PRUEBA CONFIRMATORIA PARA COLIFORMES TOTALES:

1. A partir de cada uno de los tubos que han resultado positivos en la prueba presuntiva,
agitándolos previamente para homogeneizar, inocular con tres asadas tubos
conteniendo caldo Lactosa Bilis Verde Brillante (LBVB). (Fig.
17.2)

2. Incubar durante 48 ± 3 h a 35 ± 0.5 °C.

3. Después de la incubación observar la presencia de turbidez y de gas.

INTERPRETACION:

Si se observa turbidez y producción de gas:

La prueba se considera POSITIVA, debiendo anotar el número de tubos

positivos para posteriormente hacer el cálculo del NMP.

Si en ninguno de los tubos se observa producción de gas, aun cuando se

observe turbidez:

Se consideran negativos, estableciéndose el Código 0,0,0 para efecto del cálculo

del NMP.

PRUEBA CONFIRMATORIA PARA COLIFORMES FECALES:

1. A partir de cada uno de los tubos que han resultado positivos en la prueba presuntiva,
agitándolos para homogeneizar, inocular con tres asadas tubos conteniendo caldo E.C.
(Escherichia coli). (Fig. 17.3)

2. Incubar durante 24 horas a 44 °C (0 . 5 °C), observar presencia de turbidez y gas.

(Fig. 17.4)
INTERPRETACION:

Si se observa turbidez y producción de gas:

La prueba se considera POSITIVA, debiendo anotar el número de tubos positivos

para posteriormente hacer el cálculo del NMP.

Si no se observa producción de gas, aun cuando se observe turbidez:

Se reporta la AUSENCIA DE COLIFORMES FECALES.

CALCULOS.

De acuerdo a los tubos positivos en las pruebas confirmativas para Coliformes

Totales y Fecales:

Establecer los códigos correspondientes para calcular por referencia en la tabla estadística
correspondiente (Tablas 17.1 – 17.4), el NMP de Coliformes Totales y Fecales en 100 mL
de agua.

En caso de no encontrar en las tablas la combinación de tubos adecuada, emplear para

los cálculos la siguiente ecuación:
No. De tubos positivos x 100
NMP/100 mL =
mL de muestra en tubos negativos x mL de muestraen todos los tubos

ELABORACION Y PRESENTACION DE RESULTADOS.

Los resultados se elaboran de la siguiente manera:

Si únicamente se inoculan tres series de cinco tubos cada una con 10, 1 y 0.1
mL de muestra, la lectura de los resultados nos permite tener dos códigos de
valores uno para coliformes totales y otro para coliformes fecales los cuales
leídos en la tabla del NMP nos dará el valor de bacterias correspondientes en
100 mL de muestra, de manera directa.

Si se han realizado diluciones, se ha de obtener una serie final con valor cero.

A continuación se establece el triplete de valores correspondiente a las tres

series anteriores a la del valor cero que podrá ser leída en la tabla del NMP.

Para efectos de expresar el valor obtenido basándose en 100 mL de muestra

habrá de dividirse el resultado de la tabla por el volumen real de muestra
inoculada en cada tubo de la serie central de cada triplete escogido.
 Se tendrá un triplete de valores para cada tipo de determinación.

En general se tiene:

EJEMPLOS

1) La lectura de los resultados obtenidos en el análisis del agua de un grifo es la

siguiente:

Volumen de Denominación de Tubos positivos Tubos positivos en Tubos positivos en

muestra la serie de 5 en la prueba la prueba la prueba
inoculada. tubos. presuntiva para confirmativa para confirmativa para
(mL) coliformes totales coliformes totales. coliformes fecales.
y fecales.
10 1 – CT.CF 5 4 2
1 2 – CT.CF 3 2 1
0.1 3 – CT.CF 2 1 0

Con estos datos consultando la tabla del NMP correspondiente tenemos:

Para coliformes totales los resultados obtenidos finalmente en la prueba

confirmativa son: 4,2,1 que en la tabla nos indica un valor de 26 es decir el
resultado será:

NMP DE COLIFORMES TOTALES: 26/100 mL.

Para coliformes fecales el triplete de valores obtenido es: 2,1,0 y consultando

la tabla del NMP se tiene el valor de 7.

El resultado se expresará:

NMP DE COLIFORMES FECALES: 7/100 mL

2) La lectura de los resultados obtenidos en el análisis de un agua de la que fue

necesario hacer diluciones, es la siguiente:
 Volumen de Denominación de Tubos positivos Tubos positivos en Tubos positivos en
muestra la serie de 5 en la prueba la prueba la prueba
inoculada. tubos. presuntiva para confirmativa para confirmativa para
(mL) coliformes totales coliformes totales. coliformes fecales.
y fecales.
0.1 3 – CT.CF 4 3 2
0.01 4 – CT.CF 2 1 1
0.001 5 – CT.CF 1 1 0

Para coliformes totales se establece el código del triplete: 3,1,1 y consultando

la tabla del NMP se observa un valor de 14, por lo tanto se tiene:

14 / 0.01 = 14 x 100 = 1400.

El resultado se expresará:

NMP DE COLIFORMES TOTALES: 1400/100 mL

Para coliformes fecales con el mismo razonamiento se establece el código:

2,1,0 que en las tablas del NMP correspondientes se observa un valor de 7,
por lo tanto se tiene:

7 / 0.01 = 7 x 100 = 700

El resultado se expresará:

NMP DE C OLIFORMES FECALES: 700/100 mL

CONFIABILIDAD

El procedimiento de fermentación en tubos múltiples es el método más usado por

su facilidad y economía.

El resultado de esta prueba se expresa por “el número más probable” (NMP), pero
debe entenderse que este método no es exacto ya que sólo nos da la probable
densidad de bacterias coliformes totales o fecales de una muestra determinada.

La confiabilidad está dada por los niveles superiores o inferiores del límite de
confianza al 95% establecidos en las tablas para cada NMP/100 mL, no obstante,
es una indicación importante para evaluar la calidad sanitaria del agua.

RESULTADOS DEL LABORATORIO UNAS

NMP EN 5:5:5 > 1600NMP/100ml
PARA COLIFORMES FECALES SE OBTUVO 3:3:2 1100 NMP/100ml
V. CUESTIONARIO

1. Mostrar los cálculos realizados para obtener el NMP de Coliformes Totales y

Fecales en el agua analizada.

2. ¿Cuáles son las características que debe reunir un Microorganismo Indicador?

3. ¿Por qué el número de Coliformes Totales es siempre mayor que el de

Coliformes Fecales?

4. De acuerdo a la normatividad mexicana vigente ¿Cuáles son los límites

permisibles en cuanto a Coliformes Totales y Coliformes Fecales en el agua
para consumo humano? Dar los números de las Normas Oficiales Mexicanas
correspondientes.

5. ¿Por qué aun cuando los microorganismos patógenos se encuentran en poca

concentración en un agua éstos pueden causar enfermedad?
MICROBIOLOGIA SANITARIA 2 MICROBIOLOGIA SANITARIA 2
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