porción de cultivo. En oxidasa, se agrega un poco de reactivo en la propia placa.

Sembrar en agar sangre y determinar la hemólisis en la placa de agar sangre

Hacer las Pruebas de acidez de los carbohidratos: glucosa, maltosa, sacarosa, lactosa y
manitol

En la prueba de reducción de los nitratos, se incuba a 35ºC durante 24 h y se observa el

cambio de color a rojo intenso si la prueba es positiva. Y en la prueba de gelatinasa, se
siembra la cepa en el medio y se incuba a 37ºC por 48 horas y se observa licuefacción
de la gelatina.

Determinar el crecimiento de las bacterias a la temperatura de 22ºC

Hacer la prueba de síntesis de polisacáridos, a partir de sacarosa al 5%; que consiste en:
Sembrar la cepa (técnica de siembra en superficie y en estría) en la superficie del medio
agar hipersacarosado (sacarosa al 5%),

Incubar a 37ºC por 24 horas en aerobiosis. Observar el crecimiento de colonias. Pipetear

solución de lugol sobre el cultivo para observar formación de polisacáridos (almidón)
por el color rojo o azul oscuro del medio que rodea las colonias.

Genero Streptomyces
a) Toma de muestra
Se tomaron las muestras a partir del suelo rizosférico de uno de los nichos ecológicos
presentes en la Universidad Libre. Las muestras fueron recolectadas en bolsas con cierre
hermético siendo trasladadas al laboratorio. (Duque J., López R., 2019)
Recolección de muestra a través de bolsas con cierre hermético.

A partir de las muestras se realizó el procedimiento de cuarteo para su posterior análisis.

(Duque J., López R., 2019)
Mezcla manual y cuarteo de las muestras

Cuarteo de las muestras

b) Aislamiento de Streptomyces sp.

Se tomaron 10 g de la muestra; luego se suspendieron en 90 ml de agua estéril, y se
realizaron diluciones por duplicado desde 10-1 hasta 10-7 en solución peptona. (Duque
J., López R., 2019)
Preparación de las diluciones desde 10-1 hasta 10-7

Para el aislamiento de Streptomyces sp se utilizó el medio de cultivo Agar avena, en el

cual se realizó las diluciones de 10 -7. Posteriormente, 0,1 ml de cada suspensión (las
tres últimas diluciones) son esparcidos en superficie en el agar (Agar Avena) por
triplicado.
Finalmente, se incubaron a temperatura ambiente (30 ± 3° C), durante 14 días. (Duque
J., López R., 2019)

Colocar diluciones desde 10-1 hasta 10-7 en placa

Diluciones esparcidas en la placa por triplicado

En los días 7 y 14 de la incubación se revisaron las poblaciones microbianas presentes

de cada suspensión, para el cultivo de las suspensiones se empleó el medio Ashby y
también se empleó el agar YGM. (Duque J., López R., 2019)
Placas de Petri con medio Ashby

Placas de Petri con Agar YGM

Se probó suplementando el medio YGM con extracto de malta y carbonato de calcio al
medio. Seguido se ajustó el pH a 7.0 antes de agregar el agar. Después se llevó a
condiciones de autoclave.
Medio YGM llevado a la autoclave

El último medio de cultivo probado fue el medio basal MS (Murashige y Skoog)

Medio basal MS

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
Duque J., López R. (2019). Evaluación preliminar para aislamiento e identificación
bioquímica de Streptomyces sp., a partir de un nicho ecológico del Campus Belmonte
de la Universidad Libre, Seccional Pereira. [Universidad Libre, Seccional Pereira]. 1-23
Humbert, MV, Awanye, AM, Lian, LY, Derrick, JP y Christodoulides, M. (2017).
Estructura de la proteína del complejo adhesivo de Neisseria (ACP) y su papel como un
inhibidor de lisozima novedoso. Patógenos PLoS , 13 (6), e1006448.
https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1006448